CN104739845A - 鹅去氧胆酸及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及鹅去氧胆酸及其用途。本发明具体包括式（Ⅰ）的化合物在制备用于抗血小板聚集、抗血栓形成、预防与血小板异常激活有关的疾病、治疗与血小板异常激活有关的疾病的药物中的用途。本发明所述鹅去氧胆酸具有抗血小板聚集和铺展的作用，可作为新的抗血小板聚集及抗血栓药物用于治疗血小板异常激活有关的疾病，包括但不限于血栓性疾病、具有高凝状态的病毒性疾病、肿瘤疾病、冠心病、中风、高血压、白血病、弥散性血管内凝血（DIC）等。

Description

鹅去氧胆酸及其用途

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及鹅去氧胆酸【Chenodeoxycholicacid(CDCA)】在抗血小板聚集方面的新用途及其在预防和治疗动脉血栓性疾病中的应用。

技术背景

随着生活水平的提高，中风、冠心病等动脉血栓性疾病已成为威胁我国和发达国家人民健康的头号杀手。因此，对心脑血管血栓性疾病的防治十分重要。血小板异常激活引起的血管内血栓形成是动脉血栓性疾病冠心病和中风的病理基础，其过程包括血小板的聚集和铺展，故抑制血小板激活的抗血小板药是预防与治疗这类疾病的主要手段。目前临床上广泛应用的抗血小板药包括有环氧化酶抑制剂阿司匹林，噻吩吡啶类P2Y12受体拮抗剂氯吡格雷(clopidogrel)、普拉格雷（prasugrel）、血小板纤维蛋白原受体拮抗剂盐酸替罗非班（TirofibanHydrochloride）和磷酸二酯酶抑制剂西洛他唑（Cilostazol）。这些药物或具有胃肠道毒性，或具有出血倾向等副作用，且在临床应用中有耐受和抵抗现象，局限了它们的应用,使冠心病和中风的治疗效果仍未尽如人意。

当血管破损时，血小板受到损伤部位激活因素刺激出现血小板的聚集，成为血小板凝块，起到初级止血作用，接着血小板又经过复杂的变化产生凝血酶，使邻近血浆中的纤维蛋白原变为纤维蛋白，互相交织的纤维蛋白使血小板凝块与血细胞缠结成血凝块，即血栓。同时血小板的突起伸入纤维蛋白网内，随着血小板微丝（肌动蛋白）和肌球蛋白的收缩，使血凝块收缩，血栓变得更坚实，能更有效地发挥止血作用，这是二级的止血作用。伴随着血栓的形成，血小板会释放很多细胞活性物质，包括致密颗粒、α颗粒和血小板源性的微颗粒，其中含有ADP、5-羟色胺、血小板第4因子、β血栓球蛋白、凝血酶敏感蛋白、细胞生长因子、血液凝固因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅻ和血管通透因子等多种活性物质，这些活性物质通过激活周围血小板，促进血管收缩，促纤维蛋白形成等多种方式加强止血效果。而有些物质则可加强损伤部位的炎症和免疫反应。

中风主要是由于供应脑部血液的动脉出现粥样硬化和血小板聚集形成血栓，使管腔狭窄甚至闭塞，导致局灶性脑梗死。因急性脑供血不足而发病。而冠心病的发生是由于冠状动脉内的粥样硬化斑块发生破裂或糜烂，激活血小板粘附、聚集而形成血栓所致。因此，抑制血小板聚集形成血栓已成为预防和治疗中风和冠心病的核心环节，干预的靶点应该是血小板，凝血酶，已形成的纤维蛋白和其他血液因子。此外血小板的异常聚集参与了具有高凝状态的病毒性疾病、肿瘤疾病、冠心病、中风、高血压、白血病、弥散性血管内凝血（DIC）等疾病的病程。抗血小板（即抑制血小板聚集）药物对这些疾病有良性影响。

鹅去氧胆酸Chenodeoxycholic acid(CDCA)的化学名为3a,7a-二羟基-5p-胆甾烷-24-酸，分子式C24H40O4，分子量392.58，是一种白色或淡黄色针状晶体。鹅去氧胆酸是内源性、疏水性的初级胆汁酸，存在广泛，在鸡、鸭、鹅、猪、羊等动物和人的胆汁中，都有相当比例的存在。1848年首次在鹅胆汁中发现，1972年美国、英国相继报道鹅去氧胆酸能溶解X线可透射的胆结石。1975年，鹅去氧胆酸写入药典，临床上用于治疗肝胆疾病、胆结石症，对胆固醇型胆结石有很好的溶解作用，同时用于镇咳、平喘等。鹅去氧胆酸扩大胆汁酸以利于胆固醇以微胶粒状态溶解，还能抑制肝细胞排泄胆固醇，以负反馈机制减少胆固醇合成，也可降低小肠对胆固醇的重吸收。经研究证实鹅去氧胆酸能影响胆固醇合成，减少肝细胞制造胆固醇，使胆汁中胆固醇与胆酸的比例适度，并有较强的利胆作用，同时有显著的抗菌作用。鹅去氧胆酸在抗血栓形成方面的用途尚未报道。本发明首次发现鹅去氧胆酸在体外同时具有抗血小板聚集作用及抗血小板铺展的作用，且口服后具有明显的抗血小板聚集作用。

发明内容

本发明提供鹅去氧胆酸在抗血小板聚集和血栓形成方面的新应用，其优点为：体外实验显示可抑制多种激动剂诱导的血小板聚集，且具有抗血小板铺展的作用，小鼠口服鹅去氧胆酸实验显示其具有良好的抗血小板效果。

