CN104705191B - 一种小麦花药分化培养基配方 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种小麦花药分化培养基，该培养基的配方由一定比例的KNO3、C8H7O2K、(NH4)2SO4、KH2PO4、CaCl2、MgSO4、Na2‑EDTA、FeSO4∙7H2O、MnSO4∙H2O、ZnSO4∙H2O、H3BO3、KI、CuSO4∙5H2O、Na2MoO4∙2H2O、CoCl2∙6H2O、甘氨酸、叶酸、甲基亚硝基脲、丙氨酸、赖氨酸、维生素B1、维生素B6、3‑吡啶甲酸、蔗糖、植物凝胶、NAA、KT、调环酸钙、山梨醇、水解蛋白、秋水仙碱和生物素所组成。本发明所述的培养基具有高效率地提高小麦花药愈伤组织绿苗分化率、降低白化率的优点，可以显著提高小麦花药培养效率。
Description
技术领域
本发明涉及一种小麦花药分化培养基，具体涉及一种高效率地提高小麦花药愈伤组织绿苗分化率、降低白化率的分化培养基配方，属于农业科学技术领域。
背景技术
小麦是一种在世界各地广泛种植的禾本科植物，是小麦属植物的统称，最早起源于中东的新月沃土地区。小麦是三大谷物之一，绝大部分作为食用，仅约有六分之一作为饲料使用。小麦作为世界上总产量第二的粮食作物也是中国第二大粮食作物，在国人食品中扮演着重要角色。据统计，在当前中国的口粮消费总量中，小麦占43%左右。近年来，世界人口增长以及人们生活水平不断提高，粮食需求持续增长，与此同时，耕地逐渐减少、水资源不足、小麦病害频发、生态环境恶化、自然灾害频发，以及饲料用粮和生物燃料耗粮增加等给世界粮食供给带来了严峻的挑战，小麦生产在粮食安全的地位日益重要。
花药培养是利用植物组织培养技术，把发育到一定阶段的花药，通过无菌操作技术，接种在人工培养基上以改变花药内花粉粒的发育程序，诱导其分化，并连续进行有丝分裂，形成细胞团，进而形成一团无分化的薄壁组织-愈伤组织，或分化成胚状体，随后使愈伤组织分化成完整的植株的过程，因此花药培养育种也叫单倍体育种。
与传统的育种方法相比，单倍体育种可以缩短育种时间提高选择效率，其产生的加倍单倍体（DH）植株也是进行遗传转化和进行构建分子标记群体的良好材料。从20世纪70年代以来，单倍体育种技术已广泛的用于小麦育种，至今已培育出许多优良品种，是小麦育种的有效途径之一。而且单倍体诱导可以与分子标记和遗传操作技术相结合用于作物的遗传改良研究。
尽管小麦小孢子培养近几年已取得很大进展，但花药培养技术简单，仍是目前诱导单倍体的主要途径。小麦花药培养虽然已进行过大量的研究，并建立了花培育种体系，但目前仍存在诱导率低、群体小、效率还比较低的问题，不能满足育种的需求，花药培养目前仍处于边研究边应用状况。因此，不断改进和优化培养方法，提高花药培养效率对小麦花培育种技术在育种中的广泛应用是十分必
要的。
花培植株的生长发育受很多因素的影响，包括培养基的改良、附加成分的增减、单倍体的加倍技术、培养条件的改善等等，其目的都在于提高愈伤组织的诱导率和绿苗的分化率。其中培养基是花药培养的物质基础，直接关系到培养物的生长与分化。培养基各组分的合适用量，以及它们之间一定的组合关系，可导致花培效率的大幅度提高。继续筛选和优化基本培养基，提高培养基选用的针对性，是提高小麦花药培养力的有效措施；大量的研究发现一些有机附加物可以显著提高花药培养力，发现和优化组合花药培养有机附加物质，可进一步提高花药培养力。因此，组合和优化培养基组分，摸索出高效的小麦花药培养基配方是提高花药培养效率的关键。
在多年的小麦花药培养的摸索和实践中，我们不断优化培养基配方，并且不断尝试加入一些提高小麦绿苗分化率的添加物并组合其种类搭配及浓度，最终摸索出了一种能够显著提高小麦绿苗分化率、降低白化率的小麦花药愈伤组织分化培养基配方。我们的研究结果对于进一步推广和应用水稻单倍体育种和理论研究无疑有较大的现实意义和实用价值。
发明内容
本发明提供了一种小麦花药分化培养基，该培养基的配方如下：
KNO3 2820～3080mg/L，C8H7O2K 2800～3200mg/L，(NH4)2SO4 400～460mg/L，KH2PO4320～380mg/L，CaCl2 100～120mg/L，MgSO4 80～90mg/L，Na2-EDTA 30～35mg/L，FeSO4∙7H2O22～26mg/L，MnSO4∙H2O 2.8～3.2mg/L，ZnSO4∙H2O 1.2～1.4mg/L，H3BO3 1.3～1.5mg/L，KI0.6～0.7mg/L，CuSO4∙5H2O 0.04～0.06mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.14～0.18mg/L，CoCl2∙6H2O0.14～0.18mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，叶酸 0.7～0.9mg/L，甲基亚硝基脲 2.3～2.7mg/L，丙氨酸 4.5～5.5mg/L，赖氨酸 2.3～2.7mg/L，维生素B1 4.5～5.5mg/L，维生素B6 0.9～1.1mg/L，3-吡啶甲酸 0.9～1.1mg/L，蔗糖 28～32g/L，植物凝胶 5～6g/L；
NAA 0.75～0.85mg/L，KT 0.9～1.1mg/L，调环酸钙0.9～1.1mg/L，山梨醇 28～32g/L，水解蛋白 1.3～1.7g/L，秋水仙碱 0.025～0.035mg/L，生物素 0.15～0.17mg/L，PH5.8-6.0。
