CN104711267A - 棉纤维发育相关的GhDUF231L1基因克隆与鉴定 - Google Patents

Abstract

本发明是一个新的棉纤维特异表达基因GhDUF231L1全长序列，其功能涉及棉花纤维次生壁物质的形成与修饰。GhDUF231L1基因包括5个外显子和4个内含子，以及1.6kb启动子片段，编码430氨基酸。该基因是一个棉纤维次生壁发育特异性基因，其表达量在开花后15天的纤维中急剧增加，至开花后20天时其表达量达到峰值。GhDUF231L1启动子主要在转基因拟南芥叶片的叶脉和茎的维管系统中表达，在根、花及荚果中也有表达。该启动子区域含有能够与上游转录因子发生结合的顺式作用元件。在拟南芥中过量表达GhDUF231L1，导致转基因植株增大，纤维素含量升高，细胞壁单糖组分含量发生改变。以上这些结果表明GhDUF231L1参与植物发育，特别是次生细胞壁的生物合成，可能在棉纤维发育过程中起关键作用。

Description

棉纤维发育相关的GhDUF231L1基因克隆与鉴定

技术领域：

本发明涉及棉花基因。具体是一个棉纤维特异表达的DUF231家族基因GhDUF231L1及其启动子的克隆与功能鉴定。

背景技术：

棉纤维是已知的纤维素纯度最高的天然资源之一，在世界纺织业中占有重要地位。虽然合成纤维的出现曾使棉纤维的市场占有率大幅下降，但棉纤维终因有着良好的透气性、保暖性和吸湿性以及穿着舒适等优点而不可取代。随着高效、快速的纺纱技术的引入，以及人们保健意识的增强和生活水平的提高，对棉纤维品质的要求愈加迫切。纤维强度是原棉品质的重要指标，棉纤维次生壁加厚期是棉纤维强度形成的关键时期，纤维素的累积速率决定了棉纤维的结构和强度。

棉花改良的目标是提高棉花产量和品质，利用基因工程培育优质棉品种，是适应我国现代农业生产，满足人们对棉纺织品不同需求的有效途径之一。虽然传统棉花育种技术对于我国棉花生产的发展起着重要的作用，但其方法局限于品种间的基因重组，不仅育种周期长，而且难以解决遗传连锁、多基因性状和杂交不亲和性等问题。现代基因工程技术可以将优良外源基因导入并整合到棉花基因组中，使棉花获得自身不具备的新性状，并在其后代植株中得以遗传和表达。这样不仅可以突破物种间的遗传障碍，大跨度地超越物种间的不亲和性，而且可以创造出人们所需要的新品种，因而大大拓宽了棉花遗传改良的途径。棉花纤维品质除了受环境因素影响外，主要由棉花基因型决定。棉花纤维发育相关基因的克隆鉴定，不仅有助于研究揭示棉花纤维细胞发育及纤维素合成的分子机理，而且可以充分利用棉花自身资源改良纤维品质，具有重要的理论意义和巨大的潜在经济价值。

DUF231家族基因编码了一类含有未知功能结构域(domain of unknown function，DUF)的蛋白。通常情况下，该类基因还含有一个植物特有的保守的TBL(trichome birefringence like)结构域，在该结构域中有一个典型的GDS(glycine-aspartate-serine)基序。研究证明，这种保守性存在于一些酯化酶/脂酶当中(Akoh et al.,2004；Upton et al.,1995)。另外，在该类蛋白C端的DUF231结构域中含有一个高度保守的氨基酸序列DCXHWCLPGXXDXWN，其中的DCXH基序与GDS基序中的丝氨酸残基一起形成一个具有催化功能的结构(Bischoff et al.,2010；et al.,2004)。

