CN104623262B - 一种参麦注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种参麦注射液及其制备方法，该参麦注射液起到改善心脏功能、维护心肌缺血时的血流动力学作用，该方法能够简单易行富集皂苷类成分，有效去除杂质。

Description

一种参麦注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种参麦注射液，及其制备方法。

背景技术

参麦注射液（Shenmai Injection，SMI）方源出自明代（1706年）秦景明《症因脉治》中医古方“参冬饮”处方：人参1两，麦门冬1两。1977年，根据中医古方“参冬饮”,试制出了参麦注射液。

参麦注射液是根据中医古方“生脉散”发展而来的新型中药注射剂。其主要成分为红参和麦冬，经现代工艺技术提取加工精制而成。从中医药学角度看，红参具有大补元气，复脉固脱，益气摄血，即很好的强心作用，用于体虚欲脱，肢冷脉微，气不摄血，崩漏下血。而麦冬则能养阴生津，润肺清心，用于肺燥干咳，虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，内热消渴，肠燥便秘；心阴不足之心悸易惊及热病后期热伤津液等证。可见，该方对临床上各系统的相关疾病都有很好的治疗作用。由此，我国早在70年代，就已将参麦注射液普遍应用于心血管等各类疾病的治疗领域。

目前，参麦注射液新标准已经执行，但从其标准对质量的控制来看，只对3个人参皂苷的含量进行了控制，对于其它成分并没有限量和定量标准，因此要控制产品的质量，使有效成分更多更稳定的存在于该品种中，实际很难。所以，如何有效地、特异性的控制参麦注射液的品质成为人们研究的热点。

现有技术的参麦注射液的方法为：红参、麦冬二味（红参切薄片或粉碎），分别加90%乙醇浸渍后加热回流提取（红参6次、麦冬2次，每次用3倍量90%乙醇回流提取2小时），收集提取液，减压回收乙醇至每1ml含生药0.3-0.4g，冷藏，滤过，加1％（g/ml）活性炭，搅拌1小时后滤过，滤液（其中红参滤液用10%NaOH调至近中性）减压回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至每1ml含生药约0.4g，混匀，冷藏，滤过，用10%NaOH调pH，煮沸40分钟，冷至80℃，加0.1％（g/ml）活性炭，搅拌10分钟，滤过，滤液冷藏，滤过。取混匀后的滤液，加入5g聚山梨酯80，搅匀，加注射用水至1000ml，用10%NaOH调pH，过滤，灌封，灭菌，即得。

上述方法采用活性炭无法完全吸附参麦注射液中的杂质，对除杂效果不是很显著。

为此，对于有很好疗效的参麦注射剂制备方法和含量的控制是急需解决的问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明目的在于提供一种参麦注射液，并提供一种检测方法对其物理化学特性进行全面地表征。

本发明另一目的在于提供上述参麦注射液的制备方法。

本发明通过以下技术方案进行实施。

本发明一种参麦注射液的制备方法如下：

红参提取：取红参加乙醇进行回流提取，浓缩滤液，加注射用水适量，过大孔吸附树脂柱，用50-70%乙醇洗脱吸附在柱上的成分，浓缩洗脱液，冷藏过滤，加活性炭，搅拌过滤，脱碳，补加注射用水，待配制；

麦冬提取：取麦冬药材按红参提取法进行提取；

取上述红参提取液、麦冬提取液分别初滤后再超滤，混合滤液，加入聚山梨酯80，使其完全溶解，补水，搅匀，调pH值，精滤，灌封，灭菌，得参麦注射液。

优选地，本发明一种参麦注射液的制备方法如下：

按照下述重量份取药材：红参100份，麦冬100份；

红参提取：取红参片加入回流提取罐中，90%以上乙醇加热回流提取3-5次，每次1-2小时，过滤回流液，滤液减压回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药量浓度为0.2g/ml，搅匀后，过滤，用大孔吸附树脂柱处理，收集从大孔吸附树脂上洗脱的60%乙醇液，浓缩回收乙醇至药液无醇味，并控制药液中生药量为0.4g/ml；在2-4℃下冷藏36小时-72小时，冷藏液经过0.45μm微孔滤膜过滤；滤液加入0.1%活性炭，搅拌30min后，过滤脱碳，即得红参提取液；

麦冬提取：取麦冬药材，按红参提取方法处理得麦冬提取液；

取上述红参提取液和麦冬提取液，分别用0.45μm微孔滤膜过滤后，再经超滤（5KD-10KD），混合滤液，加入聚山梨酯80（0.05-0.1%），使其完全溶解，补水至每毫升含红参药材0.1g，搅匀，调pH值7.5，精滤，灌封，灭菌。

为了能够使大孔树脂完全吸附，优选取大孔树脂10份，将其装入层析柱中，保持树脂床径高比为1:5-1:7。

由于本发明中存在大量糖、有机酸和小极性挥发油，为了更好的除杂质，本发明优选除杂方法为，将药液缓慢加入到大孔树脂柱上，流速为1-3BV/h(优选2BV/h)，当药液面基本上达到树脂床面时，缓慢加入注射用水为2-5BV体积（优选3BV）洗脱，弃去水洗脱液。

本发明的大孔树脂前处理方法：先用纯化水冲洗树脂柱2-5BV体积（优选3BV），流速为1-3BV/h(优选2BV/h)；后用乙醇冲洗树脂柱于2-5BV体积（优选3BV），流速为1-3BV/h(优选2BV/h)，再用水冲洗树脂柱，流速为1-3BV/h(优选2BV/h)，直至无醇味。

