CN104666382A - 红花黄色素在制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺病药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了从中药红花中提取制备的红花黄色素在制备治疗和／或预防慢性阻塞性肺病药物的新用途，特别是在制备治疗和／或预防主要为肺部慢性炎症损伤、肺气肿和肺纤维化病变的慢性阻塞性肺病药物的新用途，上述红花黄色素制成的药物及其制剂。

Description

红花黄色素在制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺病药物的应用

技术领域：

本发明涉及从中药红花中提取制备的红花黄色素的新用途，即在制备治疗和／或预防慢性阻塞性肺病药物的新用途，上述红花黄色素组成的药物组合物。 

背景技术：

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是呼吸系统的常见病、多发病，40岁以上人群的患病率为8.2％，该病往往可发展成慢性肺源性心脏病，导致严重的心、肺功能障碍甚至多器官的功能衰竭，是导致死亡和增加人民经济负担的重要疾病之一。近年来COPD患病率呈上升趋势，预计到2020年它将成为导致死亡的第三位疾病，该病将成为严重的公共卫生问题和沉重的社会经济负担。 

COPD的发病机理尚未完全明了，慢性炎症反应为其主要病理机制。COPD时肺内细支气管可见慢性炎性细胞浸润、肺泡壁多处断裂，部分肺泡互相融合形成肺大泡、肺气肿；慢性炎症导致气道壁损伤和修复过程的反复循环致使气道壁组织重塑，造成气腔狭窄、气道阻塞，COPD还可见血管壁增厚和肺组织的纤维化；COPD中炎症细胞活化，炎症因子如肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)、白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、IL-6表达升高，这些炎症介质可激活丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)和核转录因子кB(Nuclear Factor к B，NF кB)信号传导系统等引发更多炎症介质的释放。慢阻肺过程中还可见TGFβ1等多种生长因子表达升高，引发胶原蛋白等组织基质合成过多，致使组织重构，引发肺纤维化，这也是慢阻肺的重要表现。 

近年来随着对COPD发病机制的研究，COPD的药物治疗也有了不少新的进展，使用支气管舒张剂、肺血管扩张剂、粘液调节剂等是控制COPD症状的重要药物，但这些药物多为对症治疗的手段，不能缓解肺部的慢性炎症反应和纤维化的病理变化。激素类药物是目前广泛使用的抗炎药物，它虽然可缓解肺部慢性炎症损伤，但因其副作用和对某些表型的COPD患者疗效较差使其应用受到了限制，目前尚缺乏较为理想的药物抑制COPD过程中的肺部慢性炎症反应、缓解肺气肿与肺纤维化，因此研究开发不良反应较少抑制肺部慢性炎 症反应与肺气肿、肺纤维化以治疗COPD具重要意义[中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组，慢性阻塞性肺疾病诊治指南，中华结核和呼吸杂志2002，25(8)：453-460.]。 

中药红花为菊科植物Carthamus tinctoriusL.的干燥花，为一活血化瘀代表性药物。红花活血通经，散瘀止痛，主要用治跌打损伤、冠心病、脑血栓等多种血液循环障碍性疾病。临床上红花常以水煎液入药，红花黄色素(Safflor Yellow，SY)为红花的主要水溶性组分，为多种查耳酮苷的混合物，研究结果表明，红花黄色素为红花活血化瘀的有效部位[王会玲，红花黄色素的现代研究概述。中国中医药科技，1998，5(5)：333-334.]，羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A，HSYA，分子结构见附图1)为红花黄色素中的有效成分[金鸣，高子淳，李金荣，臧宝霞，吴伟，大孔树脂色谱法制备羟基红花黄色素A及红花黄色素，中草药，2004，35(1)：2528。]，该成分为一新的血小板激活因子受体拮抗剂[臧宝霞，金鸣，司南，张彦，吴伟，朴永哲，HSYA对血小板活化因子的拮抗作用。药学学报，2002，37(9)：696-699；]。近年来虽然关于红花黄色素和HSYA药理作用的研究报道逐渐增多，但目前尚无红花黄色素缓解COPD的报道。 

