CN104619333B - 经修饰的肽，cb受体的配体，用于评估与cb受体结合的试剂盒、体外方法，用于调节cb受体活性的药物组合物、用途 - Google Patents

经修饰的肽，cb受体的配体，用于评估与cb受体结合的试剂盒、体外方法，用于调节cb受体活性的药物组合物、用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了新的、非天然的且经修饰的肽，其作为大麻素(CB)受体(特别是CB1和/或CB2)的配体发挥作用，并且可用作CB受体活性的调节剂；本发明还描述了用于评估CB受体结合的试剂盒和体外方法，用于调节CB受体活性的用途和药物组合物。本发明涵盖SEQ.ID.No:1的非天然肽以及与其具有至少70％相似性的肽，包括，作为本发明的特别有用的实施方案，SEQ.ID.No:2、SEQ.ID.No:3、SEQ.ID.No:4、SEQ.ID.No:5和SEQ.ID.No:6的非天然肽。

Description

经修饰的肽，CB受体的配体，用于评估与CB受体结合的试剂 盒、体外方法，用于调节CB受体活性的药物组合物、用途
技术领域
本发明涉及药学、医学、化学和生物技术领域。更具体而言，本发明描述了一种新型的经修饰的肽，其作为大麻素(CB)受体(特别是CB1和CB2)的配体和/或其活性的调节剂发挥作用；其还描述了用于评估与CB受体结合的试剂盒和体外方法，用于调节CB受体活性的药物组合物和用途。
背景技术
大麻素系统(包括大麻素受体(CB)——CB1和CB2及其内源性配体)在食物的摄入控制和能量代谢中发挥作用，并且在大脑(包括皮质、海马、扁桃体、脑垂体和下丘脑)中广泛表达。CB受体(特别是CB1)已经在若干外周器官和组织中被鉴定到，包括甲状腺、肾上腺、生殖器官、脂肪组织、肝、肌肉和胃肠道。
在本领域中，几种化合物已被检测到具有CB受体的调节活性，并且，其中尤其是化合物利莫那班(Rimonabant)——用来减肥瘦腰的药物并且被广泛用于制药市场。但是，此化合物随后被与人类中的精神疾病的发病联系在一起(主要通过穿过血脑层)，然后退出全球市场。血脑屏障是高度选择性的保护大脑的屏障，其阻止潜在有害物质通过所述系统循环进入中枢神经系统。因此，在本领域中，需要获得新型化合物，其可调节大麻素受体(优选CB1和/或CB2受体)的活性，但是不会穿过血脑屏障。
本发明描述了一种新型非天然肽，其在活性、特别是在调节大麻素受体的用途和/或活性方面表现出令人吃惊的结果。本发明的肽还在调节所述CB受体活性和治疗代谢障碍(例如减少肥胖)方面具有特别有用的优势，具有不穿过血脑屏障的额外优势，如本发明人所进行的研究结果所示。
对记录公开文献的检索表明其仅部分与本发明相关。下文描述了此类文献，将其置于此处的目的仅是为了提供本领域当前状态的基础，因为其既未预期也未暗示本发明的任一目的。
文献US 2007/213302显示化合物与CB1受体的相互作用，此化合物由吡唑和其可药用的盐组成，作为CB1受体的拮抗剂或反向激动剂。本发明不同于所述文献之处主要在于示出了一种不包括吡唑或其盐的新型非天然肽，并且所述结果令人吃惊，特别是在与大麻素受体相互作用的方面，这些事实在所述文献中既未被描述也未被暗示。
文献WO 2011/011847公开了使用血加压素(hemopressin)在受试者中治疗肥胖，还公开了血加压素是有效结合于所述CB1受体并且不穿过血脑屏障的化合物。本发明不同于所述文献之处主要在于示出了一种衍生自血管紧张素转换酶的新型非天然肽。但是，本发明的肽与血加压素并不相似。此外，由本发明人进行的测试结果令人吃惊，特别是在与大麻素受体相互作用的方面，这些事实在所述文献中既未被描述也未被暗示。
本发明人在Novel Natural Peptide Substrates forEndopeptidase24.15Neurolysin,and Angiotensin-converting Enzyme(Vanessa Rioli,Fabio C.Gozzo,Andrea S.Heimann,Alessandra Linardi,José E.Krieger,ClaudioS.Shida,Paulo C.Almeida,Stephen Hyslop,Marcos N.Eberlin,Emer S.Ferro；7de
Figure GDA0000681707610000021
de 2003)中所示的一些研究证明了一种“筛选”新型肽的有效技术，其被用在本发明中以检测具有用于特异性蛋白调控的天然序列的肽。但是，没有发现此天然肽可以用于大麻素系统。本发明不同于所述文献之处主要在于示出了一种新型非天然肽，其结果令人吃惊，特别是在与大麻素受体相互作用的方面，这些事实在任何现有技术的文献中既未被描述也未被引用。
本发明提供了一种新型非天然肽——其功能和用途之一是作为CB受体的配体且不具有因为与所述血脑层的相互作用导致的不利因素，还提供了若干有用的技术效果。具体而言，本发明中公开的是一种新型非天然肽，其具有序列SeqID:1和/或具有与SeqID:1有至少70％相似性的序列。本发明的非天然肽特别适用于作为大麻素受体的配体和/或所述CB受体活性的调节剂。本发明的非天然肽除了优于本领域中已知的配体之外，还不会与血脑屏障相互作用，因此在哺乳动物治疗用途上提供了额外优势。
根据所述研究文献可以看出，未发现预期或建议本发明的教导的文献，因此本发明人认为，本文所提出的技术方案相对于现有技术而言具有新颖性和创造性。
发明内容
本发明解决了本领域现有技术中已知的许多问题，例如提供了：一种新型非天然肽；一种大麻素受体的配体；用于评估与大麻素受体结合的试剂盒和体外方法；一种提供了上述技术效果而不通过血脑屏障的分子实体；还提供了用于治疗代谢障碍和/或肥胖的新型替代疗法。本发明还公开了所述非天然肽用于制备药物的用途；以及用于调节CB受体活性，从而可用于治疗代谢障碍和/或促进减肥的药物组合物。
但是，本发明的目的之一是一种经修饰的非天然肽，其包含与肽AA1-Asp-AA2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4具有至少70％相似性的序列，其中：
AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
AA2是疏水氨基酸；
AA3是荷电氨基酸；
AA4是具有0-13个氨基酸的尾部；
在一个优选的实施方案中，所述修饰肽包含与氨基酸序列SeqID:1(或者也被称为Pep 19)至少90％的相似性。
在一个优选的实施方案中，所述氨基酸尾部AA1是功能化的尾部。在一个优选的实施方案中，所述尾部是具有10个氨基酸的尾部TAT。
在一个优选的实施方案中，所述疏水氨基酸AA2选自丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸、甘氨酸或它们的组合。