本发明所述的培养基具有高效率地提高小麦花药愈伤组织绿苗分化率、降低白化率的优点，可以显著提高小麦花药培养效率。下面的实施例以及对比实验可以清楚地反映本发明所述培养基的特点。
具体实施方式
实施例1
配制如下配方的培养基：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
选取小麦品种早洋麦和阿勃的花药愈伤组织作为供体，当诱导培养后的花药愈伤组织长到2毫米大小时，转到分化培养基上诱导绿苗，培养条件控制为：温度26℃、湿度75%、光照3000lx l4h/暗10h。愈伤组织形成后（长到2 mm左右），计算愈伤组织分化率。
绿苗分化率（%）=分化绿苗数/转移的愈伤块数×100%。
实施例2
配制如下配方的培养基（C8H7O2K添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2 110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO31.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.16mg/L，CoCl2∙6H2O0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸 1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
C8H7O2K的添加浓度设置以下8种0；500mg/L；1000mg/L；1500mg/L；2000mg/L；2500mg/L；3500mg/L；4000mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例3
配制如下配方的培养基（叶酸添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸 1.0mg/L，蔗糖30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
叶酸的添加浓度为以下6种：0；0.2mg/L；0.4mg/L；0.6mg/L；1.0mg/L；1.2mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例4
配制如下配方的培养基（甲基亚硝基脲添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸 1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
甲基亚硝基脲的添加浓度设置为以下8种：0；0.5mg/L；1.0mg/L；1.5mg/L；2.0mg/L；3.0mg/L；3.5mg/L；4.0mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例5
配制如下配方的培养基（丙氨酸添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸 1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
丙氨酸的添加浓度设置以下8种：0；1mg/L；2mg/L；3mg/L；4mg/L；6mg/L；7mg/L；8mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例6
配制如下配方的培养基（赖氨酸添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸 1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
赖氨酸添加浓度设置以下8种：0；0.5mg/L；1.0mg/L；1.5mg/L；2.0mg/L；3.0mg/L；3.5mg/L；4.0mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例7
配制如下配方的培养基（调环酸钙添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
调环酸钙添加浓度设置以下8种：0；0.2mg/L；0.4mg/L；0.6mg/L；0.8mg/L；1.2mg/L；1.4mg/L；1.6mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例8
配制如下配方的培养基（山梨醇添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
山梨醇添加浓度设置以下8种：0；5g/L；10g/L；15g/L；20g/L；25g/L；35g/L；40g/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例9
配制如下配方的培养基（水解蛋白添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
水解蛋白添加浓度设置以下6种：0；0.5mg/L；1.0mg/L；2.0mg/L；2.5mg/L；3.0mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例10
配制如下配方的培养基（秋水仙碱添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，生物素 0.16mg/L，PH 5.9。