目前，在拟南芥中共发现46个该基因家族成员，其中，TBR(trichome birefringence)与它的同源基因TBL3能够与纤维素合成酶基因CESA(cellulose synthase)共表达。抑制拟南芥TBR或TBL3的表达导致表皮毛和茎的次生细胞壁中的结晶纤维素含量下降，下胚轴中果胶甲基酯化酶活性升高，果胶甲基酯化程度降低，说明DUF231蛋白可能参与维持拟南芥某些组织器官细胞壁中果胶(尤其是同型半乳糖醛酸聚糖)的酯化过程中，而这个过程则保证了次生壁中纤维素的正常合成(Bischoff et al.,2010)。AXY4和其同源基因AXY4L同属于DUF231家族成员，敲除拟南芥中的AXY4，导致植株除了种子之外，其它组织器官细胞壁中的木葡聚糖完全缺失O-乙酰化修饰，而种子中木葡聚糖的乙酰化修饰则完全由其同源基因AXY4L来控制。AXY4可能是一种多糖特异性(尤其是木葡聚糖特异性)的O-乙酰基转移酶。虽然这种酰基转移酶的活性以及酰基转移的位置目前还不清楚，但过量表达AXY4不仅增加了木葡聚糖的乙酰化程度，而且能够使木葡聚糖中的半乳糖残基发生双乙酰化现象，说明AXY4能够将多个乙酰基团加到同一个半乳糖残基上。另外，AXY4将乙酰基团加在一个特定的位置，而该位置上的乙酰基团则能够通过化学位移移至其它位置，从而将这个O-乙酰化的初始位点空出，以备后续乙酰化的进行(Gille et al.,2011)。ESK1(Eskimo1)是DUF231家族的又一成员，定位于木聚糖的合成场所—高尔基体中。esk1突变体中，次生壁厚度变薄，茎的支撑力减弱。化学方法分析该突变体的细胞壁组分发现，虽然ESK1的突变并未引起木聚糖链长度以及还原端丰度的变化，但是却使得木聚糖的乙酰化程度明显下降。进一步对木聚糖的结构进行分析发现，ESK1的突变导致木聚糖中的木糖残基上2-O-和3-O-乙酰化程度的降低(Yuan et al.,2013)。另外，全基因组的基因表达比对显示，ESK1表达量的改变导致冷信号途径中的转录因子以及应答基因的转录水平也随之发生变化，而且esk1突变体增强了拟南芥植株对冷胁迫的耐受，说明ESK1在拟南芥应对冷胁迫的过程中发挥着调节因子的作用(Xinet al.,2007)。上述研究表明，目前拟南芥中已知的DUF231家族成员均参与到了次生壁物质的合成与修饰过程当中，而大量该家族成员的功能还有待挖掘。特别是该类基因如何参与棉纤维发育的调控，值得研究探讨，以揭示该类基因的生物学功能，为棉纤维品质改良提供科学依据。

发明内容：

本发明的目的在于提供一个新的棉纤维次生壁发育阶段优势表达的DUF231基因GhDUF231L1及其启动子，分析揭示该基因功能和启动子活性，探索其对棉纤维发育调控的分子机制，进而应用该基因改良棉纤维品质，创造棉花优良品种。

提取棉花基因组DNA，利用PCR和基因组步移法(Takara Genome Walking Kit)分离克隆了GhDUF231L1基因及其5’-上游区。序列分析表明，该基因5’-上游区是1.6kb的启动子序列，编码区(ORF)由5个外显子组成，其间插入了4个内含子。其中，第一个内含子长97bp，插入第146位氨基酸密码子内；第二个内含子长131bp，插入第236位氨基酸密码子内；第三个内含子长94bp，插入第345位氨基酸密码子内；第四个内含子长85bp，插入第429与430位氨基酸密码子之间。

由于GhDUF231L1基因在开花后20天(20DPA)的棉纤维中高量表达，因此，我们提取了20DPA棉纤维的RNA，反转录成cDNA，继而以20DPA棉纤维cDNA为模板，利用PCR技术分离鉴定了GhDUF231L1的cDNA全长序列。GhDUF231L1的cDNA包含了一个1293bp的开放阅读框，编码一个含有430氨基酸的蛋白质。该蛋白的N端包含一个跨膜结构域和TBL结构域，而C端则含有一个典型的DUF231结构域。通过同源进化分析发现，该蛋白与拟南芥TBL3同源性较高。已有研究表明，AtTBL3能够调控拟南芥果胶甲基酯化酶的活性，进而影响次生细胞壁中纤维素的含量，这暗示GhDUF231L1可能在棉纤维中发挥着类似的功能。

对GhDUF231L1在棉花组织中的表达情况进行了分析，发现该基因在棉纤维细胞发育早期(1–12DPA)仅有弱的表达，随着纤维细胞进一步发育至次生壁合成期(15–20DPA)，该基因表达量急剧升高，至20DPA时达到峰值。在棉花其他组织中，该基因不表达或仅有微弱表达。

