CN104630302A - 一种草莓花色苷的酶法酰基化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，属于农产品深加工技术领域。包括用食用酒精提取草莓花色苷，将粗提液上AB-8大孔树脂柱初步纯化，用乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，立刻上聚酰胺树脂柱，去离子水冲柱后用30％的乙醇水溶液洗脱，洗脱液减压蒸干后溶解到叔戊醇中，加入肉桂酸，Novozmy固定化脂肪酶，4A分子筛40℃震荡反应72小时，过滤取出酶和分子筛。此法溶剂、酶可多次使用，成本低适合大量生产，工业化前景好。获得的酰基化草莓花色苷可作为花色苷理论研究材料，也可作为天然食品色素，应用于不同领域。
Description
一、技术领域
本发明为一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，属于农产品深加工技术领域。
二、背景技术
国内外关于草莓的研究表明，草莓色素属于花色苷色素，主要成分为天竺葵素-3-葡萄糖苷。花色苷类物质，具有较强的降血压、降血脂、抗突变、抗氧化、抗肿瘤等生理活性和功能。花色苷作为一种安全无毒的天然食用色素在食品、保健品、医药、化妆品等方面具有很大的开发潜力，但是天然色素易受各种条件的影响而变得不稳定，这就限制了其在加工和储藏过程中的广泛应用。影响其不稳定的主要内部因素是分子结构，酰基化可提高花色苷稳定性和呈色效果已得到学术界公认，双酰化花色苷比单酰化花色苷更稳定。利用脂肪酶在有机相中的酰基化活性，将草莓花色苷的葡萄糖苷进行定向酰基化，获得酰基化花色苷，可以制备高稳定性的天然色素原料，并根据需要进行应用，因此，这一方法具有重要的理论价值和现实意义。
三、发明内容
技术问题 非酰基化天然花色苷存在的主要问题是稳定性差，造成草莓加工品易退色，色泽不稳定。也使天然花色苷作为食用色素受到限制。本发明主要针对草莓花色苷稳定性差的技术难题，通过将初步纯化的草莓花色苷进行有机相中的酶法酰基化，获得稳定性提高的酰基花色苷。
技术方案 本发明提供一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，包括：
1)草莓花色苷粗提物的制备：将草莓中加入2倍重量的95％食用酒精，进行高速打浆，60℃保温1小时，冷却，离心。滤液真空浓缩至原重量的十分之一。
2)草莓花色苷的纯化：将粗提液上大孔树脂柱，树脂型号为AB-8，上样液量为1倍树脂柱体积，上样流速为1倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以体积比70％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2～2.5倍树脂柱体积，流速为1倍柱体积/小时。将洗脱液真空浓缩至原体积的的五分之一，加入2倍体积的乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，收集水相既为纯化后的紫薯花色苷。将萃取后的水相立刻上聚酰胺树脂柱，上样量为0.5倍树脂柱体积，上样流速为1倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱。再用以体积比30％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2～2.5倍树脂柱体积，流速为1倍柱体积/小时，收集洗脱液。
3)酶法酰基化：将洗脱液60℃真空浓缩至干，再放入40℃真空干燥箱干燥6小时，加入分子筛干燥过的叔戊醇作为溶剂，加热使花色苷溶解，倒入其他可密闭容器中。分别加入干燥处理过的肉桂酸，Novozmy固定化脂肪酶，4A分子筛。在40℃震荡反应72小时后，过滤取出酶和分子筛，干燥后以备再次使用，滤液减压浓缩至干，即为酰基化草莓花色苷，回收溶剂以备再次使用。
有益效果
1.获得了酰基化草莓花色苷，稳定性得到提高，可作为花色苷理论研究的材料，也可作为天然食品色素。
2.采用固定化脂肪酶，可多次使用，降低成本，适合大量生产，工业化前景好。
3.使用叔戊醇为溶剂，毒性弱且为非管制化学品，安全可靠，可重复多次利用。
四、具体实施方式
