CN104740630A - 一种含有抗cd52单抗的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种含有抗CD52单抗的药物组合物，所述组合物还含有保护剂，选自糖、多元醇或氨基酸。本发明的药物组合物通过选用糖，多元醇或氨基酸作为保护剂，单体蛋白损失减少，蛋白聚合物含量降低，特别是在高温、振荡、光照和冻融等破坏时可起到保护作用，大大提高了病人使用该药物的安全性，相比已上市的

Description

一种含有抗CD52单抗的药物组合物

技术领域

本发明涉及制药领域，尤其涉及一种含有抗CD52单抗和保护剂的药物组合物。

背景技术

抗CD52单抗（商品名Campath），主要作用于存在于B和T淋巴细胞上的CD52抗原，从而破坏淋巴细胞，目前已批准用于用过烷化剂治疗和用氟达拉滨治疗失败的B-细胞慢性淋巴细胞白血病（CLL）的病人。

和大多数蛋白分子一样，抗CD52单抗具有不稳定性，会经历多种化学和物理降解。和传统合成的小分子药物相比，生物分子具有复杂的结构如一级、二级、三级等高级结构。而蛋白质的结构特别是高级结构非常脆弱，容易发生结构变化，如变性、聚集、和沉淀。保持抗体的高级结构是发挥它们生物学活性的最基本要求。这些降解的产物会对生物制药的安全性产生很大的影响。特别是一些蛋白聚集物会激发人体的免疫反应，轻者会降低生物药物的疗效，重者甚至会造成病人的死亡。抗体药物不仅仅需要在生产的时候能得到高纯度的产品，还要在运输、储存和使用过程中保持结构稳定。

目前已上市的制剂pH为7.1，组分为：抗CD52单抗、氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、二水依地酸二钠、聚山梨醇酯80。本发明人发现，该制剂较不稳定，在长期和加速试验条件下有显著的降解，特别是产生较多的杂质如多聚体（又称蛋白聚合物）及不溶性微粒。而多聚体及不溶性微粒是生物制药安全性非常重要的质量参数，直接影响到生物药物的用药安全，特别是它们的免疫原性。这对于长期用药的产品抗CD52单抗尤为重要。另外，有些不溶性微粒在短期内很难用肉眼检查到，但在储存过程中很容易形成大的多聚体而析出，或者成为其他蛋白聚集的成核点。

发明内容

本发明解决的技术问题是，提供了一种更稳定的含有抗CD52单抗和保护剂的药物组合物。

本发明采用的技术方案为：

一种药物组合物，含有抗CD52单抗及保护剂，该保护剂为糖、多元醇或氨基酸。本发明中，氨基酸均为本领域的宽泛含义，包括其可药用盐的形式。所述糖可选自果糖、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露糖、乳糖、甘露糖、麦芽糖、果糖、山梨糖、葡聚糖、糊精、环糊精、羟乙基淀粉或其组合；多元醇可选自甘露醇、甘油、山梨糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、乳糖醇、丙二醇、聚乙二醇或其组合；氨基酸可选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、或其组合。优选的，本发明所述的保护剂选自蔗糖、甘露醇或精氨酸。

优选的，所述保护剂浓度为1-200mg/ml，优选为10-100mg/ml，更优选20-92mg/ml。

优选的，所述组合物的pH为5.0-8.0，优选6.2-7.1，更优选6.2。

优选的，所述抗CD52单抗浓度为0.5-200mg/ml，优选1-100mg/ml，更优选1-30mg/ml。

优选的，本发明所述的药物组合物不含有氯化钠。本发明人惊奇的发现，在加入了上述的保护剂后，本发明的药物组合物在不含氯化钠的情况下，显示出更高的物理稳定性。

本发明所述的药物组合物进一步含有缓冲液，选自磷酸缓冲液、tris缓冲液、乙酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、葡萄酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、抗坏血酸缓冲液、酒石酸缓冲液、顺丁烯二酸缓冲液、乳酸缓冲液、碳酸缓冲液、苯甲酸缓冲液、咪唑缓冲液或氨基酸缓冲液。优选的，所述氨基酸缓冲液为丙氨酸缓冲液、精氨酸缓冲液、天冬酰胺缓冲液、天冬氨酸缓冲液、半胱氨酸缓冲液、谷酰胺缓冲液、谷氨酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、组氨酸缓冲液、异亮氨酸缓冲液、亮氨酸缓冲液、赖氨酸缓冲液、蛋氨酸缓冲液、苯丙氨酸缓冲液、脯氨酸缓冲液、丝氨酸缓冲液、苏氨酸缓冲液、色氨酸缓冲液、酪氨酸缓冲液或缬氨酸缓冲液。

