CN104758921A - 缓冲的眼用组合物以及使用其的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开内容提供用于配制通过促进伤口愈合、药物活性剂的递送并润滑眼睛而对治疗眼睛病症中有用的可局部施用的悬浮液的缓冲的眼用组合物。特别地，所述眼用组合物包括与对哺乳动物眼睛的应用相容的缓冲溶液，其中所述缓冲液提供增加的药物活性剂作用机能以及治疗质量。所述眼用组合物因其同时治疗角膜溃疡和来自各种眼部损伤的过度的炎症显示出双重治疗作用以缓解各种眼睛病症。

Description

缓冲的眼用组合物以及使用其的方法
本申请是申请日为2011年11月8日、发明名称为《缓冲的眼用组合物以及使用其的方法》的中国发明专利申请201180054466.4的分案申请。
技术领域
本发明一般涉及眼用组合物并且更具体地涉及用于配制在递送眼部病症、损伤和疾病的药物活性剂和治疗中有用的局部可接受的悬浮液的眼用缓冲剂。本发明还涉及单独或与药学活性剂组合使用本发明的眼用缓冲剂制品治疗眼部病症、损伤和疾病的方法，以及制备缓冲剂和基于所述缓冲剂的制品的方法。所述缓冲的溶液与PKC激活剂或抑制剂例如PKα抑制剂一起起到特别好的作用。
背景技术
已经描述由疾病或损伤导致的各种眼部病症并且以不同的成功率进行治疗。例如，一种病症是角膜溃疡，其是作为细菌、病毒或真菌感染，机械损伤或严重的变应性疾病的结果在表面角膜上发生的开放性疮口。角膜溃疡是严重的病况，其必须被迅速治疗以避免视力损失的问题。归因于炎症或损伤的角膜的炎症可导致严重的视力损失甚至是失明。角膜溃疡越深，形成越严重的病况并且非常深的溃疡可在角膜上导致瘢痕形成以及随之阻挡光线进入眼部。治疗通常涉及抗生素以及抗病毒或抗真菌药物。也可给予类固醇滴眼液以减少炎症。然而，没有增强伤口闭合并且避免瘢痕形成的药物。在严重的实例中，当已有的治疗没有帮助时，可能需要角膜移植来恢复视力。
对眼部的化学损伤表示由强烈碱性(碱性的)化合物或酸性化合物导致的真实眼科紧急事件中的一种。碱性损伤是更普通的并且可能更加有害，尤其是在常常导致永久的视力损伤的双侧化学暴露中。这一损伤的严重度与暴露的类型、体积、浓度、持续时间以及化学品穿透的程度相关。20％的化学损伤导致显著的视觉以及面貌上失能；仅15％具有严重的化学损伤的患者获得功能性的视力康复。角膜上皮细胞损害范围可从温和的弥漫性点状上皮角膜炎(PEK)至完全的上皮细胞缺陷。这些伤口同样由严重的结膜炎症和前房炎症反应以及角膜穿孔表征。
干眼被认为是导致对眼表有潜在性损害的不舒服、视觉障碍和泪液膜不稳定的症状的泪液和眼表的多因子病。干眼通常伴随增加的泪液膜渗量和眼表的炎症。
水液性泪液不足(ATD)通常是干眼的最常见的原因并且其可能归因于不足的泪液产生。泪腺的分泌受到神经反射弧的控制，角膜和结膜中的传入神经(三叉感觉纤维)通往脑桥(上涎神经核)，传出纤维从脑桥传出，在中间神经中，至终结于泪腺的蝶腭神经节以及交感节后和副交感神经。干燥性角结膜炎(KSC)是给予这一种眼表病症的命名。KSC通常被分为舍格伦综合征(SS)相关的KCS和非SS相关的KCS。如果患有水液性泪液不足的患者具有相关的口干燥症和/或结缔组织病那么他们具有SS。患有原发性SS的患者具有血清自身抗体和非常严重的水液性泪液不足和眼表疾病所显示的系统免疫疾病的症状。非SS的KSC通常归因于雄激素的降低，例如来自绝经后的雌性中降低的卵巢功能或怀孕和使用节育药丸时升高的性激素结合球蛋白的水平。
干眼可与无菌或传染性的角膜溃疡并发，尤其是在患有SS的患者中。溃疡通常是椭圆或圆形的，直径上少于3mm并且位于角膜中央或近中央。偶尔会发生角膜穿孔。在罕见的实例中，干眼综合征中无菌或传染性的角膜溃疡可导致失明。其他的并发症可包括点状上皮缺损(PED)、角膜新生血管形成和角膜瘢痕形成。
眼部病症的治疗通常需要将药物活性剂递送至眼部，例如采用或经由缓冲的液体眼用溶液。可选择地，一些治疗需要特别缓冲的溶液，其为眼部提供润滑以改善病症。理想的眼用溶液必须被配制为适应药物活性剂以及与眼部的生理相容。因此，具有提供治疗并适应药物活性剂的眼用缓冲溶液，并且优选地通过增强药剂的作用机能以提高单独由眼用溶液或活性剂提供的愈合速度来协同作用，是有用的。
发明内容
本发明部分基于用于配制在递送药物活性剂以及通过加速或促进受损害的眼部组织愈合来治疗眼睛病症中有用的可局部施用的悬浮液的眼用缓冲剂的发现。
因此，在一个方面，本公开内容提供液体眼用组合物。所述组合物包括a)0.1至2.0％(w/v)氯化钠；b)0.01至0.5％(w/v)氯化钾；c)0.01至1.0％(w/v)三水合醋酸钠；d)0.01至1.0％(w/v)二水柠檬酸三钠；和e)水。在一个实施方案中，所述组合物不包括或者包括少于0.03％(w/v)的二水合氯化钙或氯化镁六水合物中的任一种或两者。
在另一个实施方案中，本公开内容提供液体眼用组合物，其包括a)0.1至2.0％(w/v)氯化钠；b)0.01至0.5％(w/v)氯化钾；c)0.01至1.0％(w/v)三水合醋酸钠；d)0.01至1.0％(w/v)二水柠檬酸三钠；e)水和f)药物活性剂。在一些实施方案中，所述药物活性剂是PKC抑制剂或激活剂，例如PKC-α抑制剂、PKC-ε抑制剂、PKC-δ抑制剂或PKC-δ激活剂。在一些实施方案中，所述药物活性剂是PKC-α抑制剂。在一些实施方案中，所述组合物不包括或者包括少于0.03％(w/v)的二水合氯化钙或氯化镁六水合物中的任一种或两者。
在另一个方面，本公开内容提供加速或促进受试者中受损的眼部组织或眼部伤口的方法。所述方法包括向受试者的眼睛施用所公开的液体眼用组合物。在不同的实施方案中，所述伤口可以是角膜溃疡伤口、视网膜病变伤口、烧伤、炎性伤口、干眼综合征伤口、黄斑变性伤口、撕裂伤、外科切口伤口或术后粘连伤口。
在另一个方面，本公开内容提供了润滑受试者眼睛的方法。所述方法包括以足以润滑眼睛的量向受试者的眼睛局部施用液体眼用组合物。在优选的实施方案中，眼用组合物适于用作润眼剂或人工泪液组合物。
在另一个方面，本公开内容提供了治疗受试者眼睛感染的方法。所述感染可由任何传染剂例如病毒、真菌或细菌、原生动物、变形虫等导致。所述方法包括向受试者的眼睛局部施用液体眼用组合物。在优选的实施方案中，本发明的眼用组合物含有足以治疗或治愈感染的量的抗感染剂或抗炎剂。
本发明的另一个方面涉及通过施用基于本发明的缓冲的眼用溶液治疗眼部的变态反应，所述缓冲的眼用溶液另外地含有抗变应性药物例如抗组胺剂(诸如皮质醇)、肥大细胞稳定剂例如色甘酸钠、血管收缩剂例如萘甲唑林。
本发明还涉及基于本发明的缓冲剂的治疗青光眼的制剂以及用这些组合物治疗青光眼的方法。通常，这些制剂含有抗青光眼剂例如β-阻滞剂、肾上腺素能激动剂例如α-3肾上腺素能激动剂、地美溴铵或可通过局部递送至眼睛治疗青光眼的任何其他已知的或尚未发现的剂。
在另一个方面中，本公开内容的眼用组合物被用作眼洗剂或眼冲洗以预防或抑制眼部组织损伤或创伤。像这样，本公开内容提供了预防或抑制眼部组织损伤或创伤的方法，其包括响应于对腐蚀性化学品的暴露向受试者的眼睛局部施用本公开内容的液体眼用组合物。
在另一个方面，本公开内容提供了将药剂递送至患有眼睛疾病、病况或损伤的受试者中。所述方法包括向受试者的眼睛局部施用本公开内容的液体眼用组合物，其中所述组合物包括一种或多种药物活性剂并且以足以治疗或治愈所述损伤、疾病或病况的量施用。
在不同的实施方案中，液体眼用组合物包括：0.6至0.8％(w/v)氯化钠；0.07至0.09％(w/v)氯化钾；0.3至0.5％(w/v)三水合醋酸钠；0.1至0.3％(w/v)二水柠檬酸三钠和无菌水。在一些实施方案中，组合物具有约5.5至8.0或6.8至7.6的pH和从约220至320mOsm/kg的重量渗透浓度。在不同的实施方案中，所述组合物可具有约1至50,000cps或about 1至4,000cps的粘度。.
