CN104774826A - 一种组蛋白脱乙酰化酶及其编码基因和应用 - Google Patents

一种组蛋白脱乙酰化酶及其编码基因和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种组蛋白脱乙酰化酶及其编码基因和应用，属于基因工程技术领域。本发明从水稻(Oryza Sativa L.)中克隆得到了组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示第93位到1964位碱基；编码组蛋白脱乙酰化酶OsHDA704，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该基因属于水稻组蛋白脱乙酰化酶家族RPD3/HDA1亚家族，其作为正调控因子参与了水稻对高盐和干旱胁迫的应答过程。通过转基因及功能鉴定证实超量表达OsHDA704能提高水稻对高盐和干旱的抗性，OsHDA704基因在培育抗逆植物尤其是水稻新品种方面具有非常重要的理论及应用价值。

Description

一种组蛋白脱乙酰化酶及其编码基因和应用
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种组蛋白脱乙酰化酶及其编码基因和应用。
背景技术
植物在生长发育过程中常常会受到干旱、高盐、极端温度等多种不利环境条件的影响，这些不利因素在很大程度上限制着农作物的产量和分布，成了许多地区农业发展的障碍。尽快培育出抗逆的作物品种并应用于生产已经成为农业科学技术研究攻关的重要方向。
基因工程技术通过改变一个或几个基因的活性来提高植物的抗逆性，它是在基因水平上进行的，具有精确性和稳定性，提高了育种的效率，极大地加快了育种进度。随着分子生物学与基因工程技术的日趋成熟和迅猛发展，通过基因工程手段改良作物的抗性已经受到越来越广泛的关注和重视。
水稻是我国的主要粮食作物之一，提高水稻的抗逆性对保障我国粮食产量稳定具有重要意义。干旱和高盐是水稻种植中最为常见的逆境，培育抗逆水稻一直是水稻品种改良的主要目标之一。利用基因工程这一分子育种技术，将抗逆基因转入当前广泛应用的优良水稻品种中，从而提高其抗逆性，是水稻抗逆育种的有效途径之一。
在真核生物细胞核中，基因组DNA由组蛋白以及其它一些蛋白共同组成了核蛋白复合物，也就是常说的染色质。染色质的结构是高度动态的，并且能够被与其相关的一些蛋白所调控。目前已知水稻中含有18个组蛋白脱乙酰化酶成员，可分为3大亚家族：RPD3/HDA1亚家族14个成员、SIR2亚家族2个成员和HD2亚家族2个成员(Fu,et al.2007)。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种可用于提高植物耐盐和抗旱的组蛋白脱乙酰化酶OsHDA704及其编码基因OsHDA704。
所述的组蛋白脱乙酰化酶OsHDA704，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
所述的编码上述组蛋白脱乙酰化酶OsHDA704的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.1的第93位到1964位碱基所示。
本发明的第二个目的是提供一种含有所述的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704的重组表达载体。
所述的表达载体为任意一种可用于农杆菌转化植物的双元载体或可用于植物微弹攻击的载体，如pCAMBIA系列载体、pBI系列载体、pBin系列载体或GatewayTM系列载体。
本发明的第三个目的是提供组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704在增强植物耐盐和抗旱中的应用。
所述的应用优选为在培育耐盐和抗旱植物品种中的应用。
优选，所述的应用是将所述的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704导入植物细胞、组织或器官，再将被转化的植物细胞、组织或器官培育成植株，使所述的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704在植物中表达，得到耐盐和抗旱的转基因植物。进一步优选，所述组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704是通过植物表达载体导入植物细胞、组织或器官的。
所述的植物为水稻。
本发明克隆得到的属于水稻组蛋白脱乙酰化酶家族RPD3/HDA1亚家族的OsHDA704基因，其作为正调控因子参与了水稻对高盐和干旱胁迫的应答过程，通过转基因及功能鉴定证实超量表达OsHDA704基因能提高水稻对高盐和干旱的抗性，OsHDA704基因在培育抗逆植物尤其是水稻新品种方面具有非常重要的理论及应用价值。
附图说明
图1是50μM ABA、300mM NaCl和20％PEG处理0h、1h、3h和6h后OsHDA704基因的表达模式。
图2是pCUbiO l301植物双元表达载体图。
图3是用OsHDA704的全长开放阅读框引物对OsHDA704超表达转基因植株基因组DNAPCR的电泳图。
图4是野生型植株WT和超表达转基因株系OX1、OX4、OX6、OX14和OX26中OsHDA704的表达水平检测，HDA704OX1、HDA704OX4、HDA704OX6、HDA704OX14和HDA704OX26分别代表超表达转基因株系OX1、OX4、OX6、OX14和OX26。
