CN104667346B - 一种可生物降解纳米微球的制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种可生物降解纳米微球的制备方法，该方法为：一、将生物可降解材料溶解于有机溶剂中，得到溶液A；二、将溶液A加入乳化剂溶液中超声分散，得到乳化液；三、对乳化液进行负压蒸馏排出有机溶剂，得到悬浮液；四、将悬浮液倒入乙醇水溶液中洗涤，静置沉降，过滤得到滤液；五、对滤液进行喷雾干燥，得到可生物降解纳米微球。另外，本发明还公开了制备的可生物降解纳米微球的应用。本发明制备的可生物降解纳米微球呈乳白色，透明或半透明，无味，粒径尺寸均匀一致，完全可满足注射使用要求的纳米微球尺寸要求。本发明将可生物降解纳米微球与医用水凝胶相结合，注入体内可分别在短期、中期、长期起到良好充填修复作用。

Description

一种可生物降解纳米微球的制备方法和应用

技术领域

本发明属于软组织修复及组织工程材料的成型加工技术领域，具体涉及一种可生物降解纳米微球的制备方法和应用。

背景技术

生物可降解医用材料，是指能用于植入生物体或能与生物组织相结合的材料，如：PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL及PDLLA-PEG-PDLLA共聚物等材料。随着材料科学的发展和生物医学科学的进步，生物材料的应用几乎涉及到生物医学的各个领域。因此，可生物降解医用高分子材料制品依据其不同用途的功能性及其成型加工方法也越来越受到人们的重视。

近些年来的临床研究表明，人们成功的将生物可降解聚合物材料制备成骨科内固定材料，如骨夹板、骨螺钉等，可避免长期以来国内外一直采用不锈钢金属材料作骨折内固定材料所造成的骨质疏松和愈合后需二次手术的缺陷。同时开发出组织修复材料，以可降解高分子材料作为支撑材料，在其上移植器官组织的生长细胞，使其形成自然组织。研制出微胶囊药物释放体系，对体内的病灶部位进行药物定向释放治疗，可有效的提高疗效及减轻病人痛苦。另外还开发出了像手术缝合线、药物辅料等诸多的生物可降解医疗器械制品。但以生物可降解聚合物纳米微球作为整形外科充填修复注射用凝胶的填充材料或作为细胞载体的开发应用还未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种可生物降解纳米微球的制备方法。该方法制备的可生物降解纳米微球呈乳白色，透明或半透明，无味，粒径尺寸均匀一致，完全可满足注射使用要求的纳米微球尺寸要求。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一、将生物可降解材料溶解于有机溶剂中，得到溶液A；所述生物可降解材料为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的一种或几种；所述溶液A中生物可降解材料的质量百分含量为1％～8％；

步骤二、将步骤一中得到的溶液A加入乳化剂溶液中，然后置于超声波下超声分散，得到乳化液；所述乳化剂溶液的体积为溶液A体积的10～20倍；所述乳化剂溶液由以下质量百分含量的成分组成：乳化剂1％～5％，分散剂0.05％～0.10％，余量为水，其中乳化剂为聚乙烯醇和/或聚乙二醇，分散剂为聚氧乙烯；

步骤三、对步骤二中所述乳化液进行负压蒸馏排出乳化液中的有机溶剂，得到悬浮液；

步骤四、将步骤三中所述悬浮液倒入乙醇水溶液中洗涤，然后静置沉降，过滤得到滤液；

步骤五、对步骤四中所述滤液进行喷雾干燥，得到可生物降解纳米微球。

上述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤一中所述生物可降解材料的粘均分子量为2.0×10⁴～6.0×10⁵。

上述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤一中所述有机溶剂为三氯甲烷、二氯乙烷或四氯化碳。

上述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤二中所述超声分散的温度为50℃～55℃，功率为900W～1200W，时间为15s～20s。

上述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤二中所述聚乙烯醇的分子量为7.4×10⁴～7.7×10⁴，聚乙二醇的分子量为0.9×10³～1.1×10³，聚氧乙烯的分子量为1.5×10⁶～2.5×10⁶。

