CN104629489B - 一种提取草莓果实中花青苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及花青苷分离纯化技术领域,公开了一种提取草莓果实中花青苷的方法,首先将草莓果实利用冷冻干燥机进行干脱水干燥,脱脂得到草莓果实粉末,再将草莓粉末经提取、浓缩,再溶解,最后萃取得到精制花青苷,再利用高效液相色谱进行检测。利用本发明的方法可从草莓果实中快速、简单的提取得到含量大于90%的花青苷;解决了现有技术中提取花青苷时,提取液浓度低的技术问题。本发明通过冷冻干燥草莓果实,得到草莓粉末,在粉碎草莓的同时,没有破坏花青苷,进而保障了最终得到的花青苷浓度高。本发明选用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl‑甲醇溶液提取,阻止无酰基花青苷的降解;解决了现有技术中浓缩花青苷时pH值升高,进而花青苷会被降解的技术问题。
Description
技术领域
本发明涉及花青苷分离纯化技术领域,尤其涉及一种提取草莓果实中花青苷的方法。
背景技术
花青苷是一类广泛存在于植物花、果、茎、叶和种子中的水溶性天然色素,在27个科72个属中都有分布,其中以葡萄皮、阿龙尼亚苦味果、黑醋栗、草莓、树莓和蓝莓等含量最为丰富。其中最常见的有6种:天竺葵花色素、矢车菊花色素、飞燕草花色素、芍药花色素、矮牵牛花色素、锦葵花色素。
草莓是一种多年生草本植物,果实色、香、味俱佳,富含多种营养物质。在草莓成熟过程中最直观的特征是色泽的变化,花青苷在草莓果实色泽的形成过程中发挥着重要作用。花青苷对果实品质具有双重意义。一方面,花青苷的积累水平是评价果实成熟度和果品质量的一个重要指标,另一方面,作为食物同样为消费者提供基本的有益身体健康的元素。已有研究表明水果中的花青苷具有抗氧化、清除活性氧、延缓衰老的作用,此外花青苷还有增强抵抗力、恢复视力、减少肥胖产生等作用。有报道称浆果和红酒等富含花青苷的食物有利于人们的健康,特别是对预防心血管疾病和特定的癌症有特别功效。因此,开展草莓花青苷合成积累调控机理研究对改善果实品质和遗传育种具有重要意义。建立一种草莓果实花青苷提取及其检测方法对研究草莓花青苷功效及调控积累机制具有重要的作用。
发明内容
本发明针对现有中的缺点,公开了一种提取草莓果实中花青苷的方法。
为了解决上述技术问题,本发明通过下述技术方案得以解决。
一种提取草莓果实中花青苷的方法,包括以下步骤,
A.草莓果实冷冻干燥,获得草莓粉末;本发明通过冷冻干燥草莓果实,得到草莓粉末,在粉碎草莓的同时,没有破坏花青苷,进而保障了最终得到的花青苷纯度高。
B.对草莓粉末进行脱脂,得到脱脂草莓粉末;
C.黑暗状态下,温度控制在4℃,用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止;将提取液离心后,滤掉残渣,取上清液进行浓缩,得到花青苷粗提物;本发明选用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液提取,阻止无酰基花青苷的降解。即使随着被浓缩,也不会降解花青苷;解决了现有技术中浓缩花青苷时pH值升高,进而花青苷会被降解的技术问题。本发明提取花青苷时,用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,能够彻底提取花青苷。
D.精制花青苷粗提物。利用高效液相色谱检测花青苷。利用本发明的方法可从草莓果实中快速、简单的提取得到含量大于90%的花青苷。
作为优选,步骤A中,用冷冻干燥机对草莓果实进行冷冻干燥。草莓果实的冷冻干燥是利用冷冻干燥机进行的,样品处理时间为24~48小时,具体以草莓中的水份全部冻干为准。冷冻干燥机型号可选用LABCONCO Freezone-18L。
作为优选,步骤B中,用索氏提取器对草莓粉末进行脱脂。索氏提取仪型号可选用SXT-02。
作为优选,将草莓粉末加入到索氏提取器中,加入石油醚,其中草莓粉末与石油醚的质量比为1:3~10,反应2~24小时。
