CN104630148B - 一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法 - Google Patents
一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104630148B CN104630148B CN201510025985.8A CN201510025985A CN104630148B CN 104630148 B CN104630148 B CN 104630148B CN 201510025985 A CN201510025985 A CN 201510025985A CN 104630148 B CN104630148 B CN 104630148B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- hydrogel
- microwell plate
- sol
- ball
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，属于生物医学技术领域。本发明方法先制备疏水基片和载细胞的微尺度水凝胶模板，通过倒模的方式制备水凝胶微孔板，在培养箱中进行细胞培养原位形成细胞球。本发明中使用载细胞的微尺度水凝胶作为构建带有球面微孔的水凝胶微孔板，无需后续人为进行细胞接种，孔内细胞密度可控，易于构建大小可控、形状规则的细胞球。本方法成本低、操作简单、可重复性好、适用范围广，在组织工程和再生医学以及药物筛选等领域中具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，涉及细胞球的制备方法，具体涉及一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法。
背景技术
细胞球是一种多细胞聚集体，与二维细胞培养体系相比，细胞球培养能够更好地模拟在体微环境，获得与在体更为相近的响应结果，因此，在病理机理、药物筛选以及组织工程中具有广阔的应用前景。构建细胞球有多种方法，如基于细胞非粘附表面的微孔板法、基于重力的悬挂液滴法、基于磁力的磁悬浮法以及基于离心力的旋转培养法等。其中，微孔板法因其操作简单、可控性好、实现起来较为容易，得到了广泛的应用。
微孔板法的基本原理是利用微孔结构的空间约束和微孔板材料的细胞非粘附特性，促进细胞在生长过程中通过细胞之间的粘附力聚集成球。制备微孔板常用的材料是聚二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane，PDMS)，PDMS是目前微流控芯片领域用的最多的材料，成本低、惰性好、具有疏水性、无毒。制备PDMS微孔板常用的是模具法。模具材料通常采用硅或金属材料。但是硅和金属模具加工过程较为复杂，成本也较高，并且每次使用后清洗困难，重复使用效果差。
水凝胶是一种含有大量水的高分子聚合物网络，因其生物相容性、可降解性以及与细胞外基质相似等特性，在组织工程和再生医学领域得到了广泛的应用。近些年来，基于琼脂糖、海藻酸盐以及聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)水凝胶的微孔板在细胞球培养方面也得到了发展。目前水凝胶微孔板中微孔结构多半是圆柱状，底面是平的，形成的细胞球的尺寸和形状差异较大。最近研究表明，凹状微孔(如球面微孔)能够更好地促进细胞聚集生长后形成尺寸均一、形状规则的细胞球。但是，目前缺少一种有效的在水凝胶表面构建球面微孔的方法；并且，目前研究都是在构建微孔板后再人为种植细胞，存在效率低、种植细胞密度不均匀以及培养成球过程中细胞容易流失等问题。
发明内容
为了克服上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，该方法操作简单、成本低、适用范围广、成形效果好。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，包括以下步骤：
1)将基片进行疏水处理，制得疏水基片；
2)将培养的细胞消化，然后与第一水凝胶溶胶混合，制成第一水凝胶溶胶细胞混合液；
其中，第一水凝胶溶胶为质量浓度3％～20％的明胶或甲基丙烯酸酰化明胶；
3)将第一水凝胶溶胶细胞混合液以0.05～2μL每液滴的形式沉积至步骤1)制得的疏水基片表面，形成半球状液滴，在0～20℃下静置至半球状液滴交联固化，制得载细胞的微尺度水凝胶模板；
4)在载细胞的微尺度水凝胶模板上方覆盖第二水凝胶溶胶，然后通过低温处理或紫外照射使第二水凝胶溶胶交联，形成第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构；
其中，第二水凝胶溶胶为质量浓度1％～5％的琼脂糖，或者为质量浓度5％～20％的聚乙二醇水凝胶及聚乙二醇水凝胶衍生物；