具体而言，本发明的鹅去氧胆酸（Chenodeoxycholic acid(CDCA)）的化学名为3a,7a-二羟基-5p-胆甾烷-24-酸，其具有式（Ⅰ）的结构，其化学式为：分子式C₂₄H₄₀O₄，分子量392.58。

基于以上发现，本发明提供式（Ⅰ）化合物鹅去氧胆酸在抗血小板聚集和血栓形成方面的新应用，其优点为体外实验显示可抑制多种激动剂诱导的血小板聚集，且具有抗血小板铺展的作用，小鼠口服鹅去氧胆酸实验显示具有良好的抗血小板效果。

在一个实施方式中，本发明提供包含式（Ⅰ）化合物的药物组合物。在一个实施方式中，所述药物组合物还包括任何活性或非活性的成分。在一个实施方式中，所述药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。

在一个实施方式中，本发明药物组合物鹅去氧胆酸为5μM-100μM。在一个实施方式中，本发明药物组合物鹅去氧胆酸为100μM。

在一个实施方式中，本发明提供式（Ⅰ）的化合物在抗血小板聚集中的用途。在一个实施方式中，本发明提供式（Ⅰ）的化合物在制备抗血小板聚集的药物中的用途。在一个实施方式中，本发明提供的药物可抑制血小板的聚集和铺展。

在另一个实施方式中，本发明提供式（Ⅰ）的化合物在抗血栓形成中的用途。在另一个实施方式中，本发明式（Ⅰ）的化合物用于治疗血栓。在另一个实施方式中，本发明提供式（Ⅰ）的化合物在制备抗血栓形成的药物中的用途。

在另一个实施方式中，本发明提供式（Ⅰ）的化合物在预防或治疗与血小板异常激活有关的疾病中的用途。在另一个实施方式中，本发明的式（Ⅰ）的化合物用于预防或治疗与血小板异常激活有关的疾病。在另一个实施方式中，本发明提供式（Ⅰ）的化合物在制备预防或治疗与血小板异常激活有关的疾病的药物中的用途。在一个实施方式中，本发明所述与血小板异常激活有关的疾病包括但不限于血栓性疾病、具有高凝状态的病毒性疾病、肿瘤疾病、冠心病、中风、高血压、白血病、弥散性血管内凝血（DIC）。

在一个实施方式中，本发明药物或化合物制备成适合口服、静脉内、腹膜内、局部、透皮、经眼、经鼻、局部、吸入、皮下、肌内、口含、舌下或直肠给药的剂型。在一个实施方式中，本发明药物剂型包括但不限于片剂、胶囊、丸剂、颗粒制剂、注射液。

在一个实施方式中，本发明药物或化合物可与任何活性或非活性的成分联合制备或联合给药。在一个实施方式中，本发明所述活性成分包括阿司匹林、氯比格雷或西洛他唑。

附图说明

图1是鹅去氧胆酸口服给药后对ADP诱导的血小板聚集的抑制效果（聚集效果图）。其中显示了对照组及鹅去氧胆酸口服给药组小鼠的血小板，对于ADP10μM诱导的血小板的聚集有不同的反应性，鹅去氧胆酸口服给药组小鼠血小板的聚集率明显低于对照组。

具体实施方式

在描述本发明材料和方法之前，应该理解本发明不限于所述的具体方法、方案、材料和试剂，因为其可以不同。还应理解本文所用的术语仅仅出于描述具体实施方式的目的，而并非旨在限制仅由随后提交的非临时申请所限定的本发明范围。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的意义。虽然可采用与本文所述那些相似或等效的任何方法和材料来实施或测试本发明，但目前描述的是优选的方法和材料。本文具体提及的所有出版物和专利通过引用纳入本文以用于所有目的，包括描述和公开出版物中报道的可与本发明联用的化学物质、仪器、统计学分析和方法。本说明书中引用的所有参考文献应视作表明本领域的技术水平。本文所有内容均不应理解为承认本发明本能凭借在先发明而先于这些公开内容。

I.概述

如本文所用，术语“包含”、“包括”和其等同形式包括“含有”以及“由……组成”的含义，例如“包含”X的组合物可仅由X组成或可含有其它物质，例如X+Y。

除非上下文中另有明确指示，否则本文和所附权利要求中使用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。同样，术语“一个”(或“一种”)、“一种或多种”和“至少一个”在本文可互换使用。

本发明主要涉及一种具有式（Ⅰ）结构的药物“鹅去氧胆酸”在抗血小板聚集的新用途及其应用，提供了鹅去氧胆酸的抗血小板聚集活性实验，包括在体外抑制多种激动剂（ADP，凝血酶，胶原）诱导的血小板聚集，抑制血小板的铺展，口服后抑制小鼠血小板的聚集。本发明首次发现其具有抗血小板聚集和铺展的作用，本发明还涵盖鹅去氧胆酸作为新的抗血小板聚集及抗血栓药物用于治疗血小板异常激活有关的疾病，包括但不限于血栓性疾病、具有高凝状态的病毒性疾病、肿瘤疾病、冠心病、中风、高血压、白血病、弥散性血管内凝血（DIC）等。

如本文所用，术语“分离”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和蛋白是没有分离的，但同样的多聚核苷酸或蛋白如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离的。

如本文所用，术语“血小板”指是哺乳动物血液中的有形成分之一。形状不规则，无细胞核，一般呈圆形，体积小于红细胞和白细胞，成年人血液中血小板数量为1×10¹¹～3×10¹¹个/L。血小板具有特定的形态结构和生化组成，在正常血液中有较恒定的数量，具有粘附、聚集、释放等生理功能，在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理过程中有重要作用。

