CN104693198A - 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一类具有新型结构的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物及其制备方法和应用，该类化合物可用于治疗缺血性脑中风。化合物结构通式如下：。
Description
技术领域
本发涉及一种3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物及其制备方法和在缺血性脑中风中的应用。
背景技术
脑中风严重危害人类健康，是世界范围内引起死亡的主要原因之一，每年约有600万人死于该病，幸存者的致残率也非常高。缺血性脑中风占所有脑中风的85%，是中老年人的常见多发病，且具有高发病率、高致残率、高死亡率和高复发率的特点。缺血性脑中风导致的脑部组织的损伤是由于包含神经递质（谷氨酸）兴奋性毒性，氧化应激，炎症，缺氧缺糖、缺血清等引起的细胞凋亡等多种因素的作用而产生的。 尽管目前临床治疗脑中风的手段已取得了一定的进展，如溶栓药组织型纤溶酶原激活剂（t-PA），但这种方法有一定的局限性，如有效治疗时间窗较窄，容易引起出血。因此，对具有治疗缺血性脑中风的潜在药物的研究迫在眉睫。通过体外脑缺血神经保护作用评价（包括谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型，神经细胞缺氧缺糖损伤模型，神经细胞缺血清损伤模型等）及体内（动物模型）脑缺血神经保护作用评价是发现具有潜在治疗缺血性脑卒中疾病的活性化合物的有效手段。
发明内容
针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的是提供一类3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物及其制备方法和应用，它可用于治疗缺血性脑中风。
3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物，其特征在于该化合物的结构通式如下：
其中：R1、R2独立的选自：氢、碳原子数为1-3的烷基、碳原子数为1-3的烷氧基或卤素；R3为氢、碳原子数为1-5的烷基或 (CH2)nR4，n=2-5，R4为咪唑、1,2,4-三氮唑或吗啉。
所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物，其特征在于所述的烷基包括直链烷基、支链烷基或环烷基，所述的烷氧基包括直链烷氧基、支链烷氧基或环烷氧基。
所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物，其特征在于所述的R1为氢，R2为氟、甲基、氯、溴、甲氧基；R3为氢、甲基、丁基、异丙基、烯丙基、丁基、3-(1H-咪唑-1-基)丙基、3-羟丙基、3-吗林丙基。
所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
1）涉及的2-肼基取代吡啶、2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酸乙酯、2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酰胺、取代吲哚、2-(1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯、2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯及目标产物3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺的结构式分别如式（1）、式（2）、式（3）、式（4）、式（5）、式（6）及式（7）所示：
其中：R1、R2独立的选自：氢、碳原子数为1-3的烷基、碳原子数为1-3的烷氧基或卤素；R3为氢、碳原子数为1-5的烷基或 (CH2)nR4，n=2-5，R4为咪唑、1,2,4-三氮唑或吗啉；
2）如式（3）所示的2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酰胺类化合物的制备
将式（1）所示的2-肼基取代吡啶、丙二酸二乙酯及三氯氧磷加热回流至反应结束，后处理得到式（2）所示的2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酸乙酯，2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酸乙酯（2）与含氨的甲醇饱和溶液在压力反应容器中发生氨解反应，经后处理得式（3）所示的2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酰胺；
3）如式（6）所示的2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯类化合物的制备
将如式（4）所示的取代吲哚溶于无水乙醚中，控制温度0-5 oC，慢滴加草酰氯的无水乙醚溶液，滴完后保温反应1 h，然后降温至-25 ℃，滴加甲醇钠的甲醇溶液保温搅拌反应，处理后得如式（5）所示的2-(1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯，在NaH存在下，与卤代烃反应得到式（6）所示的2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯类化合物；
4）如式（7）所示的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物的制备
在有机溶剂中，加入步骤2）得到的如式（3）所示的2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酰胺及步骤3）得到的如式（6）所示的2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯类化合物，搅拌溶解，控制温度-5~00C， 缓慢滴入叔丁醇钾的叔丁醇溶液，滴完后升至室温反应2h，再后处理得3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物。
所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物的制备方法，其特征在于步骤3）中所述的卤代物为碘甲烷、烯丙基溴、溴丁烷、2-溴丙烷、1-(3-氯丙基)-1H-咪唑、3-溴丙基叔丁基二甲基硅烷或4-(3-氯丙基)吗啉。
所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物的制备方法，其特征在于步骤4）中所述的有机溶剂为无水四氢呋喃或无水DMF。
所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗缺血性脑中风药物中的应用。
本发明的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物可以由2-（取代1,2,4-三氮唑[4,3-a]吡啶-3-基）乙酰胺（3）与2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6）在叔丁醇钾的作用下缩合制得，其反应方程式如下：
本发明通过采用上述技术，由由2-（取代1,2,4-三氮唑[4,3-a]吡啶-3-基）乙酰胺（3）与2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6）在叔丁醇钾的作用下缩合制得3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物，其操作简单、反应条件温和、对设备要求低，而且得到的产品结构经过认证，产品收率好，而且该类产品适用于在制备缺血性脑中风治疗药物的应用，在脑缺血病理条件下的经典体外神经细胞损伤模型，如谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型，缺糖缺氧条件下神经细胞损伤模型和血清缺失引起的神经细胞损伤模型等中的神经起到一定的保护作用。
