CN104721252B - 一种中药组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种中药组合物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种中药组合物,其中,所述中药组合物原料为黄芪2‑10份、刺五加1份。该中药组合物可降低人工感染断奶仔猪综合征的发生率,使动物机体具有较强的抵抗力;可有效降低断奶仔猪综合征的发生,并对猪圆环病毒造成的仔猪生长发育受阻具有缓解作用,有益于减少仔猪断奶综合征给养殖业造成的损失,增加养殖效益。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物,以及其制备方法和应用,属于兽药领域。
背景技术
断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)(以下简称“仔猪断奶综合征”)曾被认为是由断奶应激、肠道微生态区系改变、饲料营养等因素引起的,随着猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)的发现,其病因逐渐被公开,它是由猪圆环病毒II型(PCV2)引起断奶乳猪的一种传染病。该病主要发生于5-12周龄的断奶仔猪,在仔猪断奶时,病猪表现为生长缓慢、呼吸困难、消瘦、贫血、黄疸等症状,以衰竭和体重减轻为显著特征。
PCV2是危害养猪业的一种严重传染性病毒,对各猪场的调查统计结果显示,我国各省份猪场中猪的PCV2阳性率在42.12-59%,说明该病毒在我国广泛存在。目前仔猪断奶综合征主要靠疫苗来预防,但受诸多因素的影响,疫苗使用率并不高。此外,在使用疫苗的过程中,有些猪场不结合本厂的状况,照搬生产厂家的免疫程序,导致疫苗效果不能充分体现。该病一旦发生,不仅影响猪群的生长,而且对猪只免疫系统产生抑制,影响其他疫苗的免疫效果,对养猪业危害很大。因此寻找一种有效防治该病的药物,以便在疾病的高发日龄时进行预先防治,并在疾病发生时及时进行治疗,是控制该病的最佳途径和迫切需求。
申请号为CN200910305884.0的专利提供了一种治疗仔猪断奶综合症的中药组合物及其制备方法。该药物由以下成分组成:党参19-23份、黄芪19-23份、益母草41-45份、炒谷芽12-16份;其制备方法:按重量份数称取党参、黄芪、益母草、谷芽等原料,煎煮两次,第1次加水10倍 量,浸泡30min,煎煮2.0h;第2次加水10倍量,煎煮1.0h,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度大于或等于1.05(60℃)的清膏,即得。但该中药组合物主要针对断奶应激综合症,对病毒引起的多系统衰竭综合征无效;同时组方中有4味中药,质量难以控制。
申请号为CN200910220085.3的专利公开了一种天然植物性抗仔猪断奶应激饲料添加剂,主要由白头翁18-20份、黄柏8-10份、秦皮18-20份,山楂5-7份、甘草4-5份、黄芪9-10份、松针粉30-35份组成。该组方具有促生长作用,将该添加剂在仔猪全价饲料中按0.05-0.1g/kg添加,在断奶后饲喂仔猪,连续饲喂21天,具有促生长和抗应激作用。但该添加剂存在以下不足:(1)主要针对断奶应激综合症,对病毒引起的多系统衰竭综合症无效;(2)饲喂周期较长,连续饲喂21天才能发挥作用;(3)药味众多,质量难以控制;(4)必须添加在饲料中饲喂,使用方法受限制。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种防治仔猪断奶综合征的中药组合物,所述中药组合物原料为黄芪2-10份、刺五加1份。本发明所述中药组合物的主要有效成分为多糖和黄芪甲苷。该中药组合物在仔猪开始断奶时应用,连用5天,可有效清除病原,使猪群恢复健康,降低疾病对仔猪的危害程度。
优选地,所述中药组合物原料为黄芪3-6份、刺五加1份。
更优选地,所述中药组合物原料为黄芪4份、刺五加1份。
优选地,所述中药组合物进一步包括药学上可接受的载体,所述载体包括稀释剂、崩解剂、包合剂、润湿剂。
本发明所述的药学上可接受的载体可以是任何制备中药颗粒剂常用的或者常规药学上可接受的载体,例如:稀释剂(填充剂)包括但不限于蔗糖、糊精、淀粉、乳糖、甘露醇、木糖醇、甲壳胺、双歧糖、可溶性淀粉、滑石粉或水溶性糊精等;崩解剂包括但不限于淀粉、羧甲基纤维素钠(CMS-Na)、微晶纤维素(MCC)、微粉硅胶、羟丙基淀粉、 可溶性淀粉、水溶性糊精;包合剂包括但不限于α-环糊精(α-CD)、β-环糊精(β-CD)和N-LOK变性淀粉等;润湿剂(粘合剂)包括但不限于水、乙醇、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、羟丙基纤维素、聚乙二醇(PEG)等。上述药学上可接受的载体可以单独使用,也可以联合使用。