5)将第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构置于培养皿中，加入培养液后进行培养，直至第一水凝胶融化为溶胶，在此培养过程中，细胞在第二水凝胶微孔板的微孔中生长，形成细胞球。
步骤1)所述疏水处理具体为：
将基片浸泡在疏水剂中处理后，烘干；所述疏水剂为子西莱自清洁剂；
或者，将基片进行硅烷化处理；
或者，将聚四氟乙烯薄膜贴在基片上，制得疏水表面。
所述基片为玻璃基片或聚甲基丙烯酸甲酯基片。
步骤3)是采用移液枪、注射器或细胞打印平台将步骤2)得到的第一水凝胶溶胶细胞混合液沉积到步骤1)制备的疏水基片表面形成半球状液滴。
步骤3)所述的静置时间为10～60min。
步骤4)所述的低温处理是在0～20℃下静置5～30min。
步骤4)所述的紫外照射处理时间为10～120s。
步骤5)所述的培养是将加入培养液的培养皿置于37℃、二氧化碳浓度为5％的培养箱中进行培养1～14d。
步骤2)所述的培养的细胞为乳腺癌细胞MCF–7、造骨细胞、骨髓基质细胞、肝细胞、成纤维细胞、心肌细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、脂肪干细胞或神经前体细胞。
步骤2)所述的第一水凝胶溶胶细胞混合液中细胞浓度为0.01×107～5×107个/mL。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明基于水凝胶微孔板构建的细胞球原位制备方法，首先制备第一水凝胶溶胶细胞混合液，将第一水凝胶溶胶细胞混合液沉积在疏水基片上制得载细胞的微尺度水凝胶模板，再在载细胞的微尺度水凝胶模板上方覆盖第二水凝胶溶胶，使第二水凝胶溶胶交联后，形成第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构，最后将第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构在培养箱中进行细胞球的培养，第一水凝胶融化为溶胶，在此培养过程中，细胞在第二水凝胶微孔板的孔中生长，形成细胞球。本发明创新性地使用载细胞的微尺度水凝胶作为模板构建带有球面微孔的第二水凝胶微孔板，在细胞培养温度下，第一水凝胶转化为溶胶态，预先混合的细胞在第二水凝胶微孔板的微孔中原位生长增殖形成细胞球，无需后续人为进行细胞接种，孔内初始细胞密度可控。本发明方法易于构建大小可控、形状规则的细胞球，且成本低、操作简单、可重复性好、适用范围广，在组织工程和再生医学以及药物筛选等领域中具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为本发明基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法的实验操作流程图；
图2a为微尺度水凝胶模板照片；
图2b为利用微尺度水凝胶模板倒模形成的PEG-DMA水凝胶微孔阵列照片；
图2c为不同体积液滴的俯视图；
图2d为为不同尺寸微孔俯视图；
图2e为微尺度水凝胶模板中0.48μL和0.23μL液滴的侧面图；
图2f为体积为0.48μL和0.23μL的水凝胶模板倒模形成的水凝胶微孔剖面图；
图3a为MCF-7在细胞密度1×106个/mL和0.48μL微尺度水凝胶模板倒模形成的水凝胶微孔中分别培养1小时、3天、5天和7天的相差照片；
图3b为图3a培养7天后的荧光染色照片；
图3c为MCF-7在细胞密度1×106个/mL和0.23μL微尺度水凝胶模板倒模形成的水凝胶微孔中分别培养1小时、3天、5天和7天的相差照片；
图3d为图3c培养7天后的荧光染色照片；
图3e为MCF-7在细胞密度5×105个/mL和0.48μL微尺度水凝胶模板倒模形成的水凝胶微孔中培养7天后的相差图片；
图3f为图3e的荧光染色照片；
图3g为MCF-7在细胞密度5×105个/mL和0.23μL微尺度水凝胶模板倒模形成的水凝胶微孔中培养7天后的相差图片；
图3h为图3g的荧光染色照片；
图4为细胞在培养和成球过程中存活率柱状图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明公开的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，采取的技术方案如图1流程所示：
第一步，准备疏水基片：将载玻片或聚甲基丙烯酸甲酯[poly(methylmethacrylate)，PMMA]片材进行硅烷化处理或浸泡在疏水剂中，进行疏水处理后，烘干备用，疏水剂为子西莱自清洁剂；或将聚四氟乙烯(PTFE)薄膜贴在基底(载玻片、聚甲基丙烯酸甲酯或培养皿盖内表面等)上，制造疏水表面。
第二步，制备第一水凝胶溶胶和细胞悬液的混合液：消化事先培养的细胞，并与第一水凝胶溶胶混合制备细胞浓度为0.01～5×107个/mL的第一水凝胶溶胶和细胞悬液的混合液。细胞为乳腺癌细胞MCF–7、造骨细胞、骨髓基质细胞、肝细胞、成纤维细胞、心肌细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、脂肪干细胞或神经前体细胞，第一水凝胶溶胶材料为浓度3～20％(w/v)的明胶或3～20％(w/v)的甲基丙烯酸酰化明胶。
