CN104650189A - 一种异构达托霉素的制备方法 - Google Patents
一种异构达托霉素的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104650189A CN104650189A CN201310585947.9A CN201310585947A CN104650189A CN 104650189 A CN104650189 A CN 104650189A CN 201310585947 A CN201310585947 A CN 201310585947A CN 104650189 A CN104650189 A CN 104650189A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- daptomycin
- isomery
- preparation
- purity
- trifluoroacetic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明公开了一种异构达托霉素的制备方法,将达托霉素水溶液调节pH7-10,30-70℃保存1-2天,将达托霉素溶液转换成含较高纯度异构达托霉素的溶液,再通过制备色谱得到色谱纯度大于90%的高纯度的异构达托霉素制备液,最后将该制备液冻干,得到固体异构达托霉素。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学领域,具体涉及异构达托霉素的制备方法。
背景技术
随着抗生素的发展及抗生素的滥用,病原菌对抗生素的耐药性是当今社会面临的最严峻挑战。除了控制抗生素滥用外,目前寻找一种有效的对抗耐药菌的抗生素成了解决这一问题的最佳途径,万古霉素曾被认为是对抗革兰氏阳性菌的最后一道防线,但现在全世界临床已发现越来越多的耐此药菌。
达托霉素(Daptomycin)是由Lilly(礼来)公司最初研究,Cubist制药公司开发的一环脂肽类抗生素。应病人对新型耐药抗生素的迫切需求,2003年底,美国食品与药物管理局(FDA)经过快速审理程序批准注射用达托霉素(Daptomycin)(商品名cubicin)用于治疗由一些革兰氏阳性敏感菌株引起的并发性皮肤及皮肤结构感染,如脓肿、手术切口感染和皮肤溃疡。达托霉素的作用机制与其他抗生素不同,它通过扰乱细胞膜对氨基酸的转运,从而阻碍细菌细胞壁肽聚糖的生物合成,改变细胞质膜的性质;另外,它还能通过破坏细菌的细胞膜,使其内容物外泄而达到杀菌的目的,因此细菌对达托霉素产生耐药性可能会比较困难。
达托霉素虽然已经在美国实现工业化生产,但在达托霉素产品中常包含有不具有抗菌活性的脱水达托霉素、异构达托霉素、达托霉素内酯水解物等杂质,严重影响产品质量,为此能够单独分离纯化出达托霉素中的杂质并进行研究是非常必要的。
现有文献嫌少涉及异构达托霉素的提取方法,例如欧洲专利1586580A2所描述的达托霉素杂质归属,并未具体涉及达托霉素杂质分离方法。而作为达托霉素的重要杂质之一,方便有效地制备异构达托霉素,并对其稳定性等相关性质进行研究,对达托霉素的质量提升意义重大。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作简便、成本低廉且能快速地从达托霉素成品制备高纯度异构达托霉素的方法,以便对异构达托霉素进行研究。
本发明的异构达托霉素制备方法包括如下步骤:
1)制备达托霉素的水溶液;
2)将步骤1)所得达托霉素水溶液调节pH7-10,30-70℃保存1-2天,得到含较高纯度异构达托霉素的溶液;
3)将步骤2)所得溶液经过制备色谱柱分离纯化后得色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液;
4)将步骤3)所得异构达托霉素制备液冻干,得到固体异构达托霉素。
上述步骤1)所述达托霉素的水溶液浓度为30~50mg/mL,采用的达托霉素色谱纯度优选>80%,更优选>90%。
上述步骤2)调节溶液pH7-10,优选pH8-9。通常用NaOH溶液(例如1mol/L的NaOH)调节溶液的pH值。
上述步骤2)中保存温度为30-70℃,优选40-60℃。
上述步骤3)采用制备色谱分离系统进一步分离纯化异构达托霉素,流动相采用乙腈-三氟乙酸溶液体系,其中三氟乙酸溶液的浓度为0.01%~0.2%(单位为g/mL,即每100mL溶液含有0.01~0.2g三氟乙酸,下同),优选0.01%~0.05%;乙腈∶三氟乙酸溶液的体积比为40∶60~60∶40,优选50∶50~60∶40。
在本发明的一些实施例中,该制备色谱的色谱条件具体是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈-三氟乙酸溶液体系;流速:5mL/min;柱温:20-30℃。
本发明采用达托霉素破坏液,在一定条件下将达托霉素转换为异构达托霉素,然后经过制备色谱分离系统处理制备高纯度达托霉素,得到的异构达托霉素其色谱纯度在98%以上。该方法简单易行,成本低廉。
具体实施方式
以下通过实施例进一步描述本发明,但不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
将色谱纯度90%的达托霉素成品用水溶解成50mg/mL的溶液,1N氢氧化钠溶液调节pH7.5,40℃恒温恒湿箱保存24h,得到色谱纯度30%的异构达托霉素。
将上述色谱纯度30%的异构达托霉素经制备色谱分离纯化(色谱条件是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈∶0.01%三氟乙酸溶液=53∶47,体积比;流速:5mL/min;柱温:20-30℃室温),并用高效液相跟踪检测(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同),收集色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液。
将上述色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液真空冻干,所得固体异构达托霉素采用高效液相色谱法(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同)检测异构达托霉素纯度,其纯度在93%。
实施例2
将色谱纯度90%的达托霉素成品用水溶解成50mg/mL的溶液,1N氢氧化钠溶液调节pH8.0,50℃恒温恒湿箱保存24h,得到色谱纯度45%的异构达托霉素。