上述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤三中所述负压蒸馏的压力为0.08MPa～0.09MPa，负压蒸馏的温度为60℃～65℃。

上述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤四中所述乙醇水溶液的质量浓度为70％～75％，悬浮液与乙醇水溶液的质量比为(1～5):10。

上述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤五中所述喷雾干燥的加热功率为3kW～4kW，喷雾干燥的温度为100℃～110℃，进料量为450mL/min～500mL/min。

另外，本发明还提供了一种上述方法制备的可生物降解纳米微球在制备可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶中的应用，其特征在于，所述可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶的制备方法包括以下步骤：

步骤一、制备医用水凝胶：将医用透明质酸钠和医用胶原蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到医用水凝胶；所述医用水凝胶中医用透明质酸钠的质量浓度为1％～10％，医用胶原蛋白的质量浓度为1％～8％；

步骤二、制备纳米微球载体的复合医用水凝胶：将可生物降解纳米微球加入步骤一中所述医用水凝胶中，可生物降解纳米微球的质量为医用透明质酸钠和医用胶原蛋白质量之和的18％～22％，搅拌均匀得到可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶。

上述的应用，其特征在于，步骤二中所述搅拌的温度为20℃～22℃，搅拌的速率为300rpm～350rpm，搅拌的时间为20min～25min。

对本发明中所用到的聚合物缩写解释如下：

PHB：聚羟基丁酸酯；PHBV：3-羟基丁酸酯与3-羟基戊酸酯的共聚物；PHB-PEG共聚物：聚羟基丁酸酯-聚乙二醇多嵌段共聚物；PLA：聚乳酸；PLGA：聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物；PCL：聚己内酯；PDLLA-PEG-PDLLA共聚物：聚D,L丙交酯-b-PEG–b-聚D,L丙交酯三嵌段共聚物。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明采用超声波将溶解于有机溶剂中的可生物降解材料均匀分散在乳化剂溶液中，经负压蒸馏脱除其中的有机溶剂，然后通过喷雾干燥制备出可生物降解纳米微球，制备的可生物降解纳米微球呈乳白色，透明或半透明，无味，粒径尺寸均匀一致，完全可满足注射使用要求的纳米微球尺寸要求。

2、本发明通过调整可生物降解纳米微球的配比，可按使用要求将微球的降解控制在6个月—36个月不等的降解时间。

3、本发明采用乳化剂及分散剂制备生物可降解纳米微球，其乳化分散液无需添加任何其它的辅助成分，使乳化液成分单一，配制操作工艺简单，并简化了后处理工艺。

4、本发明以可生物降解纳米微球作为充填剂，与医用水凝胶复合，制备出的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶呈胶冻状，在医疗美容整形领域内，对于凹陷性缺陷、改善面部轮廓、去除和充填微细皱纹的治疗，是一种非常理想的生物组织可吸收注射充填修复材料。

5、本发明将可调控降解速率的纳米微球与可吸收复合医用水凝胶载体相结合，形成复合注射充填材料，注入体内可分别在短期(6～8个月)、中期(18～23个月)、长期(24～36个月)起到良好充填修复作用。

6、本发明制备的可生物降解纳米微球作为体内组织修复充填材料，以及组织工程材料，均可形成具有自主知识产权的有着较广泛的微创修复及整形外科用途的医疗器械产品。

7、本发明制备的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶医疗制品，可填补国内空白，该水凝胶生物相容性好、无毒、无害、无急慢性过敏反应、应用安全。具有广泛的社会效益与经济效益。

下面结合附图和实施例，对本发明技术方案做进一步的详细说明。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的可生物降解纳米微球的粒径分布测试曲线。

图2为本发明实施例1制备的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶的结构形态图。

图3为细胞在本发明实施例1制备的可生物降解纳米微球上的生长形态图。

图4为本发明实施例1制备的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶注射入大鼠皮下18个月的活检分析图。

图5为本发明实施例1制备的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶注射入大鼠皮下36个月的活检分析图。