第三步，制备载细胞的微尺度水凝胶模板：用移液枪、注射器或细胞打印平台将第一水凝胶溶胶和细胞悬液的混合液以0.05～2μL每液滴的形式沉积到第一步制备的疏水基片表面形成半球状液滴，0～20℃低温放置10～60分钟使液滴交联固化形成载细胞的微尺度水凝胶阵列作为模板。
第四步，在载细胞微尺度水凝胶模板上覆盖第二水凝胶：通过模板制备水凝胶微孔板：将第二水凝胶溶胶覆盖在第三步制备的载细胞的微尺度水凝胶模板上方。第二水凝胶溶胶材料为浓度为5％～30％(w/v)聚乙二醇水凝胶及其衍生物，或1％～5％(w/v)的琼脂糖。
第五步，交联第二水凝胶：将上一步覆盖均匀的第二水凝胶在0～20℃低温放置处理5～30min，或紫外照射10～120s使之交联。
第六步，融化第一水凝胶形成孔并培养细胞：第五步制作的水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构置于培养皿中，用移液枪紧靠培养皿壁滴加培养液，最后放置于温度为37℃、二氧化碳浓度为5％的培养箱中进行培养。在此过程中第一水凝胶将转化为溶胶，细胞在随之形成的第二水凝胶微孔中生长。
第七步，原位形成细胞球：用第五步中的培养箱参数，将细胞培养1～14天，每天更换培养液并在显微镜下观察细胞生长情况。细胞逐渐沉积在第二水凝胶微孔底部，生长增殖逐渐形成细胞球。
本发明方法的创新在于：
1、采用载细胞水凝胶作为可牺牲模板；
2、用可牺牲模板制作水凝胶微孔板，且微孔为圆底；
3、在圆底微孔中，模板牺牲，同时使细胞球原位形成。
实施例1
一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，包括以下步骤：
1)将载玻片进行疏水处理，制得疏水基片；疏水处理是将载玻片浸泡在疏水剂中处理后，烘干；所述疏水剂为子西莱自清洁剂；
2)将培养的MCF-7细胞消化，然后与第一水凝胶溶胶混合，制成第一水凝胶溶胶细胞混合液；第一水凝胶溶胶细胞混合液中细胞浓度为1×106个/mL；
其中，第一水凝胶溶胶为质量浓度3％的明胶；
3)采用移液枪将第一水凝胶溶胶细胞混合液以0.48μL每液滴的形式沉积至步骤1)制得的疏水基片表面，形成半球状液滴，在4℃下静置30min，使半球状液滴交联固化，制得载细胞的微尺度水凝胶模板；
4)在载细胞的微尺度水凝胶模板上方覆盖第二水凝胶溶胶，然后紫外照射20s，使第二水凝胶溶胶交联，形成第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构；
其中，第二水凝胶溶胶为质量浓度20％的聚乙二醇水凝胶；
5)将第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构置于培养皿中，加入培养液后进行培养，于37℃、二氧化碳浓度为5％的培养箱中进行培养7d，在此过程中，第一水凝胶融化为溶胶，细胞在第二水凝胶微孔板的微孔中生长，形成细胞球。
参见图2a～图2f，表明本发明方法能够通过调控第一水凝胶的体积可控制备不同大小的球面微孔，操作简单，易于控制；参加图3a～图3h，表明本发明方法能够通过调控初始细胞密度和球面微孔的大小原位可控制备不同大小的细胞球，在此过程中不需要人为种植细胞，避免了细胞种植不均匀和细胞流失的问题；参见图4，说明在微孔构建和细胞培养过程中，细胞能够保持很高的存活率。
实施例2
一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，包括以下步骤：
1)将聚甲基丙烯酸甲酯基片进行疏水处理，制得疏水基片；疏水处理是将聚四氟乙烯薄膜贴在聚甲基丙烯酸甲酯基片上，制得疏水表面；
2)将培养的MCF-7细胞消化，然后与第一水凝胶溶胶混合，制成第一水凝胶溶胶细胞混合液；第一水凝胶溶胶细胞混合液中细胞浓度为5×105个/mL；
其中，第一水凝胶溶胶为质量浓度5％的甲基丙烯酸酰化明胶；
3)采用注射器将第一水凝胶溶胶细胞混合液以0.23μL每液滴的形式沉积至步骤1)制得的疏水基片表面，形成半球状液滴，在0℃下静置30min，使半球状液滴交联固化，制得载细胞的微尺度水凝胶模板；
4)在载细胞的微尺度水凝胶模板上方覆盖第二水凝胶溶胶，然后在4℃下静置30min，使第二水凝胶溶胶交联，形成第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构；
其中，第二水凝胶溶胶为质量浓度3％的琼脂糖；
5)将第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构置于培养皿中，加入培养液后进行培养，于37℃、二氧化碳浓度为5％的培养箱中进行培养7d，在此过程中，第一水凝胶融化为溶胶，细胞在第二水凝胶微孔板的微孔中生长，形成细胞球。
实施例3
一种基于水凝胶微孔板构建的细胞球原位制备方法，包括以下步骤：
1)将聚甲基丙烯酸甲酯基片进行疏水处理，制得疏水基片；疏水处理将聚甲基丙烯酸甲酯基片进行硅烷化处理，制得疏水表面；