本发明所述的药物组合物还包括抗氧化剂，该抗氧化剂选自自由氨基多羧酸、羟基氨基羧酸、N-取代甘氨酸、柠檬酸、烟酰胺、去氧胆酸盐、乙二胺四乙酸（EDTA）、二乙三胺五乙酸(DTPA)、次氮基三乙酸（NTA）、抗坏血酸、色氨酸、蛋氨酸、谷胱甘肽、硫代硫酸钠、过氧化氢酶或其组合。抗氧化剂可以化合物或者相应盐的无水、水合或者其他溶剂化物的形式存在。

优选的，本发明所述的药物组合物还包括表面活性剂，该表面活性剂选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯21、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯61、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85、泊洛沙姆、十二烷基硫酸钠、月桂硫酸钠、辛基糖苷钠、月桂基-磺基甜菜碱、聚乙二醇、聚丙二醇或其组合，优选聚山梨醇酯80。

优选的，本发明所述的药物组合物还含有钾盐，如氯化钾和/或磷酸二氢钾。

另外，本发明所述的药物组合物还可包括可药用的一种或多种防腐剂，如间甲酚、苯酚、苯甲醇、苯扎氯铵、苯氧乙醇或对羟基苯甲酸甲酯。

本发明所述的药物组合物可以是水针制剂、冻干制剂、或者同时含有冻干粉末和注射用水的双腔卡氏瓶制剂形式。

优选的，本发明所述的组合物含有如下组方：

其中所述组合物的pH为6.2，所述保护剂为92mg/ml的蔗糖、49mg/ml的甘露醇或29mg/ml的盐酸精氨酸。

本发明的有益效果为：

本发明的药物组合物通过选用糖，多元醇或氨基酸作为保护剂，单体蛋白损失减少，蛋白聚合物含量降低，特别是在高温、振荡、光照和冻融等破坏时可起到保护作用，相比已上市的制剂具有更优越的稳定性，大大提高了病人使用该药物的安全性。

附图说明

图1示实施例1高温试验的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量；

图2示实施例1振荡试验的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量；

图3示实施例1光照试验的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量；

图4示实施例1冻融试验的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量；

图5a示实施例2高温试验1周的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量；

图5b示实施例2高温试验2周的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量；

图6示实施例2振荡试验的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量；

图7示实施例2光照试验的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量；

图8示实施例2冻融试验的结果，其横坐标为制剂编号，纵坐标为蛋白聚合物百分含量。

具体实施方式

各实施例中的蛋白纯度均使用SEC-HPLC法测定。

实施例1.溶液pH和结构保护剂对低浓度抗CD52单抗稳定性的影响

几个含有较低抗CD52单抗浓度（1mg/ml）的制剂处方见表1，其中制剂1为原制剂（即辅料及其浓度与制剂相同的制剂）；制剂2-4为分别使用等摩尔渗透压的蔗糖、甘露醇和盐酸精氨酸代替氯化钠所配制的制剂。所使用的抗CD52单抗的SEC-HPLC单体纯度为99.2%，聚合物为0.8%。