具体实施方式

实施例1

本实施例的可生物降解纳米微球的制备方法包括以下步骤：

步骤一、将粘均分子量为6.0×10⁵的PHB溶解于三氯甲烷中，得到溶液A；所述溶液A中PHB的质量百分含量为8％；

步骤二、将步骤一中得到的溶液A加入乳化剂溶液中，然后置于超声波下超声分散，得到乳化液；所述乳化剂溶液的体积为溶液A体积的10倍；所述乳化剂溶液由以下质量百分含量的成分组成：聚乙烯醇1％，聚氧乙烯0.10％，余量为水；所述超声分散的温度为52℃，功率为1000W，时间为18s；所述聚乙烯醇的分子量为7.7×10⁴，聚氧乙烯的分子量为2.5×10⁶；

步骤三、对步骤二中所述乳化液进行负压蒸馏排出乳化液中的有机溶剂，得到悬浮液；所述负压蒸馏的压力为0.08MPa，负压蒸馏的温度为65℃；

步骤四、将步骤三中所述悬浮液倒入乙醇水溶液中洗涤，然后静置沉降，过滤得到滤液；所述乙醇水溶液的质量浓度为70％，悬浮液与乙醇水溶液的质量比为1:10；

步骤五、对步骤四中所述滤液进行喷雾干燥，得到可生物降解纳米微球；所述喷雾干燥的加热功率为4kW，喷雾干燥的温度为110℃，进料量为500mL/min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球在制备可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶中的应用，具体方法包括以下步骤：

步骤一、制备医用水凝胶：将医用透明质酸钠和医用胶原蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到医用水凝胶；所述水凝胶中医用透明质酸钠的质量浓度为5％，医用胶原蛋白的质量浓度为3％；

步骤二、制备纳米微球载体的复合医用水凝胶：将可生物降解纳米微球加入步骤一中所述医用水凝胶中，可生物降解纳米微球的质量为医用透明质酸钠和医用胶原蛋白质量之和的20％，搅拌均匀得到可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶；所述搅拌的温度为22℃，搅拌的速率为300rpm，搅拌的时间为20min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球呈乳白色，透明或半透明，无味，粒径尺寸均匀一致，完全可满足注射使用要求的纳米微球尺寸要求。图1为本实施例制备的可生物降解纳米微球的粒径分布测试曲线，从图中可以看出制备的可生物降解纳米微球粒径基本上在160nm～600nm范围内，有少量在20nm～50nm范围内。本实施例制备的可生物降解纳米微球在动物体内24～36个月基本可完全降解。

本实施例制备出的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶呈胶冻状，在医疗美容整形领域内，对于凹陷性缺陷、改善面部轮廓、去除和充填微细皱纹的治疗，是一种非常理想的生物组织可吸收注射充填修复材料。

实施例2

本实施例与实施例1相同，其中不同之处在于：所述生物可降解材料为PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL或PDLLA-PEG-PDLLA共聚物，或者为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的至少两种。

实施例3

本实施例的可生物降解纳米微球的制备方法包括以下步骤：

步骤一、将粘均分子量为3.0×10⁵的PHBV溶解于三氯甲烷中，得到溶液A；所述溶液A中PHBV的质量百分含量为5％；

步骤二、将步骤一中得到的溶液A加入乳化剂溶液中，然后置于超声波下超声分散，得到乳化液；所述乳化剂溶液的体积为溶液A体积的15倍；所述乳化剂溶液由以下质量百分含量的成分组成：聚乙二醇3％，聚氧乙烯0.05％，余量为水；所述超声分散的温度为55℃，功率为900W，时间为15s；所述聚乙二醇的分子量为0.9×10³，聚氧乙烯的分子量为1.5×10⁶；

步骤三、对步骤二中所述乳化液进行负压蒸馏排出乳化液中的有机溶剂，得到悬浮液；所述负压蒸馏的压力为0.09MPa，负压蒸馏的温度为60℃；

步骤四、将步骤三中所述悬浮液倒入乙醇水溶液中洗涤，然后静置沉降，过滤得到滤液；所述乙醇水溶液的质量浓度为75％，悬浮液与乙醇水溶液的质量比为5:10；

步骤五、对步骤四中所述滤液进行喷雾干燥，得到可生物降解纳米微球；所述喷雾干燥的加热功率为3kW，喷雾干燥的温度为100℃，进料量为450mL/min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球在制备可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶中的应用，具体方法包括以下步骤：

