CN104719345A - 一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，为首先将淡紫拟青霉菌通过培养基培养，培养成熟之后再加入甲壳素进行混合培养后制得。本发明将淡紫拟青霉菌和甲壳素很好的结合在一起，不必分开使用，使用方便，成本低，效果好，且制备的防治蔬菜线虫病的生物制剂在整地施肥时、生长期、花果期均可使用，田间使用效果稳定，具有增强肥力、增产丰收、改善品质、节省人工、增加效益、减免残毒、改善土质和消除线虫等作用。

Description

一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种生物制剂，尤其涉及一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法。

背景技术

根结线虫病对蔬菜的主要危害部分为蔬菜根部，其中蔬菜的侧根和须根最易受害。受害根部产生大小不等的瘤状物或根结，根结初为白色，柔软，后变为浅黄褐色或深褐色，表面粗糙，有时裂开。剖开根结，可看到白色珍珠状小颗粒，是根结线虫的雌成虫。蔬菜受根结线虫侵染后生长发育缓慢，叶片小而黄，发病重时，植株矮小，不结实或结实不良，遇高温干旱天气时，植株易萎蔫甚至枯死。植物线虫病在我国局部常有发生、危害严重，几乎每种作物上都有1-2种线虫病，并且发生面积有时会扩大，危害越来越重，已成为农业生产上亟待解决的问题之一。

生物防治是目前防治根结线虫病中最具有应用前景的防治方法，符合环保和健康理念，但国内用于防治根结线虫病的生防制剂非常少，大多数对根结线虫有作用的生防制剂都还处于研发阶段，且田间使用效果不太稳定。目前使用的生防制剂仅有线虫必克和阿维菌素。而在蔬菜根结线虫防治上用的较多的是阿维菌素，可用阿维菌素颗粒剂进行沟施或穴施，但作为生物农药阿维菌素存在着几乎所有生物农药都不可避免的弱点，即根结线虫病防治不彻底，且田间使用效果不太稳定。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供了一种根结线虫病防治彻底、田间使用效果稳定的防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，其特征在于：为首先将淡紫拟青霉菌通过培养基培养，培养成熟之后再加入甲壳素进行混合培养后制得。

正常农耕中微生物如丝状菌等进入土中，可得良好物理性土壤改良之效果，因为微生物的繁殖，除了可分泌大量多糖类黏液、促使土壤团粒化外，并可排出各种气体，包括二氧化碳、甲烷气，每克土壤之中平均含有一亿个微生物体，其排出之气体与气压足以疏松土质、增进土壤空隙度与耕耘深度，微生物中丝状菌的大量繁殖，其菌丝的繁衍有助于土壤改良，土壤微生物除了此类直接影响土壤物理性质的作用外，它并可分泌大量生化物质，包括氨基酸、核酸、糖类、活性酵素；并且为改善自己生存的环境，微生物会分泌一些对其他微生物生存具有抑制作用的物质或采用一些方法，如噬食、寄生或分泌杀菌物质和溶菌物质等，此为拮抗作用，能够产生拮抗作用的微生物即称之为拮抗微生物。在土壤微生物，如果含有足够的拮抗微生物的话，则土壤中甚至植物体中的病原菌即可减少，甚至于灭绝，如此可减少农药的需求量。而淡紫拟青霉菌正是根结线虫与白色胞囊线虫卵的有效寄生菌，对根结线虫的卵寄生率高达60％-70％，对多种线虫都有防治效能，其寄主有根结线虫、胞囊线虫、金色线虫、异皮线虫，是防治根结线虫最有前途的生防制剂。淡紫拟青霉菌对根结线虫的抑制机理是淡紫拟青霉与线虫卵囊接触后，在粘性基质中生防菌淡紫拟青霉菌的菌丝包围整个虫卵，菌丝末端变粗，由于代谢物和真菌几丁质酶的活动使卵壳表层破裂，淡紫拟青霉菌剂是纯微生物活孢子制剂，具有高效、光谱、长效、安全、无污染、无残留等特点，可明显刺激作物生长。在植物根系周围施用淡紫拟青霉菌剂不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植物根系及植株营养器官的生长，如播前拌种，定植时穴施，对种子的萌发与幼苗生长具有促进作用，可实现苗全、苗绿、苗壮，一般可使作物增产15％以上。在拟青霉的培养过程中，特别是在培养基与深层发酵培养过程中，该菌能产生丰富的衍生物，其一是类似吲哚乙酸产物，它最显著的生理功效是低浓度时促进植物根系与植株的生长，因此在植物根系施该菌不仅能明显抑制线虫侵染，而且能促进植株营养器官的生长，同时对种子的萌发与生长也有促进作用，该菌能产生丰富的几丁质酶，几丁质酶对几丁质有降解作用，它能促进线虫卵的孵化，提高拟青霉菌对线虫的寄生率，此外还能产生细胞裂解酶、葡聚糖酶与丝蛋白酶，淡紫拟青霉还能促进难溶磷酸盐的溶解，拟青霉菌的增溶效果可达到30％左右。