如本文所用，“血栓形成”是指在心血管内，血液发生凝固或血液中某些有形成分析出、凝集形成固体质块的过程。所形成的固体质块称为血栓。血栓是在血液流动的状态下形成的。

如本文所用，术语“疾病”和“病症”可互换使用，它们均反映损害正常功能、通常通过体征和症状表现、并引起人或动物的寿命或生活质量降低的人或动物体或其部分之一的异常状态。本文所述疾病指包括与血小板聚集有关的疾病，如血栓性疾病、具有高凝状态的病毒性疾病、肿瘤疾病、冠心病、中风、高血压、腹主动脉瘤，白血病、弥散性血管内凝血（DIC）等。

如本文所用，术语“聚集”指的是血小板彼此的粘着，通常分两个时相。第一聚集相也叫可逆聚集相；第二聚集相也叫不可逆聚集相。

如本文所用，术语“激动剂”指引起血小板聚集的物质，也叫致聚剂或诱导剂。本发明所述激动剂包括病理性致聚剂如病毒、细菌、免疫复合物、药物等和生理性致聚剂如ADP（二磷酸腺苷）、血栓烷A2(Thromboxane A2)、胶原、凝血酶。

本发明所述ADP是最重要的生理性致聚剂，尤其是血小板释放出的内源性ADP。低浓度的ADP只引发可逆聚集相，血小板迅速聚集而又迅速解聚。在血小板悬液中加入中等剂量的ADP后，血小板迅速聚集，然后解聚；在引发可逆聚集相过后不久，血小板再次聚集，此后不再解聚，这个不可逆聚集相据认为是血小板释放内源性ADP所致。高浓度的ADP直接引发不可逆聚集相。如果将血小板悬浮于不含葡萄糖的液体数小时，或者加入抑制ATP代谢的药物，或者加入钙螯合剂，则可抑制ADP引发的聚集反应。ADP无法诱导洗净的血小板（去除了纤维蛋白原）出现聚集。ADP引发的聚集反应具有剂量依赖性，且需要钙离子、纤维蛋白原的参与。

本发明所述胶原与血小板接触后，经历一个延缓期后直接进入不可逆聚集相。这可能是因为胶原在诱导聚集反应的同时，也触发血小板释放ADP、血栓烷A2等。

本发明所述凝血酶具有和ADP相似的剂量依赖性；不同的是凝血酶诱导的聚集反应不需要纤维蛋白原的参与。

如本文所用，术语“铺展”指的是血小板粘附在血管损伤部位，通过细胞骨架蛋白的变化造成最终的形态变化（由圆球形变为扁平状），增加接触面积，已被公认为血栓与止血的关键一步。

如本文所用，术语“抑制”指药物或化合物对血小板聚集、铺展的控制作用。本文所述“抑制率”和“聚集抑制率”可互换使用，它们均为处理组与溶剂对照组相比血小板聚集程度降低的百分比。

如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”指给予对象以治疗失调、病症或疾病时的化合物的量足以进行此类针对病状或病症或疾病的治疗。“治疗有效量”将根据以下因素而变化：化合物、所治疗的失调、或病症、或疾病状态、所治疗的失调、或病症、或疾病的严重程度、对象的年龄和相对健康状况、给药途径和形式、护理医务人员或兽医的判断、和其它因素。本发明中“有效量”或“治疗有效量”可指约0.01毫克每公斤体重每日(mg/kg/日)到约300mg/kg/日，优选约0.1毫克每公斤体重每日(mg/kg/日)到约100mg/kg/日，再优选约0.3毫克每公斤体重每日(mg/kg/日)到约30mg/kg/日。更优选的量可以通过本领域技术人员来确定。例如，主治医生可以容易地通过使用常规方法和观察在类似情况下获得的结果来确定有效量。在确定本发明的化合物的有效量时，许多因素被主治医生考虑，包括但不限于所要给药的具体化合物；如果使用的其它药剂的共同给药；哺乳动物的种类；其大小、年龄和一般健康；疾病的严疾病的严重度；个体患者的反应；给药方式；所给药的制剂的生物利用率特性；所选择的剂量方案；其它伴随药物的使用；以及其它相关的情况。

如本文所用，术语“载体”或“载剂”描述了药物组合物或制剂中除活性药物化合物之外的成份。本发明所述载体包括但不限于乳糖、微晶纤维素、淀粉、硬脂酸镁、PVP、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、羟丙纤维素、二氧化硅和乙醇。

本发明涉及将化合物以治疗有效量给予患者。化合物可单独给予或作为药学上可接受的组合物的一部分来给予。此外，化合物或组合物可例如通过推注一次性全部给予、例如通过一系列片剂多次给予、或例如通过使用透皮递送在一段时间内基本上均匀地递送。另外，化合物的剂量可随时间而变化。可使用即释型制剂、控释型制剂或其组合来给予化合物。

本发明的药物组合物可以单一单位剂量或以多种单一单位剂量制备、包装或大批出售。如本文中所用，"单位剂量"为包含预定量的活性成分的药物组合物的个别量。活性成分的量通常等于将给予患者的活性成分的剂量或此剂量的适当比率，例如，此剂量的二分之一或三分之一。

在一个实施方式中，本发明的化合物单独给药。在另一个实施方式中，本发明化合物与其它活性或非活性的成分联合给药，在另一个实施方式中，本发明化合物与其它活性或非活性的成分联合制备。本发明所述活性成分包括但不限于氧化酶抑制剂（如阿司匹林），噻吩吡啶类P2Y12受体拮抗剂（如氯吡格雷）、血小板纤维蛋白原受体拮抗剂（如盐酸替罗非班）和磷酸二酯酶抑制剂（如西洛他唑）。