附图说明
图1为化合物7c, 7f, 7h, 7l和7m剂量依赖性地抑制谷氨酸(Glu)引起的神经细胞死亡示意图；
图2为化合物7c, 7f, 7h, 7l和7m有效抑制缺糖缺氧(OGD) 引起的神经细胞死亡示意图；
图3为化合物7c, 7f, 7h, 7l和7m有效抑制血清缺失(-B27) 引起的神经细胞死亡示意图；
图4为化合物7f显著性减少脑缺血引起的脑梗死体积示意图。
具体实施方式
本发明结合实施例作进一步的说明。以下的实施例是说明本发明的，而不是以任何方式限制本发明。
．部分中间体和目标化合物的制备：
实施例1：2-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]-3-基)乙酸乙酯 (2) 的制备
在三口瓶中加入3.0 g（45.8 mmol）2-肼基吡啶，22.0 g（137.5 mmol）丙二酸二乙酯和60 mL三氯氧磷，回流反应3 h，反应完后将反应液冷却，倒入300 mL冰水中，碳酸氢钠中和至弱碱性，乙酸乙酯充分萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱层析（石油醚：乙酸乙酯=2:1）提纯得2.7g白色固体2，收率48 %，熔点：113-115 oC。1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.45 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.48-7.30 (m, 1H), 7.01 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.13 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.19 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
实施例2：2-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]-3-基)乙酰胺（3）的制备
在压力反应容器中加入2.0 g （9.8 mmol）2，30 mL氨的甲醇饱和溶液中，90 oC反应6 h。反应液冷却过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，干燥，得到0.88 g 白色固体3，收率为51.3 %，熔点：247-249 oC。1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.39 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.73 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.39-7.31 (m, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.96 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.13 (s, 2H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ168.76, 149.31, 142.61, 127.22, 124.42, 114.96, 112.80, 31.47. ESI-MS: m/z [M+H]+ 177. Anal. Calcd for C8H8N4O2: C, 54.54; H, 4.58; N, 31.80. Found: C, 54.66; H, 4.31; N, 31.64.
实施例3：2-(1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯 (5a) 的制备
在三口烧瓶中加入3.0 g（0.026 mol）吲哚，30 mL无水乙醚，搅拌溶解，控制温度0-5 oC，缓慢滴加3.4 g（0.026 mol）草酰氯的无水乙醚（5 mL）溶液，滴完后保温反应1 h，然后降温至-25 ℃左右，滴加16.3 g甲醇钠的甲醇溶液（17.5%，0.052 mol），滴完后保温搅拌30 min，将反应液倒入100 mL冰水中，抽滤，用水洗（3 × 10 mL），二氯甲烷洗（2 × 10 mL），干燥后得到4.5 g淡黄色固体5a，收率为86.3%，熔点：208-210 oC。1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.48 (brs, 1H), 8.46 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.32-7.26 (m, 2H), 3.90 (s, 3H).
实施例4：2-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯 (5b) 的制备
合成方法同实施3，只是用7-甲基吲哚替换吲哚，得到淡黄色固体5b, 收率：73.2%，熔点： 183-185 0C。1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.48 (brs, 1H), 8.41 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.18 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.1Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.53 (s, 3H).
实施例5：2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯 (5c) 的制备
合成方法同实施3，只是用5-氟吲哚替换吲哚，得到淡黄色固体5c, 收率：57.3%，熔点： > 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.52 (brs, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.84 (dd, J = 9.6, 2.6 Hz, 1H), 7.59-7.56 (m, 1H), 7.17 (d, J = 7.1Hz, 1H), 3.90 (s, 3H).
实施例6：2-(6-氟-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（5d）的制备
合成方法同实施3，只是用6-氟吲哚替换吲哚，得到淡黄色固体5d，收率：60.3%，熔点：182-184 0C。1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.48 (brs, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.15 (dd, J = 8.5, 5.5 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 9.5, 2.0 Hz, 1H), 7.15 (td, J = 9.5, 2.0 Hz,1H), 3.90 (s, 3H)
实施例7：2-(5-氯-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（5e）的制备
合成方法同实施3，只是用5-氯吲哚替换吲哚，得到淡黄色固体5e，收率：58.9%，熔点： > 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ12.57 (brs, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.14 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 8.6, 2.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H).