步骤一、制备医用水凝胶：将医用透明质酸钠和医用胶原蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到医用水凝胶；所述水凝胶中医用透明质酸钠的质量浓度为10％，医用胶原蛋白的质量浓度为1％；

步骤二、制备纳米微球载体的复合医用水凝胶：将可生物降解纳米微球加入步骤一中所述医用水凝胶中，可生物降解纳米微球的质量为医用透明质酸钠和医用胶原蛋白质量之和的18％，搅拌均匀得到可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶；所述搅拌的温度为20℃，搅拌的速率为350rpm，搅拌的时间为25min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球呈乳白色，透明或半透明，无味，粒径尺寸均匀一致，基本上在20nm～550nm范围内，完全可满足注射使用要求的纳米微球尺寸要求。可生物降解纳米微球在动物体内18～23月基本可完全降解。

本实施例制备出的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶呈胶冻状，在医疗美容整形领域内，对于凹陷性缺陷、改善面部轮廓、去除和充填微细皱纹的治疗，是一种非常理想的生物组织可吸收注射充填修复材料。

实施例4

本实施例与实施例3相同，其中不同之处在于：所述生物可降解材料为PHB、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL或PDLLA-PEG-PDLLA共聚物，或者为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的至少两种。

实施例5

本实施例的可生物降解纳米微球的制备方法包括以下步骤：

步骤一、将粘均分子量为5.0×10⁵的PLGA溶解于二氯乙烷中，得到溶液A；所述溶液A中PLGA的质量百分含量为1％；

步骤二、将步骤一中得到的溶液A加入乳化剂溶液中，然后置于超声波下超声分散，得到乳化液；所述乳化剂溶液的体积为溶液A体积的20倍；所述乳化剂溶液由以下质量百分含量的成分组成：聚乙烯醇2％，聚乙二醇1％，聚氧乙烯0.08％，余量为水；所述超声分散的温度为50℃，功率为1200W，时间为20s；所述聚乙烯醇的分子量为7.4×10⁴，聚乙二醇的分子量为1.1×10³，聚氧乙烯的分子量为2.0×10⁶；

步骤三、对步骤二中所述乳化液进行负压蒸馏排出乳化液中的有机溶剂，得到悬浮液；所述负压蒸馏的压力为0.085MPa，负压蒸馏的温度为62℃；

步骤四、将步骤三中所述悬浮液倒入乙醇水溶液中洗涤，然后静置沉降，过滤得到滤液；所述乙醇水溶液的质量浓度为73％，悬浮液与乙醇水溶液的质量比为3:10；

步骤五、对步骤四中所述滤液进行喷雾干燥，得到可生物降解纳米微球；所述喷雾干燥的加热功率为3.5kW，喷雾干燥的温度为105℃，进料量为480mL/min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球在制备可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶中的应用，具体方法包括以下步骤：

步骤一、制备医用水凝胶：将医用透明质酸钠和医用胶原蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到医用水凝胶；所述水凝胶中医用透明质酸钠的质量浓度为10％，医用胶原蛋白的质量浓度为8％；

步骤二、制备纳米微球载体的复合医用水凝胶：将可生物降解纳米微球加入步骤一中所述医用水凝胶中，可生物降解纳米微球的质量为医用透明质酸钠和医用胶原蛋白质量之和的19％，搅拌均匀得到可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶；所述搅拌的温度为21℃，搅拌的速率为320rpm，搅拌的时间为23min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球呈乳白色，透明或半透明，无味，粒径尺寸均匀一致，基本上在20nm～450nm范围内，完全可满足注射使用要求的纳米微球尺寸要求。该可生物降解纳米微球在动物体内18～23个月基本可完全降解。

本实施例制备出的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶呈胶冻状，在医疗美容整形领域内，对于凹陷性缺陷、改善面部轮廓、去除和充填微细皱纹的治疗，是一种非常理想的生物组织可吸收注射充填修复材料。