图5是野生型种子WT和OsHDA704超表达种子在MS培养基上(control)、添加有终浓度为5μM ABA、150mM NaCl和15％PEG的MS培养基上的种子萌发趋势。
图6是苗龄两周野生型植株WT和OsHDA704超表达OX14和OX26植株在标准营养液(control)、含150mM NaCl和20％PEG营养液处理下的表型。
图7是苗龄两周野生型植株WT和OsHDA704超表达OX14和OX26植株在含150mMNaCl和20％PEG营养液处理3天恢复7天的存活率统计，其中HDA704OX14和HDA704OX26分别代表超表达转基因株系OX14和OX26。
图8是苗龄两周野生型植株WT和OsHDA704超表达OX1和OX14植株，离体叶片的相对失水率测定，其中HDA704OX14和HDA704OX26分别代表超表达转基因株系OX14和OX26。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
下列实例中未注明具体的实验方法，均可按照常规方法进行。如J.萨姆布鲁克等《分子克隆实验指南》、F.奥斯伯等《精编分子生物学实验指南》中所述条件，或按照所用产品生产厂商的使用说明。
实施例中所用水稻中花11(Oryza Sativa L.)种子购于广东省农科院；TriZol Reagent购自Invitrogen公司，其货号为：15596026；逆转录酶M-MLV购自Promega公司，其货号为：M1701；pGEM T载体购自Promega公司，其货号为：A1360；标准营养液为国际水稻所标准营养液；LB、YM、AAM培养基为本领域常用培养基，其配方参考J.萨姆布鲁克等《分子克隆实验指南》。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径得到。
实施例1：OsHDA704基因的克隆
取水稻中花11的幼苗叶片部位，用TriZol Reagent提取叶片总RNA，采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的纯度及量，取1μg的总RNA做起始逆转录反应，所采用的逆转录酶为M-MLV，逆转录反应的步骤参考该逆转录酶的使用说明。以逆转录产物为模板，采用引物：F：GATCGCCCTCCAGATTGCGT，R：ACATCAGGATCATTCGACAG进行常规PCR扩增，PCR反应条件为：94℃ 4min；94℃ 30sec，55℃ 30sec，72℃ 90sec，30个循环；72℃10min。采用琼脂糖凝胶电泳回收目的片段，连接于pGEM T载体上，连接反应：PCR产物7μl，pGEM T载体1μl，3U T4ligase 1μl，10×buffer 1μl，共10μl体积，16℃连接3h。取5μl连接产物，转到大肠杆菌DH5α中，加800ml LB，复苏1h，涂于含100mg/L氨苄抗生素(Amp)的LB平板上(已经涂布X-gal/IPTG)，37℃过夜。挑取白色克隆，在LB+Amp(100mg/L)液体培养基中扩增培养，送交测序。其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，开放阅读框从第93位到1964位碱基，长1872bp，将此开放阅读框命名为组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704，其编码623个氨基酸，其序列如SEQ ID NO.2所示，将该蛋白命名为组蛋白脱乙酰化酶OsHDA704。
实施例2：组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704在逆境胁迫下的表达模式分析
1.胁迫处理：将水稻中花11种子浸泡催芽后，在发芽盒内用标准营养液水培生长，在25℃，16h光照/8h黑暗光周期条件下的光照培养室中培养两周，光照强度为10000lux。进行如下的胁迫处理：外源ABA胁迫：50μM ABA处理0h，1h，3h和6h；高盐胁迫：300mM NaCl处理0h，1h，3h和6h；模拟干旱处理：20％PEG处理0h，1h，3h和6h。将处理的植株用液氮速冻后于-80℃低温保存。
2.RNA提取：用Trizol reagent进行试验材料的总RNA提取，整个操作过程严格按照Trizol reagent的RNA提取流程说明进行。
3.逆转录：采用M-MLV逆转录酶逆转录mRNA成cDNA第一链，方法按照试剂说明书进行。
4.实时定量RT-PCR：根据组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704的核苷酸序列，设计以下引物对：qHDA704-F：TTGCTCCAGACATCACCATC；qHDA704-R：GACGCCATCCTAGAATATCCAG。将所得cDNA稀释5倍后作为模板，进行实时定量RT-PCR反应。反应体系及程序参照Premix Ex TaqTM II(TaKaRa)说明书，在ABI7500 Real-time PCR仪上进行反应。每个反应设置3个重复，所得数据使用ABI 7500 Real-time PCR system软件进行处理。