实施例8：2-(6-氯-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（5f）的制备
合成方法同实施3，只是用6-氯吲哚替换吲哚，得到淡黄色固体5f，收率：62.8%，熔点： 246-248 0C。1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.52 (brs, 1H), 8.51 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.31 (dd, J =8.5, 2.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H).
实施例9：2-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（5g）的制备
合成方法同实施3，只是用5-溴吲哚替换吲哚，得到淡黄色固体5g，收率：55.3%，熔点： 215-217 0C。1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.59 (brs, 1H), 8.52 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.45 (dd, J =8.5, 2.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H).
实施例10：2-(6-溴-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（5h）的制备
合成方法同实施3，只是用6-溴吲哚替换吲哚，得到淡黄色固体5h，收率：58.9%，熔点：207-209 0C。1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.50 (brs, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.43 (dd, J =8.5, 2.0 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H).
实施例11：2-(5-甲氧基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（5i）的制备
合成方法同实施3，只是用5-甲氧基吲哚替换吲哚，得到淡黄色固体5i, 收率：71.0%，熔点： 221-223 0C。1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.34 (brs, 1H), 8.37 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.81 (s, 3H).
实施例12：3-(2-甲氧基-2-乙酰羰基)-1H-吲哚-1-叔丁基羧酸酯（6a）的制备
在三口瓶中加入2.0 g（9.8 mmol）5a和100 mL无水四氢呋喃，搅拌溶解，加入2.7 g （12.3 mmol）Boc酸酐和0.01 g DMAP，室温反应3h。反应结束后将反应液减压浓缩，残留物用石油醚/乙酸乙酯重结晶，得到2.0 g白色固体6a，收率：67.1%，熔点： 132-133 0C。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.81 (s, 1H), 8.40 (dd, J = 6.5, 2.0 Hz, 1H), 8.17 (dd, 1H，J = 6.5, 1.5 Hz, 1H), 7.41-7.38 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 1.71 (s, 9H).
实施例13：2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6b）的制备
在三口烧瓶中加入1.0 g（4.9 mmol）5a和10 mL无水DMF，降温至0 0C，加入0.17 g（4.9 mmol）70%的NaH，加完后升至室温反应30 min，然后降温至0 0C左右，滴加0.83g（5.9 mmol）CH3I，滴完后升至室温反应1h，反应结束后，将反应液倒入100 mL冰水中，乙酸乙酯萃取（3 × 50mL），合并有机相，饱和食盐水洗（3 × 150mL），无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物用硅胶柱层析（石油醚：乙酸乙酯=3:1）提纯得0.81g白色固体6b，收率：76.4%，熔点： 73-74 0C。1H NMR (500 MHz, CDCl3 ) δ 8.51-8.42 (m, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.39- 7.36 (m, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).
实施例14：2-(1,7-二甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6c）的制备
合成方法同实施13，只是用5b替换5a，得到淡黄色固体6c, 收率： 63.5%，熔点：97-98 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.32 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 2.74 (s, 3H).
实施例15：2-(5-氟-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6d）的制备
合成方法同实施13，只是用5c替换5a，得到淡黄色固体6d, 收率： 67.4%， 熔点： 128-129 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.36 (s, 1H), 8.10 (dd, J = 9.3, 2.5 Hz , 1H), 7.30-7.27 (m, 1H), 7.11-7.06 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.87 (s, 3H).
实施例16：2-(6-氟-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6e）的制备
合成方法同实施13，只是用5d替换5a，得到淡黄色固体6e, 收率：70.1%，熔点：121-122 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.39-8.35 (m, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.11 (td, J = 9.5, 2.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.84 (s, 3H).
实施例17：2-(5-氯-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6f）的制备
合成方法同实施13，只是用5e替换5a，得到淡黄色固体6f, 收率：61.7% , 熔点： 117-118 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.44 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.34-7.28 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).
实施例18：2-(6-氯-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6g）的制备
合成方法同实施13，只是用5f替换5a，得到淡黄色固体6g, 收率：62.7% , 熔点： 135-137 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.36-8.34 (m, 2H), 7.38 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.86 (s, 3H).
实施例19：2-(5-溴-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6h）的制备
合成方法同实施13，只是用5g替换5a，得到淡黄色固体6h, 收率： 65.3%, 熔点： 126-127 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.59 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.46 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).
实施例20：2-(6-溴-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6i）的制备
合成方法同实施13，只是用5h替换5a，得到淡黄色固体6i, 收率： 67.9%, 熔点： 138-139 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.34 (s, 1H), 8.30 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.86 (s, 3H).
实施例21：2-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6j）的制备
合成方法同实施13，只是用5i替换5a，得到淡黄色固体6j, 收率： 78.5%, 熔点： 131-132 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 7.95 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.99 (dd, J =9.0, 2.5 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.86 (s, 3H).