实施例6

本实施例与实施例5相同，其中不同之处在于：所述生物可降解材料为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PCL或PDLLA-PEG-PDLLA共聚物，或者为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的至少两种。

实施例7

本实施例的可生物降解纳米微球的制备方法包括以下步骤：

步骤一、将粘均分子量为4.0×10⁵的PHB-PEG共聚物溶解于二氯乙烷中，得到溶液A；所述溶液A中PHB-PEG共聚物的质量百分含量为8％；

步骤二、将步骤一中得到的溶液A加入乳化剂溶液中，然后置于超声波下超声分散，得到乳化液；所述乳化剂溶液的体积为溶液A体积的18倍；所述乳化剂溶液由以下质量百分含量的成分组成：聚乙烯醇5％，聚氧乙烯0.10％，余量为水；所述超声分散的温度为53℃，功率为1100W，时间为15s；所述聚乙烯醇的分子量为7.5×10⁴，聚氧乙烯的分子量为2.2×10⁶；

步骤三、对步骤二中所述乳化液进行负压蒸馏排出乳化液中的有机溶剂，得到悬浮液；所述负压蒸馏的压力为0.09MPa，负压蒸馏的温度为60℃；

步骤四、将步骤三中所述悬浮液倒入乙醇水溶液中洗涤，然后静置沉降，过滤得到滤液；所述乙醇水溶液的质量浓度为72％，悬浮液与乙醇水溶液的质量比为2:10；

步骤五、对步骤四中所述滤液进行喷雾干燥，得到可生物降解纳米微球；所述喷雾干燥的加热功率为3.8kW，喷雾干燥的温度为108℃，进料量为450mL/min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球在制备可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶中的应用，具体方法包括以下步骤：

步骤一、制备医用水凝胶：将医用透明质酸钠和医用胶原蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到医用水凝胶；所述水凝胶中医用透明质酸钠的质量浓度为1％，医用胶原蛋白的质量浓度为1％；

步骤二、制备纳米微球载体的复合医用水凝胶：将可生物降解纳米微球加入步骤一中所述医用水凝胶中，可生物降解纳米微球的质量为医用透明质酸钠和医用胶原蛋白质量之和的18％，搅拌均匀得到可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶；所述搅拌的温度为22℃，搅拌的速率为350rpm，搅拌的时间为20min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球呈乳白色，透明或半透明，无味，粒径尺寸均匀一致，基本上在20nm～600nm范围内，完全可满足注射使用要求的纳米微球尺寸要求。该可生物降解纳米微球在动物体内18～23月基本可完全降解。

本实施例制备出的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶呈胶冻状，在医疗美容整形领域内，对于凹陷性缺陷、改善面部轮廓、去除和充填微细皱纹的治疗，是一种非常理想的生物组织可吸收注射充填修复材料。

实施例8

本实施例与实施例7相同，其中不同之处在于：所述生物可降解材料为PHB、PHBV、PLA、PLGA、PCL或PDLLA-PEG-PDLLA共聚物，或者为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的至少两种。

实施例9

本实施例的可生物降解纳米微球的制备方法包括以下步骤：

步骤一、将粘均分子量为2.0×10⁴的PLA和粘均分子量为4.0×10⁴的PCL溶解于四氯化碳中，得到溶液A；所述溶液A中PLA的质量百分含量为2％，PCL的质量百分含量为5％；

步骤二、将步骤一中得到的溶液A加入乳化剂溶液中，然后置于超声波下超声分散，得到乳化液；所述乳化剂溶液的体积为溶液A体积的12倍；所述乳化剂溶液由以下质量百分含量的成分组成：聚乙二醇5％，聚氧乙烯0.07％，余量为水；所述超声分散的温度为52℃，功率为1000W，时间为20s；所述聚乙二醇的分子量为1.0×10³，聚氧乙烯的分子量为2.5×10⁶；