本发明的药物组合物中的活性成分、药学上可接受的载体和任何附加成分的相对量将根据所治疗的人的种类、身材和病症而变化，并且还根据所述组合物的给予途径而变化。举例而言，所述组合物可包含0.1%-100%(w/w)的活性成分。或者本发明药物组合物包含5μM-100μM鹅去氧胆酸，优选5μM、10μM、20μM、30μM、50μM、100μM鹅去氧胆酸。在一个实施方式中，本发明药物组合物包含100μM鹅去氧胆酸。

如本文中所用，“给予”和“给药”包括将本发明的化合物引入身体，优选引入全身循环的任何方式。本发明的化合物可以通过任何有效途径来给药，包括但不限于口服、静脉内、腹膜内、局部、透皮、经眼、经鼻、局部、吸入、皮下、肌内、口含、舌下、直肠给药等。

本发明的药物组合物可以制备成任何适当的剂型，例如片剂、胶囊、丸剂、颗粒制剂、注射液、栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂、滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片、贴膜剂、溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂等。本发明所述剂型还包括固体或可注射植入物或贮存剂。

适于注射的组合物包含与药学上可接受的载体例如生理学上可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散体、悬浮液或乳剂联用的活性成分，或可包含用于在无菌可注射溶液或分散体中复溶的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或载剂的实例包括水、等渗盐水、乙醇、多元醇（丙二醇、聚乙二醇、甘油等）、其合适的混合物、甘油三酯，包括植物油如橄榄油，或可注射的有机酯如油酸乙酯。可例如通过使用包衣如卵磷脂、如果是分散体则通过保持所需粒度、和/或通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。此类制剂可以适于推注给予或连续给予的形式制备、包装或出售。可注射制剂可以单位剂型制备、包装或出售，例如安瓿瓶、包含防腐剂的多剂量容器或用于自动注射或通过医师注射的单次使用装置。

药物组合物还以可注射的无菌水性或油性(乳剂)悬浮液或溶液的形式制备、包装或出售。此悬浮液或溶液可根据本领域已知技术进行配制，并且除了活性成分还可包含附加成分，例如本文所述的分散剂、润湿剂或悬浮剂。例如，可使用胃肠外可接受的无毒稀释剂或溶剂例如水或1,3-丁二醇来制备此类无菌可注射制剂。其它可接受的稀释剂和溶剂包括林格溶液、等渗氯化钠溶液和非挥发性油类，例如合成单甘油酯或二甘油酯。其它有用的胃肠外可接受的制剂包括含活性成分的那些制剂，所述活性成分呈微晶形式、在脂质体制剂中或作为可生物降解聚合物体系的一部分。用于缓释或植入的组合物可包含药学上可接受的聚合或疏水材料，例如乳剂、离子交换树脂、微溶聚合物或微溶盐。

根据本发明的化合物还可包含佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和/或分散剂，包括例如对羟基苯甲酸脂、氯代丁醇、酚、山梨酸等。还可能需要包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。可通过使用能延迟吸收的药剂例如单硬脂酸铝和/或明胶来引起可注射药物组合物的长期吸收。具体而言，其中可用脂质体、胶粒和乳化剂，从而使本发明化合物更易于溶解以便递送。

用于口服给予的固体剂型包括胶囊、片剂、粉末和颗粒。在此类固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂（或载体）混合，所述赋形剂例如柠檬酸钠或磷酸二钙或(a)填料或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖醇或硅酸；(b)粘结剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖或阿拉伯树胶；(c)湿润剂，例如甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐或碳酸钠；(e)溶液缓聚剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如季铵化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇或单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如高岭土或膨润土；和/或(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠或它们的混合物。在胶囊和片剂的情况中，剂型还可包含缓冲剂。

片剂可例如通过压缩或模制活性成分来制备，其任选地包含一种或多种附加成分。可通过在合适的装置中将活性成分压缩为自由流动形式（如粉末或颗粒制剂）来制备压缩片剂，所述活性成分任选地与粘结剂、润滑剂、赋形剂、表面活性剂和分散剂中的一种或多种混合。可通过在合适的装置中对活性成分、药学上可接受的载体和至少足以润湿混合物的液体的混合物进行模制来制备模制片剂。

用于生产片剂的药学上可接受的赋形剂包括惰性稀释剂、成粒剂和崩解剂、粘结剂和润滑剂。已知的分散剂包括马铃薯淀粉和羟乙酸淀粉钠。已知的表面活性剂包括月桂基硫酸钠。已知的稀释剂包括碳酸钙、碳酸钠、乳糖、微晶纤维素、磷酸钙、磷酸氢钙和磷酸钠。已知的成粒剂和崩解剂包括玉米淀粉和藻酸。已知的粘结剂包括明胶、阿拉伯树胶、预胶凝的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基甲基纤维素。已知的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、硅石和滑石。

片剂可未经包衣或其可使用已知的方法包衣以实现在人体胃肠道中的延迟崩解，从而使活性成分持续释放和吸收。举例而言，例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯的材料可用于对片剂进行包衣。片剂还可包含甜味剂、调味剂、染色剂、防腐剂或这些的某种组合，以提供药学上优质的和可口的制剂。

可制备具有包衣或外壳，例如肠溶包衣和本领域中熟知的其它包衣的固体剂型，如片剂、糖衣丸剂、胶囊和颗粒。其还可包含遮光剂，并且还可具有使其以延迟方式释放活性化合物的组合物。可用的包埋组合物的实例为聚合物和蜡。活性化合物还可呈微囊化形式，适当时具有上述赋形剂中的一种或多种。

相似类型的固体组合物可在使用如乳糖或奶糖、以及高分子量聚乙二醇等作为赋形剂的软质或硬质明胶填充的胶囊中用作填料。可使用可生理降解的组合物如明胶来制备包含活性成分的硬质胶囊。此类硬质胶囊包含活性成分，并且还可包含附加成分，包括例如惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土。可使用可生理降解的组合物如明胶来制备包含活性成分的软质明胶胶囊。此类软质胶囊包含可与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的活性成分。