甲壳素是几丁质六碳糖四位脱乙酰而生成的衍生物，几丁质通过脱乙酰的作用而成甲壳素,它的成分跟微生物的表皮构造密切相关，当甲壳素出现在动植物细胞表皮时可以刺激并给予细胞错误的信息，当做是有外敌(病原菌)接近细胞表皮因而激活细胞的免疫系统，激活细胞抗体的形成，同时促进新陈代谢的旺盛，使细胞迅速激活对付一切微生物侵入的状态，加快了新陈代谢。激活免疫系统和新陈代谢的旺盛，其结果对动植物来说就是造成生长旺盛，免疫力抗病能力提高，同时激活免疫系统和新陈代谢的旺盛，真菌可侵入方便虫卵并取而代之，也能分泌毒素对线虫起毒杀作用，这就是甲壳素和微生物的关系，以甲壳素六聚糖为最强。甲壳素具有质子化铵，质子化铵与细菌带负电荷的细胞膜作用，吸附和聚沉细菌，同时穿透细胞壁进入细胞内，扰乱细菌的新陈代谢及合成而具有抗菌作用。

将淡紫拟青霉菌通过培养基培养，培养成熟之后再加入甲壳素进行混合培养后制得防治蔬菜线虫病的生物制剂，将淡紫拟青霉菌和甲壳素很好的结合在一起，不必分开使用，使用方便，成本低，效果好。

所述培养基为：按重量份取原料牛肉膏5-6份，蛋白胨3-4份，糖蜜100-200份，亚磷酸10-20份，氢氧化钾10-20份；将上述原料放入发酵罐中加水至1000份，将PH值调为6.5-7.5，加温到110-130℃保持20-28小时，之后将温度降至30-34℃。

所述培养基为：取原料牛肉膏5-6公斤，蛋白胨3-4公斤，糖蜜100-200公斤，亚磷酸10-20公斤，氢氧化钾10-20公斤；将上述原料放入发酵罐中加水至1000公斤，将PH值调为7，加温到120℃保持24小时，之后将温度降至32℃。

所述淡紫拟青霉菌投入发酵罐，并搅拌充氧进行培养，所述淡紫拟青霉菌培养的培养温度为28-32℃，PH值为6.5-7.5，培养5-7天培养成熟得培养液，之后将甲壳素与培养液按照重量比4-6：6-4的比例混合，将制成淡紫拟青霉和甲壳素的混合液继续培养10天以上即制得本制剂。

所述甲壳素以甲壳素溶液的方式加入培养液。甲壳素溶液的制备为公知技术，不再叙述。

甲壳素与培养液按照重量比5：5的比例混合。

本发明的防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，将淡紫拟青霉菌和甲壳素很好的结合在一起，不必分开使用，使用方便，成本低，效果好。制备的防治蔬菜线虫病的生物制剂在整地施肥时、生长期、花果期均可使用，田间使用效果稳定。蔬菜类稀释后喷施茎、叶并浇灌根部，或冲施，每10-14天施用一次，施用后可增强肥力，在种子出芽期及幼芽期可减少用量后稀释浇灌芽床。对于果树、水稻、玉米、小麦等长期作物也可以使用，于发芽期至开花期间稀释灌根一次即可；进入花果期之后，稀释喷洒枝、叶，直到收成为止，前后约五次即可。使用后具有以下作用功效：

1、增强肥力：可以取代化学基肥的近半用量，生产中少施肥料，大幅降低生产成本；

2、增产丰收：具有天然生长调节素PGPR作用，能促进发芽、生长、开花、结果，使产期提前，提高产量，增加收入；

3、改善品质：使蔬菜鲜嫩，瓜果爽脆，香甜味美，色泽鲜艳，保鲜度增加，改善农产品品质，价高又畅销；

4、节省人工：能够解除土壤板结、酸化，根旺茁壮，茎叶健壮无病，减少农药需求量及人工成本，保护农民身体健康；

5、增加效益：能够促进土壤益生菌群的繁殖，减少连作障碍，增加用地效益；

6、减免残毒：能够增强作物抗逆、抗病能力，减少农药使用量，降解农产品药残，追求有机、绿色无公害标准；

7、改善土质：能够提供有机酸，分解土壤中不溶性盐基成分，解除板结，降低盐基，冲释土壤强酸，解除酸化板结及盐基问题；

8、消除线虫：能够通过放线菌和天然资材的配合，弱化表皮后，再经感染来消除线虫；

9、抗衡害菌：能够恢复土壤生态平衡，防止病菌的徒长，避免各种病害及烂根；

10、破坏虫卵：能够通过有机物溶化土壤中虫卵外壳，杜绝害虫传宗接代的机会。

具体实施方式

下面结合实施例，进一步阐述本发明。在下面的详细描述中，只通过说明的方式描述了本发明的某些示范性实施例。毋庸置疑，本领域的普通技术人员可以认识到，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。因此描述在本质上是说明性的，而不是用于限制权利要求的保护范围。