2)将培养的细胞消化，然后与第一水凝胶溶胶混合，制成第一水凝胶溶胶细胞混合液；第一水凝胶溶胶细胞混合液中细胞浓度为0.8×107个/mL；
其中，第一水凝胶溶胶为质量浓度5％的明胶；
3)采用细胞打印平台将第一水凝胶溶胶细胞混合液以0.48μL每液滴的形式沉积至步骤1)制得的疏水基片表面，形成半球状液滴，在4℃下静置10min，使半球状液滴交联固化，制得载细胞的微尺度水凝胶模板；
4)在载细胞的微尺度水凝胶模板上方覆盖第二水凝胶溶胶，然后在4℃下静置30min，使第二水凝胶溶胶交联，形成第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构；
其中，第二水凝胶溶胶为质量浓度20％的聚乙二醇水凝胶衍生物；
5)将第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构置于培养皿中，加入培养液后进行培养，于37℃、二氧化碳浓度为5％的培养箱中进行培养5d，在此过程中，第一水凝胶融化为溶胶，细胞在第二水凝胶微孔板的微孔中生长，形成细胞球。
综上所述，本发明方法先制备疏水基片和载细胞的微尺度水凝胶模板，通过倒模的方式制备水凝胶微孔板，在培养箱中进行细胞球的培养原位形成细胞球。本发明中使用载细胞的微尺度水凝胶作为构建带有球面微孔的水凝胶微孔板，无需后续人为进行细胞接种，孔内细胞密度可控，易于构建大小可控、形状规则的细胞球。本方法成本低、操作简单、可重复性好、适用范围广，在组织工程和再生医学以及药物筛选等领域中具有广阔的应用前景。
Claims (10)
1.一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将基片进行疏水处理，制得疏水基片；
2)将培养的细胞消化，然后与第一水凝胶溶胶混合，制成第一水凝胶溶胶细胞混合液；
其中，第一水凝胶溶胶为质量浓度3％～5％的明胶或甲基丙烯酸酰化明胶；
3)将第一水凝胶溶胶细胞混合液以0.05～2μL每液滴的形式沉积至步骤1)制得的疏水基片表面，形成半球状液滴，在0～20℃下静置至半球状液滴交联固化，制得载细胞的微尺度水凝胶模板；
4)在载细胞的微尺度水凝胶模板上方覆盖第二水凝胶溶胶，然后通过低温处理或紫外照射使第二水凝胶溶胶交联，形成第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构；
其中，第二水凝胶溶胶为质量浓度1％～5％的琼脂糖，或者为质量浓度5％～20％的聚乙二醇水凝胶及聚乙二醇水凝胶衍生物；
5)将第二水凝胶微孔板和载细胞的微尺度水凝胶模板复合结构置于培养皿中，加入培养液后进行培养，直至第一水凝胶融化为溶胶，在此培养过程中，细胞在第二水凝胶微孔板的微孔中生长，形成细胞球。
2.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤1)所述疏水处理具体为：
将基片浸泡在疏水剂中处理后，烘干；所述疏水剂为子西莱自清洁剂；
或者，将基片进行硅烷化处理；
或者，将聚四氟乙烯薄膜贴在基片上，制得疏水表面。
3.根据权利要求1或2所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，所述基片为玻璃基片或聚甲基丙烯酸甲酯基片。
4.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤3)是采用移液枪、注射器或细胞打印平台将步骤2)得到的第一水凝胶溶胶细胞混合液沉积到步骤1)制备的疏水基片表面形成半球状液滴。
5.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤3)所述的静置时间为10～60min。
6.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤4)所述的低温处理是在0～20℃下静置5～30min。
7.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤4)所述的紫外照射处理时间为10～120s。
8.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤5)所述的培养是将加入培养液的培养皿置于37℃、二氧化碳浓度为5％的培养箱中进行培养1～14d。
9.根据权利要求1所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤2)所述的培养的细胞为乳腺癌细胞MCF–7、造骨细胞、骨髓基质细胞、肝细胞、成纤维细胞、心肌细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、脂肪干细胞或神经前体细胞。