5.结果分析：水稻中花11植株中的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704的表达量，在50μM ABA处理后在1h先下降后逐渐上升；300mM NaCl处理后在1h有稍微的下降，3h和6h后明显的上升；20％PEG处理后成明显上升的趋势；结果如图1所示。结果表明水稻中组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704受盐和干旱的诱导后表达量明显上升，参与水稻抗盐、抗旱胁迫应答调节过程。
实施例3：转组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704水稻的获得和鉴定
1.目的基因组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704的超表达载体的构建
根据组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704全长设计引物，以水稻中花11的cDNA为模板，高保真扩增获得组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704全长，同时在两条引物的5’端加上BamHI酶切位点，扩增引物为HDA704OX-F：CGGGATCCATGGCGTCTGATATGAGGTC(下划线部分为BamH I酶切位点)；HDA704OX-R：CGGGATCCTTAGGGCCCTGCTTCATCAT(下划线部分为BamH I酶切位点)。扩增产物经BamH I酶切纯化后，回收目的DNA片段(1888bp)；用BamH I酶切表达载体pCUbiO1301(含有Ubiquitinl启动子)，T4连接酶连接，得到目的质粒，然后鉴定插入正反向后，将正向插入的阳性克隆质粒进行PCR和测序验证。pCUbiO1301载体为图2所示，它是在pCAMBIA 1301载体的基础上接了一个玉米泛素启动子(组成型高表达启动子，Ubi promoter)，将组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704(如SEQ IDNO.1的第93位到1964位碱基所示)接在此启动子后面，构建成组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704超表达载体，将此重组载体命名为pCUbiOl301-OsHDA704。
2.重组质粒pCUbiO l301-OsHDA704转化到农杆菌EHA105
取1μl重组质粒表达载体pCUbiOl301-OsHDA704与农杆菌EHA105感受态细胞混匀，冰上放置30min。然后液氮速冻1min后，迅速转到37℃放置5min。加800μl无抗生素的YM培养基，在28℃中，100RPM转速中培养2-4h。将培养物涂到25mL YM平板,YM培养基中含卡那霉素和硫酸链霉素，浓度都为50mg/L。将平板倒置放在28℃的培养箱中培养，直至菌落长出(约2天)。挑取单克隆进行菌落PCR鉴定，菌落鉴定的PCR引物为HDA704OX-F和HDA704OX-R。选取转入了超表达载体pCUbiO l301-OsHDA704的农杆菌EHA105克隆作为阳性克隆。
3.农杆菌介导的水稻遗传转化
(1)水稻成熟胚的诱导
水稻成熟种子去壳后，用70％乙醇浸泡1min，0.1％升汞浸泡15min，再用无菌水清洗4次，种子放在无菌滤纸上晾干后，接种在诱导培养基上，26℃暗培养。约10-15天后，切去胚根和胚乳，转接到继代培养基上，26℃暗培养。两周后继代培养一次，挑选适合大小、紧密和色泽淡黄的愈伤组织预培养3天。
(2)EHA105农杆菌的培养
将含有超表达载体pCUbiO l301-OsHDA704的农杆菌EHA105在含有50mg/L Kan和50mg/L Str的YM平板上划线，28℃黑暗培养3天，挑取单克隆于加有同样抗生素的5ml液体YM中培养12～24h，然后以1：30的比例于同样的液体YM(30ml)中进行扩大培养4～5h，5500rpm离心10min后收集菌液，用液体AAM培养基(内含乙酰丁香酮(As)，浓度为100微摩尔每升)重新悬浮(OD600约为0.5)，置于28℃摇床轻微振荡培养15-30min，该农杆菌悬浮液即可用于转化水稻愈伤。
(3)水稻愈伤组织与农杆菌的共培养
挑选状态较好(预培养3天、色泽淡黄)的颗粒状愈伤组织放入50ml无菌三角瓶中，加入准备好的农杆菌悬浮液，静置培养20min，每隔5min轻轻摇一下三角瓶。倒掉菌液，将愈伤组织放在无菌滤纸上吸去多余菌液，随即转移到铺有一层无菌滤纸的固体共培养基上，22℃黑暗培养3天。
(4)抗性愈伤组织的筛选
将共培养3天后的愈伤组织放在含有500mg/L的头孢霉素(Cef)的灭菌水中清洗，每次4-5min，共4-5次。然后将愈伤组织置于灭菌过的滤纸上吸干水分。将干燥后的愈伤组织放在含有50mg/L潮霉素(Hyg)和500mg/L的头孢霉素(Cef)的筛选培养基上，26℃暗培养2周，转到新配制的筛选培养基上继续筛选2周(大部分愈伤组织在筛选后10天左右褐化，然后在褐化组织的边缘重新生长出乳白色的抗性愈伤组织)。
(5)抗性愈伤组织的分化
从经两轮筛选后长出的抗性愈伤组织中，挑选一定大小、乳黄色致密的抗性愈伤组织转至含有50mg/L Hyg和500mg/L Cef的预分化培养基上暗培养7天，然后转至分化培养基上在16h光/8h黑暗的光周期条件下培养，温度为26℃，光照强度为10000lux，一般经过6-10天就会有绿点出现，20-30天后进一步分化出小苗。