除了上文所述的，基于本发明的所述缓冲的溶液的组合物可包括一种或多种药物活性剂，其可被用于局部治疗或治愈眼睛的病况、疾病或损伤，包括但不限于麻醉剂、收敛剂、抗高血压、抗青光眼剂、神经保护剂、抗变态反应剂、粘液－促分泌素(muco-secretagogue)、血管形成抑制因子、抗微生物剂、疼痛缓解剂或抗炎剂。
在某些实施方案中，所述药物活性剂优选地是多肽、寡核苷酸、激素、类固醇、皮质醇、化学化合物或脂质。在一些实施方案中，药物活性剂是PKC抑制剂或激活剂,例如PKC-α抑制剂、PKC-ε抑制剂、PKC-δ抑制剂或PKC-δ激活剂。在一些实施方案中，PKC抑制剂或激活剂是选自SEQ ID NO:1-18的多肽。
附图说明
图1是在兔眼睛受试者中比较眼用缓冲液配方1与对照(DPBS-/-)对机械角膜创伤的治疗效果的图解表示。
图2是在兔眼睛受试者中比较眼用缓冲液配方1与对照(BBS)对机械角膜创伤的治疗效果的图解表示。所述曲线图描述创伤后24小时内具有伤口大小上有≥50％的减少的眼睛的百分比。
图3是在兔眼睛受试者中比较眼用缓冲液配方1与对照(BSS)对机械角膜创伤的治疗效果的图解表示。所述曲线图描述创伤后60小时和72小时内具有完全伤口闭合的眼睛的百分比。
图4A至4I是在兔眼睛受试者中比较眼用缓冲液配方1与对照对化学角膜创伤的治疗效果的一系列图解表示。图4A比较创伤后2天的睑水肿。图4B比较创伤后2天的结膜发红。图4C比较创伤后3天的结膜发红。图4D比较创伤后2天的结膜水肿。图4E比较创伤后2天的角膜水肿。图4F比较创伤后3天的角膜水肿。图4G比较创伤后2天的虹膜血管化。图4H比较创伤后2天的眼分泌物。图4I比较创伤后3天的眼分泌物。
图5是在兔眼睛受试者中比较眼用缓冲液配方1与BSS、(护理标准)和对照(水)对化学角膜创伤的治疗效果的图解表示。所述曲线图描述治疗7天后每个瘢痕区域的浊度得分。
图6是在兔眼睛受试者中比较眼用缓冲液配方1与BSS、(护理标准)和对照(水)对化学角膜创伤的治疗效果的图解表示。所述曲线图描述治疗7天后瘢痕区域的大小。
图7是在兔眼睛受试者中比较眼用缓冲液配方1与BSS、(护理标准)和对照(水)对化学角膜创伤的治疗效果的图解表示。所述曲线图描述治疗7天后每个瘢痕区域的浊度得分。
图8是包括比较经受机械角膜创伤并用单独的媒介物(DPBS-/-，左边)、配方3(MPDY-10.1μg/眼/治疗和胰岛素0.01U/眼/治疗，(中央)和配方2(MPDY-10.1μg/眼/治疗，右边)的完全愈合的角膜的直方图的图解表示。
图9是比较溶于BSS(标准眼用缓冲剂)或HOB-10(称作HO/05/09)的多肽MPDY-1的治疗效果的图解表示。MPDY-1的浓度以μg/眼/治疗表示。
图10是包括比较用溶于BSS(标准眼用缓冲剂)或HOB-10(称作HO/05/09)的多肽MPDY-1治疗24小时时具有≥50％闭合的机械损伤的眼睛的百分比的直方图的图解表示。MPDY-1的浓度以μg/眼/治疗表示。
图11是包括比较用溶于BSS(标准眼用缓冲剂)或HOB-10(称作HO/05/09)的多肽MPDY-1治疗后48、60和72小时时具有完全闭合的眼睛的百分比的直方图的图解表示。MPDY-1的浓度以μg/眼/治疗表示。
图12A至12I是在兔眼睛受试者中比较单独(HO/05/09)和与胰岛素组合(HO/05/09+Ins)使用的MPDY-1多肽与对照对化学角膜创伤的治疗效果的一系列图解表示。图12A比较创伤后2天的睑水肿。图12B比较创伤后2天的结膜发红。图12C比较创伤后3天的结膜发红。图12D比较创伤后2天的结膜水肿。图12E比较创伤后2天的角膜水肿。图12F比较创伤后3天的角膜水肿。图12G比较创伤后2天的虹膜血管化。图12H比较创伤后2天的眼分泌物。图12I比较创伤后3天的眼分泌物。
图13是包括经受化学角膜创伤以及单独用溶于HOB-10(称为HO/05/09)和与胰岛素组合(称为HO/05/09+胰岛素)的多肽MPDY-1以及(护理标准)和对照(水)治疗的兔眼的图片的图片表示。
图14是在兔眼睛受试者中比较单独溶于HOB-10(HO/05/09)和与胰岛素(HO/05/09+Ins)组合使用的多肽MPDY-1与(护理标准)和对照(水)对化学角膜创伤的治疗效果的图解表示。所述曲线图描述治疗7天后每个瘢痕区域的浊度得分。
图15是在兔眼睛受试者中比较单独溶于HOB-10(HO/05/09)和与胰岛素(HO/05/09+Ins)组合使用的多肽MPDY-1与(护理标准)和对照(水)对化学角膜创伤的治疗效果的图解表示。所述曲线图描述治疗7天后每个瘢痕区域的大小。
图16是在兔眼睛受试者中比较单独溶于HOB-10(HO/05/09)和与胰岛素(HO/05/09+Ins)组合使用的多肽MPDY-1与(护理标准)和对照(水)对化学角膜创伤的治疗效果的图解表示。所述曲线图描述治疗7天后每个瘢痕区域的浊度得分。
图17是与比较与不同眼用缓冲剂组合使用的多肽MPDY-1的治疗效果的图解表示。所述图描述治疗7天后每个瘢痕区域的浊度得分。显示了MPDY-1的浓度(μg/眼/治疗)。
图18A和18B是包括与不同眼用缓冲剂组合使用的多肽MPDY-1的治疗后24小时时具有≥50％闭合的眼睛的百分比的直方图的图解表示。显示了MPDY-1的浓度(μg/眼/治疗)。
图19是包括与不同眼用缓冲剂组合使用的多肽MPDY-1的治疗后48、60和72小时时具有完全闭合的眼睛的百分比的直方图的图解表示。
图20是显示通过HO/05/09促进角膜创伤的表皮细胞再生的一系列图片和图解表示。兔经受化学碱烧伤创伤(6mm宽，NaOH 1N 20秒)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。荧光染色被用于在创伤后立即，创伤后24,36、48和60小时和研究结束时测量角膜糜烂。图20A描述荧光素染色的角膜图像。图20B描述在创伤后24小时获得50％闭合的伤口的百分比。图20C描述在创伤后48小时获得98％闭合的伤口的百分比。
图21是显示HO/05/09导致角膜伤口成熟的一系列图片和图解表示。兔经受化学碱烧伤创伤(6mm宽，NaOH 1N 20秒)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。图21A较低的图板描述对K12的免疫组化染色。图21B描述经H&E染色获得完全闭合的伤口的百分比。图21C描述经K12染色获得完全闭合的伤口的百分比。
图22是显示HO/05/09在角膜基质中增强胶质沉积的直方图。将兔经受化学碱烧伤创伤(6mm宽，NaOH 1N 20秒)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。直方图概述角膜中组织胶质染色。
图23是显示HO/05/09减少所选择的角膜炎性响应的参数的直方图。将兔经受化学碱烧伤创伤(6mm宽，NaOH 1N 20秒)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。所述直方图通过临床的裂隙灯眼评价概述炎性参数的行态学评估。
图24是通过所概述的参数评分显示HO/05/09减少角膜炎性响应的直方图。将兔经受化学碱烧伤创伤(6mm宽，NaOH 1N20秒)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。所述直方图通过裂隙灯检查概述评价12个炎性参数的累积得分。
图25是显示HO/05/09在小鼠中促进角膜伤口的表皮细胞再生的直方图。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。进行角膜受伤区域的组织学H&E染色并且图解表示伤口闭合的客观评估。
图26是显示小鼠中HO/05/09减少角膜创伤裂隙中淋巴细胞浸润的一系列图片。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。进行角膜受伤区域的组织学H&E染色。箭头指示浸润的淋巴细胞。
图27是显示小鼠中HO/05/09降低角膜创伤中I-CAM-1水平的一系列图片。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。对I-CAM-1的免疫组化染色。
图28是显示小鼠中HO/05/09减少对角膜的T细胞募集的一系列图片和图解表示。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。图28A是CD3(T细胞)的免疫组化染色图像。图28B是概述每个角膜的T细胞的图解表示的直方图。
图29是显示小鼠中HO/05/09降低角膜创伤裂隙中血管发生的直方图。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续7天内每天三次用眼部滴入治疗处理眼睛。进行角膜受伤区域的组织学H&E染色。评估整个角膜区域的血管并且以客观的任意单位图解表示结果。