秋水仙碱添加浓度设置以下5种：0；0.01mg/L；0.02mg/L；0.04mg/L；0.05mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
实施例11
配制如下配方的培养基（生物素添加浓度的优选）：
KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，PH 5.9。
生物素添加浓度设置以下6种：0；0.04mg/L；0.08mg/L；0.12mg/L；0.20mg/L；0.24mg/L。
同样选取该两个小麦品种花药愈伤作为供体，操作方法、培养方法同实施例1，计算绿苗分化率。
培养基对比实验
将实施例2-11分别与实施例1进行对比，对比的结果如下表所示：
从表1-10可以看出，使用本发明所提供的培养基比使用其它任何对比培养基对小麦花药愈伤组织的分化效率更高，表明本发明提供的培养基配方是经过大量单因子、多因子试验所筛选的最优组合，多年来我们亦围绕本发明的组合配比做了小范围单因子改变优化组合试验，工厂化的规模实验研究亦得出本发明的组分配比是最优的。使用本发明所提供的培养基将小麦品种早洋麦、阿勃的愈伤组织分化率提高到了71.8%和66.6%，充分说明了本发明提供的培养基是一种显著改良的小麦花药分化培养基。
实施例12
为了比较本发明所提供的培养基与前人采用的培养基对小麦花药愈伤组织绿苗分化效果的差异，我们从相关文献查找了3个小麦花药愈伤组织分化培养基配方，配制成花药愈伤分化培养基，同样选取小麦品种早洋麦和阿勃作为花药愈伤组织供体分化绿苗，操作方法、培养方法同实施例1，计算愈伤组织绿苗分化率。
其它3个分化培养基为：
MS培养基：MS基本培养基+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂+2.0mg/L KT，pH为5.8（对比文件来自于张小红等《提高冬小麦花药愈伤组织诱导效率的研究》）；
N6培养基：N6基本培养基+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+0.5mg/L NAA+0.5mg/L KT，pH为5.8（对比文件来自于杨丽萍等《小麦花培苗染色体加倍技术研究》）；
改良MS培养基：MS基本培养基（大量元素减半）+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+1.0mg/LKT+0.5mg/L NAA+1.0mg/L REA，pH为5.8（对比文件来自于康明辉等《小麦新品种花培8号的选育》）。
培养基对比实验
将实施例12与实施例1进行对比，对比的结果如下表所示：
从不同培养基的绿苗分化效果来看，本发明培养基对小麦花药愈伤组织平均绿苗分化率为69.2%，MS、N6、改良MS培养基则为45.4%、40.7%、51.9%，可以发现本发明对小麦花药愈伤组织的绿苗分化率要显著高于其他3种小麦花药分化培养基。
以上12个实施例可以说明本发明提供的培养基配方的组分配比是最优组合，本发明提供的培养基对小麦花药愈伤组织的绿苗分化效果比前人的小麦花药分化培养基具有显著的提高。我们的研究结果对于进一步推广和应用小麦单倍体育种和理论研究无疑有较大的现实意义和实用价值。
本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。
Claims (1)
1.一种小麦花药分化培养基，其特征在于，该培养基的配方如下：
KNO3 2820～3080mg/L，C8H7O2K 2800～3200mg/L，(NH4)2SO4 400～460mg/L，KH2PO4 320～380mg/L，CaCl2 100～120mg/L，MgSO4 80～90mg/L，Na2-EDTA 30～35mg/L，FeSO4∙7H2O 22～26mg/L，MnSO4∙H2O 2.8～3.2mg/L，ZnSO4∙H2O 1.2～1.4mg/L，H3BO3 1.3～1.5mg/L，KI0.6～0.7mg/L，CuSO4∙5H2O 0.04～0.06mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.14～0.18mg/L，CoCl2∙6H2O0.14～0.18mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，叶酸 0.7～0.9mg/L，甲基亚硝基脲 2.3～2.7mg/L，丙氨酸 4.5～5.5mg/L，赖氨酸 2.3～2.7mg/L，维生素B1 4.5～5.5mg/L，维生素B6 0.9～1.1mg/L，3-吡啶甲酸 0.9～1.1mg/L，蔗糖 28～32g/L，植物凝胶 5～6g/L；
NAA 0.75～0.85mg/L，KT 0.9～1.1mg/L，调环酸钙0.9～1.1mg/L，山梨醇 28～32g/L，水解蛋白 1.3～1.7g/L，秋水仙碱 0.025～0.035mg/L，生物素 0.15～0.17mg/L，PH 5.8-6.0。
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| CN201510156889.7A CN104705191B (zh) | 2015-04-04 | 2015-04-04 | 一种小麦花药分化培养基配方 |
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