CN104686368A - 山菊花组织培养培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种山菊花组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基。增殖和生根培养通过添加合适量的荔枝汁，能促进山菊花不定芽的生长，繁殖系数高，且在增殖的同时诱导生根，缩短培育周期。生根率和移栽成活率高，遗传稳定性好。

Description

山菊花组织培养培养基
技术领域
本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种山菊花组织培养培养基。
背景技术
山菊花，又名山野菊、路边菊、野黄菊、苦薏等，为菊科菊属多年生草本植物，分布于东北、华北、华中、华南及西南各省，生于山坡、荒野、路边。其花具有极佳的药用保健功效和极高的饮用价值，是一种保健饮用茶。野菊花为菊科植物野菊的头状花序。性凉,味苦、辛,归肺肝二经,疏风清热,消肿解毒,治疗风热感冒,肺炎,高血压、口疮、丹毒等症野菊花广泛分布于我国东北、华北、西北、华东、西南等地,野生资源丰富。山菊花含菊醇、野菊花内酯、氨基酸、微量元素等多种活性成分。其水提取液对心血管系统有明显保护作用，能提高心输出量，增加心肌供氧量，保护缺血心肌的正常生理功能。山菊花水提物及水蒸气蒸馏法提取的蓝绿色挥发油对多种致病菌、病毒有杀灭或抑制活性，水提取物对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌等的抑制活性强于挥发油；并有抗炎、抗氧化、镇痛活性。具有清热解毒，消肿。对金黄色葡萄球菌、白喉杆菌、链球菌、绿脓杆菌、蒺疾杆菌、流感病毒，均有抑制作用。
山菊花以种子繁育的植株性别表现较迟，用种子繁育实生苗很大程度影响了生产。另外，采用扦插、嫁接等常规的无性繁殖技术成活率又低，不适合山菊花的快速繁殖。因此，通过组培技术快速繁殖山菊花株性一致的优良种苗倍受关注。大量研究表明，山菊花利用组培快繁技术育苗是非常理想的途径，具有保持优良品种的遗传稳定性；生产无病种苗的优点；种苗繁殖迅速等特点。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种山菊花组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.25-0.35mg/L、萘乙酸0.15-0.25mg/L、荔枝汁0.3-0.5mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1-0.2mg/L、吲哚丁酸1.5-2.5mg/L、荔枝汁0.3-0.5mg/L；
(5)其他添加物：活性炭2.0-3.0mg/L；
余量为蒸馏水。
本发明所述荔枝汁为新鲜荔枝去除枝叶、病虫果、烂果、腐果、未成熟果，清洗、去除果皮果核，果肉压榨，得到的果汁，灭菌得到。
本发明山菊花培养基中的继代培养基的配制方法为：
(1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、植物生产调节剂母液；
(2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；
(3)称量白糖和琼脂，其中白糖30g/L，琼脂3.0g/L；
(4)加热白糖和琼脂至完全溶解；
(5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；
(6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5.8；
(7)调好PH值的培养基趁热分装到培养瓶，盖上瓶盖，拧紧；
(8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121.6℃，0.1MPa下灭菌20分钟；
(9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。
本发明山菊花组织培养培养基中的生根培养基的配制方法为：
(1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、植物生产调节剂母液、活性炭；
(2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；
(3)称量白糖和琼脂，其中白糖15g/L，琼脂3.2g/L；
(4)加热白糖和琼脂至完全溶解；
(5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；
(6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5.8；
(7)调好PH值的培养基趁热分装到培养瓶，盖上瓶盖，拧紧；
(8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121.6℃，0.1MPa下灭菌20分钟；
(9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。
本发明山菊花组织培养培养基中继代培养的方法为：
(1)先弱光培养7至8天，继代苗切口愈合，顶芽上挺，分化出侧芽，苗木恢复长势；
(2)然后强光培养8至12天，顶芽侧芽高3厘米以上，叶片舒展，茎干半木质化。此时的芽即可用于生根培养。培养温度保持在25-30℃。
本发明山菊花培养基生根培养的方法为：
(1)暗培养5至7天，生根苗基部膨胀，形成根原基。温度要求比较粗放，不低于15℃即可，最佳温度25-30℃；
(2)强光培养10至15天，室温培养即可。
(3)此时生根苗高4-5厘米，根系5条以上，叶片舒展，苗茎木质化，即可出圃移植。
与目前现有技术相比，本发明的优点是：
1、增殖和生根培养通过添加合适量的荔枝汁，能促进甜茶不定芽的生长，繁殖系数高，且在增殖的同时诱导生根，缩短培育周期。
2、生根率和移栽成活率达到99.5％以上，遗传稳定性好。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1：
山菊花组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.35mg/L、萘乙酸0.25mg/L、荔枝汁0.4mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1mg/L、吲哚丁酸2.0mg/L、荔枝汁0.4mg/L；
(5)其他添加物：活性炭2.0mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例2：
山菊花组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.25mg/L、萘乙酸0.15mg/L、荔枝汁0.3mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.2mg/L、吲哚丁酸1.5mg/L、荔枝汁0.5mg/L；
(5)其他添加物：活性炭3.0mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例3：
山菊花组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.30mg/L、萘乙酸0.15mg/L、荔枝汁0.5mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1mg/L、吲哚丁酸2.5mg/L、荔枝汁0.3mg/L；
(5)其他添加物：活性炭2.0mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例4：
山菊花组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.35mg/L、萘乙酸0.25mg/L、荔枝汁0.3mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.2mg/L、吲哚丁酸2.0mg/L、荔枝汁0.4mg/L；
(5)其他添加物：活性炭3.0mg/L；
余量为蒸馏水。
对比例：
采用1/2MS+IBA的组合，其中IBA浓度为0.3mg/L。
利用上述实施例1和对比例制成的培养基，对山菊花进行组织培养，从下表的结果可以看出，实施例的技术指标远超过对比例。

Claims (1)

1.一种山菊花组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其特征在于：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2450mg/L、硝酸铵2100mg/L、七水硫酸镁450mg/L、磷酸二氢钾350mg/L、氯化钙450mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.25-0.35mg/L、萘乙酸0.15-0.25mg/L、荔枝汁0.3-0.5mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.0mg/L、七水硫酸锌8.2mg/L、硼酸5.5mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐35.5mg/L、七水硫酸亚铁26.5mg/L、碘化钾0.75mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1-0.2mg/L、吲哚丁酸1.5-2.5mg/L；
(5)其他添加物：活性炭2.0-3.0mg/L、荔枝汁0.3-0.5mg/L；
余量为蒸馏水；
所述荔枝汁为新鲜荔枝去除枝叶、病虫果、烂果、腐果、未成熟果，清洗、去除果皮果核，果肉压榨，得到的果汁，灭菌得到。
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