实施例22：2-(1-烯丙基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6k）的制备
合成方法同实施13，只是用烯丙基溴替换碘甲烷，得到淡黄色固体6k, 收率：
54.8% , 熔点： 67-68 oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.48-8.42 (m, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.41-7.32 (m, 3H), 6.07-5.99 (m, 1H), 5.34 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 17.0, 1H), 4.80 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H).
实施例23：2-(1-丁基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6l）的制备
合成方法同实施例13，用溴丁烷替换碘甲烷，得到白色固体 6l, 收率：80.5%，熔点： 81-82 0C。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.48-8.44 (m, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.45-7.38 (m, 1H), 7.37 -7.32 (m, 2H), 4.20 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 1.86-1.82 (m, 2H), 1.42-1.38 (m, 2H), 0.98 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
实施例24：2-(1-异丙基-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6m）的制备
在三口瓶中加入0.61g (3 mmol) 5a，0.74 g (6 mmol) 2-溴丙烷，1.96 g (6 mmol) 碳酸铯, 20 mL 干燥的DMF， 50 oC 反应8 h，反应完后将反应液倒入200 mL冰水中，乙酸乙酯萃取（3 × 50mL），合并有机相，饱和食盐水洗（3 × 100mL），无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物用硅胶柱层析（石油醚：乙酸乙酯 = 3:1， v:v）提纯得到0.55 淡黄色固体 6m, 收率: 74.8 %, 熔点： 73-74oC. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.49 (s, 1H), 8.48-8.45 (m, 1H), 7.47-7.42 (m, 1H), 7.39-7.31 (m, 2H), 4.77-4.70 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 1.63 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
实施例25：2-(1-(3-(1H-咪唑-1-基)丙基)-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6n）的制备
在三口烧瓶中加入3.0 g（14.8 mmol）5a，30 ml无水DMF，搅拌溶解，将反应液降温至0 0C左右，分批加入0.51 g (14.8 mmol) 70%的NaH，加完后升至室温反应30 min，加入3.14 g（19.2 mmol）1-(3-氯丙基)-1H-咪唑，60 0C左右反应过夜，冷却后将反应液倒入150 mL中水中，乙酸乙酯萃取（3 × 100 mL），合并有机相，饱和食盐水洗（3 × 300 mL），无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残余物用硅胶柱层析（乙酸乙酯：甲醇 = 50:1）提纯得2.43 g淡黄色固体6n，收率52.8%，熔点：72-73 0C。 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.51-8.46 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.42-7.34 (m, 2H), 7.30-7.27 (m, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.20 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 4.00 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 2.48-2.40 (m, 2H).
实施例26：2-(1-(3-(叔丁基二甲基硅基)氧)丙基)-1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯（6o）的制备
合成方法同实施例25，只是用3-溴丙基叔丁基二甲基硅烷替换1-(3-氯丙基)-1H-咪唑，得到淡黄色固体6o，收率：62.5 %，熔点：69-71 0C。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.40-8.36 (m, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.39-7.34 (m, 1H), 7.31-7.24 (m, 2H), 4.27 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.52 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.06-1.92 (m, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.01 (s, 6H).
实施例27：2-(1-(3-吗啉丙基)-1H-吲哚-3-基)- 2-氧代乙酸甲酯（6p）的制备
合成方法同实施例25，只是用4-(3-氯丙基)吗啉替换1-(3-氯丙基)-1H-咪唑，得到淡黄色固体6p, 收率:67.5%, 熔点：103-104 0C。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.47-8.43 (m, 2H), 7.46 -7.41 (m, 1H), 7.38 -7.32 (m, 2H), 4.32 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.78-3.72 (m, 4H), 2.44-2.38 (m, 4H), 2.28 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.08-2.02 (m, 2H).
实施例28：3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺 (7a)
在三口瓶中加入49.3 mg （0.28 mmol）2-([1,2,4]三唑并[4,3-a]-3-基)乙酰胺 (3)、109 mg (0.37 mmol) 3-(2-甲氧基-2-乙酰羰基)-1H-吲哚-1-叔丁基羧酸酯（6a) 和10 mL无水THF，搅拌溶解，控制温度-5~00C左右, 缓慢滴入0.84 ml （0.84 mmol）叔丁醇钾的叔丁醇溶液，滴完后升至室温反应2h, 然后加入5mL浓盐酸, 搅拌30 min，再将反应液倒入100 mL10%的碳酸氢钠溶液，乙酸乙酯萃取（3 × 50 mL），合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物用硅胶柱层析（二氯甲烷：甲醇=50:1）提纯，得到14.2 mg 橙色固体7a，收率：15.4%, 熔点： > 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.21 (brs, 1H), 11.39 (brs, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9.2Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.37-7.31 (m, 1H), 7.01 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.80 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 6.59 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.31, 170.70, 149.46, 138.61, 138.54, 136.53, 133.35, 128.41, 124.87, 124.58, 122.54, 120.78, 118.81, 115.23, 113.75, 113.27, 112.57, 104.76. ESI-MS: m/z [M+H]+ 330. Anal. Calcd for C18H11N5O2: C, 65.65; H, 3.37; N, 21.27. Found: C, 65.38; H,3.54; N, 21.45.