可使用已知技术来制备口腔组合物，其专门在人类患者的小肠或大肠内释放口服给予的药剂。例如，用于递送至胃肠系统（包括结肠）的制剂包括肠溶衣系统，其基于例如仅在pH6及以上溶解的甲基丙烯酸酯共聚物如聚(甲基丙烯酸,甲基丙烯酸甲酯)，从而所述聚合物只有在进入小肠时才开始溶解。所述聚合物制剂崩解的位置取决于小肠通过速率和所含聚合物的量。例如，相对较厚的聚合物包衣用于递送至结肠近端。还可使用能够提供位置特异性结肠递送的聚合物，其中所述聚合物依赖于大肠菌落来提供聚合物包衣的酶促降解从而释放药物。例如，偶氮聚合物、配糖物以及各种天然获得和修饰的多糖可用于此类制剂中。

用于口服给予的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型可包含本领域中常用的惰性稀释剂例如水或其它溶剂、等渗盐水、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类，具体为杏仁油、花生油、椰子油、棉籽油、落花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、甘油、分馏的植物油、矿物油如液体石蜡、四氢糠醇、聚乙二醇、脱水山梨糖醇的脂肪酸酯或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂之外，本发明的化合物还可包括佐剂如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、缓和剂、防腐剂、缓冲剂、盐、甜味剂、调味剂、染色剂和芳香剂。除了活性化合物之外，悬浮液还可包含悬浮剂例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯或脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、氢化的食用脂、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、阿拉伯树胶、琼脂和纤维素衍生物如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、偏氢氧化铝、膨润土或这些物质的混合物等。适于口服给予的本发明药物组合物的液体制剂可以液体形式或以旨在使用前用水或另一合适的载剂复溶的干燥产品的形式来制备、包装和出售。

已知的分散剂或润湿剂包括天然存在的磷脂如卵磷脂，环氧烷与脂肪酸、与长链脂族醇、与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯、或与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物（例如分别为聚氧乙烯硬脂酸酯、十七基乙烯氧基鲸蜡醇、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。已知的乳化剂包括卵磷脂和阿拉伯树胶。已知的防腐剂包括甲基、乙基或正丙基-对-羟基苯甲酸、抗坏血酸和山梨酸。已知的甜味剂包括例如，甘油、丙二醇、山梨醇、蔗糖和糖精。已知的用于油性悬浮液的增稠剂包括例如蜂蜡、硬石蜡和鲸蜡醇。

活性成分在水性或油性溶剂中的液体溶液可以基本上与液体悬浮液相同的方式进行制备，主要的不同之处在于活性成分是溶解而非悬浮在溶剂中。本发明药物组合物的液体溶液可包含关于液体悬浮液所述的各组分，应理解悬浮剂未必有助于活性成分在溶剂中的溶解。水性溶剂包括例如水和等渗盐水。油性溶剂包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油、分馏的植物油和矿物油如液体石蜡。

本发明的组合物还可包括环糊精组分以例如改善活性药物成分的水溶性、延长药物释放并改善压片特性。通常，葡萄糖的环状结构低聚物("环糊精")某些细菌的淀粉消化物。最丰富的环糊精为分别具有6个、7个和8个葡萄糖单位的α、β和γ环糊精。环糊精的内腔是疏水的而分子的暴露面是亲水的。已知环糊精可提高活性药物成分稳定性、水溶性并降低挥发性。市售环糊精或其衍生物的一些实例如下：α-环糊精；(2-羟丙基)-α-环糊精；β-环糊精；6-O-α-D-葡糖基-β-环糊精；γ-环糊精；和(2-羟丙基)-γ-环糊精。

用于直肠或阴道给予的组合物可通过将本发明的化合物和任何附加化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体如椰子油、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，其在常温下呈固体而在体温下为液体，从而在直肠或阴道腔体内溶解和释放活性成分。此类组合物可以为例如栓剂、滞留灌肠制剂和直肠或结肠灌洗溶液的形式。栓剂制剂还可包含各种附加成分，包括抗氧化剂和防腐剂。滞留灌肠制剂或直肠或结肠灌洗溶液可通过将活性成分与药学上可接受的液体载体组合来制备。如本领域所知，灌肠制剂可以利用并可以包装在适于人直肠结构的递送装置内进行使用。灌肠制剂还可包含各种附加成分，包括抗氧化剂和防腐剂。

本发明药物组合物可以适于阴道给予的制剂来制备、包装或出售。此类组合物可呈例如栓剂、浸渍或包衣的可插入阴道的材料如棉塞、冲洗制剂或阴道灌洗溶液的形式。

用于局部给予本发明化合物的剂型包括膏剂、粉末、喷雾和吸入剂。化合物在无菌条件下与生理学上可接受的载体混合，并且可能需要任意防腐剂、缓冲液和/或推进剂。适于局部给予的制剂包括液体或半液体制剂如擦剂、洗剂、水包油或油包水乳剂如乳膏剂、膏剂或糊剂，和溶液或悬浮液。局部给予的制剂还可包含本文所述附加成分的一种或多种。

眼部制剂、眼膏、粉末和溶液也考虑涵盖在本发明的范围之内。此类制剂可例如呈滴眼剂的形式，包含有效量的活性成分在水性或油性液体载体中的溶液或悬浮液。此类滴剂还可包含缓冲剂、盐或本文所述附加成分中的一种或多种。在其它实施方式中，眼部可给予的制剂包含呈微晶形式的或在脂质体制剂中的活性成分。