表1.各个制剂中所含组分的量（抗CD52单抗浓度为1mg/ml）

注：“/”表示不含。

影响因素试验方案（制剂1-4）

将上述各处方分别进行高温、振荡、光照以及冻融破坏试验。

高温试验：将样品放置于45℃恒温箱中，于2周后取样。

振荡试验：25℃、500rpm放置72小时后取样。

光照试验：25℃、600W/m²（相当于110000Lx）放置4小时后取样。

冻融试验：-80℃冻存1小时、室温融化1小时，反复冻融6次后取样。

影响因素试验结果

高温试验

将上述各处方置于45℃恒温箱中，于两周取样，采用SEC-HPLC法检测抗CD52单抗的聚合物含量，结果见表2和附图1。

表2.各个制剂经过高温破坏（45℃放置两周）后聚合物含量

制剂	聚合物含量（%）
		制剂1	0.44±0.04
制剂2	0.34±0.02

制剂3	0.38±0.02
		制剂4	0.31±0.03

制剂2-4，蔗糖（制剂2，0.34%）、甘露醇（制剂3，0.38%）和盐酸精氨酸（制剂4，0.31%）相比制剂1（0.44%）都能降低聚合物的含量，特别是蔗糖和盐酸精氨酸，能非常有效地保护抗CD52单抗免受高温破坏。

振荡试验

将上述各处方高速振荡3天后取样进行检测，所有制剂的蛋白聚合物含量都有明显的上升（见表3和附图2）。

对于制剂2-4，蔗糖（制剂2，1.54%）、甘露醇（制剂3，1.60%）和盐酸精氨酸（制剂4，1.39%）相比制剂1（1.92%）都能降低聚合物的含量，这显示它们都能有效地降低抗CD52单抗由于振荡造成的聚集。

表3.各个制剂经过振荡破坏后聚合物含量

制剂	聚合物含量（%）
		制剂1	1.92±0.02
制剂2	1.54±0.10
		制剂3	1.60±0.21
制剂4	1.39±0.23

光照试验

经过光照破坏后，各个制剂的聚合物含量都有明显的上升（见表4和附图3）。保护剂均起到了保护作用，尤其是蔗糖（制剂2，1.45%）和盐酸精氨酸（制剂4，1.36%），相比制剂1（4.17%），都非常显著地降低了聚合物的含量。

表4.各个制剂经过光照破坏后聚合物含量

制剂	聚合物含量（%）
		制剂1	4.17±0.60
制剂2	1.45±0.01
		制剂3	3.16±0.00
制剂4	1.36±0.01

冻融试验

经过冻融破坏后，各个制剂聚合物含量都有明显的上升（见表5和附图4）。尽管此次试验甘露醇对冻融的保护不明显，但其他保护剂——蔗糖（制剂2，0.34%）和盐酸精氨酸（制剂4，0.43%）相比原制剂1（0.71%）都能显著地降低聚合物的含量，即都能有效地保护抗CD52单抗、减少冻融破坏造成的聚集。

表5.各个制剂经过冻融破坏后聚合物含量

上述结果表明，抗CD52单抗的物理稳定性和保护剂有关。尽管甘露醇对冻融的保护不太明显，三类常见保护剂蔗糖、甘露醇和盐酸精氨酸都能在不同程度上保护抗CD52单抗免受高温、振荡和光照等破坏条件的破坏作用。

实施例2.溶液pH和结构保护剂对高浓度抗CD52单抗稳定性的影响

几个含有较高浓度（30mg/ml）抗CD52单抗的制剂如表6，其中制剂5为原研制剂制剂6为含有蔗糖保护剂且pH值为6.2的制剂，制剂7为含有蔗糖保护剂且pH值为7.1的制剂，制剂8为相比原研制剂溶液pH调节为6.2的制剂，制剂9为不含氯化钠而含有较低蔗糖浓度的制剂，制剂10为含有同制剂9等摩尔渗透压浓度的氯化钠的制剂。本轮各制剂所使用的抗CD52单抗的SEC-HPLC单体纯度为98.7%，聚合物为1.3%。