作为优选,步骤C中,用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液提取脱脂草莓粉末中的花青苷,提取2~24小时。花青苷易溶于甲醇,且甲醇较其他醇对花青苷的提取率高。花青苷的稳定性受酶、温度、氧气、光、pH值、金属离子等理化性质的影响,在中性和碱性条件下不稳定。本发明选用HCl-甲醇溶液提取,能够破坏植物细胞膜并溶解水溶性色素,且提取得到的花青苷稳定。
作为优选,步骤C中,在28-35℃浓缩花青苷。在28-35℃浓缩花青苷时,花青苷不会被降解。
作为优选,步骤C中,在30℃用旋转蒸仪浓缩花青苷。在30℃用旋转蒸仪浓缩花青苷,花青苷不会被降解,而且含量大于90%的花青苷。
作为优选,步骤D中,将花青苷粗提物利用水进行溶解,溶解后进行固相萃取,用纯水洗涤、15-25%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
作为优选,步骤D中,将花青苷粗提物利用蒸馏水进行溶解,溶解后放置于固相萃取仪中进行固相萃取,用纯水洗涤、20%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
利用本发明的方法可从草莓果实中快速、简单的提取得到含量大于90%的花青苷;解决了现有技术中提取花青苷时,提取液浓度低的技术问题。
本发明通过冷冻干燥草莓果实,得到草莓粉末,在粉碎草莓的同时,没有破坏花青苷,进而保障了最终得到的花青苷纯度高。
本发明选用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液提取,阻止无酰基花青苷的降解。即使随着被浓缩,也不会降解花青苷;解决了现有技术中浓缩花青苷时pH值升高,进而花青苷会被降解的技术问题。本发明提取花青苷时,用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,能够彻底提取花青苷。
附图说明
图1是实施例7提取的花青苷的高效液相色谱图。
图2是实施例8提取的花青苷的高效液相色谱图。
具体实施方式
实施例1
一种提取草莓果实中花青苷的方法,包括以下步骤,
A.草莓果实冷冻干燥,获得草莓粉末;
B.对草莓粉末进行脱脂,得到脱脂草莓粉末;
C.黑暗状态下,温度控制在4℃,用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止;将提取液离心后,滤掉残渣,取上清液进行浓缩,得到花青苷粗提物;
D.精制花青苷粗提物。
实施例2
一种提取草莓果实中花青苷的方法,包括以下步骤,
A.草莓果实冷冻干燥,用冷冻干燥机对草莓果实进行冷冻干燥,获得草莓粉末;
B.对草莓粉末进行脱脂,将草莓粉末加入到索氏提取器中,加入石油醚,其中草莓粉末与石油醚的质量比为1:3,反应2小时,得到脱脂草莓粉末;
C.黑暗状态下,温度控制在4℃,用体积浓度为0.1%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,提取2小时;将提取液离心后,滤掉残渣,取上清液进行在28℃,浓缩,得到花青苷粗提物;
D.将花青苷粗提物利用水进行溶解,溶解后进行固相萃取,用纯水洗涤、15%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
实施例3
一种提取草莓果实中花青苷的方法,包括以下步骤,
A.草莓果实冷冻干燥,用冷冻干燥机对草莓果实进行冷冻干燥,获得草莓粉末;
B.对草莓粉末进行脱脂,将草莓粉末加入到索氏提取器中,加入石油醚,其中草莓粉末与石油醚的质量比为1:10,反应24小时,得到脱脂草莓粉末;
C.黑暗状态下,温度控制在4℃,用体积浓度为0.5%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,提取24小时;将提取液离心后,滤掉残渣,取上清液进行在35℃,浓缩,得到花青苷粗提物;
D.将花青苷粗提物利用水进行溶解,溶解后进行固相萃取,用纯水洗涤、25%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
实施例4
一种提取草莓果实中花青苷的方法,包括以下步骤,
A.草莓果实冷冻干燥,用冷冻干燥机对草莓果实进行冷冻干燥,获得草莓粉末;
B.对草莓粉末进行脱脂,将草莓粉末加入到索氏提取器中,加入石油醚,其中草莓粉末与石油醚的质量比为1:6,反应12小时,得到脱脂草莓粉末;
C.黑暗状态下,温度控制在4℃,用体积浓度为0.3%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,提取12小时;将提取液离心后,滤掉残渣,取上清液进行在30℃,用旋转蒸仪浓缩,得到花青苷粗提物;
D.将花青苷粗提物利用蒸馏水进行溶解,溶解后放置于固相萃取仪中进行固相萃取,用纯水洗涤、20%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
实施例5
一种提取草莓果实中花青苷的方法,包括以下步骤,
A.草莓果实冷冻干燥,用冷冻干燥机对草莓果实进行冷冻干燥,获得草莓粉末;
B.对草莓粉末进行脱脂,将草莓粉末加入到索氏提取器中,加入石油醚,其中草莓粉末与石油醚的质量比为1:4,反应5小时,得到脱脂草莓粉末;
C.黑暗状态下,温度控制在4℃,用体积浓度为0.2%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,提取10小时;将提取液离心后,滤掉残渣,取上清液进行在32℃,浓缩,得到花青苷粗提物;
D.将花青苷粗提物利用水进行溶解,溶解后进行固相萃取,用纯水洗涤、16%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
实施例6
一种提取草莓果实中花青苷的方法,包括以下步骤,
A.草莓果实冷冻干燥,用冷冻干燥机对草莓果实进行冷冻干燥,获得草莓粉末;
B.对草莓粉末进行脱脂,将草莓粉末加入到索氏提取器中,加入石油醚,其中草莓粉末与石油醚的质量比为1:9,反应18小时,得到脱脂草莓粉末;
C.黑暗状态下,温度控制在4℃,用体积浓度为0.45%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,提取20小时;将提取液离心后,滤掉残渣,取上清液进行在32℃,浓缩,得到花青苷粗提物;
D.将花青苷粗提物利用水进行溶解,溶解后进行固相萃取,用纯水洗涤、23%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
实施例7
草莓品种选取幸香为实验对象。
A.利用液氮将草莓果实在多功能粉碎机的帮助下研磨成粉末。称取147.3克草莓果实粉末,放置于冷冻脱水干燥仪上,24小时后冻干,获得草莓干粉19.3克;
B.将冻干的草莓粉末放置于索氏提取仪上,利用193ml石油醚进行脱脂,反应时间16小时;常温过滤回收石油醚,滤渣常温干燥除去残存的石油醚,获得脱脂草莓粉末。
C.加入50ml 0.5%的HCl-甲醇溶液,放置于4℃冰箱中提取12小时,离心过滤转移上清液,残渣再用0.5%的HCl-甲醇反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,合并上清液;离心后,滤掉残渣,在旋转蒸发仪上30℃下旋转蒸发24小时。
D.向花青苷粗提物中加入20ml蒸馏水进行溶解,粗提液放置于固相萃取仪中进行固相萃取,先用纯水洗涤,再用20%甲醇淋洗,最后用纯甲醇洗脱得到精制花青苷;
E.将花青苷精制原液过0.22μm有机滤膜,将精制原液稀释10倍进行高效液相检测。高效液相色谱的检测条件是:waters公司的1525液相色谱仪,检测器是2487紫外检测器,液相柱是Symmetry C18柱(150×4.6mm,5μm),检测波长为520nm,进样量为每针20μl,流动相A为1%甲酸,流动相B为乙腈,采用线性梯度设计为:0~13min,乙腈为0~20%,20min,乙腈为40%,25min,乙腈为0。出峰时间在9.1min。