本发明所述的药学上可接受的载体可以是任何制备中药口服液常用的或者常规药学上可接受的载体,包括但不限于溶剂(水、乙醇或丙二醇)、防腐剂(苯甲酸钠、三梨酸以及尼泊金酯)以及表面活性剂(卵磷脂、吐温)等。
优选地,所述中药组合物为粉剂、口服液、颗粒剂、注射剂。
本发明的另一目的在于提供一种所述中药组合物的制备方法,包括如下步骤:按比例称取黄芪、刺五加饮片,粗粉碎,加8-10倍量的水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加6-8倍量的水提取2次,分次过滤,合并3次滤液;趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.05-1.10的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.15-1.25的清膏,即得中药提取浓缩液;进一步加入药学上可以接受的载体,制成兽医临床方便应用的剂型。
在根据临床需要制备相应的剂型时,可以进一步采取如下后处理步骤:
(1)粉剂取上述制得的中药提取浓缩液,喷雾,干燥,即得本发明所述的中药组合物粉剂。
(2)口服液取上述制得的中药提取浓缩液,加水稀释至每毫升含原生药材1.0-1.5g,滤过,灌装,每瓶100-200ml,115℃高压30min进行灭菌,即得本发明所述的中药组合物口服液。
(3)颗粒剂取上述制得的中药提取浓缩液,浓缩至相对密度为1.30-1.35的稠膏,加入载体,制成颗粒,干燥后即得所述的中药组合物颗粒剂。优选地,所述载体为蔗糖和糊精,膏重、蔗糖、糊精的重量比例为1:2:1。
(4)注射液取上述制得的中药提取浓缩液,加水稀释至每毫升含原生药材1-1.2g,加入注射用炭,搅拌30-60min,过滤,滤液精滤,加 注射用水调节PH值为5.0-7.0,灌装,灭菌,即得本发明所述的中药组合物注射液。优选地,所述注射用炭加入比例为0.5-1%。优选地,所述精滤采用孔径0.45μm滤膜。
本发明的再一目的在于提供所述中药组合物在防治仔猪断奶综合征方面的应用,其中,所述应用可以在免疫前后施用所述中药组合物。
优选地,所述应用中中药组合物的用法用量如下:
用法:
所述中药组合物剂型为口服剂型(粉剂、颗粒剂、口服液),每日一次经口集中给药,连用3天;
所述中药组合物剂型为注射剂型(注射液):一次肌肉注射给药。
用量:
所述中药组合物为粉剂:每1L水0.1-0.2g;所述中药组合物为颗粒剂:每1L水0.5-1.0g;所述中药组合物为口服液:每1L水0.5ml;所述中药组合物为注射液:每kg体重注射0.1-0.2ml。
本发明所制备的中药组合物可降低人工感染断奶仔猪综合征的发生率,使动物机体具有较强的抵抗力;可有效降低断奶仔猪综合征的发生,并对猪圆环病毒造成的仔猪生长发育受阻具有缓解作用,有益于减少仔猪断奶综合征给养殖业造成的损失,增加养殖效益。
具体实施方式
下面采用具体实施例进一步描述本发明。
实施例1本发明所述中药组合物的制备例
制备例1、称取黄芪2份(2kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加30L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水25L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.05的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.22的清膏,喷雾干燥,即得中药组合物粉剂1020g,分装成50g/袋,封口,即得本发明所述的中药组合物粉剂。
制备例2、称取黄芪3份(3kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加40L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水30L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.05的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.22的清膏,喷雾干燥,即得中药组合物粉剂1308g,分装成50g/袋,封口,即得本发明所述的中药组合物粉剂。
制备例3、称取黄芪4份(4kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加50L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水48L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.10的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.22的清膏,喷雾干燥,即得中药组合物粉剂1238g,分装成50g/袋,封口,即得本发明所述的中药组合物粉剂。