在一个优选的实施方案中，所述荷电氨基酸AA3选自精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或它们的组合。
在一个优选的实施方案中，所述氨基酸尾部AA4没有氨基酸或所述氨基酸尾部AA4包含具有脯氨酸、亮氨酸和/或苏氨酸的序列。
在一个特别优选的实施方案中，所述肽选自SeqID:1、SeqID:2、SeqID:3、SeqID:4、SeqID:5、SeqID:6或它们的组合。
在另一个优选的实施方案中，所述环状肽以氨基酸序列SeqID:1、SeqID:2、SeqID:3、SeqID:4、SeqID:5和/或SeqID:6的环状形式示出。
本发明的另一目的是提供了CB受体的配体，所述配体由至少一个非天然肽组成，此非天然肽包含与肽AA1-Asp-AA2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4至少70％的相似性，其中：
AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
AA2是疏水氨基酸；
AA3是荷电氨基酸；
AA4是具有0-13个氨基酸的尾部；
在一个优选的实施方案中，所述配体是CB的激动剂、拮抗剂或反向激动剂。
在一个优选的实施方案中，所述配体是CB1的激动剂、拮抗剂或反向激动剂，和/或CB2的激动剂、拮抗剂或反向激动剂。
在一个特别优选的实施方案中，所述配体选自SeqID:1、SeqID:2、SeqID:3、SeqID:4、SeqID:5、SeqID:6、或其环状形式和/或它们的组合。
本发明的其他目的是：用于评估与CB受体的结合的试剂盒和体外方法。所述方法包括至少一个以下步骤：使具有CB受体的生物样品与至少一种非天然肽接触，所述非天然肽包含与肽AA1-Asp-AA2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4至少70％的相似性，其中：
AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
AA2是疏水氨基酸；
AA3是荷电氨基酸；
AA4是具有0-13个氨基酸的尾部；
在一个优选的实施方案中，所述试剂盒或本发明方法中的非天然肽和/或配体是经过化学修饰的，以便于检测/定位CB受体。在一个优选的实施方案中，所述化学修饰包括在一个肽/配体的区域上包含一个或多个生色团和/或放射性元素。
在一个优选的实施方案中，所述试剂盒或体外方法提供了CB受体(例如CB1或CB2)的选择性结合、这类受体的表达水平定量、和/或肽/配体与CB受体的结合的强度定量，以及所述受体生物活性。
所述试剂盒或体外方法特别适用于检测其他CB受体的配体分子实体，甚至是影响本发明的肽与CB受体的(选择性或非选择性)结合的分子实体。
所述试剂盒或体外方法还特别适用于随后的基于药物组合物的治疗方法的个性化，所述药物组合物包含本发明的非天然肽。本发明所述的试剂盒或方法适用于代谢病症/障碍发展的治疗预测/预后、或者甚至是对治疗如下情况的成功治疗可能性的治疗预测/预后：包含肥胖、糖尿病、高血压的代谢疾病(或疾病、相关病症和/或相关并发症)；超重预防；食欲调控；饱腹感诱导；在成功减肥后防止体重反弹；能量消耗加快；美容性减肥；或贪食症。
本发明的另一目的是至少一种非天然肽的用于制备调节CB受体活性、可用于在哺乳动物中治疗代谢综合症和/或促进美容性减肥的药剂的用途，所述至少一种非天然肽包含与肽AA1-Asp-AA2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4至少70％的相似性，其中：
AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
AA2是疏水氨基酸；
AA3是荷电氨基酸；
AA4是具有0-13个氨基酸的尾部。
在一个特别优选的实施方案中，所述用途是一种或多种非天然肽，其选自：SeqID:1、SeqID:2、SeqID:3、SeqID:4、SeqID:5、SeqID:6、或其环状形式，和/或它们的组合。
本发明的另一目的是用于在哺乳动物中调节所述CB受体活性的药物组合物，所述组合物包括：可药用的载体和作为活性成分的一种或多种非天然肽和/或所述肽的可药用的盐，所述肽包含与肽AA1-Asp-AA2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4至少70％的相似性，其中：
AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
AA2是疏水氨基酸；
AA3是荷电氨基酸；
AA4是具有0-13个氨基酸的尾部。
在一个优选的实施方案中，所述药物组合物还包括其他活性成分。在一个优选的实施方案中，所述药物组合物可以是片剂、凝胶、可注射溶液、可吸入形式或粘合剂形式。
本专利申请的上述和其他目的将可以立即由本领域技术人员和对此部分感兴趣的公司实施，并且将在下文中被详细描述以足够用于其重复。
附图说明
以下的详细描述和附图说明了本发明的主要特征和实施方案，其被详细描述以便为所述受试者提供更好的技术支持，使其可理解并以任何可能的实施方案来重复本发明的发明构思。这类详细描述不应被以限制性的方式理解，并且其旨在仅说明本发明的某些优选实施方案。
图1示出了所述CB1受体的新型配体的筛选。
图2示出了与本领域已知的其他肽相比，给予本发明中肽的优选实施方案(SeqID:1)之后的疼痛测试的结果。
图3示出了与本领域的其他肽相比，给予本发明中优选肽的实施方案(SeqID:1)之后的抑郁测试(强迫游泳)的结果。
图4示出了给予本发明中优选肽的实施方案(SeqID:1)之后，腹膜后脂肪组织测量测试的结果。
图5示出了给予本发明中优选肽的实施方案(SeqID:1)之后，腹股沟脂肪组织测量测试的结果。
图6示出了给予本发明中优选肽的实施方案(SeqID:1)之后，生殖腺脂肪组织测量测试的结果。
图7示出了给予本发明中优选肽的实施方案(SeqID:1)之后，肠系膜脂肪组织测量测试的结果。
图8示出了给予本发明中优选肽的实施方案(SeqID:1)之后，棕色脂肪组织测量测试的结果。
图9示出了给予本发明中优选肽的实施方案(SeqID:1)之后，脂肪指数(índice deadiposidade)测量的结果。
图10示出了本发明中另一优选肽的实施方案(SeqID:2)在CB1受体中的实验结果，以及与对照和SeqID:1的对比。
图11示出了本发明中另一优选肽的实施方案(SeqID:2)在CB2受体中的实验结果，以及与对照和SeqID:1的对比。
图12示出了本发明中另一优选肽的实施方案(SeqID:3)在CB1受体中的实验结果，以及与对照和SeqID:1的对比。
图13示出了本发明中另一优选肽的实施方案(SeqID:4)在CB1受体中的实验结果，以及与对照和SeqID:1的对比。
图14示出了本发明中另一优选肽的实施方案(SeqID:5)在CB1受体中的实验结果，以及与对照和SeqID:1的对比。