实施例一

一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，为首先将淡紫拟青霉菌通过培养基培养，培养成熟之后再加入甲壳素进行混合培养后制得。

其中，首先制得所述培养基为：按重量份取原料牛肉膏5-6份，蛋白胨3-4份，糖蜜100-200份，亚磷酸10-20份，氢氧化钾10-20份；将上述原料放入发酵罐中加水至1000份，PH值调为6.5-7.5，加温到110-130℃保持20-28小时，之后将温度降至30-34℃。

之后将所述淡紫拟青霉菌投入发酵罐，并搅拌充氧进行培养，所述淡紫拟青霉菌培养的培养温度为28-32℃，PH值为6.5-7.5，培养5-7天培养成熟得培养液，之后将甲壳素与培养液按照重量比4-6：6-4的比例混合，将制成淡紫拟青霉和甲壳素的混合液继续培养10天以上即制得本制剂。所述甲壳素可以采用甲壳素溶液的方式加入培养液。

实施例二

一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，为首先将淡紫拟青霉菌通过培养基培养，培养成熟之后再加入甲壳素进行混合培养后制得。

其中，首先制得所述培养基为：取原料牛肉膏5公斤，蛋白胨3公斤，糖蜜100公斤，亚磷酸10公斤，氢氧化钾10公斤；将上述原料放入发酵罐中加水至1000公斤，PH值调为7，加温到120℃保持24小时，之后将温度降至32℃。

之后将所述淡紫拟青霉菌投入发酵罐，所述淡紫拟青霉菌投入发酵罐，并搅拌充氧进行培养，所述淡紫拟青霉菌培养的培养温度为32℃，PH值为7，培养7天培养成熟得培养液，之后将甲壳素与培养液按照重量比5:5的比例混合，将制成淡紫拟青霉和甲壳素的混合液继续培养12天即制得本制剂。所述甲壳素以甲壳素溶液的方式加入培养液。

实施例三

一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，为首先将淡紫拟青霉菌通过培养基培养，培养成熟之后再加入甲壳素进行混合培养后制得。

其中，首先制得所述培养基为：取原料牛肉膏6公斤，蛋白胨4公斤，糖蜜200公斤，亚磷酸20公斤，氢氧化钾20公斤；将上述原料放入发酵罐中加水至1000公斤，将PH值调为7，加温到130℃保持28小时，之后将温度降至30℃。

之后将所述淡紫拟青霉菌投入发酵罐，所述淡紫拟青霉菌投入发酵罐，并搅拌充氧进行培养，所述淡紫拟青霉菌培养的培养温度为30℃，PH值为7，培养5天培养成熟得培养液，之后将甲壳素与培养液按照重量比5:5的比例混合，将制成淡紫拟青霉和甲壳素的混合液继续培养11天即制得本制剂。所述甲壳素以甲壳素溶液的方式加入培养液。

Claims (6)

1.一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，其特征在于：为首先将淡紫拟青霉菌通过培养基培养，培养成熟之后再加入甲壳素进行混合培养后制得。

2.如权利要求1所述的一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，其特征在于所述培养基为：按重量份取原料牛肉膏5-6份，蛋白胨3-4份，糖蜜100-200份，亚磷酸10-20份，氢氧化钾10-20份；将上述原料放入发酵罐中加水至1000份，PH值调为6.5-7.5，加温到110-130℃保持20-28小时，之后将温度降至30-34℃。

3.如权利要求2所述的一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，其特征在于所述培养基为：取原料牛肉膏5-6公斤，蛋白胨3-4公斤，糖蜜100-200公斤，亚磷酸10-20公斤，氢氧化钾10-20公斤；将上述原料放入发酵罐中加水至1000公斤，PH值调为7，加温到120℃保持24小时，之后将温度降至32℃。

4.如权利要求2或3所述的一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，其特征在于：所述淡紫拟青霉菌投入发酵罐，并搅拌充氧进行培养，所述淡紫拟青霉菌培养的培养温度为28-32℃，PH值为6.5-7.5，培养5-7天培养成熟得培养液，之后将甲壳素与培养液按照重量比4-6：6-4的比例混合，将制成淡紫拟青霉和甲壳素的混合液继续培养10天以上即制得本制剂。

5.如权利要求4所述的一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，其特征在于：所述甲壳素以甲壳素溶液的方式加入培养液。

6.如权利要求4所述的一种防治蔬菜线虫病的生物制剂的制备方法，其特征在于：所述甲壳素与培养液按照重量比5：5的比例混合。