实施例29：3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺 (7b)
合成方法同实施28，只是用6b替换6a，得到橘黄色固体7b, 收率：20.3%, 熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.40 (brs, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.10 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.39-7.30 (m, 1H), 7.08 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.81(t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.62 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H). ESI-MS: m/z [M+H]+ 344. Anal. Calcd for C19H13N5O2: C, 66.47; H, 3.82; N, 20.40. Found: C, 66.21; H, 3.99; N, 20.18.
实施例30：3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1,7-二甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7c)
合成方法同实施28，只是用6c替换6a，得到红色固体7c, 收率：16.5%, 熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.37 (brs, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.35 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.84 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 6.8 Hz, 1H). 6.44 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.17 (s, 3H), 2.68 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.37, 170.81, 149.53, 138.75, 138.24, 137.89, 135.70, 128.46, 126.69, 125.42, 124.94, 122.60, 121.26, 117.08, 115.31, 113.91, 113.26, 103.55, 37.48, 19.02. ESI-MS: m/z [M+H]+ 358. Anal. Calcd for C20H15N5O2: C, 67.22; H, 4.23; N, 19.60. Found: C, 67.45; H, 4.02; N, 19.52.
实施例31：3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(5-氟-1-甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7d)
合成方法同实施28，只是用6d替换6a，得到红色固体7d, 收率：15.1%, 熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.40 (s, 1H), 8.16 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.41-7.36 (m, 1H), 6.96 (td, J = 9.5, 2.5 Hz, 1H), 6.87 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 5.50 (dd, J = 9.5, 2.5 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.18, 170.63, 158.56, 156.68, 149.55, 138.41, 137.98, 137.86, 133.78, 128.39, 125.60, 125.52, 124.82, 115.18, 113.84, 113.77, 112.16, 112.08, 110.64, 110.43, 104.67, 104.46, 103.81, 33.44. ESI-MS: m/z [M+H]+ 362. Anal. Calcd for C19H12FN5O2: C, 63.16; H, 3.35; N, 19.38. Found: C, 63.09; H, 3.46; N, 19.61.
实施例32: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(6-氟-1-甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺 (7e)
合成方法同实施28，只是用6e替换6a，得到红棕色固体7e, 收率： 15.1%, 熔点： > 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.43 (brs, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.41-7.36 (m, 2H), 6.85 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.55 (td, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H). 5.89-5.86 (m, 1H), 3.88 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.04, 170.50, 159.98, 158.08, 149.55, 138.39, 137.66, 137.50, 137.41, 137.21, 128.39, 124.89, 121.60, 120.50, 120.42, 115.22, 114.23, 113.79, 109.29, 109.09, 103.98, 97.63, 97.42, 33.32. ESI-MS: m/z [M+H]+ 362. Anal. Calcd for C19H12FN5O2: C, 63.16; H, 3.35; N, 19.38. Found: C, 63.33; H, 3.40; N, 19.25.
实施例33: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(5-氯-1-甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺 (7f)
合成方法同实施28，只是用6f替换6a，得到红棕色固体7f, 收率： 11.9% , 熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.46 (brs, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.18 (d, J = 6.8 Hz, 1H),7.90 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.42-7.37 (m, 1H), 7.11 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.88 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.13, 170.62, 149.68, 138.34, 137.79, 137.73, 135.61, 128.47, 126.03, 125.85, 124.84, 122.44, 118.87, 115.30, 114.28, 113.99, 112.48, 103.41, 33.44. ESI-MS: m/z [M+H]+ 378. Anal. Calcd for C19H12ClN5O2: C, 60.41; H, 3.20; N, 18.54. Found: C, 60.30; H, 3.31; N, 18.37.
实施例34: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(6-氯-1-甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7g)
合成方法同实施28，只是用6g替换6a，得到红棕色固体7g, 收率： 21.7% , 熔点： > 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.45 (brs, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.15 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.41-7.37 (m, 1H), 6.86 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.70 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H). 5.91 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 170.95, 170.40, 149.56, 138.31, 137.62, 137.50, 137.32, 128.42, 127.37, 124.90, 123.71, 121.04, 120.51, 115.21, 114.59, 113.82, 110.89, 103.87, 33.31. ESI-MS: m/z [M+H]+ 378. Anal. Calcd for C19H12ClN5O2: C, 60.41; H, 3.20; N, 18.54. Found: C, 60.25; H, 3.42; N, 18.61.