步骤三、对步骤二中所述乳化液进行负压蒸馏排出乳化液中的有机溶剂，得到悬浮液；所述负压蒸馏的压力为0.08MPa，负压蒸馏的温度为63℃；

步骤四、将步骤三中所述悬浮液倒入乙醇水溶液中洗涤，然后静置沉降，过滤得到滤液；所述乙醇水溶液的质量浓度为70％，悬浮液与乙醇水溶液的质量比为4:10；

步骤五、对步骤四中所述滤液进行喷雾干燥，得到可生物降解纳米微球；所述喷雾干燥的加热功率为4kW，喷雾干燥的温度为110℃，进料量为500mL/min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球在制备可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶中的应用，具体方法包括以下步骤：

步骤一、制备医用水凝胶：将医用透明质酸钠和医用胶原蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到医用水凝胶；所述水凝胶中医用透明质酸钠的质量浓度为8％，医用胶原蛋白的质量浓度为3％；

步骤二、制备纳米微球载体的复合医用水凝胶：将可生物降解纳米微球加入步骤一中所述医用水凝胶中，可生物降解纳米微球的质量为医用透明质酸钠和医用胶原蛋白质量之和的22％，搅拌均匀得到可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶；所述搅拌的温度为22℃，搅拌的速率为300rpm，搅拌的时间为25min。

本实施例制备的可生物降解纳米微球呈乳白色，透明或半透明，无味，粒径尺寸均匀一致，基本上在20nm～550nm范围内，完全可满足注射使用要求的纳米微球尺寸要求。该可生物降解纳米微球在动物体内6～8个月基本可完全降解。

本实施例制备出的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶呈胶冻状，在医疗美容整形领域内，对于凹陷性缺陷、改善面部轮廓、去除和充填微细皱纹的治疗，是一种非常理想的生物组织可吸收注射充填修复材料。

实施例10

本实施例与实施例9相同，其中不同之处在于：所述生物可降解材料为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的一种或三种以上，或者为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLGA、PCL和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的两种，或者为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLGA和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的一种与PLA的混合物。

在体视显微镜下观察本发明实施例1、3、5、7和9制备的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶，图2为实施例1制备的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶在体视显微镜下的结构形态图，放大倍数为200倍。实施例3、5、7和9制备的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶的形态观察照片与图2相似，从图中可以看出，可生物降解纳米微球均匀地分散于医用水凝胶中。

在本发明实施例1、3、5、7和9制备的可生物降解纳米微球上种植培养L929细胞，结果显示L929细胞在微球表面成梭状、较致密、生长状态良好，说明本发明实施例1、3、5、7和9制备的可生物降解纳米微球无毒、安全、可靠，并具有良好的生物相容性。实验方法是参照ISO10993-5标准，依据标准采用L929细胞，将L929细胞直接种植在可生物降解纳米微球上，在给定的时间内进行培养，并采用SEM扫描电镜分析观察细胞在微球表面随培养时间的增加，其黏附、增殖、生长的状况及生长的形态。图3为L929细胞在本发明实施例1(实施例3、5、7和9制备的可生物降解纳米微球的细胞生长形态与图3相似)制备的可生物降解纳米微球上第5天的生长形态。从图中可以看出，L929细胞在微球表面成梭状、较致密、生长状态良好，说明本发明实施例1制备的可生物降解纳米微球无毒、安全、可靠，并具有良好的生物相容性。

图4和图5是将本发明实施例1制备的可生物降解纳米微球充填复合水凝胶注射到大鼠体内的实验结果分析图。实验方法：取实施例1制备的可生物降解纳米微球充填复合水凝胶0.5mL，装于1mL注射器内，连接上4号针头；分别在大鼠脊背中央旁的1cm处，将针头刺入皮下，每侧各注入0.5mL；另在双侧腹股沟处注入到脂肪垫内各0.5mL实施例1制备的可生物降解纳米微球充填复合水凝胶，依据设计时间，分别于1个月、4个月、8个月、18个月、24个月和36个月取活检观察纳米微球充填复合水凝胶在大鼠体内的残留情况分析，观察大鼠注入可生物降解纳米微球充填复合水凝胶后的状态。大鼠在注入可生物降解纳米微球充填复合水凝胶后，活动、进食情况正常，精神状态无明显变化，未见腹泻、惊厥、呼吸抑制等不良反应，注入可生物降解纳米微球充填复合水凝胶处无感染、肿胀、化脓等现象。图4表明在18个月时纳米微球充填复合水凝胶在大鼠体内有一定吸收。图5表明在36个月时纳米微球充填复合水凝胶在大鼠体内已基本被完全吸收。