配制用于肺部递送的本发明的药物组合物可以溶液或悬浮液液滴的形式提供活性成分。此类制剂可作为含活性成分的任选无菌的水性或稀醇溶液或悬浮液来制备、包装或出售，并且可以利用任何雾化或喷雾装置方便地给予。此类制剂还可包含一种或多种附加成分，包括调味剂如糖精钠、挥发油、缓冲剂、表面活性剂或防腐剂如羟基苯甲酸甲酯。通过此给药途径提供的液滴优选地具有约0.1-约200纳米内的平均直径。

本发明药物组合物可以适于含服给予的制剂来制备、包装或出售。此类制剂例如可用常规方法制成片剂或锭剂的形式，并且可例如包含有效量的活性成分，含口腔可溶解或降解组合物和任选地一种或多种本文所述附加成分中的剩余部分。或者，适于含服给予的制剂可包括含活性成分的粉末或气雾化或雾化的溶液或悬浮液。此类粉末状、气雾化或雾化制剂在分散时优选具有约0.1-约200nm的平均粒径或液滴大小，并且还可包含本文所述附加成分的一种或多种。

为了在非人动物中施用，本发明的化合物可以糊剂或粒料的形式制备并且作为通常在动物头部或耳部皮肤下方的植入物来给予。糊剂制剂可通过将化合物分散在药学上可接受的油如花生油、芝蔴油、玉米油等中来制备。包含治疗有效量的化合物的粒料可通过将化合物与稀释剂如碳蜡、卡洛巴蜡等混合来制备，并且可添加润滑剂如硬脂酸镁或硬脂酸钙以改善造粒工艺。当然，认识到可将不止一种粒料给予动物以达到所需剂量水平。此外，已发现还可在动物治疗期间将此类植入物周期性给予以保持动物体内适当的活性剂水平。

本发明的化合物及其药学上可接受的盐的剂量范围可根据需要而变化，这取决于所治疗对象的年龄和质量、预期给药途径、具体给予的化合物等。获益于本公开的本领域普通技术人员有能力确定用于具体患者的剂量范围和最佳剂量。还要注意的是，本发明的化合物可用于缓释、控释和延迟释放的制剂中，这些制剂形式也是本领域的普通技术人员所熟知的。。在一个实施方式中，本发明药物组合物包含5μM-100μM鹅去氧胆酸。在一个实施方式中，本发明药物组合物包含100μM鹅去氧胆酸。

本发明化合物是否直接给予细胞、含细胞的组织、接触细胞的体液或化合物从中扩散或运送至细胞的位置并不关键。以一定的量和途径将化合物给予患者从而所述化合物的量通过该途径足以使细胞中的脂质直接或间接抵达细胞就足够了。最小量随化合物的特征而变化。

可使用的具体剂量和剂量范围取决于多种因素，包括患者的需求、所治疗病症的严重程度以及所给予化合物的药理活性。根据本公开，对具体患者的剂量范围和最佳剂量的确定完全在本领域技术人员的普通技术范围之内。应理解普通医师、牙医或兽医将易于确定和开出有效量的化合物处方，以在患者中移动脂质贮存、导致体重减轻或抑制食欲。在前述中，医师或兽医可例如首先开出较低剂量处方，随后增加剂量直至获得适当响应。然而还应理解，对于任何特定个人的具体剂量水平将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、人的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、给药时间、给药途径、分泌速率、任何药物组合以及所治疗失调的严重程度。

当以药物可注射剂型（包括本文所述和要求保护的化合物与可注射载体体系的组合）配制时，本发明的化合物尤其有用。如本文中所用，可注射和输注剂型(即胃肠外剂型)包括但不限于含有用于包封活性药物的磷脂的脂质体注射剂或脂质双层囊泡。注射剂包括在胃肠外使用的无菌制品。

存在USP定义的五种不同种类的注射剂：乳剂、脂质、粉末、溶液和悬浮液。乳液注射剂包括含旨在胃肠外给予的无菌无热源制剂的乳剂。用于溶液注射剂的脂质复合物和粉末是旨在复溶形成胃肠外使用的溶液的无菌制剂。用于悬浮液注射剂的粉末是旨在复溶形成胃肠外使用的悬浮液的无菌制剂。用于脂质体悬浮液注射剂的冻干粉末是旨在复溶以胃肠外使用的无菌冷冻干燥制剂，其配制方式允许纳入脂质体如含用于将活性药物物质包封在脂质双层或水性空间中的磷脂的脂质双层囊泡，以此使制剂可在复溶后形成。用于溶液注射剂的冻干粉末是通过冻干(“冷冻干燥”)制备的溶液所用的剂型，由此所述过程包括以极低压力移除冷冻状态产物中的水分，且以此随后液体的加入产生在所有方面均符合注射要求的溶液。用于悬浮液注射剂的冻干粉末是旨在胃肠外使用的液体制剂，其包含悬浮于合适液态介质中的固体，且其在所有方面均符合无菌悬浮液的要求，以此通过冻干来制备悬浮液所用的药剂。溶液注射剂包括液体制剂，其包含一种或多种溶于适于注射的合适溶剂或相互混溶的溶剂混合物中的药物。溶液浓缩注射剂包括胃肠外使用的无菌制剂，其在加入合适的溶剂后产生所有方面均符合注射要求的溶液。悬浮液注射剂包括(适于注射的)液体制剂，其包含分散于整个液相中的固体颗粒，所述颗粒是不溶性的，并且以此使油相分散于整个水相中，反之亦然。悬浮液脂质体注射剂是(适于注射的)液体制剂，其具有以形成脂质体(通常在脂质双层或水性空间内包含用于包封活性药物质的磷脂的脂质双层囊泡)的方式分散于整个水相的油相。悬浮液超声注射剂是包含分散于整个液相中的固体颗粒的(适于注射的)液体制剂，所述颗粒是不溶性的。此外，由于将气体鼓泡通过悬浮液产生由固体颗粒形成的微球，因此可对产物进行超声处理。