发明内容及有益效果：

实验一：红花黄色素缓解烟熏-脂多糖诱发的大鼠慢性阻塞性肺病的作用 

1.材料与方法 

1.1.实验动物 

无特异病原体(SPF)雄性wistar大鼠，购自北京维通利华公司，共84只，体重160-180g。动物购入后适应性喂养一周，实验期间自由饮水和饮食。 

1.2.试剂与药材 

红花黄色素由我研究室用红花水提液以本发明实施例中的大孔树脂-Sephadex LH20凝胶柱层析法制备，高效液相色谱分析，面积归一法测定HSYA纯度＞95％，过滤后配成生理盐水溶液使用；脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)和戊巴比妥钠(Pentobarbital)均为美国Sigma公司产品；地塞米松(dexamethasone，DXM)磷酸钠注射液为天津药业焦作有限公司产品；TRIzol Reagent(Ambion)为Life Technologies公司产品；M-MLV Reverse Transcriptase、RNasin Ribonuclease Inhibitor、Oligo dT和M-MLV Reverse Transcriptase均为美国promega公司产品；所有引物均由北京三博远志公司合成；ELISA试剂盒为上海依科赛生物技术有限公司产品；细胞浆细胞核蛋白提取试剂盒为南京凯基生物技术有限 公司产品；辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体(IgG)、BCA蛋白定量试剂盒和ECL plus超敏发光液均为江苏碧云天生物技术有限公司产品；Real Time PCR试剂盒为日本Takara公司产品；兔抗大鼠p-p38MAPK、p38MAPK、NF-кBp65、I-кB多克隆抗体均为美国cell signal technology公司产品；荧光二抗为美国LI-COR公司产品；4％的多聚甲醛溶液为中国武汉博士德生物工程有限公司产品；其它试剂均为国产分析纯。中南海牌过滤嘴香烟为北京卷烟厂产品，其每只烟含焦油量10mg，烟气烟碱量0.8mg。 

1.3.实验设备： 

垂直板电泳槽和DYY-11B型三恒电泳仪为北京六一仪器厂产品；双色红外激光成像仪为美国LI-COR公司产品；BioTek酶标仪为美国BioTek公司产品；多用途低温高速离心机，为德国Eppendorf公司产品；NANODROP微量紫外分光光度计为美国Thermo公司产品；IQ5荧光实时定量PCR仪为美国BIO-RAD公司产品；全自动脱水机、石蜡切片机、DM6000B显微镜均为德国Leica公司产品。WT40型CO浓度检测仪为上海伟泰科技有限公司产品；旋片式真空泵为浙江黄岩医疗器械厂产品。 

1.4.大鼠实验步骤 

取84只健康成年雄性wistar大鼠按体重分层随机分为7组(n=12)即正常对照组(Sham)，单纯红花黄色素对照组，慢阻肺组，慢阻肺+2mg／kg地塞米松组(阳性对照药组)，慢阻肺+30mg／kg红花黄色素组，慢阻肺+48mg／kg红花黄色素组和慢阻肺+76.8mg／kg红花黄色素组。慢阻肺+红花黄色素组大鼠第1、14d经气管注入1g／L LPS200μL后将大鼠头朝上适度振摇使药液分布均匀后继续饲养，第2-28天(第14天除外)每天将大鼠置熏烟箱中熏一小时一次，具体方法如下：将大鼠置入自制有机玻璃熏烟箱(80cm×60cm×50cm)中，箱子上面孔中插入6支香烟，并于箱子侧面孔中插入的抽气管上连接抽气泵，点燃香烟启动抽气泵，香烟产生的烟雾便进入熏烟箱中，经数分钟香烟燃烧结束后，在熏烟箱上面打开一个小通气口以维持通气，保持箱内CO浓度在1000-1100ppm，每10min观察记录CO浓度1次，60min后结束烟熏取出大鼠继续常规饲养。大鼠在首次气管注射LPS后次日开始每天一次(第14天除外)腹腔注射SY直至第28天。实验第29天1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉动物，以无菌0.9％氯化钠溶液经气管灌注入支气管及肺脏再缓慢回抽，反复抽吸次获得大鼠肺泡灌洗液，于4℃3000r／min转速下离心10min，收集上清液置于-80℃保存，以备用于ELISA实验检测细胞因子含量；取左肺和气管组织10％中性福尔马林固定以备做组织切片与HE染色以观察肺组织形态学改变，剩余肺组织置液氮或-80℃冰 箱冷冻保存以备其余各种检测。慢阻肺组大鼠以生理盐水代替红花黄色素生理盐水溶液腹腔注射，其它操作均与慢阻肺+红花黄色素组相同；慢阻肺+地塞米松组大鼠以地塞米松生理盐水溶液代替红花黄色素生理盐水溶液腹腔注射，其它操作均与慢阻肺+红花黄色素组相同；正常对照组以生理盐水溶液代替红花黄色素生理盐水溶液腹腔注射，以生理盐水代替LPS生理盐水溶液气管内注射，在与慢阻肺+红花黄色素组大鼠烟熏的相应日子分别放置于不插香烟、不连抽气泵的同样的烟熏箱内一小时，其它操作均与慢阻肺+红花黄色素组相同；单纯红花黄色素对照组腹腔注射高剂量红花黄色素生理盐水溶液，以生理盐水代替LPS生理盐水溶液气管内注射，在与慢阻肺+红花黄色素组大鼠烟熏的相应日子分别放置于不插香烟、不连抽气泵的同样的烟熏箱内一小时，其它操作均与慢阻肺+红花黄色素组相同。 