制备例4、称取黄芪6份(6kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加70L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水50L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.06的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.15的清膏,喷雾干燥,即得中药组合物粉剂2339g,分装成50g/袋,封口,即得本发明所述的中药组合物粉剂。
制备例5、称取黄芪8份(8kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加90L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水85L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.09的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.17的清膏,继续浓缩至相对密度为1.17的清膏,喷雾干燥,即得中药组合物粉剂3007g,分装成50g/袋,封口,即得本发明所述的中药组合物粉剂。
制备例6、称取黄芪10份(5kg)、刺五加1份(0.5kg),粉碎成最粗粉,加50L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水40L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.10的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓 缩至相对密度为1.15的清膏,喷雾干燥,即得中药组合物粉剂1873g,分装成50g/袋,封口,即得本发明所述的中药组合物粉剂。
制备例7、称取黄芪3份(3kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加40L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水35L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.05的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.24的清膏,继续浓缩至相对密度为1.29的稠膏1.88kg,分别加入膏重2倍的蔗糖和膏重等量的糊精,制成颗粒,进行干燥后即得本发明所述的中药组合物的颗粒剂7.5kg,分装成50g/袋,封口,即得本发明所述的中药组合物颗粒剂。
制备例8、称取黄芪4份(4kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加50L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水48L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.08的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.20的清膏,继续浓缩至相对密度为1.27的稠膏2.36kg,分别加入膏重2倍的蔗糖和膏重等量的糊精,制成颗粒,进行干燥后即得本发明所述的中药组合物的颗粒剂9.4kg,分装成50g/袋,封口,即得本发明所述的中药组合物颗粒剂。
制备例9、称取黄芪4份(4kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加50L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水45L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.08的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.19的清膏,加水稀释至5L(每毫升含原生药材1g),滤过,灌装,每瓶200ml,115℃高压30min进行灭菌,即得本发明所述的中药组合物口服液。
制备例10、称取黄芪6份(6kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加70L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水60L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.06的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩 至相对密度为1.17的清膏,加水稀释至7L(每毫升含原生药材1g),滤过,灌装,每瓶200ml,115℃高压30min进行灭菌,即得本发明所述的中药组合物口服液。