图15示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在腹膜后脂肪组织中的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图16示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在生殖腺脂肪组织中的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图17示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在腹股沟脂肪组织中的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图18示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在棕色脂肪组织中的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图19示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在肠系膜脂肪组织中的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图20示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)与脂肪指数相关的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图21示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)关于血清瘦蛋白(leptin)浓度的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图22示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在棕色脂肪组织中关于CB1和CB2蛋白表达的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图23示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于体重的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图24示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于葡萄糖的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图25示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于胰岛素血症的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图26示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于胆固醇水平的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图27示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于甘油三酯水平的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图28示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于生殖腺脂肪组织量的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图29示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于肠系膜脂肪组织量的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图30示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于棕色脂肪组织量的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图31示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于腹膜后脂肪组织量的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图32示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于腹股沟脂肪组织量的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图33示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于脂肪指数的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图34示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于脂肪指数的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
图35示出了本发明中一个优选肽的实施方案(SeqID:1)在补充有20％蔗糖的动物中关于血压的实验结果，以及与对照和利莫那班的对比。
具体实施方式
本发明的若干目的的共同发明点是提供一种可用作CB受体的配体的非天然肽。从这一发明点出发，本发明人利用所述发明点实施了若干应用，其中包括：选择性或非选择性地调节此类受体的活性；获得用于评估与CB受体的结合的试剂盒和体外方法；在鉴定其他CB分子实体配体或干扰本发明的肽与CB受体的结合的配体时，使用所述肽作为辅剂；使用所述肽制备调节CB受体活性的药物组合物。
出于本发明的目的，使用了以下定义：
经修饰的肽
在本专利申请的上下文中，“经修饰的肽”应被理解为非天然肽，其经过人工修饰以实现本发明的目的。
至少70％的相似性
在本专利申请的上下文中，“至少70％的相似性”应被理解为保持与肽(SeqID:1)至少70％的相似性和/或同一性。对于本发明的肽而言，这相当于修饰最多达3个氨基酸，以使得所述肽保持本专利申请中所示的相同活性。
环状或环形肽
在本专利申请的上下文中，“环状或环形肽”应被理解为在核酸线性分子(单链或双链)的两端之间具有共价键合的肽，其包括通过本领域中任何已知的方法(特别是通过连接酶的酶活性)将3’-羟基和5’-磷酸连接在一起。可将所述环状肽用于替换所述线性肽，这是由于其更难被降解，因为所述环状肽的末端或水解酶作用区域并不像在线性肽中那样暴露。