表6.制剂5-10中所含组分的量（抗CD52单抗浓度为30mg/ml）

注：“/”表示不含。

影响因素试验及结果（制剂5-10）

将上述各处方分别进行高温、振荡、光照和冻融破坏试验。

高温试验：将样品放置于40℃恒温箱中，于1周、2周分别取样。

振荡试验：25℃、500rpm放置72小时后取样。

光照试验：25℃、600W/m²（相当于110000Lx）放置4小时后取样。

冻融试验：-80℃冻存1小时、室温融化1小时，反复冻融6次后取样。

高温试验

经过1周破坏后，结果如表7及附图5a所示。在pH7.1条件下，含有蔗糖保护剂的制剂7的聚合物含量（1.47%）明显低于含氯化钠的制剂5（1.78%）；在pH6.2条件下，含有蔗糖保护剂的制剂6的聚合物含量（1.12%）明显低于含氯化钠的制剂8（1.35%）。数据表明，在不含氯化钠的制剂中加入保护剂后，其稳定性明显高于含有氯化钠而不含保护剂的制剂。另外，低pH值的制剂6（pH=6.2）的稳定性明显高于高pH值的制剂7（pH=7.1）。使用较低蔗糖浓度的制剂9的聚合物含量（1.74%）比含有较低浓度氯化钠的制剂10（1.84%）低，但是和含有高浓度蔗糖的制剂7（1.47%）相比聚合物含量高。

表7.各个高浓度制剂经过高温破坏（40℃放置1周、2周）后聚合物含量

经过2周破坏后，结果如表7和附图5b所示，各个制剂的聚合物含量变化趋势和1周破坏的一致。

振荡试验

对样品进行高速振荡三天后，结果如表8和附图6所示。在pH7.1条件下，含有蔗糖的制剂7的聚合物含量（1.56%）显著低于含有氯化钠的制剂5（2.02%）；在pH6.2条件下，含有蔗糖为保护剂的制剂6的聚合物含量（1.23%）显著低于含氯化钠的制剂8（1.69%）。数据表明，在不含氯化钠的制剂中加入保护剂后，其稳定性明显高于含有氯化钠而不含保护剂的制剂。另外，低pH值的制剂6（pH=6.2）的稳定性明显高于高pH值的制剂7（pH=7.1）。使用较低蔗糖浓度的制剂9的聚合物含量（1.73%）比含有较低浓度氯化钠的制剂10（2.14%）低，但是和含有高浓度蔗糖的制剂7（1.56%）相比聚合物含量高。

表8.各个高浓度制剂经过振荡破坏后聚合物含量

制剂	聚合物含量（%）
		制剂5	2.02±0.05
制剂6	1.23±0.04
		制剂7	1.56±0.03
制剂8	1.69±0.01
		制剂9	1.73±0.08
制剂10	2.14±0.08

光照试验

对样品进行光照（600W光照4小时）破坏后，各个制剂产生的聚合物含量非常高（见表9和附图7），但趋势和高温破坏及振荡破坏一致，即：

1）、在pH7.1条件下，含蔗糖的制剂7的聚合物含量（7.03%）低于含氯化钠的制剂5（7.93%）；含蔗糖的制剂6的聚合物含量（3.98%）低于含氯化钠的制剂8（6.34%）；

2）、同含蔗糖的制剂，低pH值的制剂6（pH=6.2）的聚合物含量（3.98%）低于pH7.1的制剂7（7.03%）；

3）、同含蔗糖的制剂，含高浓度蔗糖的制剂7的聚合物含量（7.03%）低于含低浓度蔗糖的制剂9（8.18%）。

表9.各个高浓度制剂经过光照破坏后聚合物含量

冻融试验

对样品进行冻融破坏后，各个制剂的聚合物含量变化趋势和上述几个破坏试验相一致（见表10和附图8）。制剂6的聚合物含量相比原研制剂5明显降低。

表10.各个高浓度制剂经过冻融破坏后聚合物含量

上述结果进一步表明，在高抗CD52单抗浓度条件下，保护剂也能有效地保护抗CD52单抗免受高温、振荡、光照和冻融等破坏条件的破坏作用。

实施例3：海藻糖作为保护剂的抗CD52单抗制剂的制备

配制了几个不含氯化钠、pH6.2的制剂处方11-14，分别含有不同海藻糖浓度和不同抗CD52单抗浓度制剂（表11），这些制剂的其它组分为：0.2mg/ml氯化钾，0.2mg/ml磷酸二氢钾，1.44mg/ml磷酸氢二钠，0.0178mg/ml二水依地酸二钠，0.1mg/ml聚山梨醇酯80。