实施例35: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(5-溴-1-甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7h)
合成方法同实施28，只是用6h替换6a，得到红棕色固体7g, 收率：12.8%, 熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.45 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.19 (d, J = 7.0 Hz, 1H),7.90 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.42-7.38 (m, 1H), 7.22 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 6.89 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.59, 171.09, 150.20, 138.80, 138.20, 138.12, 136.35, 128.97, 127.09, 125.52, 125.31, 122.44, 115.85, 114.82, 114.53, 114.44, 113.41, 103.81, 33.92. ESI-MS: m/z [M+H]+ 422. Anal. Calcd for C19H12BrN5O2: C, 54.05; H, 2.86; N, 16.59. Found: C, 54.31; H, 2.63; N, 16.41.
实施例36: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(6-溴-1-甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺 (7i)
合成方法同实施28，只是用6i替换6a，得到红棕色固体7i, 收率：12.4%，熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.47 (brs, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.15 (d, J = 7.0 Hz, 1H),7.87 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.40-7.37 (m, 1H), 6.86 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.81 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H). 5.86 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.08, 170.55, 149.61, 138.39, 138.01, 137.49, 137.31, 128.53, 125.04, 124.01, 123.74, 120.88, 115.40, 115.32, 114.61, 113.92, 113.93, 103.90, 33.39. ESI-MS: m/z [M+H]+ 422. Anal. Calcd for C19H12BrN5O2: C, 54.05; H, 2.86; N, 16.59. Found: C, 54.41; H, 2.91; N, 16.75.
实施例37: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(5-甲氧基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7j)
合成方法同实施28，只是用6j替换6a，得到红棕色固体7j, 收率： 13.8%, 熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 11.37 (brs, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.16 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.39-7.35 (m, 2H), 6.86 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.67 ( dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 5.26 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.07 (s, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.32, 170.79, 154.56, 149.60, 138.94, 138.19, 136.94, 132.05, 128.56, 125.73, 124.91, 115.20, 113.93, 112.94, 112.20, 111.90, 103.65, 100.54, 54.23, 33.43. ESI-MS: m/z [M+H]+ 422. Anal. Calcd for C20H15N5O3: C, 64.34; H, 4.05; N, 18.76. Found: C, 64.08; H, 4.22; N, 18.53.
实施例38: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1-烯丙基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺
合成方法同实施28，只是用6k替换6a，得到橙色固体7k, 收率：20.8%, 熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.42 (brs, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.2, 1H), 7.38-7.31 (m, 1H), 7.06 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.78 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.61 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.07-6.00 (m, 1H), 5.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.21 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 17.1Hz, 1H), 5.00 (d, J = 5.5 Hz, 2H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.25, 170.65, 149.49, 138.55, 137.88, 136.36, 135.80, 133.39, 128.40, 125.16, 124.90, 122.70, 121.13, 119.16, 117.51, 115.26, 113.82, 113.72, 111.27, 104.28, 48.55. ESI-MS: m/z [M+H]+ 370. Anal. Calcd for C21H15N5O2: C, 68.28; H, 4.09; N, 18.96. Found: C, 68.46; H, 4.22; N, 18.71.
实施例39: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1-丁基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7l)
合成方法同实施28，只是用6l替换6a，得到橙色固体7l, 收率26.5%, 熔点：> 250 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.40 (brs, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.07 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.37-7.34 (m, 1H), 7.06 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 6.78 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.63 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.31 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.77-1.71 (m, 2H), 1.28~1.21(m, 2H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3H).13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.28, 170.67, 149.50, 138.60, 138.07, 136.37, 135.80, 128.40, 125.18, 124.91, 122.65, 121.05, 119.33, 115.27, 113.69, 113.53, 111.05, 104.03, 45.93, 31.51, 19.31, 13.48. ESI-MS: m/z [M+H]+ 386. Anal. Calcd for C22H19N5O2: C, 68.56; H, 4.97; N, 18.17. Found: C, 68.32; H, 4.85; N, 18.42.
实施例40: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1-异丙基-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7m)
合成方法同实施28，只是用6m替换6a，得到橙色固体7m, 收率25.6%, 熔点：218-220 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.42 (brs, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.16 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41-7.35 (m, 1H), 7.08 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 6.85 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.66 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.96-4.67 (m, 1H), 1.51 (d, J = 6.6 Hz, 6H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.33, 170.71, 149.58, 138.63, 138.13, 136.00, 132.03, 128.45, 125.23, 125.03, 122.62, 121.15, 119.58, 115.27, 113.79, 113.69, 111.11, 104.48, 47.64, 22.15. ESI-MS: m/z [M+H]+ 372. Anal. Calcd for C21H17N5O2: C, 67.91; H, 4.61; N, 18.86. Found: C,68.11; H, 4.77; N, 18.58.