构建GhDUF231L1启动子:GUS基因表达载体，利用GUS报告基因，在转基因拟南芥中检测了该启动子的表达活性。分析表明，GhDUF231L1启动子拟南芥转基因幼苗中有表达活性，随着植株进一步发育成熟，其GUS表达活性主要集中在植株的维管组织(例如，叶脉和茎维管系统)中。另外，实验表明，GhDUF231L1启动子区域含有能够与上游转录因子结合的顺式作用元件，具有一定的特异表达活性。

将GhDUF231L1:eGFP融合载体转化烟草叶片，培养48小时后，撕取烟草叶片表皮进行观察发现，GFP绿色荧光信号出现在烟草细胞的细胞膜，表明GhDUF231L1蛋白可能定位于细胞膜。

构建了GhDUF231L1基因的过量表达载体，转化拟南芥，获得转基因拟南芥植株，选取多个后代株系进行表型分析。与野生型相比，过量表达GhDUF231L1基因的转基因拟南芥株高明显增加，茎部细胞壁中纤维素含量有所升高，细胞壁中一些单糖组分含量也发生了显著的变化。以上这些结果表明，GhDUF231L1参与植物次生细胞壁合成过程的调节，这暗示该基因在棉纤维细胞次生壁形成过程中可能具有重要调控功能。

本发明的优点：

1.提供了一个新的棉纤维次生壁发育特异表达的GhDUF231L1基因(包括启动子)序列及其cDNA序列。该基因在棉纤维次生壁发育时期高量表达，表明该基因可能在棉纤维细胞次生壁生物合成中发挥重要的调控作用。分析了该基因启动子在转基因拟南芥维管组织中的表达活性，从而间接证明了其在棉纤维细胞次生壁发育中的功能表达。

2.GhDUF231L1蛋白定位于细胞膜上，表明该蛋白极有可能参与到细胞壁的建成及修饰过程中。

3.在拟南芥中过量表达GhDUF231L1基因，导致转基因植株生长加快，株高增加，细胞壁纤维素含量升高，次生细胞壁中单糖组分含量发生改变。这表明GhDUF231L1参与调控植物次生细胞壁的建成，可能在棉纤维细胞次生壁合成过程中发挥重要调控功能。

附图说明：

图1实时定量RT-PCR分析GhDUF231L1在棉花组织及不同发育阶段的纤维中的表达。

图2GhDUF231L1启动子及其顺式作用元件的表达活性分析。A–F，GhDUF231L1启动子:GUS转基因拟南芥的GUS活性的组织化学染色分析。A.生长6天的转基因拟南芥小苗；B.生长12天的转基因拟南芥小苗；C.生长6周的转基因拟南芥植株叶片；D.生长6周的转基因拟南芥植株的茎；E.生长6周的转基因拟南芥植株的荚果；F.生长6周的转基因拟南芥植株的花。G–K，转基因拟南芥茎横切切片的GUS活性染色分析。G.GhDUF231L1基因启动子在拟南芥茎中的表达模式；H.GhDUF231L1基因启动子区域所含顺式作用元件在拟南芥茎中的表达模式；I.GhDUF231L1基因启动子缺失其中一个顺式作用元件后在拟南芥茎中的表达模式；J.GhDUF231L1基因启动子缺失另外一个顺式作用元件后在拟南芥茎中的表达模式；K.GhDUF231L1基因启动子缺失两个顺式作用元件后在拟南芥茎中的表达模式。

co,皮层；if,束间纤维；ph,韧皮部；ve,导管元件；pi,髓；NBS1和NBS2,两个顺式作用元件；ΔNBS1,缺失第一个顺式作用元件；ΔNBS2,缺失第二个顺式作用元件；ΔNBS1NBS2,缺失两个顺式作用元件；5xNBS2,5个NBS2顺式作用元件串联。

图3 GhDUF231L1基因结构及其亚细胞定位分析。A.GhDUF231L1基因结构图；B.暗视野下GhDUF231L1:eGFP融合蛋白在烟草叶片表皮细胞中的表达荧光；C.明视野下同一烟草叶片表皮。图中箭头所指即为绿色荧光所在位置，即融合蛋白所在位置。