本发明一种参麦注射液具有以下理化参数：

HPLC指纹图谱中，单峰面积占总峰面积2%以上的有14个峰，指纹图谱中该14个峰的出峰时间在12-84min，平均出峰时间为59-62min；以6#峰为参照取相对面积，平均相对峰面积为0.40-0.55；

一测多评法测定本品：每1ml药液中，人参皂苷Re为0.08-0.16mg/ml，Rg1为0.15-0.3mg/ml，Rf为0.03-0.7 mg/ml，Rb1为0.1-0.4mg/ml。

上述理化参数的测定条件如下：

HPLC指纹图谱测定：

（1） 高效液相色谱条件：

固定相采用Waters symmetry shield^TMRP18色谱柱（4.6mm×250mm；5.0μm）； 柱温30℃，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1进行梯度洗脱；检测波长为203nm，理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于1350000；

表1 高效液相色谱法测定指纹图谱洗脱梯度表

（2）参照溶液的制备

精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加20％乙腈制成每1ml含0.20mg的溶液，即得；

（3）测定法

分别精密吸取对照品溶液与本品各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。

一测多评法测定人参皂苷含量：

（1）高效液相色谱条件：

固定相采用AcclaimTM120 C18色谱柱（4.6mm×250mm；5.0μm）；以水为流动相A，乙腈为流动相B，按表2进行梯度洗脱；检测波长为203nm，柱温30-50℃，理论塔板数按人参皂苷Rb1计应不低于10000；

表2 一测多评高效液相色谱法测定人参皂苷含量洗脱梯度表

（2）对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加20％乙腈制成每1ml分别含0.20mg的溶液，即得；

（3）测定法

分别精密吸取对照品溶液与本品各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；

（4）结果计算

以对照品溶液中人参皂苷Rb1峰面积为基准，采用相关系数法计算人参皂苷Rg1、Re、Rf的含量；

计算公式：C=A/A_Rb1*C_Rb1*f

C：被测样品某皂苷的浓度；

A：被测样品某皂苷的峰面积；

A_Rb1：对照品溶液Rb1的峰面积；

C_Rb1：对照品溶液Rb1的浓度；

f： 相关系数，见下表3

表3 人参皂苷一测多评相关系数列表

本发明一种参麦注射液的理化参数如下：

HPLC指纹图谱：

按以上所述色谱方法进行检测，对大于总峰面积2%的峰进行积分，参麦注射液表现出14个特征峰，以6号峰人参皂苷Rb1为参照峰，各峰的相对保留时间（RRT）和相对峰面积（RA）见表4：

表4 相对保留时间相对峰面积表

在上述指纹图谱中，已知峰3为人参皂苷Rg1，峰4为人参皂苷Re，峰5为人参皂苷Rf，峰6为人参皂苷Rb1。

优选地，本发明一种参麦注射液的指纹图谱理化参数如下：按以上所述色谱方法进行检测，对大于总峰面积2%的峰进行积分，参麦注射液表现出14个特征峰，以6号峰人参皂苷Rb1为参照峰，各峰的相对保留时间和相对峰面积见表5：

表5 相对保留时间相对峰面积表

人参皂苷含量：

按以上所述色谱方法进行检测，对4种人参皂苷（人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1）含量测定结果见表6：

表6 人参皂苷含量表

优选地，本发明一种参麦注射液的含量测定理化参数如下：按以上所述色谱方法进行检测，对4种人参皂苷（人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1）含量测定结果见表7：

表7 人参皂苷含量表

通过采用本发明特定的提取和分析方法，以指纹图谱检测和一测多评法测定四种人参皂苷含量的方式全面的表征了本发明一种参麦注射液；与仅用三个成份来表征中药制剂中复杂的生物活性成分的现有技术相比较，更加容易客观地控制中药制剂内在质量。

通过特定的分离、鉴定方法，对本发明一种参麦注射液中活性成分进行了鉴定；按照前述指纹图谱标实的成分进行了鉴定。对于化合物的鉴定主要基于LC-MSⁿ数据的解析以及与相应对照品LC-MSⁿ数据比较而进行。最终，通过比较使大部分成分得到了确认。由此可见，采用本发明特定LC-MSⁿ方法，对于本发明一种参麦注射液进行化学成分分析，可以得到丰富的生物活性成分的结构信息，由此表征的中药制剂具有准确性、特异性等特点，大大优于现有技术的方法。

指纹图谱中峰3、4、5、6化学成分的确定：

化学成分分离：

A、取红参提取液100ml，用旋转蒸发器减压浓缩至体积20ml，作为待分离样；

B、取人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1 四个标准品（中国食品药品检定研究院）配制浓度分别为0.1mg/ml、0.1mg/ml、50μg/ml、0.1mg/ml的对照品溶液，作标准物质样；

C、取标准物质样和待分离样用制备液相进行分离：Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（250 mm×9.4 mm，5 μm），柱温30℃，检测波长203nm，进样量200μl；按表8进行梯度洗脱，收集分离样中与标准物质样保留时间一致的色谱峰；

D、将收集到的四个色谱峰流份减压蒸干，用甲醇溶解，重结晶得四个峰的化学成分；

表8 半制备液相色谱分离人参皂苷洗脱梯度表

利用现代波谱技术（NMR、LC-MS、UV、IR）技术，对该成分进行鉴定，得出分离出的四个化学成分与标准品成分一致；利用LC-DAD技术，对四个峰进行指认，确定峰3、4、5、6分别为人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1。

四个人参皂苷化学结构如下：

本发明每1ml参麦注射液中，含人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）应不得少于0.15mg/ml，人参皂苷Re（C₄₈H₈₂O₁₈）应不得少于0.08mg/ml，人参皂苷Rf（C₄₂H₇₂O₁₄）应不得少于0.03mg/ml，Rb₁(C₅₄H₉₂O₂₃)应不得少于0.1mg/ml；人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）、人参皂苷Re（C₄₈H₈₂O₁₈）、人参皂苷Rf（C₄₂H₇₂O₁₄）和人参皂苷Rb₁(C₅₄H₉₂O₂₃)的总量计，应为0.38～1.00mg/ml。

以下通过本发明一种参麦注射液对于心肌缺血犬血流动力学的影响

目的 通过观察本发明参麦注射液对麻醉犬心肌缺血血流动力学影响，研究本品对心肌缺血的药效作用：

方法 将杂种犬随机分为5组，每组6只，分别为急性心肌缺血模型组（5%葡萄糖生理盐水10ml/kg）、阳性对照药组（丹参注射液0.62ml/kg），参麦注射液大剂量组（8.75ml/kg）、中剂量组（4.375ml/kg）、小剂量组（1.75ml/kg）。丹参组为1倍临床剂量，各剂量组分别相当于5倍、2.5倍和1倍临床用量。采用结扎犬冠状动脉方法建立急性心肌缺血模型，造模成功后，15min时静脉滴注相应药液。记录给药前、给药后5、15、30、60、90、120和180min时血流动力学指标，包括心率（HR）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、左室收缩压（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）、左室内压最大变化速率（±dp/dtmax）、冠脉流量（CBF）和心输出量（CO），通过公式计算出平均动脉压（MAP）、外周阻力（TPR）和心脏每分做功（MW）；

结果 血流动力学变化：冠脉结扎后，模型组犬HR和SBP轻微加快和升高，DBP稍有下降，LVSP、±dp/dtmax均显著降低，LVEDP明显升高；参麦注射液各剂量组和丹参组均显著减慢心肌缺血犬HR，显著降低DBP（P<0.05~0.01），使SBP、LVSP先降低（P<0.05~0.01）而后升高，并对抗LVEDP升高，同时使±dp/dtmax先减慢（P<0.05~0.01）后加快；增加CBF和CO（P<0.05），降低TPR（P<0.05），减少MW（P<0.05~0.01）；与丹参组比，参麦注射液减慢HR和降低DBP作用较丹参组更为明显（P<0.05~0.01），同时，参麦注射液大剂量、原工艺参麦注射液、新工艺参麦注射液小剂量分别在90min、60min后升高SBP较丹参组明显（P<0.05）；参麦注射液大剂量组在30-90min期间LVSP明显低于丹参组（P<0.05），其余各剂量参麦组各时间段降低LVSP作用与丹参组相当（P>0.05）；参麦注射液各剂量组对抗LVEDP升高作用也与丹参组相似，增加CBF、CO、MW作用与丹参组比较无显著差异，而参麦注射液加快±dp/dtmax均较丹参组更为明显（P<0.05~0.01）；

结论 参麦注射液可减慢冠脉结扎犬HR，降低SBP、DBP和MAP、TPR，MW从而降低心脏负荷，减少心脏做功；

参麦注射液升高LVSP和±dp/dtmax，增强心脏收缩功能，对抗LVEDP的升高，改善心脏舒张功能；

参麦注射液增加CBF和CO，有效改善缺血心脏心功能；

通过上述作用，参麦注射液起到改善心脏功能、维护心肌缺血时的血流动力学作用。

1材料与方法

1.1 药品与试剂

参麦注射液：黄色透明液体，50ml/瓶，批号：K-110401，四川雅安三九药业有限公司生产；

丹参注射液：黄色透明液体，四川雅安三九药业有限公司生产，批号：K-100112，10ml/支；

1.2 动物与试验仪器

试验动物：杂种犬，体重10-14kg，雌雄兼用，由四川大学华西医学实验动物中心提供；

试验仪器：BL-420F生物信号采集与处理系统：成都泰盟科技有限责任公司生产并提供；HX-300动物呼吸机：成都泰盟科技有限责任公司；电磁流量计（NIHONKOHDEN）：0.16mm，日本光电公司生产；

1.3 试验方法

将杂种犬随机分为5组，每组6只（按有效数据统计只数计算），分别为模型组（5%葡萄糖生理盐水10ml/kg）、阳性对照药组（丹参注射液0.62ml/kg），参麦注射液大（8.75ml/kg）、中（4.375ml/kg）、小（1.75ml/kg）剂量组；

丹参组用量相当于1倍临床剂量，两种参麦各剂量组分别相当于5倍、2.5倍和1倍临床用量。各组药液均用5%葡萄糖生理盐水稀释为100ml液体进行静脉滴注，模型组直接使用不含药物的5%葡萄糖生理盐水；

各组犬经后肢隐静脉注射3%戊巴比妥钠1ml/kg麻醉，固定于手术台，将心电图电极插入四肢皮下，以标准Ⅱ导联监测动物心电图；手术分离气管、右侧颈总动脉、右侧颈内静脉；行气管插管，连接呼吸机以保持呼吸通畅；行右侧颈总动脉插管，通过压力转换器与BL-420F生物信号采集与处理系统连接，记录收缩压（SBP）、舒张压（DBP）；于第4肋间隙开胸，扩胸器辅助打开视野，剪破心包膜，于左冠状动脉前降支第二个主要分支以下小心游离一段动脉，穿线备用，同时小心分离一段冠状动脉左旋支固定电磁流量计记录冠脉流量（CBF）；另分离升主动脉根部，固定电磁流量计记录心输出量（CO）；行左心室插管，通过压力转换器与BL-420F生物信号采集与处理系统连接，记录左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压（LVEDP）和左室等容期最大上升和下降速率（±dp/dtmax）等；分离右侧股静脉，建立静脉输液通道，备给药用；分离右侧股动脉，备取血用；待各血流动力学指标稳定后，结扎LAD，分别记录结扎后5min、15min、30min、60min、90min、120min、180min各血流动力学指标、CBF及CO，结扎15分钟时各组经股静脉滴注相应药液；

根据公式分别计算外周阻力（TPR）、心脏做功（MW），计算公式如下：平均动脉压（MAP）=（SBP+2×DBP）/3、外周阻力TPR=平均动脉压（MAP）/心输出量（CO）、心脏做功MW（每分做功）=（MAP-6）×CO ×13.6/ 1000；

1.4 数据处理

各组数据以均数±标准差表示，各时间点数据与结扎前做差后用SPSS13.0统计软件统计后进行组间比较t检验，检验水平α=0.05。

2 试验结果

2.1参麦注射液对心肌缺血犬心率（HR）的影响，结果见表9：

表9参麦注射液对心肌缺血犬心率（HR）的影响（次/分, ±s, n=6）

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表9可见，冠脉结扎后，模型组HR有所加快；与模型组比，参麦注射液大剂量组在结扎30min后、中剂量组分别在结扎30min、90min后使HR显著减慢（P<0.05）；丹参组亦在结扎60min后使HR显著减慢（P<0.05~0.01）；与丹参组比，参麦注射液各剂量组与丹参组比，各剂量各时间段减慢HR作用与之比较无显著差异；

说明参麦注射液能明显减慢冠脉结扎犬心率，该作用有利于降低心肌缺血时心脏做功而有效保护心脏。

2.2参麦注射液对心肌缺血犬收缩压（SBP）的影响，结果见表10：

表10参麦注射液对心肌缺血犬收缩压（SBP）的影响(mmHg, ±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表10结果显示，冠脉结扎后，模型组SBP有所升高；与模型组比，参麦注射液大、中剂量组，以及丹参组SBP于结扎30min后显著降低（P<0.05~0.01），随后逐渐有所回升，但未升至结扎前水平，也未超过180min时模型组水平（P<0.05~0.01）；与丹参组比，参麦注射液大剂量组在结扎90~120min时、两种参麦注射液小剂量组分别在结扎60 和90 min后升高SBP作用较丹参组明显（P<0.05~0.01）；

说明参麦注射液均对SBP产生先降低，后回升的作用。参麦注射液显著降低心肌缺血犬SBP作用可能与该药在用药初期显著抑制缺血时交感兴奋，降低心脏做功有关。

2.3参麦注射液对心肌缺血犬舒张压（DBP）的影响，结果见表11：

表11参麦注射液对心肌缺血犬舒张压（DBP）的影响(mmHg, ±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表11结果显示，冠脉结扎后，模型组DBP稍有下降；与丹参组比，参麦注射液各剂量与丹参组比较无明显差异，说明参麦注射液有明显扩张冠脉结扎犬外周血管作用；

参麦注射液的扩张外周血管作用可显著降低冠脉结扎犬血管阻力，由此降低心脏负荷，减少心脏做功，有利于保护缺血心脏。

2.4参麦注射液对心肌缺血犬平均动脉压（MAP）的影响，结果见表12：

表12参麦注射液对心肌缺血犬平均动脉压（MAP）的影响(mmHg, ±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表12显示，冠脉结扎后模型组MAP较结扎前有所升高；与模型组比，参麦注射液各剂量组以及丹参组MAP于结扎30min后显著降低（P<0.05~0.01），随后逐渐有所回升，但仍明显较模型组低，（P<0.05~0.01）；与丹参组比，参麦注射液大剂量组在结扎30min、60min时降低MAP幅度更为明显（P<0.05~0.01），说明参麦注射液对MAP均为先降低，后回升。

2.5参麦注射液对心肌缺血犬左室收缩压（LVSP）的影响，结果见表13：

表13参麦注射液对心肌缺血犬左室收缩压（LVSP）的影响(mmHg, ±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；原工艺参麦注射液与丹参组比，▲：P<0.05，▲▲：P<0.01。

表13显示，冠脉结扎后，模型组LVSP有所下降；与模型组比，参麦注射液大、中剂量组在结扎30min后LVSP明显降低（P<0.05~0.01），随后各用药组LVSP逐渐回升，参麦注射液各剂量参麦组回升LVSP作用均强于模型组（P<0.05~0.01）；而丹参组也对LVSP呈现先降低后升高趋势，但与模型组比无明显差异；与丹参组比，参麦注射液各剂量参麦组各时间段降低LVSP作用与丹参组相当（P>0.05），说明参麦注射液均能先显著降低LVSP，再回升LVSP；参麦注射液初期降低LVSP作用与药物在初期抑制交感张力而降低心脏兴奋性所致。而后期升高LVSP可能与药物持续作用直接兴奋心脏而致心收缩能力提高有关。

2.6参麦注射液对心肌缺血犬左室舒张末压（LVEDP）的影响，结果见表14：

表14参麦注射液对心肌缺血犬左室舒张末压（LVEDP）的影响(mmHg, ±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表14结果显示，冠脉结扎后，模型组LVEDP较结扎前明显升高；参麦注射液各剂量组和丹参组则明显对抗心肌缺血犬的LVEDP升高；与丹参组比，参麦注射液各剂量组作用与丹参组相当。说明参麦注射液均明显对抗LVEDP的升高，且作用相当。此作用有助于提高缺血心脏舒张功能，增加舒张期血液回心而增加心脏泵血时的心输出量和冠脉流量。