将上述色谱纯度45%的异构达托霉素经制备色谱分离纯化(色谱条件是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈∶0.01%三氟乙酸溶液=53∶47,体积比;流速:5mL/min;柱温:20-30℃室温),并用高效液相跟踪检测(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同),收集色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液。
将上述色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液真空冻干,所得固体异构达托霉素采用高效液相色谱法(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同)检测异构达托霉素纯度,其纯度在96%。
实施例3
将色谱纯度90%的达托霉素成品用水溶解成50mg/mL的溶液,1N氢氧化钠溶液调节pH8.5,50℃恒温恒湿箱保存24h,得到色谱纯度55%的异构达托霉素。
用上述色谱纯度55%的异构达托霉素经制备色谱分离纯化(色谱条件是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈∶0.01%三氟乙酸溶液=53∶47,体积比;流速:5mL/min;柱温:20-30℃室温),并用高效液相跟踪检测(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同),收集色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液。
将上述色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液真空冻干,所得固体异构达托霉素采用高效液相色谱法(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同)检测异构达托霉素纯度,其纯度在98%。
实施例4
将色谱纯度90%的达托霉素成品用水溶解成50mg/mL的溶液,1N氢氧化钠溶液调节pH9.0,50℃恒温恒湿箱保存24h,得到色谱纯度60%的异构达托霉素。
用上述色谱纯度60%的异构达托霉素经制备色谱分离纯化(色谱条件是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈∶0.01%三氟乙酸溶液=53∶47,体积比;流速:5mL/min;柱温:20-30℃室温),并用高效液相跟踪检测(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同),收集色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液。
将色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液真空冻干,所得固体异构达托霉素采用高效液相色谱法(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同)检测异构达托霉素纯度,其纯度在98%。
实施例5
将色谱纯度90%的达托霉素成品用水溶解成50mg/mL的溶液,1N氢氧化钠溶液调节pH9.0,50℃恒温恒湿箱保存24h,得到色谱纯度60%的异构达托霉素。
将上述色谱纯度60%的异构达托霉素经制备色谱分离纯化(色谱条件是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈∶0.02%三氟乙酸溶液=53∶47,体积比;流速:5mL/min;柱温:20-30℃室温),并用高效液相跟踪检测(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同),收集色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液。
将上述色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液真空冻干,所得固体异构达托霉素采用高效液相色谱法(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同)检测异构达托霉素纯度,其纯度在96%。
实施例6
将色谱纯度90%的达托霉素成品用水溶解成50mg/mL的溶液,1N氢氧化钠溶液调节pH9.0,50℃恒温恒湿箱保存24h,得到色谱纯度60%的异构达托霉素。
将上述色谱纯度60%的异构达托霉素经制备色谱分离纯化(色谱条件是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈∶0.03%三氟乙酸溶液=53∶47,体积比;流速:5mL/min;柱温:20-30℃室温),并用高效液相跟踪检测(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同),收集色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液。
将上述色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液真空冻干,所得固体异构达托霉素采用高效液相色谱法(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同)检测异构达托霉素纯度,其纯度在95%。
实施例7
将色谱纯度90%的达托霉素成品用水溶解成50mg/mL的溶液,1N氢氧化钠溶液调节pH9.0,50℃恒温恒湿箱保存24h,得到色谱纯度60%的异构达托霉素。
将色谱纯度>90%的异构达托霉素异构达托霉素经制备色谱分离纯化(色谱条件是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈∶0.01%三氟乙酸溶液=55∶45,体积比;流速:5mL/min;柱温:20-30℃室温),并用高效液相跟踪检测(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同),收集色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液。