(6)生根、壮苗和移栽
当抗性愈伤组织分化的芽长至约8厘米左右时，将小苗移到生根培养基上，培养两周左右。选择高约10厘米、根系发达的小苗，洗去培养基，在温室内移栽入土。
(7)GUS染色检测转基因阳性植株
将转化得到的苗进行GUS染色。染色后为蓝色的为转基因阳性植株，反之为阴性植株。
4.转基因植株的分子鉴定
(1)转基因阳性植株的初步分子鉴定：DNA的提取采用CTAB的方法，以转基因植株的基因组DNA为模板进行PCR扩增，扩增引物为HDA704OX-F和HDA704OX-R，用1％琼脂糖凝胶电泳进行检测。如图3所示：其中M为Marker 2000；2和10为转基因阴性植株；1，3，4，5，6，7，8和9和为阳性植株。结果表明，pCUbiOl301-OsHDA704重组质粒已经插入到水稻基因组中，得到转组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704水稻。
(2)超表达转基因植株目的基因OsHDA704的表达量鉴定：选取5个转基因阳性植株和野生型植株，取叶片为材料提取RNA，逆转录成cDNA后用引物qHDA704-F和qHDA704-R扩增OsHDA704。结果如图4所示，在转基因阳性植株中组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704的表达水平都有不同程度的提高，表明组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704超表达转基因体系成功，转化所得的OsHDA704转基因材料可用于后续的实验。
实施例4：转基因植株抗旱抗盐性鉴定
1.种子萌发期对盐胁迫和干旱胁迫的耐受性
每个处理选取30粒饱满的种子，3个生物学重复。将种子去壳后用75％乙醇浸泡1min后，用0.1％升汞浸泡15min(每5min振荡一次)，后用无菌水清洗3-4次，在无菌的滤纸上晾干后转接到含有相应胁迫处理的培养基上，在规定的时间点统计萌发率。如图5所示，在没有胁迫处理下转基因阳性植株的(组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704超表达)种子在前60个小时萌发速率比野生型稍快，用5μM ABA、150mM NaCl和15％PEG处理后转基因阳性植株的(组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704超表达)种子的萌发速率显著地高于野生型。表明，超表达组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704后，在种子萌发期增强了对盐胁迫和干旱胁迫的耐受性。
2.幼苗对盐胁迫和干旱胁迫的耐受性
组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704超表达转基因株系幼苗干旱胁迫生长实验结果表明：标准营养液中生长两周的幼苗在含15％PEG6000的营养液中模拟干旱处理3天后，移到水稻营养液中恢复培养7天，组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704超表达转基因株系的存活率明显比野生型高，如图6所示。两周的幼苗在含150mM NaCl营养液中处理3天后，移到水稻营养液中恢复培养7天，组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704超表达转基因株系的存活率明显也比野生型高，如图7所示。因此，与野生型植株相比，超表达组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704基因后能够显著提高水稻抵御高盐和干旱胁迫的能力。
3.幼苗抗旱性测定
用标准营养液水培水稻至两周，取苗的地上部分，每个株系取30棵，设置3个生物学重复。将所取样品在培养室中自然放置，每隔30min称取一次重量，在210min内连续称量7次。拿第一次的重量减去相应时间点称取的重量为这个时间点的失水量。称量完后在105℃的烘箱里放置4h，称重，用失水前的重量减去干重即为植株的含水量。相对失水量为各时间点的失水量除以含水量的百分比。组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704超表达转基因株系的失水速率明显低于野生型植株，如图8所示，说明转基因植株保水能力较好，抗旱能力比野生型强。

Claims (10)

1.一种组蛋白脱乙酰化酶OsHDA704，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种编码权利要求1所述的组蛋白脱乙酰化酶OsHDA704的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.1的第93位到1964位碱基所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，含有权利要求2所述的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述的表达载体为任意一种可用于农杆菌转化植物的双元载体或可用于植物微弹攻击的载体。
5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述的表达载体为pCAMBIA系列载体、pBI系列载体、pBin系列载体或GatewayTM系列载体。