图30是显示小鼠中DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml促进角膜伤口的表皮细胞再生的直方图。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续7天内每天三次通过用DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml或用配方1作为对照的眼部滴入治疗处理眼睛。在创伤后7天获得完全表皮闭合的伤口的百分比。
图31是显示小鼠中DAP-1 1μg/ml和DIP-1 1μg/ml降低角膜创伤裂隙中淋巴细胞浸润的直方图。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续3天内每天三次通过用DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml或用配方1作为对照的眼部滴入治疗处理眼睛。进行角膜受伤区域的组织学H&E染色并任意评估淋巴细胞浸润。
图32是显示小鼠中DAP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml降低中性粒细胞向角膜创伤裂隙募集的直方图。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续3天内每天三次通过用DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml或用配方1作为对照的眼部滴入治疗处理眼睛。用特殊的中性粒细胞染色试剂盒对皮肤样品的组织切片进行染色(根据制造商)。对每个固定场X200的中性粒细胞计数并以任意单位表示。
图33是显示小鼠中DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml减少角膜创伤裂隙中血管发生的直方图。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续3天内每天三次通过用DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml或用配方1作为对照的眼部滴入治疗处理眼睛。进行角膜受伤区域的组织学H&E染色。评估整个角膜区域中的血管并且以目标随意单位图解表示结果。
图34是显示小鼠中DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml降低受伤的角膜的病理学膨胀的直方图。将小鼠经受化学碱烧伤创伤(使用硝酸银涂抹器10秒钟)。在连续3天内每天三次通过用DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml或用配方1作为对照的眼部滴入治疗处理眼部。进行角膜受伤区域的组织学H&E染色并客观评估角膜膨胀。结果以任意单位显示。
发明详述
本公开内容部分基于适于配制在递送药物活性剂中有用的可局部施用的悬浮液的眼用缓冲组合物的发现。所述组合物增强不同药物活性剂的药学作用并且具有自身的治疗表征。
本公开内容还利用调解不同的PKC同种型是影响伤口愈合的有效工具的知识。如美国专利临时申请第2006/0258562号中所讨论的，伤口愈合可由抑制或活化PKC同种型的表达和/或活性来促进，例如PKC-α、PKC-ε和PKC-δ。然而，将剂方便地递送以抑制或活化对眼部组织的这些活性需要适于向眼睛施用的特别配制的眼用溶液同时促进所述剂的药物活性。
本公开内容基于自身展现治疗效果并且当与药物活性剂组合时增强所述剂的作用机能以提供协同效应并增加单独施用任一个的治愈率的特殊的眼用制剂的发现。
因此，在本公开内容的一个方面，提供了加速或促进受试者中受损的眼部组织或眼部伤口的愈合的方法。所述方法包括向受试者的眼睛施用所公开的液体眼用组合物。所述组合物可单独或与其他药剂例如PKC同种型抑制剂或激活剂，特别地PKC-α、PKC-ε抑制剂、PKC-δ抑制剂或PKC-δ激活剂组合使用。
在相关的方面，眼用组合物可起到人工泪液溶液或润眼剂的作用以促进伤口愈合或舒适。如此，本公开内容提供润滑受试者眼睛的方法，所述方法包括向受试者的眼睛局部施用液体眼用组合物。
应当理解的是这一公开内容不限于所描述的特定的组合物、方法和实验条件，因为这些组合物、方法和条件可以变化。还应当理解的是本文所用的术语仅为了描述特定实施方案而不预期为限制性的，本发明的范围将仅由所附的权利要求限制。
参照附图和所附的说明可更好的理解根据本公开内容的方法和药物组合物的原理和运行。
如本说明书和所附的权利要求中所用的，除非上下文中以其他方式清楚地指出，否则单数形式“一(a)”“一(an)”和“该(the)”包括复数引用。因此例如，对“该方法”的引用包括一种或多种方法和/或将在阅读本公开内容时对本领域技术人员来说变得更加清楚的本文描述的类型的步骤等等。
除非以其他方式定义，否则本文所用所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的一般技术人员通常所理解的相同的含义。尽管等同或相似于本文描述的那些的任何方法和材料可用于实行或测试本发明，但现将描述的是优选的方法和材料。
本公开内容提供适于局部应用于哺乳动物眼睛的液体眼用组合物。如本文所用的，术语“眼用溶液”、“液体眼用组合物”、“眼用缓冲组合物”和其排列组合可互换使用并且是指眼用可接受或与对眼睛的应用相容的液体制剂并且在某些实施方案中形成用于加入药物活性剂的原液。
如本文所用的，术语“眼用可接受的组合物”或“与对眼部的应用相容的”包括可被放入哺乳动物或人眼睛中而不会导致任何显著的不适、损害或危害的组合物。
如本文所用的，术语“哺乳动物眼睛”是指哺乳动物目中任何动物的眼睛。这些动物包括但不限于马、猫、犬、兔、小鼠、山羊、绵羊、非人灵长类动物和人。因此、该方案预期用于兽医应用以及人用途中。
如本文所用的，术语“受试者”是指哺乳动物受试者。如此，可预见哺乳动物目中任何动物的治疗。这样的动物包括但不限于马、猫、犬、兔、小鼠、山羊、绵羊、非人灵长类动物和人。因此、本公开内容的方法预期用于兽医应用以及人用途中。
配制用于缓解眼伤口的所描述的眼用组合物。
如本文所用的，术语“伤口”泛指通过多种方式(例如压力、炎症、外伤导致的伤口、切口、溃疡、烧伤等)中的任一种引起对上皮的损伤并且具有不同的表征。
伤口的“症状”是受治疗者经历的并且指示伤口的任何病态的现象或在结构、功能或感觉上从正常的偏离。
就伤口而言术语“愈合”是指通过将受伤组织或上皮恢复成正常状态或功能来修复伤口的过程。
短语“加速或促进愈合”是指诱导伤口收缩的肉芽组织形成和/或诱导上皮形成(例如上皮中新细胞的生成)。伤口愈合可方便地通过减小的伤口面积来测量。
术语“眼部”或“眼部组织”意指附属于眼睛的任何组织或细胞。此外，术语“眼部”与术语“眼睛”可互换使用。
本公开内容预期治疗所有类型的眼部伤口，包括慢性伤口。
术语“慢性伤口”是指显示妨碍生理学事件序列的受损的愈合参数的伤口。这些伤口往往延长和/或停止愈合时间过程，使得伤口经受其他的并发症例如复发的感染和坏疽。
本文中受试者的“治疗”是指治疗性治疗和预防性(prophylactic)或预防性(preventative)措施两者。需要治疗的那些包括已经具有眼伤口的那些以及其中眼伤口有待被预防的那些。因此，受试者可以遭受眼伤口或可以对眼伤口例如干眼敏感。
在不同的实施方案中，眼用溶液可被用于治疗角膜溃疡伤口，视网膜病变伤口，烧伤、炎性伤口、干眼综合征伤口、黄斑变性伤口、撕裂伤、外科切口伤口或术后粘连伤口。
表述“有效的量”是指对预防、缓解或治疗眼伤口有效的药物活性剂例如PKC同种型的抑制剂或活化剂(诸如SEQ ID NO：1-18的多肽)的量。这些有效的量通常将导致伤口的征象、症状和/或其他指示的改善。
如本文所用的，术语“PKC同种型”涵盖所有的PKC同种型，包括PKC-a、PKC-β、PKC-δ、PKC-ε、PKC-η、PKC-ζ、PKC-γ、PKC-θ和PKC-λ。
短语“调节PKC同种型的表达和/或活性”涉及增加或减少PKC同种型的表达和/或活性。表达的增加导致PKC同种型的产生增加。
综上所述，本文所示的结果表明本发明的眼用组合物对促进眼部伤口愈合以及将药物活性剂递送至眼部组织有用。
眼用组合物可单独用于治疗以促进伤口愈合。因此，在一个实施方案中，组合物包括a)0.1至2.0％重量每体积(w/v)氯化钠；b)0.01至0.5％(w/v)氯化钾；e)0.01至1.0％(w/v)三水合醋酸钠；d)0.01至1.0％(w/v)二水柠檬酸三钠和e)水，条件是组合物不包括或包括少于0.03％(w/v)的二水合氯化钙或氯化镁六水合物中的任一种或两种。
氯化钠是具有式NaCl的离子化合物。在实施方案中，眼用组合物可包括0.1至2.0％(w/v)氯化钠。在不同的实施方案中，所述组合物可包括从约0.01至2.0％、0.05至2.0％、0.1至2.0％、0.5至1.5％、0.5至1.0％、0.6至0.9％、0.6至0.8％、0.65至0.75％或0.7至0.75％(w/v)氯化钠。在一个实施方案中，所述组合物包括约0.70％、0.71％、0.73％或0.74％(w/v)的氯化钠.