将上述色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液真空冻干,所得固体异构达托霉素采用高效液相色谱法(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同)检测异构达托霉素纯度,其纯度在97%。
实施例8
将色谱纯度90%的达托霉素成品用水溶解成50mg/mL的溶液,1N氢氧化钠溶液调节pH9.0,50℃恒温恒湿箱保存24h,得到色谱纯度60%的异构达托霉素。
将上述色谱纯度60%的异构达托霉素经制备色谱分离纯化(色谱条件是:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈∶0.01%三氟乙酸溶液=50∶50,体积比;流速:5mL/min;柱温:20-30℃室温),并用高效液相跟踪检测(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同),收集色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液。
将色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液真空冻干,所得固体异构达托霉素采用高效液相色谱法(检测条件与欧洲专利“PROCESS FOR THE PURIFICATION OF DAPTOMYCIN”(EP1586580A2)公开的方法相同)检测异构达托霉素纯度,其纯度在95%。
本发明采用制备色谱技术提供一种快速简便、成本低廉的制备高纯度异构达托霉素的工艺技术。制备流动相中乙腈和三氟乙酸溶液比例及三氟乙酸浓度更是高纯度异构达托霉素制备的关键工艺控制点。虽然本文已经对该发明进行了详尽的描述,但可以理解,在不违背本发明精神和实质的基础上,本领域技术人员可以做一些修改或变动,这些修改或变动均在本发明要求保护的范围之内。
Claims (10)
1.一种异构达托霉素的制备方法,包括以下步骤:
1)制备达托霉素水溶液;
2)调节达托霉素水溶液pH7-10,30-70℃保存1-2天;
3)将步骤2)所得溶液经过制备色谱柱分离纯化,得色谱纯度>90%的异构达托霉素制备液;
4)将步骤3)所得异构达托霉素制备液冻干,得到固体异构达托霉素。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)的达托霉素水溶液浓度是30-50mg/mL。
3.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)所用的达托霉素色谱纯度>80%。
4.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤1)所用的达托霉素色谱纯度>90%。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤2)调节达托霉素水溶液pH为8-9。
6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤2)保存温度为40-60℃。
7.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤3)制备色谱的流动相采用乙腈-三氟乙酸溶液体系。
8.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述三氟乙酸溶液的浓度为0.01%~0.2%,乙腈∶三氟乙酸溶液的体积比为40∶60~60∶40。
9.如权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述三氟乙酸溶液的浓度为0.01%~0.05%,乙腈∶三氟乙酸溶液的体积比为50∶50~60∶40。
10.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于,步骤3)的制备色谱条件为:色谱柱:Ib-SitC8/6045-1、250×10.00mm;波长:214nm;流动相:乙腈-三氟乙酸溶液体系;流速:5mL/min;柱温:20-30℃。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310585947.9A CN104650189A (zh) | 2013-11-19 | 2013-11-19 | 一种异构达托霉素的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310585947.9A CN104650189A (zh) | 2013-11-19 | 2013-11-19 | 一种异构达托霉素的制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104650189A true CN104650189A (zh) | 2015-05-27 |
Family
ID=53241873
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310585947.9A Pending CN104650189A (zh) | 2013-11-19 | 2013-11-19 | 一种异构达托霉素的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104650189A (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105699554A (zh) * | 2016-03-10 | 2016-06-22 | 杭州华东医药集团新药研究院有限公司 | 高纯度达托霉素内酯水解物及其应用 |
CN106866789A (zh) * | 2015-12-11 | 2017-06-20 | 北大方正集团有限公司 | 一种分离纯化达托霉素rs-8杂质的方法 |
CN106866791A (zh) * | 2015-12-11 | 2017-06-20 | 北大方正集团有限公司 | 一种高纯度达托霉素内酯水解物的制备方法 |
CN106866790A (zh) * | 2015-12-11 | 2017-06-20 | 北大方正集团有限公司 | 达托霉素RS-5/6、RS-7和RS-7a/7b杂质的制备方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1586580A2 (en) * | 2000-01-20 | 2005-10-19 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Process for the purification of daptomycin |