将草莓中加入2倍重量的95％食用酒精，进行高速打浆，60℃保温1小时，冷却，离心。滤液真空浓缩至原重量的十分之一。将粗提液上大孔树脂柱，树脂型号为AB-8，上样液量为1倍树脂柱体积，上样流速为1倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以体积比70％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2～2.5倍树脂柱体积，流速为1倍柱体积/小时。将洗脱液真空浓缩至原体积的的五分之一，加入2倍体积的乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，收集水相既为纯化后的紫薯花色苷。将萃取后的水相立刻上聚酰胺树脂柱，上样量为0.5倍树脂柱体积，上样流速为1倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱。再用体积比30％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2～2.5倍树脂柱体积，流速为1倍柱体积/小时，收集洗脱液。将洗脱液60℃真空浓缩至干，再放入40℃真空干燥箱干燥6小时，加入叔戊醇作为溶剂，加热使花色苷溶解，倒入其他可密闭容器中。分别加入干燥处理过的肉桂酸，Novozmy435固定化脂肪酶，4A分子筛。在40℃震荡反应72小时后，过滤取出酶和分子筛，干燥后以备再次使用，滤液减压浓缩至干，回收溶剂以备再次使用。
实施例
将1千克草莓中加入2升95％食用酒精，进行高速打浆，60℃保温1小时，冷却，离心。滤液真空浓缩至约300毫升既为粗提液，将粗提液上500mm×50mm大孔树脂柱，树脂型号为AB-8，上样流速为300毫升/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以750毫升70％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，流速为300毫升/小时。将洗脱液真空浓缩至150毫升，加入300毫升乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，收集水相既为纯化后的紫薯花色苷。将萃取后的水相150毫升立刻上500mm×50mm聚酰胺树脂柱，上样流速为300毫升/小时，然后用500毫升去离子水冲柱，再用750毫升体积比30％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，流速为300毫升/小时，收集洗脱液。将洗脱液60℃真空浓缩至干，再放入40℃真空干燥箱干燥6小时，加入100ml用10克4A分子筛干燥过的叔戊醇作为溶剂，加热使花色苷溶解，倒入具塞三角瓶中。分别加入干燥处理过的0.1克肉桂酸，1克Novozmy435固定化脂肪酶，5克4A分子筛，密闭三角瓶。在40℃震荡反应72小时后，过滤取出酶和分子筛，干燥后以备再次使用，滤液减压浓缩至干，回收溶剂以备再次使用。
Claims (5)
1.一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，包括：
1)草莓花色苷粗提物的制备：将草莓中加入2倍重量的95％食用酒精，进行高速打浆，60℃保温1小时，冷却，离心。滤液真空浓缩至原重量的十分之一。
2)草莓花色苷的纯化：将粗提液上大孔树脂柱，树脂型号为AB-8，上样液量为1倍树脂柱体积，上样流速为1倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱，当流出液澄清后，以体积比70％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2～2.5倍树脂柱体积，流速为1倍柱体积/小时。将洗脱液真空浓缩至原体积的的五分之一，加入2倍体积的乙酸乙酯萃取脂溶性杂质，收集水相既为纯化后的紫薯花色苷。将萃取后的水相立刻上聚酰胺树脂柱，上样量为0.5倍树脂柱体积，上样流速为1倍柱体积/小时，然后用去离子水冲柱。再用以体积比30％的乙醇水溶液为洗脱剂洗脱树脂柱，洗脱液为2～2.5倍树脂柱体积，流速为1倍柱体积/小时，收集洗脱液。
3)酶法酰基化：将洗脱液60℃真空浓缩至干，再放入40℃真空干燥箱干燥6小时，加入叔戊醇作为溶剂，加热使花色苷溶解，倒入其他可密闭容器中。分别加入干燥处理过的肉桂酸，Novozmy435固定化脂肪酶，4A分子筛。40℃震荡反应72小时后，过滤分离出酶和分子筛，干燥后以备再次使用，滤液减压浓缩至干，即为酰基化草莓花色苷，回收溶剂以备再次使用。
2.根据权利要求1所述一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，其特征在于：所用固定化脂肪酶型号为Novozmy435，诺维信有限公司生产。
3.根据权利要求1或2所述一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，其特征在于：使用溶剂为干燥处理过的叔戊醇。
4.根据权利要求1或2所述一种草莓花色苷的酶法酰基化方法，其特征在于：使用酰基供体为干燥处理过的肉桂酸。
5.权利要求1-5之一所述一种草莓花色苷的酶法酰基化方法所获得的产品。
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