CB受体的配体
在本专利申请的上下文中，“CB受体的配体”应被理解为以促进与所述受体的任何直接或间接结合作用的方式，与CB系统和/或CB1或CB2受体相互作用的化合物或分子。
激动剂
在本专利申请的上下文中，“激动剂”应被理解为与受体位点形成复合物从而触发细胞的活性应答的药剂、药物、激素、神经递质或其他信号分子。
反向激动剂/拮抗剂
在本专利申请的上下文中，“反向激动剂或拮抗剂”应被理解为与激动剂受体结合并产生对抗所述激动剂的药理作用从而使得一种的作用部分抑制或完全抑制另一种的作用的试剂(例如，药剂、药物、激素或酶)。具体而言，当一种化合物在激动剂存在的情况下发挥作用，但是降低激动剂活性时，其即为反向激动剂，而拮抗剂是完全阻断所述激动剂活性的化合物。
调节CB受体功能
在本专利申请的上下文中，“调节CB受体功能”应被理解为导致所述CB受体(特别是CB1或CB2)的生物化学活性改变的相互作用。应理解，当存在对所述CB受体的拮抗剂或反向激动剂作用时，此改变为正的；当存在对所述CB受体的激动剂作用时，此改变为负的。
药物组合物
在本专利申请的上下文中，“药物组合物”应被理解为具有活性成分的所有或任何组合物，其以预防、缓解和/或治疗为目的，以保持和/或恢复稳态的方式发挥作用，并可通过局部、肠胃外、肠内和/或鞘内方式给药。
可药用的制剂
在本专利申请的上下文中，“可药用的制剂”应被理解为具有本领域普通技术人员所公知的可药用的赋形剂和载体的制剂，这是开发用于特定组合物的适合剂量和治疗，所述特定的组合物可被记载于多个治疗方案中，包括：口服、肠胃外、静脉内、鼻内、玻璃体内、肌内、脑内、侧脑室内和眼内，以及其给药和/或制剂。
代谢障碍
在本专利申请的上下文中，“代谢障碍”应被理解为改变特定哺乳动物中人类的正常生理功能的任何代谢障碍。在本专利申请的上下文中，所述术语包括在人体中产生生理改变的慢性和急性疾病，如若干原因导致的血脂障碍、肥胖、高血压、糖尿病、I型糖尿病、代谢综合症、动脉粥样硬化和其他代谢障碍。
本发明的目的之一是公开了一种非天然肽，其包含与肽AA1-Asp-AA2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4至少70％的相似性，其中：
AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
AA2是疏水氨基酸；
AA3是荷电氨基酸；
AA4是具有0-13个氨基酸的尾部。
优选地，所述经修饰的非天然肽具有功能化的氨基酸尾部AA1。
优选地，所述经修饰的非天然肽具有疏水氨基酸AA2，其选自丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸、甘氨酸或它们的组合。
优选地，所述经修饰的非天然肽具有荷电氨基酸AA3，其选自精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或它们的组合。
优选地，所述经修饰的非天然肽具有氨基酸尾部AA4，其没有氨基酸或包含具有脯氨酸、亮氨酸和/或苏氨酸的序列。
优选地，所述经修饰的非天然肽具有与所述氨基酸序列SeqID:1(Pep 19)至少90％的相似性。
优选地，所述经修饰的非天然肽选自具有以下序列的肽：SeqID:1、SeqID:2、SeqID:3、SeqID:4、SeqID:5、SeqID:6、它们列的环状形式或它们的组合。
本发明还提供了用于评估与CB受体的结合的试剂盒和体外方法。所述方法包括至少一个以下步骤：使具有CB受体的生物样品与至少一种本发明的非天然肽接触。
优选地，本发明所述的试剂盒或方法中的非天然肽和/或配体是经过化学修饰的，以易于检测/定位CB受体。在一个优选的实施方案中，所述化学修饰包括在一个肽/配体的区域上包含一个或多个生色团和/或放射性元素。
所述试剂盒或体外方法提供了CB受体(例如CB1或CB2受体)的选择性结合、这类受体的表达水平定量、和/或肽/配体与CB受体的结合的强度定量。所述试剂盒或体外方法特别适用于检测其他CB受体的配体分子实体，甚至是影响本发明的肽与CB受体(选择性或非选择性)结合的分子实体。
所述试剂盒或体外方法还特别适用于随后的基于药物组合物的治疗方法的个性化，所述药物组合物包含本发明的非天然肽。本发明所述的试剂盒或方法适用于代谢病症/障碍发展的治疗预测/预后、甚至是对治疗如下情况的成功治疗可能性的治疗预测/预后：包含肥胖、糖尿病、高血压的代谢障碍(或疾病、相关病症和/或相关并发症)；超重预防；食欲调控；饱腹感诱导；在成功减肥后防止体重反弹；能量消耗加快；美容减肥；或贪食症。
本发明的肽具有若干应用，在这些应用中，其特别适用于调节所述CB受体的活性，可用于与大麻素(CB)受体活性调节相关的代谢病症或疾病的治疗——没有本领域中可获得的同类的已知不良效果。本发明的肽特别适合作为CB1和/或CB2的拮抗剂或反向激动剂，其以优于本领域中可获得的同类的方式发挥作用且不会穿过血脑屏障。
此外，如将要在随后的实施例中证明的，本发明的肽可通过口服给予哺乳动物，即，其不会在口服摄入过程中被降解。此特征是特别令人意想不到的，因为当所述肽进入消化道后，受试者体内的天然酶不会降解或基本不会降解所述肽，并且其通过口服给药时可有效发挥作用。本专利申请公开了一种药物组合物，其包括本专利申请的肽。本申请的药物组合物包括可药用的载体，还包括其他活性成分和/或其可药用的盐。所述肽是所述组合物中的活性成分，所述组合物是通过片剂、凝胶、可注射溶液或其他用于药物和医学目的的合适给药形式被给予。
在一个优选的实施方案中，本专利申请中的肽作为CB1受体的配体发挥作用，更优选地，所述肽为CB1的激动剂、拮抗剂或反向激动剂。
在一个优选的实施方案中，本专利申请中的肽作为CB2的激动剂、拮抗剂或反向激动剂发挥作用。
本专利申请的肽还可用于制备治疗以下的药物：动脉粥样硬化、高血压、糖尿病、II型糖尿病、葡萄糖耐量减低(ITG)、血脂障碍、冠心病、胆囊疾病、胆结石、骨关节炎(osteoartite)、癌症、性功能障碍和早产儿死亡的风险。本发明的肽还可用于制备在受试者中促进美容性减肥的药物。“美容性减肥”意指没有任何体重降低导致的医学指征的受试者的减肥。
此外，如将要在随后的实施例中证明的，本发明的肽可通过口服递送给哺乳动物，即，其不会在口服摄入过程中被降解。此特征是特别令人意想不到的，因为当所述肽在消化道中时后，受试者体内的天然酶不会降解或基本不会降解此肽，并且其通过口服给药时可有效发挥作用。
以下所示实施例仅为示例性地说明本发明的几种实施方式，而不会限制本发明的范围。
优选的实施例
实施例1.肽Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr
在本发明的一个实施方案中，所述肽具有序列Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr(其以氨基酸序列SeqID:1或Pep 19表示，且是通过GPCR筛选法鉴定)，其作为CB1受体的反向激动剂发挥作用。图1通过ELISA(其中在室温下用1μM各种药物处理条纹膜(5μg/池)2小时并用抗CB1的抗体(1:500)孵育)证明了所述CB1受体的配体。根据对照——未处理的膜(100％)计算受体激活百分比。结果表示为平均值的±SEM(n＝5)。标示出显著性差异，并且p<0.05。
通过检测与CB1受体有效相互作用，随后在图2进行了持续的疼痛测试，示出了本发明的肽、血加压素和其他肽在体内的抗痛觉过敏活性。进行了所述肽的足底给药对于卡拉胶诱导的痛觉过敏的对较分析。用肽(20g，通过腿部)处理大鼠，然后立即进行卡拉胶足底内给药(200g，通过腿部)，并使用压力装置Ugo Basileantes(0h，未给药的腿)和卡拉胶给药后3h(黑腿)进行评估。对足底给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照组)，结果表示为平均值的SEM，n＝6-8。
图3示出了本发明的肽在抑郁模型(强迫游泳)中的应用效果，发现与利莫那班相反，所述肽不会导致抑郁。基于之前的测试(Harkin et al.,2004；Petit-Demouliere etal.,2005；和Treit and Menard,1998)进行了强迫游泳测试。将大鼠放置于具有最高达1m深(使大鼠不能碰触到底部)的水(24±1℃)的池中，在20cm水池中的不动时间(除了漂浮所需的少数动作之外，动物不运动)；通过3次实验，分别在1、126、9分钟之后记录所述步骤。
此外，在一个治疗的急性模型中(非肥胖Wistar大鼠，3天口服治疗)，经确认棕色脂肪组织激活，腹膜后、腹股沟和棕色脂肪组织减少，脂肪指数减少(图4-9)，而使用利莫那班时未观察到上述效果。
特别地，可确定此肽甚至在口服给药的情况下仍具有活性。该事实在本领域中难以发生，并在药物的商业制药和给药方面具有若干优势。
实施例2:肽Asp-Ile-Leu-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr
在本发明的一个实施方案中，所述肽具有序列Asp-Ile-Leu-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr(其以氨基酸序列SeqID:2表示，并且是通过GPCR筛选法鉴定)，其作为CB2受体的反向激动剂发挥作用(图10和11)。图10示出了通过ELISA(其中在室温下用1μM各种药物处理条纹膜(5μg/池)2小时并用抗CB1的抗体(1:500)孵育)对所述肽、对照与用于CB1受体的序列为Seq.ID:1的肽进行的比较结果。根据对照——未处理的膜(100％)计算受体激活百分比。结果表示为平均值的±SEM(n＝5)。标示出显著性差异，并且p<0.05。
图11示出了通过ELISA(其中在室温下用1μM各种药物处理条纹膜(membranas destirato)(5μg/池)2小时并用抗CB1的抗体(1:500)孵育)对所述肽、对照肽和用于CB2受体的序列为Seq.ID:1的肽进行的比较结果。根据对照——未处理的膜(100％)计算受体激活百分比。结果表示为平均值的±SEM(n＝5)。标示出显著性差异，并且p<0.05。
从实施例2所获得的结果可得出结论，在序列SeqID:1中第三个氨基酸疏水性的改变增大了对CB2受体的反向激动剂活性。因此，此位置上疏水氨基酸的存在对保持对CB1受体的活性是重要的。
还进行了一个实验，其中SeqID:1的第三个氨基酸(异亮氨酸)被替换为苏氨酸。但是，这类置换导致所研究的肽的预期生物活性的丧失。因此可得出结论，在SeqID:1的第三个氨基酸位置上存在疏水氨基酸是重要的。
特别是关于其中Seq ID:1的第三个氨基酸被替换为苏氨酸的序列，值得注意的是，强调了尽管各个实验均未能证明其对CB1或CB2的可检测的活性，但是其可用于与上述试剂盒中所示的其他修饰肽结合，以用于评估底物的最终竞争和其他效果。
特别地，可看到本发明的肽甚至在口服给药的情况下仍具有活性。该事实在本领域中难以发生，并在药物的商业制药和给药方面具有若干优势。
实施例3:肽Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Ala-Pro-Leu-Thr
在本发明的一个实施例中，所述肽具有序列Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Ala-Pro-Leu-Thr(其以氨基酸序列SeqID:3表示，并且是通过GPCR筛选法鉴定)，与氨基酸序列SeqID:1所获得的活性相比，所述肽对CB1受体的活性较低(图12)。但是，保持了药理作用。
图12示出了通过ELISA(其中在室温下用1μM各种药物处理条纹膜(5μg/池)2小时并用抗CB1的抗体(1:500)孵育)进行的该示例肽对CB1受体的结果。根据对照——未处理的膜(100％)计算受体激活百分比。结果表示为平均值的±SEM(n＝5)。标示出显著性差异，并且p<0.05。
籍此，将本实施例所获得的结果与其他实施例所获得的结果进行比较可得出结论，在第七个位置上的荷电氨基酸(基于序列SeqID:1，其中第7个氨基酸是谷氨酸)对于对CB1受体的活性而言并非必需但其可改变活性。
特别地，可看到本发明的肽甚至在口服给药的情况下仍具有活性。该事实在本领域中难以发生，并在药物的商业制药和给药方面具有若干优势。
实施例4:肽Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Glu
在本发明的一个实施例中，所述肽的序列为Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Glu(其以氨基酸序列SeqID:4表示，并且是通过GPCR筛选法鉴定)，并且与使用序列SeqID:1所获得的活性相比，所述肽对CB1受体的反向激动剂活性增加。因此，此序列第7个氨基酸对于所述肽作为CB1受体反向激动剂的活性而言是必需的。
图13示出了通过ELISA(其中在室温下用1μM各种药物处理条纹膜(5μg/池)2小时并用抗CB1的抗体(1:500)孵育)进行的该示例肽对CB1受体的结果。根据对照——未处理的膜(100％)计算受体激活百分比。结果表示为平均值的±SEM(n＝5)。标示出显著性差异，并且p<0.05。
特别地，可看到本发明的肽甚至在口服给药的情况下仍具有活性。该事实在本领域中难以发生，并在药物的商业制药和给药方面具有若干优势。
实施例5:肽Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Glu-Ala-Leu-Thr