CN102485902A (zh) * | 2010-12-06 | 2012-06-06 | 北大方正集团有限公司 | 一种发酵生产达托霉素的方法 |
CN102875652A (zh) * | 2011-07-13 | 2013-01-16 | 北大方正集团有限公司 | 一种分离纯化达托霉素的方法 |
-
2013
- 2013-11-19 CN CN201310585947.9A patent/CN104650189A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1586580A2 (en) * | 2000-01-20 | 2005-10-19 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Process for the purification of daptomycin |
CN102485902A (zh) * | 2010-12-06 | 2012-06-06 | 北大方正集团有限公司 | 一种发酵生产达托霉素的方法 |
CN102875652A (zh) * | 2011-07-13 | 2013-01-16 | 北大方正集团有限公司 | 一种分离纯化达托霉素的方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
张定丰等: "达托霉素在不同酸碱条件下产生的杂质及其结构研究", 《中国抗生素杂志》 * |
张翠英等: "达托霉素β-异构体的分离纯化及相关研究", 《第十一届全国抗生素(微生物药物)学术会议论文集》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106866789A (zh) * | 2015-12-11 | 2017-06-20 | 北大方正集团有限公司 | 一种分离纯化达托霉素rs-8杂质的方法 |
CN106866791A (zh) * | 2015-12-11 | 2017-06-20 | 北大方正集团有限公司 | 一种高纯度达托霉素内酯水解物的制备方法 |
CN106866790A (zh) * | 2015-12-11 | 2017-06-20 | 北大方正集团有限公司 | 达托霉素RS-5/6、RS-7和RS-7a/7b杂质的制备方法 |
CN105699554A (zh) * | 2016-03-10 | 2016-06-22 | 杭州华东医药集团新药研究院有限公司 | 高纯度达托霉素内酯水解物及其应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Hegemann et al. | Caulosegnins I–III: a highly diverse group of lasso peptides derived from a single biosynthetic gene cluster | |
CN103724400B (zh) | 一种分离纯化脱水达托霉素的方法 | |
CN104650189A (zh) | 一种异构达托霉素的制备方法 | |
Matsunaga et al. | Long‐chain polyamines (LCPAs) from marine sponge: possible implication in spicule formation | |
CN101830970B (zh) | 一种高纯度达托霉素(Daptomycin)的纯化制备方法 | |
CN104387444A (zh) | 一种达托霉素杂质rs-2高纯度样品的制备方法 | |
CN104450746A (zh) | 一种向蛋白质定点引入非天然氨基酸的方法 | |
CN102875652A (zh) | 一种分离纯化达托霉素的方法 | |
CN107607643A (zh) | 鳗鱼中硝基呋喃类药物的检测方法 | |
NZ597836A (en) | Production of acid soluble soy protein isolates (”s700”) | |
CN103509133B (zh) | 一种香菇多糖快速分离的方法 | |
CN105131079A (zh) | 一种醋酸去氨加压素的纯化方法 | |
Zhang et al. | Reactive extraction of amino acids mixture in hydrolysate from cottonseed meal with di (2‐ethylhexyl) phosphoric acid | |
CN106866790A (zh) | 达托霉素RS-5/6、RS-7和RS-7a/7b杂质的制备方法 | |
CN105254721A (zh) | 米卡芬净的纯化转盐方法 | |
CN102492024A (zh) | 从发酵液中提取达托霉素的方法 | |
Juhl et al. | Tyrocidine A interactions with saccharides investigated by CD and NMR spectroscopies | |
Moharkar et al. | Sugaring-out extraction of erythromycin from fermentation broth | |
CN103130875B (zh) | 一种从发酵液中提取多粘菌素b的方法 | |
CN105585628A (zh) | 一种甘精胰岛素的制备方法及其制备的甘精胰岛素 | |
CN105198905A (zh) | 一种纯化制备超纯马波沙星的方法 | |
CN106565820A (zh) | 一种制备盐酸万古霉素杂质3和8高纯度样品的方法 | |
CN106866791A (zh) | 一种高纯度达托霉素内酯水解物的制备方法 | |
CN103665068B (zh) | 一种1-N-乙基庆大霉素C1a的制备方法 | |
CN106866789A (zh) | 一种分离纯化达托霉素rs-8杂质的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20150527 |