表11.海藻糖作为保护剂的含有高浓度和低浓度抗CD52单抗的制剂

实施例4：不同氨基酸作为保护剂的不同pH的抗CD52单抗制剂的制备

配制几个不含氯化钠的制剂处方15-26，分别含有不同氨基酸作为保护剂的抗CD52单抗制剂（表12），其中这些制剂的其它组分为：30mg/ml抗CD52单抗，0.2mg/ml氯化钾，0.2mg/ml磷酸二氢钾，1.44mg/ml磷酸氢二钠，0.0178mg/ml二水依地酸二钠，0.1mg/ml聚山梨醇酯80。

表12.不同氨基酸作为保护剂的不同pH的抗CD52单抗制剂

实施例5：蔗糖为保护剂、不同聚山梨醇酯80含量的抗CD52单抗制剂的制备

配制几个不含氯化钠、pH6.2的制剂处方27-31，分别含有不同聚山梨醇酯80含量的抗CD52单抗制剂（表13），其中这些制剂的其它组分为：30mg/ml抗CD52单抗，92mg/ml蔗糖，0.2mg/ml氯化钾，0.2mg/ml磷酸二氢钾，1.44mg/ml磷酸氢二钠，0.0178mg/ml二水依地酸二钠。

表13.不同聚山梨醇酯80浓度的含蔗糖抗CD52单抗制剂

制剂	蔗糖(mg/ml)	聚山梨醇酯80（mg/ml）
			27	92	0.01
28	92	0.05
			29	92	0.5
30	92	2
			31	92	5

Claims (11)

1.一种含有抗CD52单抗的药物组合物，其特征在于，所述组合物含有保护剂，选自糖、多元醇或氨基酸。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物不含氯化钠。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：所述保护剂选自果糖、葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露糖、乳糖、甘露糖、麦芽糖、山梨糖、葡聚糖、糊精、环糊精、羟乙基淀粉、甘露醇、甘油、山梨糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇、木糖醇、乳糖醇、丙二醇、聚乙二醇、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸，或它们的组合，优选蔗糖、甘露醇或精氨酸。

4.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于：所述保护剂浓度为1-200mg/ml，优选为10-100mg/ml，更优选为20-92mg/ml。

5.根据权利要求1-4任一项所述的组合物，其特征在于：所述组合物pH为5.0-8.0，优选6.2-7.1，更优选为6.2。

6.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其特征在于：所述抗CD52单抗浓度为0.5-200mg/ml，优选1-100mg/ml，更优选1-30mg/ml。

7.根据权利要求1-6任一项所述的组合物，其特征在于：所述组合物进一步含有缓冲液，选自磷酸缓冲液、tris缓冲液、乙酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、葡萄酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、抗坏血酸缓冲液、酒石酸缓冲液、顺丁烯二酸缓冲液、乳酸缓冲液、碳酸缓冲液、苯甲酸缓冲液、咪唑缓冲液或氨基酸缓冲液。

8.根据权利要求1-7任一项所述的组合物，其特征在于：所述组合物还包括抗氧化剂，选自氨基多羧酸、羟基氨基羧酸、N-取代甘氨酸、柠檬酸、烟酰胺、去氧胆酸盐、乙二胺四乙酸、二乙三胺五乙酸、次氮基三乙酸、抗坏血酸、色氨酸、蛋氨酸、谷胱甘肽、硫代硫酸钠、过氧化氢酶或其组合，优选乙二胺四乙酸。

9.根据权利要求1-8任一项所述的组合物，其特征在于：所述组合物还包括表面活性剂，选自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯21、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯61、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯81、聚山梨醇酯85、泊洛沙姆、triton、十二烷基硫酸钠、月桂硫酸钠、辛基糖苷钠、月桂基-磺基甜菜碱、聚乙二醇、聚丙二醇或其组合，优选聚山梨醇酯80。

10.根据权利要求1-9任一项所述的组合物，其特征在于：所述组合物还含有钾盐，优选氯化钾和/或磷酸二氢钾。

11.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物的pH为6.2，由下述组分组成：

所述保护剂为92mg/ml的蔗糖、49mg/ml的甘露醇或29mg/ml的盐酸精氨酸。