1.5.RT-qPCR法检测细胞基因表达 

1.5.1.肺组织总RNA的提取。 

取出冻存肺组织，每5-10mg加入1mlTrizol试剂，制得匀浆，置于1.5ml离心管内，室温静置5min后加入0.2ml氯仿振荡15s，室温静置5min，4℃，12000rpm离心15min。小心吸取上清液约0.5ml转移至新的塑料离心管，加入0.5ml异丙醇轻轻混匀，室温静置10min，4℃，12000rpm离心10min，弃上清。加入1ml75％乙醇，轻轻洗涤沉淀，4℃，7500rpm离心5min，弃上清，所得沉淀即为RNA。0.1％焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate，DEPC)-H₂O溶解后，NANODROP紫外分光仪检测浓度及纯度。 

1.5.2.肺组织cDNA的合成 

反应条件：42℃反应1h，95℃放置5min灭活M-MLV逆转录酶，4℃5min。 

1.5.3.Real-time PCR反应检测肺组织mRNA水平 

引物： 

表1.引物序列 

PCR扩增条件为：预变性，95℃30s；95℃5s，60℃30s，40个循环后熔解曲线分析。以2^ΔΔCt法计算肺组织靶基因mRNA相对水平。 

1.6.Western Blot法测定肺组织内磷酸化p38MAPK水平 

每只动物分别取约0.1g肺组织加入500μl Western及IP细胞裂解液(使用前加入PMSF，使之终浓度为1mmol／L)制得匀浆，按照试剂盒操作说明提取组织蛋白(裂解液置于1.5ml离心管中，12000rpm4℃离心15分钟，将上清吸至新的离心管中)，BCA法测定测定蛋白浓度后，用裂解液将所有样品稀释至同等浓度，加入SDS上样缓冲液沸水浴5min，以5％浓缩胶和12％分离胶进行SDS-PAGE电泳。电泳结束后以湿法电转移法将蛋白条带转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上，加入封闭液，室温封闭1个半小时，加入一抗室温下孵育1h或4℃过夜，用PBST洗膜3次，每次5min，加入稀释好的特异性 荧光二抗，避光室温孵育1个半小时，PBST洗膜3次，每次15min后采用美国LI-COR公司的Odyseey双色红外激光成像仪对NC膜进行扫描采图，用Quantity One软件进行灰度分析。 

1.7.HE染色 

取左肺组织10％中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡包埋后切片。二甲苯脱蜡：二甲苯(I)15min，二甲苯(II)15min二甲苯(III)15min；梯度乙醇：100％乙醇5min，95％的乙醇5min，80％乙醇5min；蒸馏水洗2min，苏木素染色5min，自来水冲洗1min，极化液2s，自来水水冲洗10min，置伊红液3-5min，自来水水冲洗30s，80％乙醇(I)7min，95％乙醇(II)3min，100％乙醇(III)5min，二甲苯10min，二甲苯(I)10min，中性树脂封片，显微镜下观察。 

1.8.免疫组化染色(IHS)及评分分方法 

1.8.1.免疫组化操作步骤 

肺组织石蜡切片脱蜡至水，3％H₂O₂室温孵育，蒸馏水冲洗，PBS浸泡，％正常山羊血清稀释液封闭后滴加一抗工作液反应后，PBS冲洗，滴加适量生物素标记二抗工作液反应，PBS冲洗，滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液反应后PBS冲洗，显色剂显色反应后冲洗，复染，脱水，透明，封片，显微镜观察，照相，分析。 