化学化合物氯化钾是由钾和氯组成的金属氯化物盐，具有式KCl。在实施方案中，眼用组合物可包括0.01至0.5％(w/v)氯化钾。在不同的实施方案中，所述组合物可包括从约0.01至0.5％、0.05至0.4％、0.05至0.3％、0.05至0.2％、.0.05至0.1％、0.06至0.09％、0.07至0.085％,或0.08至0.085％(w/v)氯化钾。在一个实施方案中，所述组合物包括约0.08％、0.081％、0.082％、0.083％、0.084％,或0.085％(w/v)的氯化钾。
三水合醋酸钠是具有式C2H3NaO2的醋酸钠盐。在实施方案中，眼用组合物可包括0.01至1.0％(w/v)三水合醋酸钠。在不同的实施方案中，所述组合物可包括从约0.01至1.0％、0.05至1.0％、0.1至0.8％、0.2至0.5％或0.3至0.4％(w/v)三水合醋酸钠。在一个实施方案中，所述组合物包括约0.35％、0.36％、0.37％、0.38％、0.39％、0.40％、0.41％、0.42％或0.43％(w/v)的三水合醋酸钠。
二水柠檬酸三钠是具有化学式NaH2C6H5O7的酸性盐。本领域技术人员应当理解的是可根据本发明使用单钠、双钠和三钠式的酸性盐。还应当理解的是可根据本发明使用不同水合的盐。在实施方案中，眼用组合物可包括0.01至1.0(w/v)二水柠檬酸钠或二水柠檬酸三钠。在不同的实施方案中，所述组合物可包括从约0.01至1.0％、0.05至1.0％、0.1至0.8％、0.1至0.5％、0.1至0.4％0.1至0.3％、0.1至0.2％或0.15至0.2％(w/v)二水柠檬酸钠或二水柠檬酸三钠。在一个实施方案中，所述组合物包括约0.15％、0.16％、0.17％、0.18％、0.19％或0.2％(w/v)的二水柠檬酸钠或二水柠檬酸三钠。
应当理解的是可根据本发明使用当量的非水合的盐。还应当理解的是可根据本发明使用不同水合的盐。例如通式MgCl2(H2O)x的氯化镁水合物(其中x＝1-5或7-12)可被用于取代所述六水合盐并且可用所述缓冲组合物的其他优选的水合物盐进行相似的取代。
眼用组合物可单独用于治疗以促进伤口愈合或可与一种或多种药物活性剂组合。因此，在一个实施方案中，所述组合物包括a)0.1至2.0％(w/v)氯化钠；b)0.01至0.5％(w/v)氯化钾；c)0.01至1.0％(w/v)三水合醋酸钠；d)0.01至1.0％(w/v)二水柠檬酸三钠；e)水；和药物活性剂。
在不同的实施方案中，药物活性剂是PKC同种型抑制剂或激活剂，例如PKC-α抑制剂、PKC-ε抑制剂、PKC-δ抑制剂或PKC-δ激活剂、术语“激活剂”本文用于描述增强PKC同种型的表达和/或活性的分子。术语“抑制剂”本文用于描述抑制PKC同种型的表达和/或活性的分子。其中，磷酰基转移区、假底物结构域、佛波酯结合序列和磷酸化位点可以是调解同工酶特异性PKC活性的靶。
PKC同种型的“假底物区”或自体抑制结构域本文中被定义为实质上不具有可磷酸化的残基的激酶的底物的共有序列。假底物结构域位于调节区，与底物识别基序十分相似，其封闭识别位点并且防止磷酸化。因此PKC同种型的抑制性肽(例如本公开内容的多肽)通过用丙氨酸(A)替代丝氨酸(S)或苏氨酸(T)的可磷酸化的残基来获得的。
在不同的实施方案中，PKC同种型抑制剂或激活剂是多肽。不限制于特定理论，已经发现多肽PKC抑制剂和激活剂的作用机能在与本文描述的眼用溶液组合并一起施用时被增强。眼用缓冲的溶液提供治疗以及调解PKC抑制剂或激活剂并且通过增强抑制剂的作用机能来协同作用以增加由所述眼用溶液或活性剂单独火雨其他缓冲溶液组合提供的治愈率。
在不同的实施方案中，PKC同种型的抑制剂是PKC的假底物区的抑制剂并且是多肽，而PKC同种型的激活剂也是多肽。术语“多肽”、“肽”或“蛋白”本文可互换使用以标明通过α氨基和相邻残基的羧基基团之间的肽键将一个与其他连接的线性连续氨基酸残基。
在不同的实施方案中，可使用的多肽PKC激活剂和抑制剂的实例包括但不限于表1中所示的SEQ ID NO:1-6、12、14和17的肽或其生理学上可接受的盐以及显示具有特定的修饰或末端保护基团的表1的SEQ ID NO:7-11、13、15、16和18的肽。
表1:PKC同种型抑制剂和激活剂肽
氨基酸序列 SEQ ID NO
PKC-α抑制剂
Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala 1
Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln 2
Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln 3
Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu 4
Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Arg-Gln 5
Thr-Leu-Asn-Pro-Gln-Trp-Glu-Ser 6
豆蔻酰基-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-(13C315N)Ala-Leu-Arg-Gln-OH 7
H-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-OH 8
豆蔻酰基-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-OH-三氟乙酸盐 9
H-Thr-Leu-Asn-Pro-Gln-Trp-Glu-Ser-OH 10
棕榈酰基-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Arg-Gln-OH 11
PKC-ε抑制剂
Pro-Tyr-Ile-Ala-Leu-Asn-Val-Asp 12
H-Pro-Tyr-Ile-Ala-Leu-Asn-Val-Asp-OH 13
PKC-δ抑制剂
Ser-Phe-Asn-Ser-Tyr-Glu-Leu-Gly-Ser-Leu 14
Ser-Phe-Asn-Ser-Tyr-Glu-Leu-Gly-Ser-Leu-OH 15
Myristoyl-Ser-Phe-Asn-Ser-Tyr-Glu-Leu-Gly-Ser-Leu-OH 16
PKC-δ激活剂
Met-Arg-Ala-Ala-Glu-Ala-Ala-Ala-Ala-Glu-Pro-Met 17
H-Met-Arg-Ala-Ala-Glu-Ala-Ala-Ala-Ala-Glu-Pro-Met-OH 18
在不同的实施方案中，多肽PKC抑制剂或激活剂通常包含6和12个之间的氨基酸，但是长度上可以更长或更短。在不同的实施方案中，多肽PKC抑制剂或激活剂长度上可从6至45、6至40、6至35、6至30、6至25、6至20、6至15或6至10个氨基酸。在一个实施方案中，多肽包括6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸。
通常多肽PKC-α抑制剂包括共用基序序列Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala(SEQ IDNO:1)。可选择地，在另一个实施方案中，PKC-α抑制包括共用基序序列Thr-Leu-Asn-Pro-Gln-Trp-Glu-Ser(SEQ ID NO:6)。
尽管可通过确切的序列或基序序列定义多肽PKC抑制剂和激活剂，本领域技术人员将理解的是具有相似序列的多肽可具有相似的功能。因此，预期涵盖具有基本上相同的序列或具有与表1中的PKC抑制剂或激活剂基本上相同或相似序列的多肽。如本文所使用的，术语“基本上相同的序列”包括包含与SEQ IDNO:1-18定义的序列具有至少60+％(意指六十百分比或更高)，优选地70+％，更优选地80+％和最优选地90+％、95+％或98+％的序列同一性并与SEQ IDNO:1-18的多肽相比保留，60+％，优选地70+％，更优选地80+％和最优选地90+％、95+％或98+％的PKC同种型抑制或活化活性的序列的多肽。
两个多肽基本上相同的进一步指示是一个多肽与第二个免疫交叉反应。因此，例如当两个肽仅因保守取代而不同时多肽通常与第二多肽基本上相同。
就蛋白或肽而言，术语“保守取代”用于反映不会实质性改变分子活性(例如抗微生物活性)的氨基酸取代。通常保守的氨基酸取代包括一种氨基酸取代具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的另一种氨基酸。下列六组每组包含彼此为典型的保守取代的氨基酸：1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)。
术语“氨基酸”以其最广义被使用，包括天然存在的氨基酸以及包含氨基酸类似物的非天然存在的氨基酸。由这一广义定义来看，本领域的技术人员将知道本文对氨基酸的引用包括，例如天然存在的成蛋白的(L)-氨基酸、(D)-氨基酸、化学修饰的氨基酸例如氨基酸类似物、天然存在的非成蛋白的氨基酸例如正亮氨酸，和具有本领域中己知为氨基酸表征的性质的化学合成的化合物。如本文所用的，术语“成蛋白的”表明氨基酸可通过代谢途径掺入细胞中的蛋白中。