制备例11、称取黄芪4份(4kg)、刺五加1份(1kg),粉碎成最粗粉,加50L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水40L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.07的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.20的清膏约3L,加入60g注射用炭,搅拌30-60min,过滤,除去杂质。滤液用孔径0.45μm滤膜精滤,加注射用水至8L,调节PH值为5.73,灌装,每瓶50ml,115℃高压30min灭菌,即得本发明所述的中药组合物注射液。
制备例12、称取黄芪10份(5kg)、刺五加1份(0.5kg),粉碎成最粗粉,加50L水,浸泡1.5h,回流提取2h,过滤,收集滤液,滤渣再加水提取2次,每次加水40L,过滤,合并3次滤液,趁热离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.10的溶液,冷藏24h,离心,上清液减压浓缩至相对密度为1.20的清膏约4L,加入50g注射用炭,搅拌30-60min,过滤,除去杂质。滤液用孔径0.45μm滤膜精滤,加注射用水至5.5L,调节PH值为6.22,灌装,每瓶50ml,115℃高压30min灭菌,即得本发明所述的中药组合物注射液。
实施例2本发明所述中药组合物对猪圆环病毒的抑制作用试验
取实施例1中制备例2、制备例3、制备例4、制备例5制备的中药组合物粉剂测定本发明各中药组合物对猪圆环病毒的抑制作用。
一、试验材料
猪圆环病毒毒株:PCV2(SH株),国家兽用药品工程技术研究中心猪病室提供,TCID50为107.5/0.3ml。
试剂及其他:试验中所需要的溶液试剂按常规的方法配制。试剂的厂家、批号信息如下:RPMI-1640培养基,批号1042186,Gibco公司产品;MTT,批号:MKBH7489V,Sigma公司;DMSO,批号:20090312, 天津市德恩化学试剂有限公司;胎牛血清,批号:NSF0051,海克隆生物化学制品(北京)有限公司。
二、试验方法
1.试验前的准备
铺板:取传代后的PK-15细胞,用胰酶消化30min,使其分散成单个细胞,台盼蓝染色计数,用完全1640培养基调整细胞浓度为1×106个/ml。加入5块96孔板中,每孔100μl,振荡混匀后置于37℃CO2培养箱培养24h。
药物的稀释:取制备例2、制备例3、制备例4、制备例5制备的中药组合物粉剂,用不完全1640培养基配成200mg/ml的母液,0.22μm微孔滤膜过滤除菌。用完全1640培养基稀释成3200μg/ml、1600μg/ml、800μg/ml、400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml,备用。
2.药物抗病毒试验
96孔板培养细胞24h,细胞长成单层细胞后,每孔加入20μl的106.0TCID50的猪圆环病毒液,继续培养6h。依次加入上述稀释好的药物100μl,每块板加1种药物,每个浓度重复6孔,继续培养24h,加入10μl浓度为5mg/mI的MTT,继续培养4h,小心吸取上清液弃去,加入150μl二甲基亚枫,振荡10min,用酶标仪在570nm下测定OD值。设立正常细胞对照组和病毒对照组。根据公式计算病毒的抑制率。
病毒抑制率=(药物处理组OD值-病毒对照组平均OD值)/(正常细胞对照组OD值-病毒对照组平均OD值)×100%
3.数据分析
采用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析,所有数据均以表示。以0.01<P<0.05表示差异显著,P<0.01表示差异极显著。
4.试验结果
试验结果见表1。
表1.各中药组合物对猪圆环病毒的抑制率
从表1的统计结果可以看出,添加药物孔的OD值与病毒对照孔的数值基本相当,病毒抑制率均在20%以内,说明各药物组合物粉剂基本无抗病毒作用,应用本发明各药物组合物粉剂在体外对猪圆环病毒均无抑制作用。
实施例3本发明所述中药组合物对人工感染的仔猪断奶综合征的作用试验
取制备例2、制备例3、制备例4、制备例5制备的中药组合物粉剂和制备例11所制备的中药组合物注射液来测定本发明各中药组合物对仔猪断奶综合征的作用。
一、试验材料
抗PCV2猪血清,购自VMRD公司;
猪圆环病毒2型ELLSA抗体检测试剂盒,购自武汉科前动物生物制品有限公司;
PCR仪,Eppendorf公司;
PCV2抗体阴性三元杂交商品猪35头,购自洛阳市森龙农业发展有限公司种猪场。