1.8.2.IHS观察方法： 

采用双盲法观察肺组织切片光镜视野中p65蛋白阳性细胞面积变化以反映p65蛋白水平，在100倍光镜下每个切片随机取5个视野，以Nikon公司NIS-ELEMENTS程序扫描计算p65阳性细胞所占面积，以五个视野p65蛋白阳性细胞面积的平均值作为一只动物的数据，各组数据进行统计分析得出实验结果。 

1.9.ELISA方法检测大鼠肺泡灌洗液IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子表达 

取大鼠肺泡灌洗液，按照测试盒说明书进行操作，分别将标准品、肺泡灌洗液样品各100μL加入反应板中，37℃孵育90min，洗板5次。除空白孔外，加入生物素化抗体工作液100μL，37℃孵育60min，洗板5次；除空白孔外，加入酶结合物工作液100μL，37℃避光孵育30min，洗板5次；各孔加入显色底物100μL／孔，37℃避光孵育15min； 各孔加入终止液100μL／孔，混匀10min内用酶标仪以空白孔为检色空白在450nm波长处检测各孔吸光度(A)值.对照标准曲线计算IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子水平。 

1.10.Masson染色 

石蜡切片二甲苯脱蜡，梯度酒精至水。10％重铬酸钾与10％三氯乙酸1：1混合液浸泡40min，自来水冲去浮色，蒸馏水洗3遍，0.5‰天青石蓝5min，自来水冲洗，蒸馏水洗3遍。苏木素3min，自来水冲洗，蒸馏水洗3遍，0.5％盐酸酒精分色数秒，自来水冲，蒸馏洗。滴染1％丽春红：1％酸性复红(1：2)混合液，15-30min，吸去染液。1％磷钼酸洗5min，0.5-1％冰醋酸涮数次。2％靓绿，20min。1％磷钼酸涮数次，0.5-1％冰醋酸涮数次。梯度乙醇脱水，二甲苯5min，两次。中性树脂封片。 

1.11.统计学方法 

将实验数据整理后采用SPSS19.0软件进行统计分析，用均数±标准差(x±s)表示，计量资料统计分析采用单因素方差分析法，各组均数的两两比较采用SNK法，p＜0.05认为差异的显著性有统计学意义。 

2.实验一结果 

2.1.红花黄色素缓解慢性阻塞性肺病大鼠肺脏外观变化的作用 

正常对照组左肺组织色粉红，无明显淤血水肿，质地柔软；COPD组肺组织色暗红，淤血较重，质地柔韧；给予不同剂量SY和地塞米松后，上述损伤可见缓解，其中SY低剂量组的保护作用不很明显，SY中高剂量组和地塞米松组对的COPD大鼠肺脏外观变化的缓解作用较明显；单纯SY组和Sham组无明显差别。 

2.2.红花黄色素缓解慢性阻塞性肺病大鼠肺组织形态学变化的作用 

光镜下可见正常对照组大鼠的肺泡腔清晰可见、结构完整，间质无炎症细胞浸润，细支气管未见明显分泌物；COPD组大鼠的肺泡部分扩张融合，出现肺大泡等肺气肿的病理变化，细支气管渗出明显，间质明显增厚，肺问质及细支气管周围有大量炎性细胞浸润；而不同剂量SY给药组的上述损伤均见减轻，其中低剂量的保护作用不很明显，中高剂量对的COPD大鼠肺组织形态学变化的改善较明显；地塞米松组也有较明显的改善。 

2.3.红花黄色素缓解慢性阻塞性肺病大鼠肺组织纤维化的作用 

Sham组大鼠小气道管壁可见少量蓝染的纤维组织存在。COPD组大鼠支气管平滑肌层明显增厚，小气道管壁和粘膜下可见较多的蓝染组织，提示纤维组织沉积增多，管腔纤维化导致官腔狭窄，呈气道重塑等较明显的肺纤维化的表现，给予不同剂量的SY后低剂量SY治疗组纤维化改善不很明显，而中高剂量SY组可见大鼠肺组织小气道管壁内的蓝染的纤维组织明显减少，纤维化改善明显。地塞米松组小支气管壁内蓝染纤维也明显减少，纤维化也明显改善。单纯SY组表现和Sham组没有明显差别。 