图4过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥植株表型分析。

A.过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥在DNA水平上的PCR检测分析。M.Marker；–.阴性对照；WT，野生型；1–6，6个随机选取的过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥植株株系。B.过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥在RNA水平上的RT-PCR检测分析。WT，野生型；L1–L4，4个过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥株系；AtActin2，拟南芥Actin2基因内参。C.过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥表型。WT，野生型；tbl3，拟南芥TBL3突变体；231OEL3和231OEL4，两个过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥株系。

图5过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥植株茎中纤维素含量分析。

A.纤维素含量的标准曲线；B.过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥茎中纤维素含量分析。WT，野生型；tbl3，拟南芥TBL3突变体；L1–L4，4个不同的过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥株系。

图6.过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥茎中细胞壁单糖组分分析。

WT，野生型；tbl3，拟南芥TBL3突变体；DUF231OE，过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥植株；星号表示统计分析证明与野生型相比，二者有显著差异(P<0.05)。

具体实施方式：

本发明通过以下附图和实施方式作进一步阐述，但不限制本发明的范围。

一个棉花DUF231家族成员GhDUF231L1基因全长序列的克隆鉴定和功能分析：

1.GhDUF231L1基因序列及其cDNA序列的分离鉴定

利用生物信息学方法筛查棉花基因组公共数据库，分析鉴定了GhDUF231L1基因序列。提取棉花基因组DNA，设计特异引物GhDUF231L1OE-up(CTTTCTAGAATGAGCTTTGCGGCATCTCCT)和GhDUF231L1OE-dn(CTTCTCGAGCTACAAATGTGCCAAAAATATTC)，利用PCR技术分离克隆了GhDUF231L1基因。提取了开花后20天(20DPA)的棉纤维RNA，反转录成cDNA，利用PCR技术分离克隆了GhDUF231L1的cDNA全长序列。分别对其进行DNA测序验证。GhDUF231L1基因DNA序列如SEQ.ID.No.1所示，cDNA全长序列如SEQ.ID.No.2所示。

序列分析表明，该基因编码区(ORF)由5个外显子组成，其间插入了4个内含子。其中，第一个内含子长97bp，插入第146位氨基酸密码子内；第二个内含子长131bp，插入第236位氨基酸密码子内；第三个内含子长94bp，插入第345位氨基酸密码子内；第四个内含子长85bp，插入第429与430位氨基酸密码子之间。GhDUF231L1基因结构图如图3A。

GhDUF231L1的cDNA包含了一个1293bp的开放阅读框，编码一个含有430氨基酸的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ.ID.No.3所示。该蛋白的N端包含一个跨膜结构域和TBL结构域，而C端则含有一个典型的DUF231结构域。通过同源进化分析发现，该蛋白与拟南芥TBL3同源性较高。已有研究表明，AtTBL3能够调控拟南芥果胶甲基酯化酶的活性，进而影响次生细胞壁中纤维素的含量，这暗示GhDUF231L1可能在棉纤维中发挥着类似的功能。

2.定量RT-PCR分析GhDUF231L1基因的表达

提取棉花组织总RNA(按Li XB,Cai L,Cheng NH,Liu JW,2002.Molecular characterizationof the cotton GhTUB1 gene that preferentially expressed in fiber.Plant Physiol.130:666-674进行)，采用实时荧光定量RT-PCR技术研究基因表达(按照Li XB,Fan XP,Wang XL,Cai L,YangWC,2005.The Cotton ACTIN1 gene is functionally expressed in fibers and participates in fiberelongation.Plant Cell 17:859–875进行)。首先，利用反转录酶(M-MLV RNase H^-ReverseTranscriptase,Promega)将棉花不同组织(包括根、下胚轴、子叶、花瓣、花药、开花后2天、3天和10天的胚珠、开花后6天、9天、12天、15天、18天和20天的纤维)的总RNA(2μg/样品)反转录成cDNA；然后，以cDNA为模板，用基因特异引物GhDUF231L1RT-up(CAGCAGTTGCCTACCAAATAG)和GhDUF231L1RT-dn(ACCACACTCATCATCTCCTTG)和Real-time PCR Master Mix(TOYOBO,Japan)进行定量PCR反应。棉花GhUBI1基因作为RT-PCR反应的内标(引物序列分别为GhUBI RT-up：CTGAATCTTCGCTTTCACGTTATC和GhUBI RT-dn：GGGATGCAAATCTTCGTGAAAAC)，目标基因每一个循环的扩增都被SYBR-Green荧光检测。每个基因的表达水平相对值按公式Y＝10^△Ct/3.57×100％计算(其中△Ct＝CtGhUBI1–CtGhDUF231L1，3.57是利用GhUBI1制备的标准曲线y＝-0.28x+9.87中斜率的倒数，表示基因表达相差10倍的PCR循环数)。重复3次，统计分析实验结果(见图1)。结果显示GhDUF231L1基因在开花后15–20天的棉纤维中优势高量表达，表明该基因可能参与棉纤维细胞次生壁合成的调控过程。