在两条多肽序列的情况下，术语“同一性”或百分比“同一性”是指，如使用序列比对算法或通过目测所测量的，当以最大一致性比较和比对时，相同或者具有特定百分比的相同的氨基酸残基的两条或更多条序列或子序列。
短语“基本上相同的”在两个多肽的情况下是指，如使用序列比对算法或通过目测所测量的，当以最大一致性比较和对比时，具有至少60+％，优选地80+％，最优选地90-95+％的氨基酸残基列同一性的两条或更多条序列或子序列。
如本领域中熟知的，例如可通过Smith&Waterman((1981)Adv Appl Math2:482)的局部同源性算法，通过Needleman&Wunsch((1970)J Mol Biol 48:443)的同源性比对算法，通过Pearson&Lipman((1988)Proc Natl Acad Sci USA85:2444)的对相似性方法的探索，通过经由目测的这些算法的计算机实现，或其他有效的方法，进行用于比较的序列的最佳比对。
多肽PKC抑制剂或激活剂可具有修饰的氨基酸序列或非天然存在的末端修饰。对肽序列的修饰可包括，例如氨基酸的加入、缺失或取代，条件是通过这些修饰产生的多肽保留PKC同种型抑制或活化活性。另外，多肽可以具有游离末端或具有氨基保护(例如N-保护的)和/或羧基保护(例如C-保护的)末端的结构式存在。保护基团包括：(a)芳香族聚氨酯类保护基团，其包括苄氧羰基、2-氯代苄氧羰基、9-芴甲氧羰基、异烟肼氧羰基和4-甲氧基苄氧羰基；(b)脂肪族聚氨酯类保护基团，其包括叔丁氧羰基、叔戊氧羰基、异丙氧基羰基、2-(4-联苯基)-2-丙氧羰基、烯丙氧基羰基和甲基磺酰基乙氧基羰基(methylsulfonylethoxycarbonyl)；(c)环烷基聚氨酯类保护基团，其包括金刚烷氧羰基、环戊氧羰基、环己氧羰基和异冰片氧基羰基；(d)酰基保护基团或磺酰基保护基团。另外的保护基团包括苄氧羰基、叔丁氧羰基、乙酰基、2-丙基戊酰基、4-甲基戊酰基、叔丁基乙酰基、3-环己基丙酰基、正丁烷磺酰基、苄基磺酰基、4-甲基苯磺酰基、2-萘磺酰基、3-萘磺酰基和1-樟脑磺酰基。
在不同的实施方案中，多肽PKC抑制剂或激活剂是N-酰化的，优选地通过来自C12-C20脂肪酸的酰基基团，例如C14酰基(豆蔻酰基)或C16酰基(棕榈酰基)。
在一个实施方案中，PKC-α抑制剂是N-酰化的，优选地通过来自C12-C20脂肪酸的酰基基团，例如C14酰基(豆蔻酰基)或C16酰基(棕榈酰基)。在示例性的实施方案中，所述多肽是SEQ ID NO:2定义的N-豆蔻酰化的肽(本文称为MPDY-1)。
在一个实施方案中，PKC-δ抑制剂是N-酰化的，优选地通过来自C12-C20脂肪酸的酰基基团，例如C14酰基(豆蔻酰基)或C16酰基(棕榈酰基)。在示例性的实施方案中，所述多肽是SEQ ID NO:16定义的N-豆蔻酰化的肽(本文称为DIP-1)。
在一个实施方案中，PKC-δ激活剂是SEQ ID NO:18的多肽(本文称为DAP-1)。
在一个实施方案中，PKC-δ抑制剂是SEQ ID NO:15的多肽(本文称为DIP-2)。
在一个实施方案中，PKC-δ抑制剂是SEQ ID NO:13的多肽(本文称为EPIP-2)。
在一个实施方案中，所述组合物包括多肽PKC同种型抑制剂，包括PKC-α抑制剂、PKC-ε抑制剂、PKC-δ抑制剂或PKC-δ激活剂。
在不同的实施方案中，眼用溶液的pH是中性至微碱性。优选的是眼用溶液具有约5至9、6.5和8.0、6.8和7.8、7.1和7.8或7.1和7.5之间的pH。在一个实施方案中，pH是约7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7或7.8。
制备缓冲溶液的方法是本领域中的技术人员所熟知的并且可在例如许多标准实验室手册中的任一种中找到(参见，Sambrook et al.,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Press(1989))。在示例性实施方案中，眼用缓冲的溶液被配制为无菌溶液。
眼用溶液中包括的盐的浓度大体上确立溶液的张力。溶液的张力通常是约220-320毫渗摩尔每千克溶液(mOsm/kg)以使得溶液与眼部组织相容。在一个实施方案中，溶液具有约300mOsm/kg的重量渗透浓度。
通常，尤其是当用作人工泪液时，眼用溶液具有约1至约50,100,500,1000,2000,3000,4000或5000厘泊(cps)的粘度。作为溶液，主题组合物通常以滴眼剂的形式分配于眼睛中。然而，应当理解的是主题组合物同样被配制为粘稠液(例如从50至50,000cps的粘度)、凝胶或软膏。
所述组合物可包括其他添加剂。例如，所述组合物可包括下列中的一种或多种：缓冲剂、防腐剂、张力调节剂、缓和剂、润湿剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、舒适性增强剂、软化剂、pH调节剂、润滑剂、聚集抑制剂、电荷改性剂、降解酶抑制剂、膜渗透剂、掩蔽剂(螯合剂)、血管扩张或粘度调节剂。
而缓冲溶液本身可被认为是张力调节剂和pH调节剂，大体上将滴眼液保持在特定的离子浓度和pH，另外的张力调节剂可被添加以调节该溶液的最终张力。这种张力调节剂是本领域技术人员熟知的，包括但不限于甘露醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、尿素和甘油。同时，各种盐类，包括一价阳离子卤化物盐，已知调节渗透压。在使用张力调节剂的实施方案中，眼用溶液可以包含单一的剂或不同张力调节剂的组合。
在不同实施方案中，所述眼用溶液可以进一步包括一个或多种表面活性剂。合适的表面活性剂包括阳离子，阴离子，非离子或两性表面活性剂。优选的表面活性剂是中性或非离子表面活性剂。
各种非离子表面活性剂是熟知并适合使用的。非离子表面活性剂包括非离子型嵌段共聚物，例如聚(氧乙烯)-聚(氧化丙烯)嵌段共聚物(也被称为泊洛沙姆)。这种共聚物是商业上已知的并以大范围的结构和分子量生产，具有不同含量的环氧乙烯。这些非离子表面活性剂是无毒的、稳定的并在水系统中容易分散并且与大范围的制剂和用于眼用制品的其他成分相容。此外，泊洛沙姆很适合眼科应用因为它们通常具有最小的或无眼刺激性。适合用于眼用溶液的一类泊洛沙姆是特定种类的乙烯二胺的聚乙烯氧基-聚丙烯氧基嵌段共聚物加合物(也被称为poloxamine)，这些剂在清洁上都有效并表现出最小的或无眼刺激性。
合适的表面活性剂的例子包括，但不限于，聚乙二醇脂肪酸酯，C12-C18烃的聚氧丙烯醚和聚氧乙烯，乙二胺的聚氧丙烯嵌段共聚物(例如泊洛沙胺)。其他的例子包括泊洛沙姆182LF、泊洛沙姆188、泊洛沙姆331、泊洛沙姆407NF、十二烷基硫酸钠、Pluronic F-127、聚维酮(Sigma)、PVP K-30、羟乙基纤维素、NF和泰洛沙泊(Sigma)。
在某些实施例中，眼用溶液的保质期可通过包括一个或更多的阳离子螯合剂包含增强，更优选的二价阳离子的螯合剂来增强。螯合剂是本领域技术人员所熟知的。螯合剂的实例包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)和及其盐类(例如二钠)，亚乙基双(氧亚乙基次氮基)四乙酸(EGTA)和2,2’-(乙烯基二亚氨基)-二丁酸EDBA，其通常以约0.01至约0.2％(w/v)的量使用。还可采用其他已知的螯合剂(或掩蔽剂)例如某些聚乙烯醇。
在某些实施例中，眼用溶液可任选地包括一众或更多种二价阳离子。二价阳离子，包括，但不限于Mg2+、C2+、Zn22+、Fe2+和Ba2+。
在某些实施例中，眼用溶液包括螯合剂(例如乙二胺四乙酸二钠)和/或其他杀微生物剂，聚亚己基双胍(PHMBO)，N-烷基-2-吡咯烷酮，氯己定，polyquatemium-1，海克替啶，溴硝丙二醇，阿来西定，低浓度的过氧化氢和其眼科可接受的盐。
另外的杀微生物剂和抗微生物剂可以包括但不限于氯己定，硫柳汞，硼酸，硼酸盐，山梨酸钾和山梨酸钠，季铵盐，甲醛的供体，苄索氯铵，苯甲酸，苯甲醇，苯甲酸，对羟基苯甲酸丁酯，西吡氯铵，三氯叔丁醇，氯甲酚，甲酚，脱氢乙酸，羟苯乙酯，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸甲酯钠，苯酚，苯乙醇，乙酸苯汞，硝酸苯汞，polyquad，苯甲酸钾，尼泊金丙酯，尼泊金丙酯钠，苯甲酸钠，脱氢醋酸钠，丙酸钠，山梨酸，高硼酸钠，麝香草酚，和抗菌多肽(例如crecropin、防卫素和马加宁)及其混合物。抗微生物剂通常以约0.01至2.5％(w/v)的浓度范围使用。
在不同实施方案中，眼用溶液可以任选包括缓和剂。缓和剂是舒缓疼痛的组织尤其是粘膜的物质。缓和剂(或保湿剂)用于润滑粘膜表面缓解干燥和刺激。术语“缓和剂”是指水溶性聚合物，其局部应用于眼睛以保护和润滑粘膜表面并缓解干燥和刺激。在这个意义上，术语“润湿剂”也是常用的。此外，应当理解的是某些组分具有多种功能的属性。例如，纤维素衍生物是常见的缓和剂，也用作“粘度增加剂”。相似地，甘油是已知的缓和剂，也作为“张力调整剂”。广泛使用的缓和剂的实例包括；聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素衍生物和聚乙二醇。
由美国食品和药物管理局批准的缓和剂的实例包括纤维素衍生物，例如羧甲基纤维素钠，羟乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素和甲基纤维素；右旋糖酐70；明胶；多元醇，例如甘油，聚乙二醇300，聚乙二醇400，聚山梨酯80，丙二醇，聚乙烯醇和聚维酮(聚乙烯基吡咯烷酮)。