本发明组合物还可包括一种或多种药学上合适的赋形剂，如溶剂和共溶剂、增溶剂、润湿剂、悬浮剂、增稠剂、乳化剂、螯合剂、缓冲液、pH调节剂、抗氧化剂、还原剂、抗微生物防腐剂、增量剂、保护剂、张力调节剂和特殊添加剂。

II.鹅去氧胆酸对ADP诱导的人血小板聚集的抑制效果

在一个实施方式中，鹅去氧胆酸对ADP诱导的人血小板聚集具有抑制效果。鹅去氧胆酸浓度依赖性抑制ADP5μM诱导的人血小板聚集，鹅去氧胆酸5μM抑制率为18±2％，鹅去氧胆酸10μM抑制率为32±4％，鹅去氧胆酸20μM抑制率为54±5％，鹅去氧胆酸30μM抑制率为66±4％，鹅去氧胆酸50μM抑制率为86±5％，鹅去氧胆酸100μM抑制率为99±2％。(见表1)。

III.鹅去氧胆酸对其他多种激动剂诱导的人血小板聚集的抑制效果

在另一个实施方式中，鹅去氧胆酸100μM对其他多种激动剂诱导的人血小板聚集具有抑制效果：100μM时鹅去氧胆酸可抑制凝血酶和胶原诱导的血小板聚集，对凝血酶0.1U/ml诱导的血小板聚集的抑制率为23％±8％,对胶原1μg/ml诱导的血小板聚集的抑制率为25％±6％。（见表2）

IV.鹅去氧胆酸对人血小板铺展的抑制效果

在另一个实施方式中，鹅去氧胆酸对人血小板铺展具有抑制效果：鹅去氧胆酸浓度依赖性抑制人血小板铺展，30μM鹅去氧胆酸抑制率为25±6％，50μM鹅去氧胆酸抑制率为37±4％，100μM鹅去氧胆酸抑制率为45±8％。（见表3）

V.口服鹅去氧胆酸后的抗血小板聚集效果

在另一个实施方式中，口服给予鹅去氧胆酸后具有抗血小板聚集效果：在鹅去氧胆酸口服（100mg/kg/day）给药一周小鼠中，经腹主动脉取血后测定血小板聚集率，鹅去氧胆酸给药一周显著抑制血小板的聚集，其对ADP10μM诱导的血小板聚集抑制率为28％±9％。（见图1，表4）

实验结果证实，本发明的式（Ⅰ）所示化合物鹅去氧胆酸对于多种激动剂诱导的人血小板聚集具有良好的抑制效果，对血小板在玻片上的铺展具有良好的抑制效果，最终在小鼠口服给药后，发现鹅去氧胆酸具有显著抗血小板效果（即抑制血小板聚集形成血栓）。在此基础上，发明人发现鹅去氧胆酸，一种传统的治疗肝胆疾病药物，在预防和治疗心血管性疾病的新用途。其通过抑制血小板聚集，抑制血小板铺展，发挥良好的抗血小板效果（即抑制血小板聚集形成血栓）。对病理机制为血小板异常激活的血栓性心血管性疾病具有预防和治疗效果。

实施例

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于以任何方式限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Alan D.Michelson等人，在《血小板》第二版(NewYork:Elsevier Press，2007)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，文中所使用试剂来自国药试剂有限公司，百分比和份数按重量计算。通过上述说明和以下实施例，在本文示出和描述的那些之外的本发明的各种修改对于本领域的技术人员显而易见，并且落在所附权利要求的范围之内。

除非另行定义，所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1.鹅去氧胆酸对ADP诱导的人血小板聚集的抑制效果

本实施例的目的是证明鹅去氧胆酸可以抑制ADP诱导的人血小板聚集。

在本实施例中，血小板的制备如下：血小板来自于签订知情同意书的健康志愿者，志愿者在取血前20天内未服用阿司匹林，氯比格雷等任何抗血小板药物。抗凝剂采用ACD(85mmol L^-1柠檬酸钠，71.38mmol L^-1柠檬酸，和27.78mmolL^-1葡萄糖)。300x g离心20分钟得到富血小板血浆，取上层富血小板血浆后900x g进一步离心10分钟得到血小板，最终用Tyrode’s缓冲液重悬(138mmol L^-1氯化钠（NaCl），2.7mmol L^-1氯化钾（KCl），2mmol L^-1氯化镁（MgCl₂），0.42mmol L^-1磷酸二氢钠（NaH₂PO₄），5mmol L^-1葡萄糖(glucose)，10mmol L^-1HEPES，0.2%牛血清清蛋白(BSA)，和0.02unit mL^-1三磷酸腺苷双磷酸酶（apyrase），pH7.4，得到洗过的血小板，血小板数目调整为2.5×10⁸个血小板/ml。

血小板的聚集测定：血小板的聚集在血小板聚集仪(Model400VS，Chrono-Log公司，Haverston，PA)，参数设定：搅拌速度900rpm，温度37℃，在加入激动剂ADP之前，血小板用溶剂或药物预处理3分钟，血小板聚集曲线监测时间为5分钟，聚集抑制率为处理组与溶剂对照组相比血小板聚集程度降低的百分比。

聚集抑制结果见表1，鹅去氧胆酸(西格玛公司,sigma,USA），浓度依赖性抑制ADP10μM（Chrono-log公司,Havertown,PA）诱导的人血小板聚集。