2.4.红花黄色素抑制慢阻肺大鼠肺组织相关基因mRNA表达异常的作用 

如表2所示：与Sham组比较，COPD模型组的肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1、VCAM-1在mRNA表达都显著增加(P＜0.001)，给予不同剂量的SY后炎症因子在mRNA水平的高表达受到抑制，地塞米松组也见明显的抑制，单纯SY组与Sham组无明显差异。 

表2：SY抑制COPD大鼠肺组织炎症因子mRNA表达异常的作用(N=10) 

^▲▲▲P＜0.001vs.Sham group，^*P＜0.05vs.COPD group,^***P＜0.001vs.COPD group 

2.5.红花黄色素抑制慢阻肺大鼠肺泡灌洗液相关细胞因子表达异常的作用 

如表3所示：与Sham组比较，COPD组的肺泡灌洗液中炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平明显升高(P＜0.001)，给予不同浓度的SY后炎症因子的高表达受到抑制，地塞米松组也见明显的抑制，单纯SY组与Sham组无明显差异。 

表3：SY抑制慢阻肺大鼠肺泡灌洗液相关细胞因子表达异常的作用(N=10) 

^▲▲▲P＜0.001vs.Sham group，*P＜0.05vs.COPD group，***P＜0.001vs.COPD group 

2.6.红花黄色素缓解慢阻肺大鼠肺组织p65表达水平升高的作用 

如表4所示：与Sham组比较，COPD模型组的p65阳性面积明显增加(P＜0.001)，给予不同浓度的SY后p65阳性面积增加受到抑制，地塞米松组也可见明显的抑制，单纯SY组与Sham组无统计学意义。 

表4：SY缓解慢阻肺大鼠肺组织p65表达水平升高的作用(N=10) 

^▲▲▲P＜0.001vs.Sham group，^*P＜0.05vs.COPD group,^***P＜0.001vs.COPD group 

2.7.红花黄色素缓解慢阻肺大鼠肺组织p38MAPK磷酸化的作用 

如表5所示：与Sham组比较，COPD模型组的p38MAPK的磷酸化水平明显升高(P＜0.001)，给予不同浓度的SY后p38MAPK的磷酸化水平升高受到抑制，地塞米松组也可见明显的抑制，单纯SY组与Sham组无明显差异。 

表5：SY缓解慢阻肺大鼠肺组织p38MAPK磷酸化的作用(N=10) 

^▲▲▲P＜0.001vs.Sham group，^*P＜0.05vs.COPD group,^***P＜0.001vs.COPD group 

上述实验结果表明，红花黄色素可缓解以慢性肺部炎症反应、肺气肿与肺纤维化为主要特征的慢性阻塞性肺病的病理变化和相关的细胞信号转导与细胞因子的表达异常。 

实施方式：

红花黄色素提取分离分析方法及结果 

红花生药购自新疆维吾尔族自治区乌鲁木齐药材公司，产地为新疆维吾尔族自治区吉木萨尔县。鉴定人北京中医药大学中药学院生药系李家实教授，为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。95％卫生酒精北京市远弘药用酒精有限责任公司生产；D-4020型非极性大孔树脂为天津南开大学化工厂产品；新购大孔树脂用5％NaOH液浸泡2hr后，用水洗至中性，再用5％HCl浸泡2hr，水洗至中性，湿法装柱，95％乙醇洗至流出液中加水无白色混浊，水冲洗至无醇味备用。乙腈为Fisher公司HPLC级产品，甲醇为国产优级纯，Sephadex LH-20为Pharamacia公司产品；其它试剂均为国产分析纯。 

设备 

岛津LC-10A型高效液相色谱仪，色谱软件为泰立化公司TL9000液相色谱工作站。 

红花水提取液的制备 

红花生药20kg，加400L水，室温浸泡并不时搅动，24hr后放出提取液，再加400L水同法冷浸24hr，弃药渣，合并两次水提液，离心过滤除去药渣，80℃减压浓缩至1g生药／ml，过滤即得红花水提取液。 

大孔树脂柱层析法制备粗品红花黄色素 

取1g生药／ml红花水提液4000ml上直径40厘米×120厘米的大孔树脂层析柱，蒸馏水洗至Molish反应阴性后用20％乙醇洗脱，收集后续黄色流出液，此洗脱液60℃减压浓缩即得红花黄色素粗品浓缩液。 