包含各种缓和剂的已知眼用组合物的具体实例是本领域技术人员已知。例如，美国专利第5,591,426号公开了用作人工泪液的眼用溶液。该参考文献包括硼酸盐缓冲的、防腐的(例如，苯扎氯铵)水溶液的具体的实例，包括下列三种缓和剂：1)甘油，2)聚乙烯吡咯烷酮和3)纤维素衍生物，例如羟丙基甲基纤维素。美国专利第5,106,615号公开等渗剂保湿滴眼剂包括甘油，乙二醇或丙二醇，以及阴离子聚合物例如卡波姆941。其他参考文献公开了缓和剂的不同组合的使用，包括但不限于丙二醇，聚山梨酯80，聚乙烯吡咯烷酮，聚氧化乙烯，聚氧化乙烯和聚丙烯酰胺，羟乙基纤维素，聚乙二醇6000和葡萄糖(参见美国专利号4,029,817,3,767,788；3,767,789；3,856,919；3,907,985；3,920,810；3,947,573；3,987,163,3,549,747,4,131,651,4,120,949,和4,409,205)。
在某些实施方案中，眼用溶液可任选地包括粘度调节剂(例如，特别是当滴眼液预期作为润滑剂(例如人工泪液)时)。适于施用于眼睛的粘度调节剂是本领域技术人员熟知的。特别是，纤维素衍生物常用来增加粘度以及如此提供其他的优势。具体的纤维素衍生物包括但不限于羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素，甲基纤维素，羟乙基纤维素以及类似物。
尽管本领域技术人员应当理解的是本眼用组合物可用于局部递送药物活性剂以改善眼部伤口，但剂也可经由将所属溶液应用于眼睛而被系统递送。为了帮助经由眼部组织的粘膜吸收药物活性剂，眼用组合物可以包括一个膜渗透增强剂。可以提供膜渗透增强的剂包括，例如表面活性剂，胆汁盐，磷脂添加剂，混合胶束，脂质体或载体，醇，烯胺，一氧化氮供体化合物，长链的两亲性分子，小的疏水性的渗透促进剂，钠或水杨酸衍生物，乙酰乙酸甘油酯，环糊精或β环糊精衍生物，中链脂肪酸，螯合剂，氨基酸或其盐，N-乙酰氨基酸或其盐以及降解所选择的膜组件的酶。
在一个方面，眼用组合物可以用作眼部润滑剂或人工泪液。因此，本发明提供了一种润滑眼睛的方法。该方法包括向受试者的眼睛局部施用液体眼用组合物。
在另一个方面，眼用组合物包括一种或多种药物活性剂。如本文所讨论的，本领域技术人员应当理解的是药物活性剂可为局部作用(例如伤口处理)或经由吸收至受试者的循环系统的系统作用而施用。
通常，眼用组合物可用来将不同药物活性化合物施用于眼睛。这样的药物可包括但不限于麻醉剂、收敛剂、抗高血压剂、抗青光眼剂、神经保护剂、抗变态反应剂、粘液－促分泌素、血管形成抑制因子、抗微生物剂、疼痛缓解剂或抗炎剂。
在某些实施例中，药物活性剂是眼用药物。这些药物包括但不限于：抗青光眼剂，例如β受体阻滞剂(包括噻吗洛尔、倍他洛尔、左倍他洛尔、卡替洛尔)，缩瞳剂(包括毛果芸香碱)，碳酸酐酶抑制剂，前列腺素，seretonergics，毒蕈碱类，多巴胺受体激动剂，肾上腺素受体激动剂(包括阿可乐定和溴莫尼定)；抗血管生成剂；抗感染剂，包括喹诺酮类例如环丙沙星以及氨基糖苷类例如妥布霉素和庆大霉素；非甾体和甾体抗炎剂，例如舒洛芬，双氯芬酸，酮咯酸，利美索龙和四氢可的索；生长因子，例如EGF；免疫抑制剂；和抗变态反应剂，包括奥洛他定。眼用药物可以药学上可接受的盐的形式存在，例如马来酸噻吗洛尔，酒石酸溴莫尼定或双氯芬酸钠。组合物还可以包括眼用药物的组合，例如(i)β受体阻滞剂例如倍他洛尔和和噻吗洛尔与(ii)前列腺素例如拉坦前列素；15酮拉坦前列素；曲伏前列素；和异丙基乌诺前列酮的组合。
在不同实施方案中，药物活性剂可以是任何类型的分子。例如，药物活性剂可以是寡核苷酸，激素，类固醇，皮质醇，脂质，多肽，肽模拟物，类肽例如插烯肽或化合物例如或有机小分子有机分子。本领域技术人员应理解的是任何给定的药物活性剂可以是合成或天然来源的。
此外，除了PKC抑制性多肽，可以配制任何其他类型的多肽，例如任何其它医疗或诊断上有用的多肽。眼用组合物可以结合任何多肽，尽管改善多肽好处的程度可根据多肽的分子量以及物理和化学性质而变化。例如，多肽可能是一种生长因子例如PDGF、EGF、TGF-β、KGF、ECGF、IGF 1或PDGF-BB。多肽也可是胰岛素。胰岛素可以是重组的或来自天然来源例如人胰岛素或适合人类使用的非人哺乳动物胰岛素例如猪胰岛素。本领域的技术人员应当理解的是也可以使用胰岛素类似物，例如化学或氨基酸修饰的类似物。胰岛素类似物的实例包括但不限于NPH胰岛素、赖脯胰岛素、门冬胰岛素、赖谷胰岛素、甘精胰岛素和地特胰岛素
在另一个实施方案中，药物活性剂是寡核苷酸。术语“多核苷酸”和“寡核苷酸”本文可互换使用，是指核酸分子。许多药物活性寡核苷酸是本领域中已知的，其可用于本文所述的眼用组合物。这些寡核苷酸可以包括反义分子、siRNA或类似物。
虽然眼用溶液可优选配制成备用的水溶液，但替代制剂也预期在本公开内容的范围内。因此，例如，眼用溶液可被冻干或相反作为准备溶解在水(例如去离子水或蒸馏水)中的干燥粉末或片剂提供。
在一个实施方案中，干燥粉末或片剂形式的组合物的配制涉及保护组合物中存在的肽药剂存。有效的配制通常涉及处理和规划蛋白和其他剂(如果存在)，从而使蛋白质的构象和生物活性在整个加工和来自干燥形式的长时间释放过程中被保持。持续的蛋白包装系统可以用常常用于体内递送蛋白治疗的各种已知的微球递送系统来实现。
一种微球装配方法描述于美国专利第5,019,400号并特别设计用于实现高的蛋白包装效率而同时保持蛋白的完整性。所述工艺包括：(i)通过将药物溶液与稳定的赋形剂一起喷雾冷冻干燥从大块蛋白制备冷冻干燥的蛋白颗粒；(ii)制备药物-聚合物悬浮液，然后通过超声波降解或均质化减少药物的粒径；(iii)通过雾化于液氮中生产冷冻的药物-聚合物微球；(iv)用乙醇提取聚合物溶剂；和(v)过滤并真空干燥以产生最终的干粉产品。所得到的粉末包含的固体形式的蛋白，其均匀地和刚性地分散在多孔的聚合物颗粒中。工艺中最常用的聚合物，聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)，同时是生物相容的和可生物降解的。
在另一个实施方案中，溶液的一个或更多的组分可以作为“浓缩物”提供，例如在准备用于稀释的存储容器中(例如以预先测量的体积)或在准备添加至一定体积的水中的可溶胶囊中。
在又一个实施方案中，本公开内容提供的试剂盒，其利用本文所描述的眼用溶液中的一种或多种。因此，例如，试剂盒可包括一个或多个容器，所述容器含有一种或多种所描述的眼用溶液，片剂或胶囊。该试剂盒可被设计为包括说明材料，其含有本公开内容提供的眼用溶液的使用的指导(例如，程序)。虽然说明材料通常包括书面或印刷材料但它们并不限于此。预期能够存储这样的说明并将它们传达给最终用户的任何介质。这样的介质包括但不限于电子存储介质(例如磁盘、磁带、盒式磁带、芯片)，光学介质(例如CD-ROM)以及类似物。这样的介质可以包括提供这些说明材料的互联网网站地址。
术语“说明”或“说明书”是指通常包括在治疗产品的商业包装中的说明，其包含有关适应症、用法、剂量、施用、禁忌症、有待与所包装的产品组合的其他治疗产品和/或关于使用这种治疗产品的警告和类似的信息。
应当理解的是用于需要治疗的特定受试者的具体的剂量水平和剂量频率可以改变并将取决于多种因素，包括所使用的药物活性剂的活性，该化合物的代谢稳定性和作用长度，年龄，体重，一般健康状况，性别，饮食，施用的模式和时间，排泄速率，药物组合，特定病况的严重程度和经受治疗的宿主。然而一般来说，剂量是近似的，其对于施用特定的药物活性剂的已知方法来说是典型的。在本领域的普通技术人员可以很容易地确定最佳剂量，给药方法和重复速度。确切的配方和剂型可由私人医生根据病人的情况来选择(参见，Fingl,et al.,"The Pharmacological Basis of Therapeutics",Ch.1p.1(1975))。
因此，根据有待治疗的病况的严重程度和响应速度，给药可以是单次或重复施用，具有持续从几天到几个星期的治疗过程中，直到获得治愈或获得病症的减少。在不同的实施方案中，本发明的眼用组合物可以每天施用约1至10次或如需要的以完成的特定病症的改善或防止伤口进行。此外，该组合物可以如所需要的被持续施用或间隔地每天，每周，每月或每年施用。
在眼用组合物包括多肽PKC同种型抑制剂或激活剂的实施方案中，所述多肽以0.001和100μg/ml之间的浓度提供于组合物中。例如，浓度可以在0.001和100,0.01和50,0.01和10,0.01和1以及0.01和.5μg ml之间。
在一个给药方案中，所述方法包括向受试者的眼部组织施用肽PKC同种型抑制剂或激活剂，例如作为滴剂。所述多肽以约1μg ml至约1000μg/ml、1μg/ml至约500μg/ml、1μg/ml至约100μg/ml、1μg/ml至约10μg/ml或10μg ml至约100μg/ml的浓度局部应用。所述肽可以每天，每周，每两周或每月施用至少一次直到病况被处理。例如，每天至少约1，2，3，4，5，6，7天或8次每眼施用约0.1至1.0μg的肽。
在其中眼用组合物包括胰岛素的实施方案中，胰岛素以0.001和100μg/ml之间的浓度提供于组合物。例如，浓度可以在0.001和100、0.01和50、0.01和10、0.01和1以及0.01和.5g/ml之间。