10.根据权利要求1或9所述的一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法，其特征在于，步骤2)所述的第一水凝胶溶胶细胞混合液中细胞浓度为0.01×107～5×107个/mL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510025985.8A CN104630148B (zh) | 2015-01-19 | 2015-01-19 | 一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510025985.8A CN104630148B (zh) | 2015-01-19 | 2015-01-19 | 一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104630148A CN104630148A (zh) | 2015-05-20 |
| CN104630148B true CN104630148B (zh) | 2017-06-06 |
Family
ID=53209398
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510025985.8A Active CN104630148B (zh) | 2015-01-19 | 2015-01-19 | 一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104630148B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106350437B (zh) * | 2016-06-13 | 2019-10-15 | 暨南大学 | 一种细胞球定位生物打印装置及方法 |
| CN112430565B (zh) * | 2020-09-18 | 2022-09-09 | 徐州医科大学 | 批量生产3d细胞球的培养基底的制备方法 |
| CN112626025A (zh) * | 2021-01-20 | 2021-04-09 | 温州医科大学附属第一医院 | 一种三维肿瘤细胞耐药模型及其制备方法 |
| CN113274555B (zh) * | 2021-05-31 | 2022-05-03 | 清华大学 | 一种具有仿生螺旋取向化微结构的人工心室及其制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1939280B1 (en) * | 2001-07-26 | 2010-07-07 | Transparent Inc. | Cultured cell construct which contains spheroids of cultured animal cells and the use thereof |
| CN101809446A (zh) * | 2007-09-27 | 2010-08-18 | 阿克纳公司 | 溶胶-凝胶相可逆性水凝胶模板及其应用 |
| CN101892285A (zh) * | 2010-06-23 | 2010-11-24 | 西安交通大学 | 一种三维细胞芯片的制备方法 |
| CN102266589A (zh) * | 2011-07-28 | 2011-12-07 | 西安交通大学 | 一种力学增强型载细胞微通道水凝胶的制备方法 |
| CN103351484A (zh) * | 2013-07-03 | 2013-10-16 | 苏州睿研纳米医学科技有限公司 | 一种微图案化水凝胶涂层及其制备方法与用途 |
| CN103756902A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-04-30 | 南开大学 | 一种用于三维多细胞球培养的细胞培养板及其制备方法 |
-
2015
- 2015-01-19 CN CN201510025985.8A patent/CN104630148B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1939280B1 (en) * | 2001-07-26 | 2010-07-07 | Transparent Inc. | Cultured cell construct which contains spheroids of cultured animal cells and the use thereof |
| CN101809446A (zh) * | 2007-09-27 | 2010-08-18 | 阿克纳公司 | 溶胶-凝胶相可逆性水凝胶模板及其应用 |
| CN101892285A (zh) * | 2010-06-23 | 2010-11-24 | 西安交通大学 | 一种三维细胞芯片的制备方法 |
| CN102266589A (zh) * | 2011-07-28 | 2011-12-07 | 西安交通大学 | 一种力学增强型载细胞微通道水凝胶的制备方法 |