3.GhDUF231L1基因启动子的分离克隆及表达活性分析

GhDUF231L1基因启动子分离克隆按照基因组步移法(Takara Genome Walking Kit)进行。根据GhDUF231L1基因的DNA序列，设计出退火温度较高，同向且特异的引物，以及退火温度较低的兼并引物，以棉花基因组DNA为模板，进行不对称PCR反应。一般情况下，所设计的兼并引物中至少有一种可以与目的基因的特异性引物一起，根据退火温度的差异来进行不对称PCR反应。经过三次巢式PCR反应，获得了1.6kb GhDUF231L1基因的5’-上游区启动子序列。

利用GUS报告基因，进行GhDUF231L1启动子表达活性分析。将GhDUF231L1启动子序列与GUS基因序列融合，构建pBI101-GhDUF231L1p:GUS融合表达载体(所用引物分别为GhDUF231L1pro-up：GGGAAGCTTGTATCTGAACTATCAATT和GhDUF231L1pro-dn：CTTGTCGACCATGGTTGGAGGGAAAGCT)，通过电击转化法将其转入农杆菌GV3101中，再借助浸花法转化拟南芥，筛选获得转基因拟南芥植株(T0代)。将转基因拟南芥多代种植，鉴定纯合的后代植株株系(T2代)。选取检测呈阳性的T2代幼苗以及开花植株的各组织器官，将其浸于GUS染液中，置于37℃条件下进行显色反应(蓝色反应)。将GUS染液吸出，加入70％乙醇进行脱色，直至组织完全脱去叶绿素变为透明，而在GUS基因表达的部位则会显现蓝色，在显微镜下进行图像采集，分析其蓝色反应的深浅程度，用以评估GhDUF231L1启动子的表达活性。分析表明，GhDUF231L1启动子驱动的GUS基因在拟南芥转基因幼苗中有表达活性(图2A和2B)，随着植株进一步发育成熟，其GUS表达活性主要集中在植株的维管组织如：叶脉(图2C)和茎(图2D)中，另外，在荚果(图2E)和花(图2F)中也有一定的表达。上述结果表明GhDUF231L1启动子在所测的转基因拟南芥组织中具有差异表达活性。

序列分析表明GhDUF231L1启动子区域含有能够与上游转录因子结合的顺式作用元件。因此，我们构建了2个顺式作用元件分别缺失，全部缺失以及仅具有顺式作用元件的GUS基因融合表达载体，分别转化拟南芥。通过对阳性拟南芥植株茎部进行徒手切片以及GUS染色观察发现，这2个顺式作用元件具有一定的特异表达活性(图2G-2K)。

4.GhDUF231L1蛋白亚细胞定位分析

将GhDUF231L1基因开放阅读框序列与绿色荧光蛋白基因(eGFP)序列融合，构建pBI121-GhDUF231L1:eGFP融合表达载体(所用引物分别为GhDUF231L1OE-up：CTTTCTAGAATGAGCTTTGCGGCATCTCCT和GhDUF231L1GFP-dn：CTTTCTAGACAAATGTGCCAAAAATATTC)，通过电击转化法将其转入农杆菌GV3101中，再借助注射法转化烟草叶片细胞，培养48小时后，将烟草表皮置于激光共聚焦显微镜下观察GFP荧光，确定GhDUF231L1:eGFP融合蛋白在烟草表皮细胞中的定位。结果表明，GFP绿色荧光信号出现在烟草细胞的细胞膜，表明GhDUF231L1蛋白可能定位于细胞膜。实验结果见图3B-C。