F.精制花青苷在旋转蒸发仪RE52A上30℃下旋转蒸发24小时后称得重量为14.391mg,利用液相色谱仪得到花青苷总量为13.212mg,幸香草莓中花青苷含量为89.7mg/kg鲜重,精提物中花青苷含量为91.81%(分析色谱图如图1所示)。
实施例8
草莓品种选取越丽为实验对象。
A.利用液氮将草莓果实在高速多功能粉碎机的帮助下研磨成粉末。称取200克草莓果实粉末,放置于冷冻脱水干燥仪上,36小时后冻干,获得草莓干粉19克;
B.将冻干的草莓粉末放置于索氏提取仪上,利用200ml石油醚进行脱脂,反应时间20小时;常温过滤回收石油醚,滤渣常温干燥除去残存的石油醚,获得脱脂草莓粉末。
C.加入60ml 0.5%的HCl-甲醇,放置于4℃冰箱中提取12小时,离心过滤转移上清液,残渣再用0.5%的HCl-甲醇反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止,合并上清液;离心后,滤掉残渣,将上清液在旋转蒸发仪上30℃下旋转蒸发24小时。
D.向花青苷粗提物中加入25ml蒸馏水进行溶解,粗提液放置于固相萃取仪中进行固相萃取,先用纯水洗涤,再用20%甲醇淋洗,最后用纯甲醇洗脱得到精制花青苷;
E.将花青苷精制原液过0.22μm有机滤膜,将精制原液稀释10倍进行高效液相检测。高效液相色谱的检测条件是:waters公司的1525液相色谱仪,检测器是2487紫外检测器,液相柱是Symmetry C18柱(150×4.6mm,5μm),检测波长为520nm,进样量为每针20μl,流动相A为1%甲酸,流动相B为乙腈,采用线性梯度设计为:0~13min,乙腈为0~20%,20min,乙腈为40%,25min,乙腈为0。出峰时间在8.6min。
F.精制花青苷在旋转蒸发仪RE52A上30℃下旋转蒸发24小时后称得重量为22.758mg,利用液相色谱仪得到花青苷总量为21.22mg,幸香草莓中花青苷含量为106.1mg/kg鲜重,精提物中花青苷含量为93.24%(分析色谱图如图2所示)。
总之,以上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰,皆应属本发明专利的涵盖范围。
Claims (7)
1.一种提取草莓果实中花青苷的方法,其特征在于:包括以下步骤,
A.草莓果实冷冻干燥,获得草莓粉末;
B.对草莓粉末进行脱脂,得到脱脂草莓粉末;
C.黑暗状态下,温度控制在4℃,用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液反复提取,直到脱脂草莓粉末变成白色为止;将提取液离心后,滤掉残渣,取上清液进行浓缩,得到花青苷粗提物;
D.精制花青苷粗提物;
步骤C中,用体积浓度为0.1%~0.5%的HCl-甲醇溶液提取脱脂草莓粉末中的花青苷,提取2~24小时;
步骤D中,将花青苷粗提物利用水进行溶解,溶解后进行固相萃取,用纯水洗涤、15-25%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
2.根据权利要求1所述的提取草莓果实中花青苷的方法,其特征在于:步骤A中,用冷冻干燥机对草莓果实进行冷冻干燥。
3.根据权利要求1所述的提取草莓果实中花青苷的方法,其特征在于:步骤B中,用索氏提取器对草莓粉末进行脱脂。
4.根据权利要求3所述的提取草莓果实中花青苷的方法,其特征在于:将草莓粉末加入到索氏提取器中,加入石油醚,其中草莓粉末与石油醚的质量比为1:3~10,反应2~24小时。
5.根据权利要求1所述的提取草莓果实中花青苷的方法,其特征在于:步骤C中,在28-35℃浓缩花青苷。
6.根据权利要求1所述的提取草莓果实中花青苷的方法,其特征在于:步骤C中,在30℃用旋转蒸仪浓缩花青苷。
7.根据权利要求1所述的提取草莓果实中花青苷的方法,其特征在于:步骤D中,将花青苷粗提物利用蒸馏水进行溶解,溶解后放置于固相萃取仪中进行固相萃取,用纯水洗涤、20%甲醇淋洗、纯甲醇洗脱后,得到花青苷。
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