| CN103351484A (zh) * | 2013-07-03 | 2013-10-16 | 苏州睿研纳米医学科技有限公司 | 一种微图案化水凝胶涂层及其制备方法与用途 |
| CN103756902A (zh) * | 2014-01-03 | 2014-04-30 | 南开大学 | 一种用于三维多细胞球培养的细胞培养板及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Application of Concave Microwells to Pancreatic Tumor Spheroids Enabling Anticancer Drug Evaluation in a Clinically Relevant Drug Resistance Model;Sang-Eun Yeon et al.;《PLOS one》;20130910;第8卷(第9期);第1-12页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104630148A (zh) | 2015-05-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104630148B (zh) | 一种基于水凝胶微孔板的细胞球原位制备方法 | |
| US20160257926A1 (en) | Self-assembling tissue modules | |
| CN111201047B (zh) | 组织构建体、其生产和使用方法 | |
| Morimoto et al. | Point-, line-, and plane-shaped cellular constructs for 3D tissue assembly | |
| Raof et al. | One-dimensional self-assembly of mouse embryonic stem cells using an array of hydrogel microstrands | |
| CN106978384A (zh) | 多孔微冰胶细胞三维培养载体及其制备方法和制备系统 | |
| CA2914463A1 (en) | Culture chamber and culture method | |
| CN108474140A (zh) | 大规模细胞生产系统 | |
| Park et al. | One-stop microfiber spinning and fabrication of a fibrous cell-encapsulated scaffold on a single microfluidic platform | |
| CN109689366A (zh) | 用于细胞扩增和相关应用的三维生物反应器 | |
| CN102575216A (zh) | 浸泡式灌注生物反应器 | |
| Zhang et al. | Fabrication of agarose concave petridish for 3D-culture microarray method for spheroids formation of hepatic cells | |
| CN103608451A (zh) | 培养方法、成熟脂肪细胞群和药物筛选方法 | |
| CN110003408A (zh) | 生物相容性多孔冷冻凝胶微球及其制备方法 | |
| CN102787364B (zh) | 一种制作弧形的凹陷小孔的pdms聚合物芯片的方法与应用 | |
| Shao et al. | Hierarchically inverse opal porous scaffolds from droplet microfluidics for biomimetic 3D cell co-culture | |
| CN103261395A (zh) | 具有便于进入培养腔的盖子的生物反应器 | |
| CN206843497U (zh) | 成型模具板、成型基板及细胞聚球培养模具 | |
| CN101402917B (zh) | 一种生产组织工程产品的生物反应器 | |
| CN1304566C (zh) | 带有培养装置的类复杂器官前体及其构建和培养方法 | |
| CN207405148U (zh) | 多孔微冰胶细胞三维培养载体的制备系统 | |
| CN104232484A (zh) | 一种细胞共培养模型及制备方法 | |
| Li et al. | Biomaterial scaffolds with biomimetic fluidic channels for hepatocyte culture | |
| CN113755425B (zh) | 一种载三维胰岛β细胞聚集体的多孔微载体的制备方法 | |
| CN104232486A (zh) | 用于单细胞克隆培养用培养板及其应用方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |