CN104686365A - 甜茶组织培养培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种甜茶组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基。增殖和生根培养通过添加合适量的荔枝汁，能促进甜茶不定芽的生长，繁殖系数高，且在增殖的同时诱导生根，缩短培育周期。生根率和移栽成活率高，遗传稳定性好。

Description

甜茶组织培养培养基
技术领域
本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种甜茶组织培养培养基。
背景技术
广西甜茶，学名Rubus Suavissmus S,Gee.英文名Sweet tea，是蔷薇科悬钩子属植物中的一种，为多年生有刺落叶灌木，高1-2m，单叶，矩圆状卵形，长5-10m，叶柄长1.5-4cm。花单生叶腋，白色，直径2-3cm，垂生；萼裂片长矩圆状卵形，渐尖，无毛。聚合果球形、黄色。它和普通悬钩子不同之处是叶子味甜。甜茶全身是宝，根、茎、叶、果实均可入茶入药。甜茶叶常用来作为甜味剂加工食品，民间入药用于补肾降压，被誉为神茶，与罗汉果、合浦珍珠、广西香料等齐名为广西十大名品。甜茶鲜果别名树莓，营养丰富，红里透亮，果肉甜，清香味鲜，肉味独特，特别是富含抗癌物质—鞣花酸，被称为第三代水果；其干果实可作为中药覆盘子(或覆盆子)使用。甜茶叶虽然在广西民间应用已久，但我国八十年代初药物调查时才发现这个新变种。广西甜茶生长在海拔800-1000m左右的荒山上，主产区在广西大瑶山地区，主要分布在广西其它地区及广东、湖南、江西等省。悬钩子在我国其它地方都可见到，却没有这种甜味。因此，学者们认为甜茶应定为一个新变种。据《广西中药标准》记载，广西甜茶有“清热降火、润肺、祛痰、止咳的功效”。被誉为“神茶”，其药用性和食用性已为地方医药和民间所证实，广西甜茶中还含有3.2％以上的黄酮、8.94％的甜茶茶多酚和4-5％的甜茶素。甜茶茶多酚有明显抗氧化、抗突变、防癌、降低胆固醇、降低血液中低密度脂蛋白、抑制血压上升、抑制血糖上升、抑制血小板凝集、抗菌、抗食物过敏、改善肠胃微生物环境、消臭的作用，是目前发现最理想的纯天然抗氧化剂，用途十分广泛。
目前甜茶繁殖育苗主要采用以下几种方法：(1)分株繁殖：3-4月挖取母株支根上萌发的幼株进行移植，此时幼株叶片尚未展开，但长有须根，挖取时要保证幼株有约10cm长的支根和较完整的须根；(2)分根繁殖：春季气温回升时，在支根上出现许多突起的白色不定芽，把这种支根挖出，按长10-15cm切成根段，斜插或平埋于沙床中，淋水保湿，半个月后根段即可长成幼株；(3)无性繁殖：主要是用长穗一茎带两节间一叶长约8-lOcm，土壤选用石灰消毒，再铺心土、用生根剂浸泡的育苗方法。
广西甜茶多为野生，目前采用繁殖育苗方法有一定的效果，但是成活率等不稳定，这就大大制约了甜茶的繁殖，成为加快开发利用甜茶的瓶颈。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种甜茶组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2550mg/L、硝酸铵2148mg/L、七水硫酸镁475mg/L、磷酸二氢钾325mg/L、氯化钙500mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.35-0.45mg/L、萘乙酸0.15-0.25mg/L、荔枝汁0.3-0.5mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1-0.2mg/L、吲哚丁酸1.0-2.0mg/L、荔枝汁0.3-0.5mg/L；
(5)其他添加物：活性炭2.0-3.0mg/L；
余量为蒸馏水。
本发明所述荔枝汁为新鲜荔枝去除枝叶、病虫果、烂果、腐果、未成熟果，清洗、去除果皮果核，果肉压榨，得到的果汁，灭菌得到。
本发明甜茶培养基中的继代培养基的配制方法为：
(1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、植物生产调节剂母液；
(2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；
(3)称量白糖和琼脂，其中白糖30g/L，琼脂3.0g/L；
(4)加热白糖和琼脂至完全溶解；
(5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；
(6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5.8；
(7)调好PH值的培养基趁热分装到培养瓶，盖上瓶盖，拧紧；
(8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121.6℃，0.1MPa下灭菌20分钟；
(9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。
本发明甜茶组织培养培养基中的生根培养基的配制方法为：
(1)配制大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、植物生产调节剂母液、活性炭；
(2)根据培养基配制量依次量取各种母液，即混合母液；
(3)称量白糖和琼脂，其中白糖15g/L，琼脂3.2g/L；
(4)加热白糖和琼脂至完全溶解；
(5)然后加入量好的混合母液，用水定容，搅拌均匀；
(6)用NaOH和HCl调试培养基的PH值至5.8；
(7)调好PH值的培养基趁热分装到培养瓶，盖上瓶盖，拧紧；
(8)把培养基放入高温高压灭菌锅，在121.6℃，0.1MPa下灭菌20分钟；
(9)灭菌后的培养基静置冷却至凝固，此时的培养基可以使用。
本发明甜茶组织培养培养基中继代培养的方法为：
(1)先弱光培养7至8天，继代苗切口愈合，顶芽上挺，分化出侧芽，苗木恢复长势；
(2)然后强光培养8至12天，顶芽侧芽高3厘米以上，叶片舒展，茎干半木质化。此时的芽即可用于生根培养。培养温度保持在25-30℃。
本发明甜茶培养基生根培养的方法为：
(1)暗培养5至7天，生根苗基部膨胀，形成根原基。温度要求比较粗放，不低于15℃即可，最佳温度25-30℃；
(2)强光培养10至15天，室温培养即可；
(3)此时生根苗高4-5厘米，根系5条以上，叶片舒展，苗茎木质化，即可出圃移植。
与目前现有技术的甜茶组织培养基相比，本发明的优点是：
与目前现有技术相比，本发明的优点是：
1、增殖和生根培养通过添加合适量的荔枝汁，能促进甜茶不定芽的生长，繁殖系数高，且在增殖的同时诱导生根，缩短培育周期。
2、生根率和移栽成活率达到99.5％以上，遗传稳定性好。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1：
甜茶组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2550mg/L、硝酸铵2148mg/L、七水硫酸镁475mg/L、磷酸二氢钾325mg/L、氯化钙500mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.35mg/L、萘乙酸0.25mg/L、荔枝汁0.3mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1mg/L、吲哚丁酸2.0mg/L、荔枝汁0.5mg/L；
(5)其他添加物：活性炭2.0mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例2：
甜茶组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2550mg/L、硝酸铵2148mg/L、七水硫酸镁475mg/L、磷酸二氢钾325mg/L、氯化钙500mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.35mg/L、萘乙酸0.15mg/L、荔枝汁0.5mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.2mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、荔枝汁0.3mg/L；
(5)其他添加物：活性炭3.0mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例3：
甜茶组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2550mg/L、硝酸铵2148mg/L、七水硫酸镁475mg/L、磷酸二氢钾325mg/L、氯化钙500mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.45mg/L、萘乙酸0.15mg/L、荔枝汁0.4mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、荔枝汁0.5mg/L；
(5)其他添加物：活性炭2.0mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例4：
甜茶组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2550mg/L、硝酸铵2148mg/L、七水硫酸镁475mg/L、磷酸二氢钾325mg/L、氯化钙500mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.45mg/L、萘乙酸0.25mg/L、荔枝汁0.4mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.2mg/L、吲哚丁酸2.0mg/L、荔枝汁0.4mg/L；
(5)其他添加物：活性炭3.0mg/L；
余量为蒸馏水。
对比例：
采用1/2MS+IBA的组合，其中IBA浓度为0.3mg/L。
利用上述实施例1和对比例制成的培养基，对甜茶进行组织培养，从下表的结果可以看出，实施例的技术指标远超过对比例。

Claims (1)

1.一种甜茶组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其特征在于：
每升(L)继代培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2550mg/L、硝酸铵2148mg/L、七水硫酸镁475mg/L、磷酸二氢钾325mg/L、氯化钙500mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.35-0.45mg/L、萘乙酸0.15-0.25mg/L、荔枝汁0.3-0.5mg/L；
余量为蒸馏水；
每升(L)生根培养基的组分及各组分的含量如下：
(1)大量元素：硝酸钾2100mg/L、硝酸铵1824mg/L、七水硫酸镁352mg/L、磷酸二氢钾222mg/L、氯化钙490mg/L；
(2)微量元素：一水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.025mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、钠盐37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、碘化钾0.83mg/L；
(3)有机物：甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、肌醇100.0mg/L；
(4)植物生长调节剂：萘乙酸0.1-0.2mg/L、吲哚丁酸1.0-2.0mg/L、荔枝汁0.3-0.5mg/L；
(5)其他添加物：活性炭2.0-3.0mg/L；
余量为蒸馏水；
所述荔枝汁为新鲜荔枝去除枝叶、病虫果、烂果、腐果、未成熟果，清洗、去除果皮果核，果肉压榨，得到的果汁，灭菌得到。
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