实施例41: 3-(1-(3-(1H-咪唑-1-基)丙基)-1H-吲哚-3-基)-4-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)马来酰亚胺(7n)
合成方法同实施28，只是用6n替换6a，得到红色固体7m, 收率38.7%, 熔点：169-171 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.42 (brs, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.11(d, J = 7.1Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.46 (d, J = 8.3Hz, 1H), 7.37-7.32 (m, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.07 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.93(s, 1H), 6.79 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.64 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.29 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 4.00 (t, J = 7.1Hz, 2H), 2.32-2.19 (m, 2H). δ 171.21, 170.61, 149.50, 138.52, 137.89, 137.24, 136.16, 135.68, 128.58, 128.41, 125.19, 124.95, 122.75, 121.14, 119.33, 119.22, 115.24, 113.87, 113.72, 110.85, 104.27, 43.58, 43.38, 30.79. ESI-MS: m/z [M+H]+ 438. Anal. Calcd for C24H19N7O2: C, 65.89; H, 4.38; N, 22.41. Found: C, 65.64; H, 4.57; N, 22.67.
实施例42: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1-(3-羟丙基)-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7o)
合成方法同实施28，只是用6o替换6a，得到橙色固体7o, 收率30.0%, 熔点：241-243 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.41 (brs, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.38-7.32 (m, 1H), 7.07 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.80 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.62 (t, J = 7.8, 1H), 5.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.72 (brs, 1H), 4.37 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.47- 3.29 (m, 2H), 1.94-1.89 (m, 2H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.25, 170.66, 149.48, 138.59, 137.94, 136.35, 135.98, 128.42, 125.16, 124.91, 122.65, 121.04, 119.19, 115.24, 113.73, 113.46, 111.03, 104.04, 57.48, 43.28, 32.56. ESI-MS: m/z [M+H]+ 388. Anal. Calcd for C21H17N5O3: C, 65.11; H, 4.42; N, 18.08. Found: C, 65.37; H, 4.58; N, 18.36.
实施例43: 3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1-(3-吗林丙基)-1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺(7p)
合成方法同实施28，只是用6p替换6a，得到橙色固体7p, 收率16.3% , 熔点：215-217 oC. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.37 (s, 1H), 8.07(d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.42-7.15 (m, 1H), 7.06 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.77 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.62 (t, J = 7.8, 1H), 5.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.64-3.52 (m, 4H), 2.39- 2.21(m, 4H), 2.16 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.95-1.88 (m, 2H). 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6 ) δ 171.31, 170.68, 149.50, 138.62, 138.04, 136.38, 136.26, 128.41, 125.11, 124.93, 122.64, 121.06, 119.24, 115.31, 113.71, 113.40, 111.06, 104.07, 66.20 (2), 54.39, 53.10 (2), 43.94, 25.88. ESI-MS: m/z [M+H]+ 457. Anal. Calcd for C25H24N6O3: C, 65.78; H, 5.30; N, 18.41. Found: C, 65.49; H, 5.12; N, 18.37.
2．生物活性测试
目标化合物体外脑缺血神经保护作用评价
本发明对目标化合物在脑缺血病理条件下的经典体外神经细胞损伤模型（谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型，缺糖缺氧条件下神经细胞损伤模型和血清缺失引起的神经细胞损伤模型）中的神保护作用进行了评价。
a. 目标化合物在谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型中的保护作用测试方法及部分结果
原代培养的大鼠小脑颗粒神经细胞经不同浓度的化合物预处理24小时后，然后再加入200 μM的谷氨酸孵育细胞。24小时后，采用MTT方法检测神经细胞存活率，实验结果见表1。
从表1可以看出，通过加入本发明的目标化合物，原代培养的大鼠小脑颗粒神经细胞存活率大大提高，化合物7c，7f，7h, 7l和7m的效果最为显著。
本发明再分别用不同剂量的化合物7c，7f，7h, 7l和7m，测试抑制谷氨酸引起的神经细胞损伤情况，结果见图1，从图1中可以得出，化合物7c，7f，7h, 7l和7m能够剂量依赖性地抑制谷氨酸引起的神经细胞损伤。
b. 目标化合物在缺糖缺氧条件下神经细胞损伤模型中的保护作用测试方法及部分结果