5.转基因拟南芥植株表型分析，纤维素的含量分析和细胞壁单糖组分分析。

构建了GhDUF231L1基因的过量表达载体，转化拟南芥，获得转基因拟南芥植株，选取多个后代株系进行表型分析。其中：6个随机选取的过量表达GhDUF231L1的转基因拟南芥在DNA水平上的PCR检测分析见图4A，阳性的过量表达株系通过PCR实验可以看到明显的PCR条带。株系1–4在PCR检测中出现明显的条带，为阳性，而5–6无条带，为阴性。过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥在RNA水平上的RT-PCR检测分析见图4B，(过量表达株系在RT-PCR实验中可以检测到明显的PCR条带).过量表达GhDUF231L1转基因拟南芥表型见图4C。

硫酸-蒽酮法分析GhDUF231L1转基因拟南芥茎中纤维素的含量

纤维素标准曲线的绘制：称取50mg微晶纤维素于锥形瓶中，加入冷的60％硫酸50mL，将锥形瓶放入摇床中消化处理50min。吸取该纤维素消化液5mL，放入50mL量瓶中，加蒸馏水定容至50mL，则每mL含100μg纤维素。取6支小试管，分别放入0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0mL纤维素标准液，每管均补水至总体积2mL，摇匀，每管依次含纤维素0，40，80，120，160，200μg。向每管加5mL浓硫酸，0.5mL 2％蒽酮，摇匀，静置5min，在620nm下测定不同含量纤维素溶液的吸光度。以测得的吸光度为Y值，相应纤维素含量为X值，求得线形回归方程，见图5A。

拟南芥茎中纤维素含量测定：分别称取0.04g转基因拟南芥以及突变体和野生型(对照组)植株茎的细胞壁AIR粉末于锥形瓶中，加入60％硫酸50mL，放于摇床内消化50min。吸取消化液5mL于锥形瓶中，蒸馏水精确定容至40mL，充分摇匀。取2mL于试管中，加入5mL浓硫酸，0.5mL 2％蒽酮，摇匀，静置5min，在620nm波长下测定吸光度。根据测得的吸光度按回归方程求出纤维素含量，按如下公式计算细胞壁干粉中纤维素的百分比：Y(％)＝X*10^-6*a*100/w[其中，X—按回归线方程算出的纤维素含量(μg)；w—样品重(g)；10^-6—将μg换算成g的系数；a—样品稀释倍数(在此方案中为200)；Y—样品中纤维素含量(％)]。实验结果见图5B。

GhDUF231L1转基因拟南芥茎中细胞壁单糖组分分析

将GhDUF231L1基因过量表达的转基因拟南芥以及突变体和野生型(对照组)植株茎的醇不溶性细胞壁组分经CDTA和Na₂CO₃(分离细胞壁组分中的果胶组分)抽提后，连续进行1M KOH和4M KOH(分离细胞壁组分中的半纤维素组分)的抽提，分别获得细胞壁中的果胶、半纤维素和纤维素组分。采用肌醇作为内标，通过气相色谱法分析细胞壁中不同单糖组分的含量，结果表明除了鼠李糖之外，其余几种单糖(如：阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖以及半乳糖的含量)在转基因拟南芥植株中均发生了改变。实验结果见图6。

与野生型相比，过量表达GhDUF231L1基因的转基因拟南芥株高明显增加，茎部细胞壁中纤维素含量有所升高，细胞壁中一些单糖组分含量也发生了显著的变化。

上述结果表明GhDUF231L1参与植物次生细胞壁合成过程的调节，这说明该基因在棉纤维细胞次生壁形成过程中可能具有重要调控功能。

Claims (3)

1.棉花GhDUF231L1基因，其特征在于：DNA序列如下：

从1–1623bp为启动子序列(5’-上游区)；起始密码子ATG位于第1624–1626bp，第1624–2060bp为第一个外显子区，第2061-2157bp为第一个内含子区，用下划线标出，第2158-2329bp为第二个外显子区，第2330-2460bp为第二个内含子区，用下划线标出，第2461-2657bp为第三个外显子区，第2658-2751bp为第三个内含子区，用下划线标出，第2752-2910bp为第四个外显子区，第2911-2995bp为第四个内含子区，用下划线标出，第2996-3323bp为第五个外显子区，其末尾3个碱基TAA为终止密码子。

2.权利要求1所述的棉花GhDUF231L1基因的cDNA序列如下：

开放阅读框为第1位到1293位碱基，编码430个氨基酸。

3.权利要求1所述的棉花GhDUF231L1基因编码的蛋白质序列如下：