Sephadex LH-20凝胶柱层析法制备精品红花黄色素 

前述红花黄色素粗品浓缩液上直径10厘米的Sephadex LH-20凝胶层析柱，蒸馏水洗脱除去先流出的棕色杂质，收集黄色洗脱液，60℃减压浓缩即得红花黄色素精品。 

HPLC法分析红花黄色素中HSYA的纯度方法 

岛津LC-10AT高效液相色谱仪，Apollo碳18反相色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，SPD-6AV紫外检测器。流动相由乙腈(A)和0.1％的三氟乙酸(B)组成，流速1ml／min；梯度洗脱程序：0-50min由A1％线性递增至A35％；50-60min由A35％线性递增至45％；检测波长：405nm；柱温：30℃；面积归一法计算纯度。 

结果 

HPLC法分析红花黄色素的结果 

凝胶柱层析法制备所得的红花黄色素溶液稀释后HPLC分析结果见附图2-附图4。该图谱上最高峰为HSYA峰(见附图2附图4)。 

制剂方案 

以本发明方法制得红花黄色素按以下实施例方法制得可使用的制剂。 

制剂实施例1  红花黄色素口服硬胶囊剂 

红花黄色素  100克 

干淀粉      100克 

上述组分混合后装入1000个硬胶囊，即得红花总黄色素口服硬胶囊剂 

制剂实施例2  红花黄色素注射剂 

红花黄色素  50克 

注射用水    适量 

全量        1000毫升 

取50克红花黄色素以适量注射用水溶解后加至1000毫升按常规方法经灌装，封口等步骤制得红花黄色素注射剂. 

制剂实施例3  红花黄色素栓剂 

红花黄色素          500克 

半合成脂肪酸甘油脂  适量 

制成                1000粒 

取半合成脂肪酸甘油脂加热使融，适当降温后加入500克红花黄色素混匀，制栓，冷却即得红花黄色素栓剂. 

制剂实施例4  红花黄色素口服液 

红花黄色素  0.5克 

蒸馏水      10毫升 

红花黄色素溶解后按常规方法经灌装，封口等步骤生产即得红花黄色素口服液. 

制剂实施例5  红花黄色素片剂 

红花黄色素，硬脂酸镁与淀粉混匀后按常规方法经压片，包衣，装瓶等工艺即得红花黄色素片剂. 

此外，在未违背本发明精神内，可以对给定的实施例进行各种变化和改进。由本技术领域中熟练的技术人员认识到的可选择的实施例，它们也被包括在权利要求的范围内。 

附图说明：

附图1是HSYA的分子结构图 

附图2是大孔树脂-凝胶层析法制备的HSYA含量大于95％的红花黄色素的HPLC分析图谱 

附图3是大孔树脂-凝胶层析法制备的HSYA含量约63.6％的红花黄色素的HPLC分析图谱 

附图4是大孔树脂-凝胶层析法制备的HSYA含量约43.8％的红花黄色素的HPLC分析图谱。

Claims (8)

1.红花黄色素在制备治疗和/或预防慢性阻塞性肺病药物的应用。 

2.权利要求1所述的红花黄色素，为红花生药用水和/或其它极性溶剂提取，其提取液经大孔树脂层析除杂质后获得。 

3.权利要求1所述的红花黄色素，为红花生药用水或其它极性溶剂提取，其提取液经大孔树脂层析除杂质后再经进一步纯化获得或不经进一步纯化直接获得。 

4.权利要求3所述的红花提取液经大孔树脂层析除杂质后再进一步的纯化过程首先选择凝胶层析法纯化。 

5.权利要求1所述的红花黄色素所含的主要有效成分羟基红花黄色素A的纯度按重量计为10-100％。 

6.权利要求1所述的慢性阻塞性肺病，其特征在于其损伤的主要病理表现为肺部炎症损伤、肺气肿与肺纤维化现象。 

7.一种治疗和/或预防慢性阻塞性肺病的药物，其特征在于含有治疗和/或预防慢性阻塞性肺病有效量的红花黄色素和可药用的载体。 

8.权利要求7的药物，其特征在于可以制成胶囊、注射剂、片剂、栓剂、口服液、丸剂等可使用的制剂。