提供下面的实施例进一步说明本公开内容的实施方案，但并不预期限制范围。虽然它们通常是可能会用到的那些，但是可可选择地使用本领域技术人员已知的其他的程序、方法或技术。
实施例1
眼用缓冲剂的治疗效果
配制配方1用于眼睛治疗并加强MPDY-1的作用机能。为了确定眼用缓冲剂配方1对角膜溃疡和眼睛病况的治疗效果，用兔眼进行了一系列的实验。通过机械或化学方法在兔眼睛中诱导角膜溃疡并随后用配方1缓冲溶液或对照治疗。如下诱导角膜溃疡：
机械性角膜溃疡形成：6mm角膜环钻(Grieshaber,Switzerland)，预设为50微米深，以及手术显微镜下使用迷你刀片施行均匀的中央角膜上皮糜烂，直径6mm和50微米深。
化学碱性溃疡形成：将5mm吸收纸磁盘用于通过放置120μl的NaOH 1N 10秒施行角膜碱性糜烂。用无菌冲洗水彻底清洗眼睛直至pH恢复到正常(～pH＝7)。
缓冲组合物示于表2中(未显示)
表2眼科缓冲组合物
缓冲组合物(w/v) DPBS-/- BSS NHBSS 配方1
氯化钠 0.8％ 0.64％ 0.8％， 0.71％
氯化钾 0.2％ 0.075％ 0.04％ 0.083％
磷酸氢二钠 1.15％ 0.036％
磷酸二氢钾 0.2％ 00.64％
碳酸氢钠
二水合氯化钙 0.048％
六水合氯化镁 0.03％
三水合醋酸钠 0.39％ 0.39％
二水柠檬酸三钠 0.17％ 0.17％
pH 7.5 7.5 7.5 7.2
重量渗透浓度[mOsm/Kg] 300 300 274 300
测试了用眼用缓冲剂配方1对比对照缓冲剂(DPBS-/-)治疗后机械诱导的角膜溃疡的愈合动力学。将兔经受机械角膜床上，之后是上文所讨论的程序。通过连续3天内每天两次的眼部滴入治疗处理眼睛。使用荧光染色以两小时的间隔测量创伤后24小时开始并直到72小时的角膜糜烂面积。如图1中所示，结果表明采用配方1的治疗加速角膜糜烂的愈合。
除了在伤口愈合研究中常规测定的愈合时间参数之外，若干出版物确立了新参数，伤口大小减少50％，作为完全伤口愈合的有力预测起作用的重要性。这一替代指标由作者们提出作为关键临床决策点来预测糖尿病足溃疡伤口愈合护理的效率(参见Sheehan et al.,Diabetes Care 26(6):1879-82(2003)；和Armstrong et al.,Diabetes Care 31:26-29,(2008))。因此，将结果分析为创伤后24小时具有50％闭合或更高的眼睛(图2)。
配方1同样被证明促进角膜糜烂的完全愈合(图3)。
除了机械诱导的角膜溃疡，还检查了指定的治疗对经由对兔眼的碱烧伤(如上文进行的)的化学诱导的角膜溃疡的治疗效果。临床观察的数据概述于表3和图4中所示的结果中。结果表明，缓冲配方1提供了优良的愈合与控制。另外，曲线图中概述的数据清楚地表明配方1减少眼部炎症和血管化的有益效果。
表3临床观察
在经受化学角膜创伤的兔眼睛中在用眼用缓冲溶液配方1、BSS、(护理标准)和对照(水)治疗7天后进行了另外的实验以测定眼部浊度和瘢痕。
在一个实施方案中，兔眼睛被暴露于5mm纸盘上的1M NaOH 10秒。移除这一盘并且用水冲洗清洗眼睛直到pH正常化(pH＝6.8-7.2)。之后通过应用120μL的不同缓冲溶液每天3次处理眼睛7天。通过软件测量瘢痕面积。通过医学标准计算并给出每个瘢痕区域的浊度得分(最终区域/最初区域)。计算每个未愈合区域的浊度得分。图5显示与和对照相比用配方1治疗的眼睛中7天治疗后每个瘢痕区域的浊度得分减少。
在另一个实验中，兔眼被暴露于5mm纸盘上的1M NaOH 10秒。移除这一盘并且用水冲洗清洗眼睛直到pH正常化(pH＝6.8-7.2)。之后通过应用120μL的不同缓冲溶液每天3次处理眼睛7天。通过软件测量瘢痕面积。图6显示与和对照相比在用配方1治疗的眼睛中7天治疗后瘢痕面积减少。
在另一个实施方案中，兔眼睛被暴露于5mm纸盘上的1M NaOH 10秒。移除这一盘并且用冲洗水清洗眼睛直到pH正常化(pH＝6.8-7.2)。之后通过应用120μL的不同缓冲溶液每天3次处理眼睛7天。通过软件测量瘢痕面积。通过医学标准计算并给出每个瘢痕区域(最终区域/最初区域)的浊度得分。计算每未愈合区域的浊度得分(医学标准)。图7显示与和对照相比在用配方1治疗的眼睛中7天治疗后每个瘢痕区域的浊度得分减少。
实施例2
单独和与另外的药物活性组合的MPDY-1的治疗效果
这一实施例讨论显示溶于BSS或DPBS-/-(称为配方2)的MPDY-1和与胰岛素一起溶于DPBS-/-(称为配方3)的MPDY-1或溶于HOB-10(称为HO/05/09)的MPDY-1对机械和化学角膜创伤的治疗效果的实验。
如实施例1中所讨论的将兔经历机械角膜创伤。在连续3天内通过每天两次的眼部滴入治疗处理眼睛。使用荧光染色以六个小时的间隔测量角膜糜烂。图8显示用单独的媒介物(DPBS-/-，左边)、配方3(MPDY-1 0.1μg/眼/治疗和胰岛素0.01μg/眼/治疗，(中央)和配方2(MPDY-1 0.1μg/眼/治疗，右边)治疗后具有完全闭合的眼睛的百分比的比较。配方3和配方2清楚显示角膜溃疡和眼睛损伤的加速愈合。
使用不同剂量的活性剂进行了另外的实验。如上文所述的将兔经受机械角膜创伤。在连续3天内用单独溶于HOB-10(称为HO/05/09)或BSS或与胰岛素0.1-0.5μg/眼/治疗一起的0.1或0.5μg/眼/治疗的MPDY-1的眼部滴入治疗每天两次处理眼睛。兔接受总共从0.1μg(1μg/ml)直到2μg(20μg/ml)的每日剂量。使用荧光染色以十二小时的间隔从创伤后24hr开始直到72hr测量角膜糜烂面积。
如图9中所示，结果证明用MPDY-1(溶于BSS)或HO/05/09处理的眼睛显示出较快的眼部损伤愈合，证明与用标准护理的眼部缓冲剂处理的对照动物相比早在创伤后24h时60％的闭合。而且，HO/05/09处理的动物早在创伤后48hr达到完全闭合。
如之前讨论过的，除了在创伤愈合研究中通常测量的愈合时间参数之外，若干出版物确立了新参数，伤口大小减少50％，作为完全伤口愈合的有力预测起作用的重要性。因此，将结果分析为创伤后24小时具有50％闭合或更高的眼睛的百分比(参见图10)。结果清楚证实尽管没有对照眼睛达到角膜溃疡的至少50％的闭合，但是溶于BSS(MPDY-1)或配方1(HO/05/09)的MPDY-1获得角膜溃疡的60％或更高的闭合。
完全无瘢痕的愈合在损伤后对于恢复眼睛部位来说极其重要。因此，研究了MPDY-1单独和与胰岛素组合获得完全的角膜愈合的能力
如上文所述的将兔经受机械角膜创伤。在连续3天内用溶于BSS(MPDY-1)或配方1(HO/05/09)的0.1或0.5μg/眼/治疗的MPDY-1的眼部滴入治疗每天两次处理眼睛。兔接受总共从0.1μg(1μg/ml)直到2μg(20μg/ml)的每日剂量。使用荧光染色在创伤后48、60和72hr测量100％愈合的角膜糜烂面积。
如图11中所显示的，结果表明尽管用标准眼用缓冲剂(BSS)处理的对照组中仅30％的眼睛在创伤后72小时内达到完全无瘢痕的闭合，而早在创伤后48小时所处理的眼睛是完全愈合而没有眼部瘢痕(分别30％和65％MPDY-1和HO/05/09)。而且，用HO/05/09处理的所有眼睛在60hr内达到完全闭合而用MPDY-1处理的眼睛在创伤后72hr内。
除了机械诱导的角膜溃疡之外，检查了指定的治疗对经由对兔眼睛的碱烧伤而化学诱导的角膜溃疡的效果。临床观察数据被概述在表4中并且结果示于图12中。结果证实用单独溶于HOB-10(HO/05/09)和与胰岛素组合的MPDY-1的治疗提供了比对照优良的愈合。而且，概述于曲线图的数据清楚显示HO/05/09和HO/05/09+胰岛素抑制眼睛中的血管化并且令人惊讶地减少眼睛炎症。
表4：临床观察
进行另外的实验以在经受化学角膜创伤的兔眼睛中在具有或不具有胰岛素的HO/05/09、用(标准护理)和对照(水)治疗7天后检测眼部浊度和瘢痕形成。结果示于图13中。
在一个实验中，兔眼睛被暴露于5mm纸盘上的1M NaOH 10秒。移除这一盘并且用水冲洗清洗眼睛直到pH正常化(pH＝6.8-7.2)。之后通过应用120μL的溶液每天3次处理眼睛7天。用HO/05/09(0.5μg/眼/治疗，1.5μg/眼/天)、HO/05/09+胰岛素(0.5μg/眼/治疗，1.5μg眼/天)、(标准护理)和对照(水)处理眼睛。图14显示与和对照相比7天治疗后在用HO/05/09和HO/05/09+胰岛素治疗的眼睛中每个瘢痕区域的浊度得分减少。
在另一个实验中，兔眼睛被暴露于5mm纸盘上的1M NaOH 10秒。移除这一盘并且用水冲洗清洗眼睛直到pH正常化(pH＝6.8-7.2)。之后通过应用120μL的溶液每天3次处理眼睛7天。用HO/05/09(0.5μg/眼/治疗，1.5μg/眼/天)、HO/05/09+胰岛素(0.5μg/眼/治疗，1.5μg眼/天)、(标准护理)和对照(水)处理眼睛。通过软件测量瘢痕面积。图15显示与和对照相比7天治疗后在用HO/05/09和HO/05/09+胰岛素治疗的眼睛中每个瘢痕区域的浊度得分减少。
在另一个实验中，兔眼睛被暴露于5mm纸盘上的1M NaOH 10秒。移除这一盘并且用水冲洗清洗眼睛直到pH正常化(pH＝6.8-7.2)。之后通过应用120μL的溶液每天3次处理眼睛7天。用HO/05/09(0.5μg/眼/治疗，1.5μg/眼/天)、HO/05/09+胰岛素(0.5μg/眼/治疗，1.5μg眼/天)、(标准护理)和对照(水)处理眼睛。通过软件测量瘢痕面积。计算每个未愈合的瘢痕区域的浊度得分(由医学标准给出)。图16显示与和对照相比7天治疗后在用HO/05/09和HO/05/09+胰岛素治疗的眼睛中每个瘢痕区域的浊度得分减少。