2.7 参麦注射液对心肌梗死犬左心室等容期压力最大上升速率（+dp/dtmax）的影响，结果见表15：

表15参麦注射液对心肌缺血犬左心室等容收缩期压力最大上升速率（+dp/dtmax）的影响(±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表15显示，冠脉结扎后，模型组+dp/dtmax较结扎前明显减慢；与模型组比，参麦注射液大、中剂量组显著减慢结扎60min时的+dp/dtmax，随后各用药组+dp/dtmax逐渐加快，各剂量组在180min时加快+dp/dtmax作用明显（P<0.05~0.01）；丹参组+dp/dtmax在结扎90min时减慢明显（P<0.01），之后有所加快；各用药组在后期均呈现加快+dp/dtmax作用趋势，且最终均超过模型组+dp/dtmax水平（P<0.05~0.01）；与丹参组比，参麦注射液大剂量组在90-180min期间、中剂量组在120-180min期间、小剂量组在60-180min期间加快+dp/dtmax作用较丹参组明显（P<0.05~0.01），其余各剂量参麦组与丹参组作用相当。说明参麦注射液对+dp/dtmax均为先减慢后加快。参麦注射液加快+dp/dtmax作用明显，前期降低+dp/dtmax，后期提高心脏做功能力较原工艺参麦注射液更为显著。

2.8参麦注射液对心肌梗死犬左心室等容期压力最大下降速率（-dp/dtmax）的影响，结果见表16：

表16参麦注射液对心肌缺血犬左心室等容舒张期压力最大下降速率（-dp/dtmax）的影响(±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表16结果显示，冠脉结扎后，模型组-dp/dtmax明显减慢；与模型组比，参麦注射液大、中剂量组结扎60min时减慢-dp/dtmax作用显著。各用药组均呈现先减慢后加快-dp/dtmax作用，且加快作用各组均强于模型组-dp/dtmax（P<0.05~0.01），丹参组在结扎30、60和90min时-dp/dtmax也有所减慢，之后逐渐加快；与丹参组比，参麦注射液中剂量在5-15min时减慢-dp/dtmax的作用明显大于丹参组（P<0.05~0.01），而参麦注射液大剂量组在结扎90-180min时，中、小剂量组在结扎120min时，加快-dp/dtmax的作用明显大于丹参组（P<0.05~0.01），参麦注射液出现加快-dp/dtmax时间均早于丹参组，说明参麦注射液均先减慢后加快-dp/dtmax；

参麦注射液在初期降低-dp/dtmax现象可能是该药在心肌缺血初期降低心脏做功而使其心脏舒张速率降低，随后通过整体调节作用又使心脏功能提高而使-dp/dtmax加快。其降低-dp/dtmax可能在心肌缺血的一段时间内有效降低心肌耗氧，更有利于保护心脏。而后期提高-dp/dtmax作用也属抗心肌缺血有利之举。其中，参麦注射液主要以提高-dp/dtmax为主，初期降低-dp/dtmax作用显著，而回升-dp/dtmax作用出现时间要快一些。

2.9参麦注射液对心肌缺血犬冠脉血流量（CBF）的影响，结果见表17：

表17参麦注射液对心肌缺血犬冠脉血流量（CBF）的影响[ml/(100g·min), ±s,n=6]

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表17显示，冠脉结扎后，模型组CBF先稍升高，后逐渐下降；与模型组比，参麦注射液大、中剂量组180min时明显增加CBF（P<0.05），丹参组也在180min时明显升高CBF（P<0.05）；与丹参组比，参麦注射液大、中剂量组与丹参组比较无显著差异，仅小剂量组90min后升高幅度小于丹参组（P<0.05），其余无明显差异，说明参麦注射液可显著增加冠脉结扎后的CBF，且与丹参组作用相当。

2.10参麦注射液对心肌缺血犬心输出量（CO）的影响，结果见表18：

表18参麦注射液对心肌缺血犬心输出量（CO）的影响(L/min, ±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表18显示，冠脉结扎后，模型组CO先稍有升高后有所下降；与模型组比，参麦注射液大、中剂量组在180min时明显升高CO（P<0.05）；丹参组也在180min时明显升高CO（P<0.05）；与丹参组比，参麦注射液小剂量组升高CO幅度小于丹参组（P<0.05），说明参麦注射液可显著增加冠脉结扎后的CO，且与丹参组作用相当。

2.11参麦注射液对心肌缺血犬外周阻力（TPR）的影响，结果见表19：

表19参麦注射液对心肌缺血犬外周阻力（TPR）的影响(mmHg·min/L, ±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表19显示，冠脉结扎后，模型组TPR先稍有降低后明显升高，与模型组比，参麦注射液大剂量组在结扎60min后，中剂量组在结扎90min后，小剂量组在结扎120min后，TPR明显降低（P<0.05）；丹参组在结扎90min后TPR也明显降低（P<0.05）；与丹参组比，参麦注射液大剂量组在结扎60min时降低TPR幅度明显大于丹参组（P<0.05~0.01），小剂量组在结扎60-90min时降低TPR幅度明显小于丹参组（P<0.05~0.01），说明参麦注射液显著降低TPR。

2.12参麦注射液对心肌缺血犬心脏做功（MW）的影响，结果见表20：

表20参麦注射液对心肌缺血犬心脏做功（MW）的影响(mmHg·m3/min, ±s, n=6)

与模型组比较，*：P<0.05，**：P<0.01；与丹参组比，▲：P<0.05， ▲▲：P<0.01；

表20显示，冠脉结扎后，模型组MW先有所升高，后逐渐降低；与模型组比，参麦注射液大、中剂量组在结扎30min-60min期间、小剂量组在结扎30min时，MW明显较低（P<0.05~0.01）、丹参组降低MW作用也在30-60min明显较低（P<0.05）但180min时明显较模型组高（P<0.05）；与丹参组比，参麦注射液大剂量在30min时降低MW作用明显（P<0.05）；

上述结果说明参麦注射液明显降低心脏做功效应，此有利于心肌缺血时降低心肌氧耗，有效防止心脏代谢紊乱而导致的严重后果。大剂量降低MW作用较丹参组强。

3.讨论

本试验结果显示，犬冠状动脉结扎后，血流动力学变化主要为HR、SBP稍有升高，DBP、MAP、LVSP稍有下降、LVEDP明显升高、±dp/dtmax明显减慢、CBF和CO先稍有升高，后有所下降、TPR和MW先有所降低，后逐渐升高。

其原因在于心肌缺血后，交感神经系统产生应激反应，反射性增强交感神经兴奋性。同时，由于心肌缺血后心肌细胞出现急性缺血缺氧，导致能量代谢紊乱，其收缩和舒张功能受到损害，使反映心肌收缩功能的LVSP、±dp/dtmax下降、LVEDP上升；CBF可能由于结扎后左旋支分流增加而稍有升高，但随后可因心肌收缩功能受损，冠脉灌注不足而降低；CO在结扎后由于HR加快和SBP应激性升高而出现短暂的增大，后因心功能的下降而减小。如缺血继续长期存在，心肌细胞大量坏死，超出机体的代偿能力，则出现心律失常、血压下降和心功能不全等心肌缺血并发症表现。

同时，试验结果显示参麦注射液对心肌缺血犬能有效减慢心率，降低血压（包括SBP和DBP），改善心功能，并能增加冠脉流量和心输出量，降低外周阻力，减少心脏做功。对心肌缺血患者血流动力学观察也发现，参麦注射液可使其心率、血压恢复接近正常，并改善左心室收缩和舒张功能。动物试验也发现，参麦可显著增加慢性缺氧鼠的心输出量，降低肺、体循环阻力。本试验的结果与文献报道一致，证明参麦注射液确有良好的改善心肌缺血时心血管血流动力学的药效作用。

试验结果还表明，参麦注射液某些时段升高SBP作用、降低LVSP作用明显强于丹参组；而对抗LVEDP升高作用强度相当于丹参组；参麦注射液在用药初期虽有减慢±dp/dtmax作用，但持续时间较短，其后加快+dp/dtmax作用强于丹参组，且出现加快±dp/dtmax时间均早于丹参组；参麦注射液升高CBF、CO作用强度相当于丹参组；而降低TPR、MW作用强于丹参组。

4 结论

（1）参麦注射液均可减慢冠脉结扎犬HR，降低SBP、DBP和MAP、TPR、MW，从而降低心脏负荷，减少心脏做功；

（2）参麦注射液均升高LVSP和±dp/dtmax，增强心脏收缩功能，对抗LVEDP的升高，改善心脏舒张功能；

（3）参麦注射液均增加CBF和CO，有效改善缺血心脏心功能。

通过上述作用，参麦注射液起到改善心脏功能、维护心肌缺血时的血流动力学作用。

试验例：本发明的制备方法与现有技术的区别试验。

对照样品：按照最接近的现有技术制备：

以上二味（红参切薄片或粉碎），分别加90%乙醇浸渍后加热回流提取（红参6次、麦冬2次，每次用3倍量90%乙醇回流提取2小时），收集提取液，减压回收乙醇至每1ml含生药0.3-0.4g，冷藏，滤过，加1％（g/ml）活性炭，搅拌1小时后滤过，滤液（其中红参滤液用10%NaOH调至近中性）减压回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至每1ml含生药约0.4g，混匀，冷藏，滤过，用10%NaOH调pH，煮沸40分钟，冷至80℃，加0.1％（g/ml）活性炭，搅拌10分钟，滤过，滤液冷藏，滤过；取混匀后的滤液，加入5g聚山梨酯80，搅匀，加注射用水至1000ml，用10%NaOH调pH，过滤，灌封，灭菌，即得。

本发明样品：具体实施例1的方法。

试验方法：具体实施例2。

试验结果：

（1）指纹图谱：见图谱，本发明的工艺的指纹图谱杂质峰更少，主要信号峰出现在保留时间50-85min范围内，本发明主要以人参皂苷成分为主；

（2）总固体的比较，结果见表21：

表21 同批药材不同工艺制成的成品总固体测定结果

从总固体来看，本工艺总固体显著低于现行工艺；又因本工艺产品指纹图谱中信号与现行工艺产品相似，提示本工艺产品有效成分更纯；

（3）人参皂苷含量比较，结果见表22：

表22 同批药材不同工艺制成的成品人参皂苷含量测定结果

从表中可以看出，本工艺中人参皂苷Rg1、Re和Rb1显著高于现行工艺，说明本工艺所得成品的有效成分比现行工艺含量更高。

实验结论：

两种工艺均采用90%乙醇回流提取，但在进一步精制过程中，现行工艺采用活性碳除杂、水沉冷藏除杂质；本工艺采用大孔吸附树脂除大分子杂质、大极性杂质、小极性杂质，重点富集皂苷类成分；同时也有水液冷藏除杂质工艺；

从工艺的先进性来看，本工艺更先进，对杂质的去除有针对性：利用大孔吸附树脂除杂，其主要去除的成分有糖、有机酸、小极性挥发油等，这些物质都不是参麦注射液的有效成分；而现行工艺采用活性碳在醇液状态下除杂，对杂质的去除效果不明显，且对各类别物质无明显特异性吸附。

本发明的工艺除去了更多地杂质（固含量大大降低），有效成分含量得到进一步提高（人参皂苷），指纹图谱信息得到有效保留。故比较二者的工艺，本工艺更优越。

说明书附图

图1为本发明参麦注射液的HPLC指纹图谱；

图2为本发明参麦注射液的一测多评法HPLC图谱；

图3为本发明工艺的HPLC指纹图谱；

图4为现有技术工艺的HPLC指纹图谱。

实施例

下面列举实施例对于本发明技术方案进行进一步说明，该实施例对于本发明不构成任何限制。

实施例1（制备例）

100g红参切片，取红参片加入回流提取罐中，90%以上乙醇加热回流提取3-5次，每次1-2小时，过滤回流液，滤液减压回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药量浓度为0.2g/ml，搅匀后，过滤，用大孔吸附树脂柱处理，收集从大孔吸附树脂上洗脱的60%乙醇液，浓缩回收乙醇至药液无醇味，并控制药液中生药量为0.4g/ml，在2-4℃下冷藏36小时-72小时，冷藏液经过0.45μm微孔滤膜过滤；滤液加入0.1%活性炭，搅拌30min后，过滤脱碳，即得红参提取液；

100g麦冬药材，按红参提取方法处理得麦冬提取液；

取红参提取液、麦冬提取液，分别用0.45μm微孔滤膜过滤后，再经超滤（5KD-10KD），混合滤液，加入聚山梨酯80（0.05-0.1%），使其完全溶解，补水至1000ml体积，搅匀，调pH值7.5，精滤，灌封，灭菌。

实施例2（指纹图谱测定）

供试品制备 取参麦注射液成品作供试品；

照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VID）测定：

色谱条件与系统适用性试验 固定相采用Waters symmetry shield^TMRP18色谱柱（4.6mm×250mm；5.0μm）； 柱温30℃，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表21进行梯度洗脱；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于1350000；

参照溶液的制备 精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加20％乙腈制成每1ml分别含0.20mg的溶液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与本品各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。

供试品指纹图谱在10～90分钟范围内，应呈现14个与对照指纹图谱（图1）相对应的特征峰，以上标定的14个特征峰，以6号峰人参皂苷Rb1为参照峰，各峰的相对保留时间（RRT）和相对峰面积（RA）见表5。

实施例3（一测多评法测参麦注射液中人参皂苷的含量）

照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录ⅥD）测定

色谱条件与系统适用性试验 固定相采用AcclaimTM120 C18色谱柱（4.6mm×250mm；5.0μm）；，以水为流动相A，乙腈为流动相B，按表2进行梯度洗脱；检测波长为203nm，柱温30-50℃。理论塔板数按人参皂苷Rb1计应不低于10000；

对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加20％乙腈制成每1ml分别含0.20mg的溶液，即得；

测定法 分别精密吸取对照品溶液与本品各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得；

结果计算 以对照品溶液中人参皂苷Rb1峰面积为基准，采用相关系数法计算人参皂苷Rg1、Re、Rf的含量；

计算公式：C=A/A_Rb1*C_Rb1*f

C：被测样品某皂苷的浓度；

A：被测样品某皂苷的峰面积；

A_Rb1：对照品溶液Rb1的峰面积；

C_Rb1：对照品溶液Rb1的浓度；

f:：相关系数，见表3

本品每1ml成品中，含人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）应不得少于0.15 mg/ml，人参皂苷Re（C₄₈H₈₂O₁₈）应不得少于0.08 mg/ml，人参皂苷Rf（C₄₂H₇₂O₁₄）应不得少于0.03mg/ml，人参皂苷Rb₁(C₅₄H₉₂O₂₃)应不得少于0.1 mg/ml；人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）、人参皂苷Re（C₄₈H₈₂O₁₈）、人参皂苷Rf（C₄₂H₇₂O₁₄）和人参皂苷Rb₁(C₅₄H₉₂O₂₃)的总量计，应为0.38～1.00 mg/ml。

实施例4（制备例）

100g红参切片，取红参片加入回流提取罐中，90%以上乙醇加热回流提取3-5次，每次1-2小时，过滤回流液，滤液减压回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药量浓度为0.2g/ml，搅匀后，过滤，用大孔吸附树脂柱处理。收集从大孔吸附树脂上洗脱的70%乙醇液，浓缩回收乙醇至药液无醇味，并控制药液中生药量为0.4g/ml。在2-4℃下冷藏36小时-72小时，冷藏液经过0.45μm微孔滤膜过滤；滤液加入0.1%活性炭，搅拌30min后，过滤脱碳。即得红参提取液；

100g麦冬药材，按红参提取方法处理得麦冬提取液；

取红参提取液、麦冬提取液，分别用0.45μm微孔滤膜过滤后，再经超滤（5KD-10KD），混合滤液，加入聚山梨酯80（0.05-0.1%），使其完全溶解，补水至1000ml体积，搅匀，调pH值7.5，精滤，灌封，灭菌。

Claims (9)