原代培养的大鼠小脑颗粒神经细胞经10 μM的化合物预处理24小时，然后神经细胞换成无糖EBSS孵育，放入低氧箱（<1% O2）培养6小时。然后取出神经细胞，换成正常神经细胞培养基后正常培养24小时。最后采用MTT方法检测神经细胞存活率。实验结果见图2，如图2所示，化合物7c，7f，7h，7l和7m能够显著抑制缺糖缺氧条件引起的神经细胞损伤。
c. 目标化合物在血清缺失引起的神经细胞损伤模型中的保护作用测试方法及部分结果
原代培养的大鼠小脑颗粒神经细胞经10 μM的化合物预处理24小时后，然后换成无血清培养基孵育细胞。24小时后，采用MTT方法检测神经细胞存活率。实验结果见图3，如图3所示，化合物7c，7f，7h, 7l和7m能够显著性地抑制血清缺失引起的神经细胞损伤。
目标化合物在体内（动物模型）脑缺血神经保护作用
大鼠局灶性脑缺血模型采用经典的大脑中动脉阻塞方法建立。SD大鼠中动脉阻塞2小时后复灌22小时。给药方式：采用尾静脉注射10 mg/kg的化合物，分别在手术时、手术后2小时、手术后4小时连续给药三次。最后动物处死取脑组织，切成2mm厚的脑片后采用TTC染色方法检测脑梗死体积。初步实验结果如图4所示，初步动物实验结果显示：10 mg/kg的GSK-3β小分子抑制剂7f，能显著性地减少急性局灶性大鼠脑缺血引起的脑梗死体积。
Claims (7)
1.3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物，其特征在于该化合物的结构通式如下：
其中：R1、R2独立的选自：氢、碳原子数为1-3的烷基、碳原子数为1-3的烷氧基或卤素；R3为氢、碳原子数为1-5的烷基或 (CH2)nR4，n=2-5，R4为咪唑、1,2,4-三氮唑或吗啉。
2.根据权利要求1所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物，其特征在于所述的烷基包括直链烷基、支链烷基或环烷基，所述的烷氧基包括直链烷氧基、支链烷氧基或环烷氧基。
3.根据权利要求1所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物，其特征在于所述的R1为氢，R2为氟、甲基、氯、溴、甲氧基；R3为氢、甲基、丁基、异丙基、烯丙基、丁基、3-(1H-咪唑-1-基)丙基、3-羟丙基、3-吗林丙基。
4.一种根据权利要求1所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
1）涉及的2-肼基取代吡啶、2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酸乙酯、2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酰胺、取代吲哚、2-(1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯、2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯及目标产物3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺的结构式分别如式（1）、式（2）、式（3）、式（4）、式（5）、式（6）及式（7）所示：
其中：R1、R2独立的选自：氢、碳原子数为1-3的烷基、碳原子数为1-3的烷氧基或卤素；R3为氢、碳原子数为1-5的烷基或 (CH2)nR4，n=2-5，R4为咪唑、1,2,4-三氮唑或吗啉；
2）如式（3）所示的2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酰胺类化合物的制备
将式（1）所示的2-肼基取代吡啶、丙二酸二乙酯及三氯氧磷加热回流至反应结束，后处理得到式（2）所示的2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酸乙酯，2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酸乙酯（2）与含氨的甲醇饱和溶液在压力反应容器中发生氨解反应，经后处理得式（3）所示的2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酰胺；
3）如式（6）所示的2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯类化合物的制备
将如式（4）所示的取代吲哚溶于无水乙醚中，控制温度0-5 oC，慢滴加草酰氯的无水乙醚溶液，滴完后保温反应1 h，然后降温至-25 ℃，滴加甲醇钠的甲醇溶液保温搅拌反应，处理后得如式（5）所示的2-(1H-吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯，在NaH存在下，与卤代烃反应得到式（6）所示的2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯类化合物；
4）如式（7）所示的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物的制备
在有机溶剂中，加入步骤2）得到的如式（3）所示的2-(取代1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)乙酰胺及步骤3）得到的如式（6）所示的2-(取代吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯类化合物，搅拌溶解，控制温度-5~00C， 缓慢滴入叔丁醇钾的叔丁醇溶液，滴完后升至室温反应2h，再后处理得3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物。
5.如权利要求4所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物的制备方法，其特征在于步骤3）中所述的卤代物为碘甲烷、烯丙基溴、溴丁烷、2-溴丙烷、1-(3-氯丙基)-1H-咪唑、3-溴丙基叔丁基二甲基硅烷或4-(3-氯丙基)吗啉。
6.如权利要求4所述的3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物的制备方法，其特征在于步骤4）中所述的有机溶剂为无水四氢呋喃或无水DMF。
7.3-(1,2,4-三氮唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-4-(1H-吲哚-3-基)马来酰亚胺类衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗缺血性脑中风药物中的应用。
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| WO1995035294A1 (en) * | 1994-06-22 | 1995-12-28 | Eli Lilly And Company | Protein kinase c inhibitors |
| CN100439359C (zh) * | 2003-02-13 | 2008-12-03 | 诺瓦提斯公司 | 吲哚基马来酰亚胺衍生物 |
| CN101558062A (zh) * | 2006-12-19 | 2009-10-14 | 诺瓦提斯公司 | 作为激酶抑制剂的吲哚基马来酰亚胺衍生物 |
-
2014
- 2014-12-13 CN CN201410763064.7A patent/CN104693198B/zh active Active
Patent Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN108299426A (zh) * | 2018-03-20 | 2018-07-20 | 宝鸡文理学院 | 一种[1,2,4]-三唑并[4,3-a]吡啶类化合物及其合成方法 |
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| CN104693198B (zh) | 2017-03-08 |
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