实施例3
MPDY-1的抗炎性效果
这一实施例讨论显示MPDY-1的抗炎性效果的实验。使用不同的体外、离体和体内模型证实MPDY-1的抗炎性效果。MPDY-1显示减弱上皮细胞和角质化细胞上的ICAM-1表达，抑制巨噬细胞、中性粒细胞和T细胞对炎症位点的浸润并且减弱炎症位点处巨噬细胞的活性。
实施例4
MPDY-1的治疗效果
进行了一系列实验测定溶于不同缓冲剂中的MPDY-1的治疗效果。开发用于MPDY-1的缓冲溶液以适合眼睛治疗和MPDY-1作用机能两者。在所开发的两种缓冲剂以及用于眼睛治疗的标准缓冲剂(BSS)和通常用于皮肤伤口治疗的的DPBS-/-中测试不同浓度的MPDY-1。
所配制的不同缓冲组合物示于实施例1的表2中。
配制具有或不具有MPDY-1的缓冲溶液并且使用已经经受如实施例1中所描述的机械角膜创伤的兔眼睛测试治疗效果。在连续3天中通过每天两次的眼部滴入治疗处理眼睛。使用荧光染色以十二小时的检测从创伤后24hr开始测量角膜糜烂面积。
结果示于图17-19。与其他缓冲剂和缓冲剂/MPDY-1组合相比，配方1和包括MPDY-1的配方1(HO/05/09)显示加速伤口闭合。因此配方1增强MPDY-1的作用机能。
实施例5
MPDY-1的治疗效果
在证明HO/05/09加速正常急性角膜伤口愈合(机械创伤的)之后，检查其克服慢性伤口愈合模型中伤口愈合削弱的能力。为了这一目的，在化学糜烂模型中检测药物。使用NaOH(1N)在麻醉的兔上进行角膜的碱性烧伤(6mm)20秒。将眼睛用10ml无菌盐水冲洗30秒。冲洗之后立即用荧光素将眼睛染色并且拍照。用HO/05/09 1μg ml和5μg/ml或作为临床实行中的护理标准的和OfloxTM(类固醇和抗生素)处理眼睛7天或保留未处理作为对照。
与未处理的眼睛或标准护理对照相比，在两个浓度的HO/05/09处理的眼睛中创伤后24小时的角膜上皮伤口的形态学测定表现出增加的表皮细胞再生。由于50％闭合显示为完全的伤口愈合的重要的预测，因此测定角膜糜烂的50％闭合以及完全闭合(在第7天的98％闭合)。如图20中所示，在创伤后24h观察到剂量依赖性趋势。在1μg/ml处理组，60％的眼睛在这一早期显示出50％闭合而在5μg/ml处理组，80％的伤口是50％闭合的。HO/05/09有益效果的这一趋势同样在48小时时间点观察到，此时在1μg/ml和5μg/ml处理的组中，60％的伤口显示出98％以上的伤口闭合而在这一时间点在对照组中没有动物达到闭合。
使用对角蛋白12(K12)的免疫化学染色(其染色基底上皮细胞)以及之后的角膜表皮细胞再生的组织学分析和角膜的新上皮层的品质评估证实这些结果。图21A-C中所示的结果证实创伤后7天，两个HO/05/09治疗组显示如通过H&E染色所测定的增加的(在HO/05/09 5μg/ml的60％和在HO/05/09 5μg/ml几乎70％)角膜闭合，而在对照组，未治疗的和用治疗的，仅10％的角膜达到闭合。而且如通过K12染色所表现的的，两个HO/05/09治疗组显示高品质的愈合(图21A和C)。
高品质的愈合并非仅与上皮闭合有关还与其下面的角膜基底纤维组织的再生有关。如图22中所证实的，胶质组织化学染色证实创伤后七天胶质沉积在所处理的伤口中正常化。与在处理的组中所观察到的较低的程度相似的结果，在未治疗的对照中没有伤口显示角膜的基底重建。
最终，通过在化学溃疡创伤后七天的治疗过程中检查若干形态学炎性参数来研究角膜的炎症。如图23中所证实的，如角膜水肿、结膜红斑、结膜水肿和分泌上的减少所表示的HO/05/09减少局部炎性响应。
此外，图24显示来自相似研究的12个不同的临床炎性参数的平均得分的概述。结果显示与和类固醇相似(其是非常有效的减少角膜的局部炎症的剂)，HO/05/09 1μg/ml减少局部炎症。然而，如上文所显示的，类固醇的使用显著减少表皮细胞再生和溃疡愈合，而HO/05/09产生加速愈合的相反的效果。
实施例6
不同PKC同种型调节剂的治疗效果
在另一个实验中，使用硝酸银涂抹器(75％硝酸银，25％硝酸钾，Grafco，GFCO Inc.)在麻醉的小鼠上进行角膜的碱烧伤10秒钟。立即用5ml无菌盐水冲洗眼睛。在连续7天内用HO/05/09(1μg/ml和5μg/ml)或作为对照的配方1通过每天三次的眼部滴入治疗处理眼睛。
结果证实用两个浓度的HO/05/09的治疗与对照(配方1)相比提供优良的愈合能力并且显著减少眼睛炎症。采用HO/05/09的治疗被发现对角膜表皮细胞再生(图25)和眼睛炎症上的减少有益，如通过不同参数所测量的，例如淋巴细胞浸润(图26)、I-cam-1表达(图27)和T细胞的募集(图28)。此外，采用HO/05/09的治疗降低了伤口区域中的病理学血管发生(图29)。
在另一个实验中，使用硝酸银涂抹器(75％硝酸银，25％硝酸钾，Grafco，GFCO Inc.)在麻醉的小鼠上进行角膜的碱烧伤10秒钟。立即用5ml无菌盐水冲洗眼睛。用DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml或作为对照的配方1每天三次治疗处理眼睛3或7天。与对照相比采用DAP-1 1μg/ml、DIP-1 1μg/ml和EPIP-2 1μg/ml的治疗显示出伤口愈合增强。
结果证实采用肽的治疗影响角膜愈合的能力。采用所有检查的肽的治疗被发现对角膜表皮细胞再生有利，而DIP-1 1μg/ml被发现是更有力的(图30)。所有检测的肽显示以某种程度减少伤口区域中的炎性响应的能力。DAP-1和DIP-1优于减少炎性细胞向伤口区域的浸润(表31)，而DAP-1和EPIP-2被发现在减少特定的中性粒细胞募集上更有力(图32)。此外，采用所有检查的肽的治疗减少伤口区域中的病理学血管化(图33)。而且，采用DIP-1或EPIP-2的治疗导致病理学角膜膨胀正常化(图34)。
尽管已经参考上文实施例描述本公开内容，但应当理解的是修改和变化涵盖在本公开内容的精神和领域内。因此，本公开内容仅由所附的权利要求限制。

Claims (18)

1.一种包含PKC-α抑制剂和生理学上可接受的盐的局部眼用组合物在制备用于治疗受试者中的干眼的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述组合物还包含缓冲剂、防腐剂、药物活性剂、张力调节剂、缓和剂、润湿剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、舒适性增强剂、润肤剂、pH调节剂、润滑剂、聚集抑制剂、电荷改性剂、降解酶抑制剂、膜渗透剂、掩蔽剂(螯合剂)、血管扩张或粘度调节剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其中所述药物活性剂选自麻醉剂、收敛剂、抗高血压、抗青光眼剂、神经保护剂、抗变态反应剂、粘液－促分泌素、血管形成抑制因子、抗微生物剂、疼痛缓解剂和抗炎剂。
4.根据权利要求1所述的应用，其中所述PKC-α抑制剂是包含选自SEQ ID NO:1-11的氨基酸序列的多肽及其生理学上可接受的盐。
5.根据权利要求4所述的应用，其中其中所述多肽包含N-末端修饰、C-末端修饰或其组合。
6.根据权利要求5所述的应用，其中所述多肽是N-乙酰化的、N-豆蔻酰化的或N-棕榈酰化的。
7.根据权利要求4所述的眼用组合物，其中所述组合物还包含胰岛素。
8.根据权利要求7所述的应用，其中所述多肽和胰岛素各自以0.001和100μg/ml之间的浓度存在于所述组合物中。
9.根据权利要求1所述的应用，其中所述组合物每天施用1至10次之间。
10.根据权利要求1所述的应用，其中所述眼用组合物对治疗眼睛发炎或眼部的炎症有效。
11.一种包含PKC-α抑制剂和生理学上可接受的盐的局部眼用组合物在制备用于润滑受试者的眼睛的药物中的应用。
12.根据权利要求11所述的应用，其中所述组合物还包含缓冲剂、防腐剂、药物活性剂、张力调节剂、缓和剂、润湿剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、舒适性增强剂、润肤剂、pH调节剂、润滑剂、聚集抑制剂、电荷改性剂、降解酶抑制剂、膜渗透剂、掩蔽剂(螯合剂)、血管扩张或粘度调节剂。
13.根据权利要求12所述的应用，其中所述药物活性剂选自麻醉剂、收敛 剂、抗高血压、抗青光眼剂、神经保护剂、抗变态反应剂、粘液－促分泌素、血管形成抑制因子、抗微生物剂、疼痛缓解剂和抗炎剂。
14.根据权利要求11所述的应用，其中所述PKC-α抑制剂是包含选自SEQ ID NO:1-11的氨基酸序列的多肽及其生理学上可接受的盐。
15.根据权利要求14所述的应用，其中所述多肽是N-乙酰化的、N-豆蔻酰化的或N-棕榈酰化的。
16.根据权利要求14所述的眼用组合物，其中所述组合物还包含胰岛素。
17.根据权利要求16所述的应用，其中所述多肽和胰岛素各自以0.001和100μg/ml之间的浓度存在于所述组合物中。
18.根据权利要求12所述的应用，其中所述组合物每天施用1至10次之间。
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