在本发明的一个实施例中，所述肽具有序列Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Glu-Ala-Leu-Thr(其以氨基酸序列SeqID:5表示，并且是通过GPCR筛选法鉴定)，其在低剂量时具有对内源大麻素受体的反向激动剂活性，在高剂量时具有对内源大麻素受体的激动剂活性。
但是，从此实验中可得出结论，原序列SeqID:1中第8个氨基酸(脯氨酸)是肽激动剂组分，因为将此脯氨酸(Pro)替换为丙氨酸(Ala)导致所研究的肽的反向激动剂活性的增加。
还可得出的结论是，去除由序列SeqID:1中第8位的脯氨酸提供的构象折叠性质，提高了对内源大麻素受体的激动剂活性。
图14示出了通过ELISA(其中在室温下用1μM各种药物处理条纹膜(5μg/池)2小时并用抗CB1抗体(1:500)孵育)进行的该示例肽对CB1受体的结果。根据对照——未处理的膜(100％)计算受体激活百分比。结果表示为平均值的±SEM(n＝5)。表示出显著性差异，并且p<0.05。
特别地，可看到本发明的肽甚至在口服给药的情况下仍具有活性。该事实在本领域中难以发生，并在药物的商业制药和给药方面具有若干优势。
实施例6:环状肽-Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr-
在本发明的一个实施例中，所述环状肽具有序列Asp-Ile-Ile-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr(其以氨基酸序列SeqID:1表示但是为环状，并是通过GPCR筛选法鉴定)，与相同序列的非环状肽相比，其具有类似的生物活性。但是，环化过程是有值得注意的，主要是所述在生物体中(体内)的半衰期增加。还可看到本发明的肽甚至在口服给药的情况下仍具有活性。此事实在本领域中难以发生，并在药物的商业制药和给药方面具有若干优势。
表1总结了在几个优选的实施方案中使用本发明的肽获得的结果数据，并与现有技术中使用已知的天然肽的结果进行广泛比较。
表1
Figure GDA0000681707610000171
Figure GDA0000681707610000181
已报道的体外测试支持了所对应的要求保护的用途。此外，进行了若干详细的体内测试，以支持所述治疗应用，其总结如下。
实施例7:腹膜后脂肪组织的测试
图15示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)在腹膜后脂肪组织模型中的应用效果，在此模型中，在3天内通过口服途径用利莫那班(剂量为100ug/Kg)或肽19(Pep 19，剂量为100ug/Kg)处理较瘦的Wistar大鼠。在完成处理后测量脂肪组织。结果表示为处理完成时测量的腹膜后脂肪组织的重量(单位g/100g)。对给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照)。结果表示为平均值和平均值标准误差(SEM)，n＝4-5。
结果表明，与接受利莫那班和/或盐水的组相比，接受Pep 19的动物中腹膜后脂肪组织质量更少。
实施例8：生殖腺脂肪组织的测试
图16示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)在生殖腺脂肪组织模型中的应用效果，在此模型中，在3天内通过口服途径用利莫那班(剂量为100ug/Kg)或肽19(Pep 19，剂量为100ug/Kg)处理较瘦的Wistar大鼠。在完成处理后测量脂肪组织。结果表示为处理完成时测量的生殖腺脂肪组织的重量(单位g/100g)。对给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照)。结果表示为平均值和平均值的标准误差(SEM)，n＝5。
结果表明，与接受利莫那班和/或盐水的组相比，接受Pep 19的动物中生殖腺脂肪组织质量无差异。
实施例9：腹股沟脂肪组织的测试
图17示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)在腹股沟脂肪组织模型中的应用效果，在此模型中，在3天内通过口服途径用利莫那班(剂量为100ug/Kg)或肽19(Pep 19，剂量为100ug/Kg)处理较瘦的Wistar大鼠。在完成处理后测量脂肪组织。结果表示为处理完成时测量的腹股沟脂肪组织的重量(单位g/100g)。对给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照)。结果表示为平均值和平均值的标准误差(SEM)，n＝5。
结果表明，与接受利莫那班和/或盐水的组相比，接受Pep 19的动物中腹股沟脂肪组织质量更少。
实施例10：棕色脂肪组织的测试
图18示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)在棕色脂肪组织模型中的应用效果，在此模型中，在3天内通过口服途径用利莫那班(剂量为100ug/Kg)或肽19(Pep19，剂量为100ug/Kg)处理较瘦的Wistar大鼠。在完成处理后测量脂肪组织。结果表示为处理完成时测量的棕色脂肪组织的重量(单位g/100g)。对给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照)。结果表示为平均值和平均值的标准误差(SEM)，n＝5。
结果表明，与接受利莫那班和/或盐水的组相比，接受Pep 19的动物中棕色脂肪组织质量更少。
实施例11：肠系膜脂肪组织的测试
图19示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)在肠系膜脂肪组织模型中的应用效果，在此模型中，在3天内通过口服途径用利莫那班(剂量为100ug/Kg)或肽19(Pep 19，剂量为100ug/Kg)处理较瘦的Wistar大鼠。在完成处理后测量脂肪组织。结果表示为处理完成时测量的肠系膜脂肪组织的重量(单位g/100g)。对给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照)。结果表示为平均值和平均值的标准误差(SEM)，n＝5。
结果表明，与接受利莫那班和/或盐水的组相比，接受Pep 19的动物中肠系膜脂肪组织质量无差异。
实施例12：脂肪指数确定
图20示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对动物脂肪指数的应用效果。在3天内通过口服途径用利莫那班(剂量为100ug/Kg)或肽19(Pep 19，剂量为100ug/Kg)处理较瘦的Wistar大鼠。在完成处理后，利用公式(％)，(I＝Σ脂肪沉积物/体重×100)计算脂肪指数。结果表示为处理完成时测量的动物体重(单位g/100g)。对给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照)。结果表示为平均值和平均值的标准误差(SEM)，n＝5。
结果表明，与接受利莫那班和/或盐水的组相比，接受Pep 19的动物中脂肪指数更少。
实施例13：血清瘦蛋白浓度的测定
图21示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对动物的血清瘦蛋白浓度的应用效果。在3天内通过口服途径用利莫那班(剂量为100ug/Kg)或肽19(Pep 19，剂量为100ug/Kg)处理较瘦的Wistar大鼠。在完成处理后进行所述血清瘦蛋白浓度的测量。结果表示为ng/mL。对给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照)。结果表示为平均值和平均值的标准误差(SEM)，n＝5。
结果表明，与接受利莫那班和/或盐水的组相比，接受Pep 19的动物中血清瘦蛋白浓度更低。
实施例14:在棕色脂肪组织中CB1和CB2蛋白表达的测定
图22示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对动物的棕色脂肪组织中CB1和CB2蛋白表达的应用效果。在3天内通过口服途径用利莫那班(剂量为100ug/Kg)或肽19(Pep 19，剂量为100ug/Kg)处理较瘦的Wistar大鼠。在完成处理后进行所述蛋白表达的测量。结果表示为细胞/mm2。对给予载体(盐水)的大鼠实施相同的操作(对照)。结果表示为平均值和平均值的标准误差(SEM)，n＝5。
实施例15：补充有20％蔗糖的动物的体重的测定
图23示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物体重的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep 19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。结果以用盐水(阴性对照)处理的动物体重的百分比表示，并通过双因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，用浓度为100μg/Kg的Pep 19处理的动物在处理后第3周到第5周表现出更低的体重百分比。
实施例16：补充有20％蔗糖的动物的体重的测定
图24示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中葡萄糖的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep 19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。在60天的补充之前和之后，以及在处理后的第15天和第30天收集数据，并且表示为平均值±标准误差(SEM)，并通过双因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，用利莫那班(阳性对照)和浓度为100μg/Kg的肽19处理的动物在处理后的第15天和第30天表现出更低的血糖。
实施例17：补充有20％蔗糖的动物中胰岛素血症的测定
图25示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中胰岛素血症的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep 19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。数据表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA检验和检验后Bonferroni校正进行分析，n＝10。
结果表明，用浓度为100μg/Kg的肽19处理的动物在30天的处理之后表现出较低的胰岛素血症平均值。
实施例18：补充有20％蔗糖的动物中胆固醇的测定
图26示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中胆固醇水平的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep 19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。在处理之前、处理之后的第15天和第30天收集结果，并且表示为用盐水(阴性对照)处理的动物中胆固醇的百分比，并通过双因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，用利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg和100μg/Kg的肽19处理的动物在30天的处理后表现出更低的胆固醇百分比。
实施例19：补充有20％蔗糖的动物中甘油三酯的测定
图27示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中甘油三酯水平的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep 19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。在处理之前、处理之后的第15天和第30天收集结果，并表示为用盐水(阴性对照)处理的动物中甘油三酯的百分比，并通过双因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，用浓度为100μg/Kg的肽19处理的动物在30天的处理后表现出更低的甘油三酯百分比。
实施例20：补充有20％蔗糖的动物中生殖腺脂肪组织量的测定
图28示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中生殖腺脂肪组织量的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。在处理30天后收集结果并通过每只动物的体重进行校正，结果表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，与其他组相比，用浓度为100μg/Kg的肽19处理的动物表现出更低的生殖腺脂肪组织百分比。
实施例21：补充有20％蔗糖的动物中肠系膜脂肪组织量的测定
图29示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中肠系膜脂肪组织量的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。在处理30天后收集结果并通过每只动物的体重进行校正，结果表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，与其他组相比，用浓度为50μg/Kg和100μg/Kg的肽处理的动物表现出更低的肠系膜脂肪组织百分比。
实施例22：补充有20％蔗糖的动物中棕色脂肪组织量的测定
图30示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中棕色脂肪组织量的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。在处理30天后收集结果并通过每只动物的体重进行校正，结果表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
实施例23：补充有20％蔗糖的动物中腹膜后脂肪组织量的测定
图31示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中腹膜后脂肪组织量的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。在处理30天后收集结果并通过每只动物的体重进行校正，结果表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
实施例24：补充有20％蔗糖的动物中腹股沟脂肪组织量的测定
图32示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中腹股沟脂肪组织量的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。在处理30天后收集结果并通过每只动物的体重进行校正，结果表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，与其他组相比，用浓度为100μg/Kg的肽19处理的动物表现出最大的腹股沟脂肪组织量。
实施例25：补充有20％蔗糖的动物中脂肪指数的测定
图33表示本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中脂肪指数的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为50μg/Kg的肽19(Pep 19)和浓度为100μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。所述脂肪组织总质量是通过每只动物的体重进行校正，表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA和检验后Bonferroni校正进行分析，n＝10。
结果表明，与其他组相比，用浓度为100μg/Kg的肽19处理的动物表现出最大的脂肪组织量。
实施例26：补充有20％蔗糖的动物中脂肪指数的测定
图34示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物脂肪指数的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为100μg/Kg、300μg/Kg和600μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。所述脂肪组织总质量是通过每只动物的体重进行校正，表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，与其他组相比，用浓度为600μg/Kg的肽19处理的动物表现出更少的脂肪组织量。
实施例27：补充有20％蔗糖的动物中血压的测定
图35示出了本发明的优选肽实施方案(SeqID:1或Pep 19)对补充有20％蔗糖的动物中血压的应用效果。在60天内，给Wistar大鼠喂食在饮用水中补充20％蔗糖的标准饮食；然后用盐水(阴性对照)、利莫那班(阳性对照)、浓度为100μg/Kg、300μg/Kg和600μg/Kg的肽19(Pep 19)处理大鼠30天。所述脂肪组织总质量是通过每只动物的体重进行校正，表示为平均值±SEM，并通过单因素ANOVA检验和检验后Bonferroni进行分析，n＝10。
结果表明，与其他组相比，用浓度为600μg/Kg的肽19处理的动物表现出更低的血压。
本领域技术人员将很快了解本公开的教导，并且将根据所教导的实施例，知道以其他实施方案重复本发明，所述其他实施方案必须被认为是在本发明和所附权利要求的范围之内。

Claims (13)

1.经修饰的非天然肽，其由SeqID：1、SeqID：2、SeqID：3、SeqID：4、SeqID：5、SeqID：6的序列组成。
2.CB受体的配体，其中所述配体由非天然肽组成，所述非天然肽由选自SeqID：1、SeqID：2、SeqID：3、SeqID：4、SeqID：5、SeqID：6的序列组成。
3.根据权利要求2的配体，其中所述配体是CB的激动剂、拮抗剂或反向激动剂。
4.根据权利要求3的配体，其中所述配体是CB1的激动剂、拮抗剂或反向激动剂，和/或CB2受体的激动剂、拮抗剂或反向激动剂。
5.用于评估与CB受体的结合的试剂盒，其包括由选自SeqID：1、SeqID：2、SeqID：3、SeqID：4、SeqID：5、SeqID：6的序列组成的非天然肽。
6.根据权利要求5的试剂盒，其特征在于所述非天然肽是用一个或多个生色团和/或放射性元素化学修饰的。
7.用于评估与CB受体的结合的体外方法，其包括使一种具有CB受体的生物样品与非天然肽接触，所述肽由选自SeqID：1、SeqID：2、SeqID：3、SeqID：4、SeqID：5、SeqID：6的序列组成。
8.根据权利要求7的体外方法，其特征在于对CB1和/或CB2受体的结合评估提供了这类受体的表达水平定量，和/或，肽/配体与CB受体的结合的强度定量。
9.一种非天然肽用于制备试剂盒的用途，所述试剂盒用于评估与CB受体的结合并且/或者用于检测CB受体的配体分子实体和/或影响所述肽与CB受体结合的分子实体，所述非天然肽由选自SeqID：1、SeqID：2、SeqID：3、SeqID：4、SeqID：5、SeqID：6的序列组成。
10.一种非天然肽用于制备调节CB受体活性、可用于在哺乳动物中治疗代谢障碍和/或促进美容性减肥的药剂的用途，所述非天然肽由选自SeqID：1、SeqID：2、SeqID：3、SeqID：4、SeqID：5、SeqID：6的序列组成。
11.用于调节哺乳动物中CB受体活性的药物组合物，其包括：
-可药用的载体；和
-作为活性成分的一种非天然肽和/或所述肽的可药用的盐，所述肽由选自SeqID：1、SeqID：2、SeqID：3、SeqID：4、SeqID：5、SeqID：6的序列组成。
12.根据权利要求11的药物组合物，其还包含其他活性成分。
13.根据权利要求11-12中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是以片剂、凝胶或可注射溶液的形式存在。
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