1.一种参麦注射液，其特征在于其含多个人参皂苷成分，其具有如下理化参数：HPLC图谱中单峰面积占总峰面积的百分比超过2%的有14个峰，#6峰为人参皂苷Rb1，以#6峰参照峰，该14个峰的相对保留时间为0.1~0.2，0.2~0.3，0.7~0.8，0.8~0.9，0.9~1.0，1.0，1.0~1.1，1.0~1.1，1.0~1.1，1.1~1.2，1.1~1.2，1.2~1.3，1.2~1.3，1.2~1.3；以#6峰为参照峰，该14个峰的相对峰面积为0.1~0.2，1.0~1.5，0.7~0.9，0.3~0.5，0.2~0.5，1.0，0.6~0.8，0.3~0.5，0.2~0.4，0.2~0.4，0.2~0.4，0.2~0.4，0.1~0.3，0.2~0.4；上述理化参数的测定条件如下：高效液相色谱条件：固定相采用耐水色谱柱；流速1.0-1.5ml/min，检测波长203-220nm，柱温保持在30-50℃；洗脱条件：乙腈为流动相A，以水为流动相B，从0～30分钟，流动相B从100%均匀变为90%；从30~40分钟，流动相B从90%均匀变为77%；从40～50分钟，流动相B保持77%不变；从50～85分钟，流动相B从77%均匀变为40%；从85～95分钟，流动相B从40%均匀变为0%；对照品溶液配制和测定：精密称取人参皂苷Rb1适量，加20％乙腈制成每1ml含0.20mg的溶液，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得高效液相图谱，所述的参麦注射液是通过下述方法制备得到的：a.按照下述重量份取药材：红参100份，麦冬100份；b.红参提取：取红参加90%以上乙醇进行回流提取，浓缩滤液，加注射用水适量混匀，过大孔吸附树脂柱，用50-70%乙醇洗脱吸附在柱上的成分，浓缩洗脱液，冷藏过滤，加活性炭搅拌过滤脱碳，补加注射用水，待配制；c.麦冬提取：取麦冬药材按红参提取法进行提取；d.取上述红参提取液、麦冬提取液分别粗滤后再超滤，混合滤液，加入聚山梨酯80，使其完全溶解，补水，搅匀，调pH值，精滤，灌封，灭菌，得参麦注射液。

2.根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，其具有如下理化参数：高效液相图谱中单峰面积占总峰面积的百分比超过2%的有14个峰，#6峰为人参皂苷Rb1，以#6峰参照峰，该14个峰的相对保留时间为0.195，0.295，0.790，0.800，0.993，1.000，1.014，1.023，1.053，1.142，1.177，1.248，1.291，1.299；以#6峰为参照峰，该14个峰的相对峰面积为0.156，1.366，0.799，0.377，0.310，1.000，0.668，0.419，0.254，0.224，0.210，0.247，0.144，0.302；上述理化参数的测定条件如下：高效液相色谱条件：固定相采用耐水色谱柱4.6mm×250mm；5.0μm；流速1.0ml/min，检测波长203nm，柱温保持在30-50℃；洗脱条件：乙腈为流动相A，以水为流动相B，从0～30分钟，流动相B从100%均匀变为90%；从30~40分钟，流动相B从90%均有变为77%；从40～50分钟，流动相B保持77%不变；从50～85分钟，流动相B从77%均匀变为40%；从85～95分钟，流动相B从40%均匀变为0%；对照品溶液配制和测定：精密称取人参皂苷Rb1适量，加20％乙腈制成每1ml含0.20mg的溶液，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得高效液相图谱。

3. 根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，本品每1ml成品中，含人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）应不得少于0.15 mg/ml，人参皂苷Re（C₄₈H₈₂O₁₈）应不得少于0.08 mg/ml，人参皂苷Rf（C₄₂H₇₂O₁₄）应不得少于0.03mg/ml，人参皂苷Rb₁(C₅₄H₉₂O₂₃)应不得少于0.1 mg/ml；人参皂苷Rg₁（C₄₂H₇₂O₁₄）、人参皂苷Re（C₄₈H₈₂O₁₈）、人参皂苷Rf（C₄₂H₇₂O₁₄）和人参皂苷Rb₁(C₅₄H₉₂O₂₃)的总量计，应为0.38～1.00 mg/ml。

4.根据权利要求1所述的注射液，其特征在于，#3峰为人参皂苷Rg1，#4峰为人参皂苷Re，#5峰为人参皂苷Rf，#6峰为人参皂苷Rb1。

5.根据权利要求1所述的一种参麦注射液的制备方法，由下述步骤组成：

a.按照下述重量份取药材：红参100份，麦冬100份；

b.红参提取：取红参加90%以上乙醇进行回流提取，浓缩滤液，加注射用水适量混匀，过大孔吸附树脂柱，用50-70%乙醇洗脱吸附在柱上的成分，浓缩洗脱液，冷藏过滤，加活性炭搅拌过滤脱碳，补加注射用水，待配制；

c.麦冬提取：取麦冬药材按红参提取法进行提取；

d.取上述红参提取液、麦冬提取液分别粗滤后再超滤，混合滤液，加入聚山梨酯80，使其完全溶解，补水，搅匀，调pH值，精滤，灌封，灭菌，得参麦注射液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，由下述步骤组成：

a.按照下述重量份取药材：红参100份，麦冬100份；

b.红参提取：取红参片加入回流提取罐中，90%以上乙醇加热回流提取3-5次，每次1-2小时，过滤回流液，滤液减压回收乙醇至无醇味，加注射用水稀释至生药量浓度为0.2g/ml，搅匀后，过滤，用大孔吸附树脂柱处理，收集从大孔吸附树脂上洗脱的60%乙醇液，浓缩回收乙醇至药液无醇味，并控制药液中生药量为0.4g/ml，在2-4℃下冷藏36小时-72小时，冷藏液经过0.45μm微孔滤膜过滤；滤液加入0.1%活性炭，搅拌30min后，过滤脱碳，即得红参提取液；

c.麦冬提取：取麦冬药材，按红参提取方法处理得麦冬提取液；

d. 取上述红参提取液和麦冬提取液，分别用0.45μm微孔滤膜过滤后，再经5KD-10KD超滤，混合滤液，加入0.05-0.1%聚山梨酯80，使其完全溶解，补水至每毫升含红参药材0.1g，搅匀，调pH值7.5，精滤，灌封，灭菌。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂装入层析柱中的径高比1:5-1:7。

8.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂柱，洗脱前，先用水洗脱。

9.根据权利要求1所述的参麦注射液在制备治疗心肌缺血，改善心脏功能药物中的应用。