6.权利要求2所述的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704在增强植物耐盐和抗旱中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的应用为在培育耐盐和抗旱植物品种中的应用。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的应用是将所述的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704导入植物细胞、组织或器官，再将被转化的植物细胞、组织或器官培育成植株，使组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704在植物中表达，得到耐盐和抗旱的转基因植物。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的组蛋白脱乙酰化酶基因OsHDA704是通过植物表达载体导入植物细胞、组织或器官的。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的植物为水稻。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105087615A (zh) * 2015-09-28 2015-11-25 中国科学院华南植物园 拟南芥组蛋白脱乙酰化酶基因hda15在调控植物种子萌发中的应用
CN113698282A (zh) * 2021-09-22 2021-11-26 中国科学院华南植物园 一种提高甘草中查尔酮a含量的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004022735A1 (en) * 2002-09-05 2004-03-18 Greengene Biotech Inc. Method for producing a plant with a high-growth rate
CN102363782A (zh) * 2011-10-25 2012-02-29 中国科学院华南植物园 一种水稻组蛋白脱乙酰化酶基因hdt701启动子及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004022735A1 (en) * 2002-09-05 2004-03-18 Greengene Biotech Inc. Method for producing a plant with a high-growth rate
CN102363782A (zh) * 2011-10-25 2012-02-29 中国科学院华南植物园 一种水稻组蛋白脱乙酰化酶基因hdt701启动子及其应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J.H.ZHAO，ET AL.: "OsHDA704 regulates drought and salt tolerance in rice via stomatal aperture control", 《万方数据》 *
KIKUCHI,S.，ET AL.: "ACCESSION：AK111557，Oryza sativa Japonica Group cDNA clone:J013057F02, full insert sequence", 《GENBANK》 *
WENQUN FU,ET AL.: "Sequence and expression analysis of histone deacetylases in rice", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 *
YONGFENG HUA，ET AL.: "Rice histone deacetylase genes display specific expression patterns and developmental functions", 《BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS》 *
段俊 等: "水稻组蛋白脱乙酰化酶基因的功能初探", 《全国植物分子育种研讨会摘要集》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105087615A (zh) * 2015-09-28 2015-11-25 中国科学院华南植物园 拟南芥组蛋白脱乙酰化酶基因hda15在调控植物种子萌发中的应用
CN105087615B (zh) * 2015-09-28 2018-09-28 中国科学院华南植物园 拟南芥组蛋白脱乙酰化酶基因hda15在调控植物种子萌发中的应用
CN113698282A (zh) * 2021-09-22 2021-11-26 中国科学院华南植物园 一种提高甘草中查尔酮a含量的方法
CN113698282B (zh) * 2021-09-22 2022-05-13 中国科学院华南植物园 一种提高甘草中查尔酮a含量的方法

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