按照上述方法将本发明实施例3、5、7和9制备的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶注射到大鼠体内进行实验分析，结果显示：在制备可生物降解纳米微球时，通过设计调整制备可生物降解材料的配比，所制备出的可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶，基本上可按使用要求将微球的降解控制在6～8个月、18～23个月和24～36个月不等的降解时间。大鼠在注入可生物降解纳米微球充填复合水凝胶后，活动、进食情况正常，精神状态无明显变化，未见腹泻、惊厥、呼吸抑制等不良反应，注入可生物降解纳米微球充填复合水凝胶处无感染、肿胀、化脓等现象。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何限制，凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (9)

1.一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

步骤一、将生物可降解材料溶解于有机溶剂中，得到溶液A；所述生物可降解材料为PHB、PHBV、PHB-PEG共聚物、PLA、PLGA、PCL和PDLLA-PEG-PDLLA共聚物中的一种或几种；所述溶液A中生物可降解材料的质量百分含量为1％～8％；所述生物可降解材料的粘均分子量为2.0×10⁴～6.0×10⁵；

步骤二、将步骤一中得到的溶液A加入乳化剂溶液中，然后置于超声波下超声分散，得到乳化液；所述乳化剂溶液的体积为溶液A体积的10～20倍；所述乳化剂溶液由以下质量百分含量的成分组成：乳化剂1％～5％，分散剂0.05％～0.10％，余量为水，其中乳化剂为聚乙烯醇和/或聚乙二醇，分散剂为聚氧乙烯；

步骤三、对步骤二中所述乳化液进行负压蒸馏排出乳化液中的有机溶剂，得到悬浮液；

步骤四、将步骤三中所述悬浮液倒入乙醇水溶液中洗涤，然后静置沉降，过滤得到滤液；

步骤五、对步骤四中所述滤液进行喷雾干燥，得到可生物降解纳米微球。

2.根据权利要求1所述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤一中所述有机溶剂为三氯甲烷、二氯乙烷或四氯化碳。

3.根据权利要求1所述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤二中所述超声分散的温度为50℃～55℃，功率为900W～1200W，时间为15s～20s。

4.根据权利要求1所述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤二中所述聚乙烯醇的分子量为7.4×10⁴～7.7×10⁴，聚乙二醇的分子量为0.9×10³～1.1×10³，聚氧乙烯的分子量为1.5×10⁶～2.5×10⁶。

5.根据权利要求1所述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤三中所述负压蒸馏的压力为0.08MPa～0.09MPa，负压蒸馏的温度为60℃～65℃。

6.根据权利要求1所述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤四中所述乙醇水溶液的质量浓度为70％～75％，悬浮液与乙醇水溶液的质量比为(1～5):10。

7.根据权利要求1所述的一种可生物降解纳米微球的制备方法，其特征在于，步骤五中所述喷雾干燥的加热功率为3kW～4kW，喷雾干燥的温度为100℃～110℃，进料量为450mL/min～500mL/min。

8.一种如权利要求1至7中任一权利要求所述方法制备的可生物降解纳米微球在制备可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶中的应用，其特征在于，所述可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶的制备方法包括以下步骤：

步骤一、制备医用水凝胶：将医用透明质酸钠和医用胶原蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到医用水凝胶；所述医用水凝胶中医用透明质酸钠的质量浓度为1％～10％，医用胶原蛋白的质量浓度为1％～8％；

步骤二、制备纳米微球载体的复合医用水凝胶：将可生物降解纳米微球加入步骤一中所述医用水凝胶中，可生物降解纳米微球的质量为医用透明质酸钠和医用胶原蛋白质量之和的18％～22％，搅拌均匀得到可生物降解纳米微球充填复合医用水凝胶。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤二中所述搅拌的温度为20℃～22℃，搅拌的速率为300rpm～350rpm，搅拌的时间为20min～25min。