PCV2(SH株),国家兽用药品工程技术研究中心猪病室提供,TCID50为107.5/0.3ml。
二、试验方法
将35头猪随机分为A、B、C、D、E、F、G7个组,每组5头。A、 B、C、D、E、F于分组后攻毒给予PCV2病毒,每猪3ml,肌注2ml,滴鼻1ml。各组于攻毒后24h给予本发明制备的中药组合物,试验具体分组及处理与给药方法见表2。G组为空白对照组,空白对照组不攻毒,不给药,隔离饲养。各组动物每天定期观察,测定各项相关指标,观察至攻毒后第14d,采血后将全部动物处死,取其扁桃体、淋巴结、肺脏,石蜡切片,进行免疫组化,观察组织中阳性细胞出现率。
表2试验具体分组及处理与给药方法
三、检测指标:
1.临床观察每日观察包括猪的食欲、体温、被毛状况、神经症状、粘膜黄疸等。
2.相对增重率在攻毒前和试验结束时称取猪体重,计算试验期内的相对增重率。
相对增重率=(试验结束时体重-试验开始时体重)/试验开始时体重×100%
3.PCV2病毒血症检测于攻毒前、攻毒后第7天、14天对各试验组猪只分别抽取血液2ml,分离血清,提取血清中的DNA,进行基因扩增,上下游引物如下:
上游5’-agaagcectctatcggag-3’,下游引物为5’-aaggttgaattctggccc-3’
扩增方法如下:94℃预变性1min,55℃退火1min,72℃延伸1min,进行30个循环;72℃延伸7min,4℃保存。取6μL PCR产物在0.8%琼脂糖凝胶中电泳检测。
4.组织中病毒检测试验结束后处死全部动物,取其扁桃体、淋巴结、肺脏,石蜡切片,进行免疫组化,观察组织中阳性细胞出现率。
四、试验结果
1.临床观察各试验组猪只在攻毒前体温均处于正常范围,猪直肠温度在38.6-39.8℃之间。接种病毒后,F组在攻毒后第2天有3头猪出现体温升高,达到40℃以上,但2天后测定又下降至39.5℃以下。给药组中,B、E组猪体温与食欲均正常,无任何异常表现。A组、C组、D组均有一头猪在攻毒后第2-3天体温达40℃以上,2天后又恢复正常。
2.相对增重率试验期内的各试验组猪只增重统计结果见表3。可见,整个试验期内F组与G组猪只的相对增重率差异显著(0.01<P<0.05),其他各组之间均无明显差异(P>0.05)。
表3.各试验组猪只增重的统计结果
注:相对增重率一列中,“a”表示与G组相比,差异显著(0.01<P<0.05)。
3.PCV2病毒血症的检测
各试验组猪只的PCV2病毒血症检测结果见表4。
表4.试验猪群PCV2病毒血症检测结果
从表4可以看出,通过PCR检测发现,所有猪只在试验前均未检测到PCV2病毒血症。攻毒后第7天,A、C、D组均有2头猪发生PCV2病毒血症;攻毒后第14天,A、C、D组分别有3头、1头、2头猪检出PCV2病毒血症;在整个试验过程中,F组即攻毒对照组5头猪全部被检出PCV2病毒血症感染,B组、E组、G组始终未检测出PCV2病毒血症。
4.组织中病毒检测结果
各试验组猪只组织中PCV2免疫组化检测结果见表5。
表5.各试验组猪只组织中PCV2免疫组化检测结果
从表5可以看出,B组、E组、G组猪只的扁桃体、淋巴结、肺组织中均未检测出PCV2病毒。除这3个组外,其他4个组均有病毒检出,并且病毒多集中于淋巴结、扁桃体中,在肺脏中也有分布。
五、结论
应用本发明所制备的中药组合物,可降低人工感染断奶仔猪多系统衰竭综合征的发生率,使动物机体具有较强的抵抗力,可有效降低断奶仔猪多系统衰竭综合征的发生,并且对圆环病毒造成的仔猪生长发育受阻亦具有缓解作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施方式,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.中药组合物在制备单独治疗断奶仔猪多系统衰竭综合征的药物中的应用,其中,所述中药组合物原料为黄芪2-10份、刺五加1份。
2.根据权利要求1所述的应用,其中,所述中药组合物原料为黄芪3-6份、刺五加1份。
3.根据权利要求2所述的应用,其中,所述中药组合物原料为黄芪4份、刺五加1份。
4.根据权利要求1所述的应用,其中,所述中药组合物进一步包括载体,所述载体包括稀释剂、崩解剂、包合剂、润湿剂。
5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述中药组合物为粉剂、颗粒剂、口服液、注射剂。
6.根据权利要求1所述的应用,其中,所述中药组合物剂型为粉剂、颗粒剂、口服液,每日一次经口集中给药,连用3天;或者所述中药组合物剂型为注射液,一次肌肉注射给药。
7.根据权利要求1所述的应用,其中,所述中药组合物剂型为粉剂:每升水0.1-0.2g;所述中药组合物剂型为颗粒剂:每升水0.5-1.0g;所述中药组合物剂型为口服液:每升水0.5ml;所述中药组合物剂型为注射液:每kg体重注射0.1-0.2ml。
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