表1：鹅去氧胆酸浓度依赖性抑制ADP5μM诱导的人血小板聚集。

鹅去氧胆酸剂量（μM）	血小板聚集抑制率(n=3)
		5	18±2％
10	32±4％
		20	54±5％
30	66±4％
		50	86±5％
100	99±2％

实施例2.鹅去氧胆酸100μM对其他多种激动剂诱导的人血小板聚集的抑制效果

本实施例的目的是证明鹅去氧胆酸可以抑制凝血酶和胶原诱导的人血小板聚集。

在本实施例中，血小板的制备和血小板的聚集诱导和测定方法同实施例1。结果见表2，鹅去氧胆酸在100μM时抑制凝血酶（Chrono-log公司,Havertown,PA）（0.1U/mL）,和胶原（Chrono-log公司,Havertown,PA）（1μg/mL）诱导的人血小板聚集。

表2：鹅去氧胆酸抑制凝血酶和胶原诱导的人血小板聚集。

鹅去氧胆酸浓度（μM）	激动剂名称（浓度）	血小板聚集抑制率(n=3)
			100	凝血酶（0.1U/mL）	23％±8％
100	胶原（1μg/mL）	25％±6％

实施例3.鹅去氧胆酸对于血小板铺展的抑制效果。

本实施例的目的是证明鹅去氧胆酸可以抑制血小板铺展。

在本实施例中，血小板的制备同实施例1，血小板铺展实验过程如下：

1)盖玻片或培养板的包被：将盖玻片或一次性培养板用20μg/mL纤维蛋白原（fibrinogen,Chrono-log公司,Havertown,PA）（溶于PBS）包被，4℃过夜，2%牛血清白蛋白37℃封闭非特异性结合位点1h，PBS冲洗一次。

2)将对照组或鹅去氧胆酸处理组的血小板用HEPES-Tyrode缓冲液调整浓度为1.8×10⁶/500μL，接种于24孔板内纤维蛋白原包被的盖玻片上，每孔500μL，37℃孵育2小时。

3)将上述盖玻片取出，用预冷PBS洗涤一次，黏附血小板用4%多聚甲醛（formaldehyde）固定20min。

4)将固定好的血小板用含3%BSA的PBS室温封闭30min。

5)加入含1％BSA和微丝绿色荧光探针（actin-Tracker Green，碧云天公司，中国）的PBS，室温孵育45min。

6)PBS洗片5次，每次3min，去离子水冲洗盖玻片1次，以去除多余的盐分。

7)晾干盖玻片，在载玻片上滴加荧光防淬灭封片剂(DAKO公司)，将盖玻片倒置覆盖于封片剂上，避免出现气泡。用指甲油封片，4℃避光保存。

8)荧光显微镜（Leica DM5500，日本）观察结果。计录每个高倍视野血小板铺展情况。

以上步骤均须注意避光。结果见表3，鹅去氧胆酸浓度依赖性抑制人血小板的铺展。

表3：鹅去氧胆酸浓度依赖性抑制人血小板的铺展。

鹅去氧胆酸浓度（μM）	血小板铺展抑制率(n=3)
		30μM	25±6％
50μM	37±4％
		100μM	45±8％

实施例4.鹅去氧胆酸的口服给药后抑制血小板聚集效果

本实施例的目的是证明鹅去氧胆酸口服给药后可以抑制血小板聚集。

在本实施例中，6到8周龄的小鼠(BALB/C)口服鹅去氧胆酸（100mg/kg/day,溶解于乙醇）和对照（乙醇）给药一周后，10％水合氯醛(400mg kg^-1)麻醉，体外获取小鼠血小板，以2.9％枸橼酸钠（枸橼酸钠：全血=1：9）抗凝，300x g离心5分钟得到富血小板血浆，取上层富血小板血浆后900x g进一步离心8分钟得到血小板，最终用Tyrode’s缓冲液重悬，得到洗过的血小板，血小板数目调整为2.5×10⁸个血小板/ml。血小板的聚集测定方法同实施例1。结果见图1和表4。鹅去氧胆酸小鼠口服给药后可显著抑制ADP（10μM）诱导的血小板聚集，显示其口服后仍具有良好的抗血小板活性。

表4：鹅去氧胆酸口服后抑制小鼠血小板聚集。

上文所列的各相关文献均以全篇引入本申请作为参考。本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明之精神与范围的前提下，对上述描述的任何修饰都是允许的。同样，类似的情况也包括在权利要求中。

Claims (10)

1.式（Ⅰ）的化合物在制备抗血小板聚集的药物中的用途

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物抑制血小板的聚集和铺展。

3.式（Ⅰ）的化合物在制备抗血栓形成的药物中的用途

4.式（Ⅰ）的化合物在制备预防与血小板异常激活有关的疾病的药物中的用途

5.式（Ⅰ）的化合物在制备治疗与血小板异常激活有关的疾病的药物中的用途

6.如权利要求4或5所述的用途，其特征在于，所述与血小板异常激活有关的疾病包括血栓性疾病、具有高凝状态的病毒性疾病、肿瘤疾病、冠心病、中风、高血压、白血病或弥散性血管内凝血（DIC）。

7.如权利要求1-5中任一项所述的用途，其特征在于，所述药物制备成适合口服、静脉内、腹膜内、局部、透皮、经眼、经鼻、吸入、皮下、肌内、口含、舌下或直肠给药的剂型。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述剂型包括片剂、胶囊、丸剂、颗粒制剂或注射液。

9.如权利要求1-5中任一项所述的用途其特征在于，所述药物与任何活性或非活性的成分联合制备或联合给药。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于所述活性成分包括阿司匹林、氯比格雷或西洛他唑。