WO2014008567A1

WO2014008567A1 - Peptídeo modificado, ligante de receptores cb, kit, processo in vitro para avaliação de ligação a receptores cb, usos, composição farmacêutica para modular a atividade de receptores cb

Info

Publication number: WO2014008567A1
Application number: PCT/BR2013/000251
Authority: WO
Inventors: Andrea Sterman Heimann
Original assignee: Proteimax Biotecnologia Ltda
Priority date: 2012-07-13
Filing date: 2013-07-12
Publication date: 2014-01-16
Also published as: BR102012017421A2; CN104619333A; US9796760B2; US20150291662A1; CN104619333B

Abstract

A presente invenção revela novos peptídeos não naturais e modificados que atuam como ligantes de receptores canabinóides (CB), especialmente CB1 e/ou CB2, úteis como moduladores da sua atividade; são também descritos um kit e um processo in vitro para avaliar a ligação a receptores CB, usos e composição farmacêutica para modular a atividade de receptores CB. A invenção abrange o peptídeo não natural de SeqlD:1 e aqueles com pelo menos 70% de similaridade em relação ao mesmo, incluindo como concretizações particularmente úteis da invenção os peptídeos não naturais de SeqlD:2, SeqlD:3, SeqlD:4, SeqlD:5, SeqlD:6.

Description

Relatório Descritivo de Patente de Invenção

Peptídeo Modificado, Ligante de Receptores CB, Kit, Processo in vitro para Avaliação de Ligação a Receptores CB, Usos, Composição Farmacêutica para Modular a Atividade de Receptores CB

Campo da Invenção

A presente invenção situa-se nos campos da farmácia, medicina, química e biotecnologia. Mais especificamente, a presente invenção descreve um novo peptídeo modificado que atua como ligante de receptores canabinóides (CB), especialmente CB1 e/ou CB2, e/ou modulador da sua atividade; são também descritos um kit e um processo in vitro para avaliar a ligação a receptores CB, usos e composição farmacêutica para modular a atividade de receptores CB. Antecedentes da Invenção

O sistema canabinóide, que compreende os receptores canabinóides (CB), CB1 e CB2 e seus ligantes endógenos, atua no controle de ingestão de alimentos e no metabolismo de energia e é amplamente expresso no cérebro, incluindo córtex, hipocampos, amígdala, pituitário e hipotálamo. Os receptores CB, particularmente CB1 , já foram identificados em inúmeros órgãos periféricos e tecidos, incluindo glândula tiroidal, glândula adrenal, órgãos reprodutivos, tecido adiposo, fígado, músculos e trato gastrointestinal.

Diversos compostos já foram detectados na técnica possuindo atividade de modulação desse receptor e, dentre eles, o composto rimonabanto - fármaco que era utilizado para redução de peso e afinamento da cintura e que foi amplamente utilizado no mercado farmacêutico. Entretanto, esse composto foi subsequentemente associado à ocorrência de doenças psiquiátricas em humanos, principalmente por conseguir atravessar a camada hematoencefálica, sendo assim removido do mercado mundial. A barreira hematoencefálica é uma barreira altamente seletiva que protege o cérebro pela prevenção da entrada, pela circulação sistémica, de substâncias potencialmente prejudiciais ao sistema nervoso central. Assim, há uma necessidade na técnica de se obter novos compostos que consigam modular a atividade de receptores canabinóides, preferencialmente do receptor CB1 e/ou CB2, porém sem que haja uma passagem do(s) mesmo(s) pela barreira hematoencefálica.

A presente invenção descreve um novo peptídeo não natural, o qual apresenta resultados surpreendentes quanto à sua atividade, mais especialmente quanto ao seu uso e/ou sua atividade de modulação de receptores canabinóides. O peptídeo da presente invenção, adicionalmente, possui a vantagem ser particularmente útil para modular a atividade de receptores CB e no tratamento de distúrbios metabólicos como, por exemplo, para a redução da obesidade, possuindo ainda a vantagem adicional de não atravessar a barreira hematoencefálica, conforme mostram os resultados de pesquisas feitas pelos inventores.

As buscas de antecedentes revelaram documentos apenas parcialmente relevantes para a presente invenção. Tais documentos serão descritos abaixo, sendo os mesmos colocados aqui unicamente com o objetivo de servir de base ao estado da técnica atual, uma vez que nenhum deles antecipa ou sugere qualquer dos objetos da presente invenção.

O documento US 2007/2 3302 apresenta compostos de interação com o receptor CB1 , consistindo de pirazóis e seus sais farmaceuticamente aceitáveis que atuam como antagonistas ou agonistas inversos do receptor CB1. A presente invenção difere do referido documento, dentre outros motivos, por apresentar um novo peptídeo não natural, que não compreende pirazóis ou seus sais, e cujos resultados mostram-se surpreendentes, especialmente em relação à interação com receptores canabinóides, fatos não descritos e nem sugeridos no referido documento.

O documento WO 2011/01 847 revela o uso da hemopressina para o tratamento da obesidade em um indivíduo e é adicionalmente revelado que hemopressina é um composto que se liga eficazmente ao receptor CB1 e não atravessa a barreira hematoencefálica. A presente invenção difere desse documento, dentre outros motivos, por apresentar um novo peptídeo não natural, derivado de enzimas conversoras de angiotensina. Portanto, o peptídeo da invenção não é em nada semelhante à hemopressina. Além disso, os resultados de testes realizados pelos inventores mostraram-se surpreendentes, especialmente em relação à interação com receptores canabinóides, fatos não descritos e nem sugeridos no referido documento.

Alguns estudos apresentados pelos presentes inventores em "Novel Natural Peptide Substrates for Endopeptidase 24.15 Neurolysin, and Angiotensin-converting Enzyme" (Vanessa Rioli, Fabio C. Gozzo, Andrea S. Heimann, Alessandra Linardi, José E. Krieger, Cláudio S. Shida, Paulo C. Almeida, Stephen Hysiop, Marcos N. Eberlin, Emer S. Ferro; 7 de Março de 2003) demonstram uma técnica eficaz de "triagem" de novos peptídeos, a qual foi utilizada na presente invenção para detecção de um peptídeo de sequência natural para a regulação de proteínas específicas. Entretanto, nenhuma utilidade com relação ao sistema canabinóide foi encontrada com esse peptídeo natural. A presente invenção difere desse documento, dentre outras razões, por apresentar um novo peptídeo não natural, cujos resultados mostraram-se surpreendentes, especialmente em relação à interação com receptores canabinóides, fato não descrito e nem citado em nenhum documento do estado da técnica.

A presente invenção proporciona um novo peptídeo não natural, que entre outras funções e usos é ligante para receptores CB e que não possui os inconvenientes decorrentes de interação com a camada hematoencefálica - e que adicionalmente proporciona diversos efeitos técnicos úteis. Em especial, é revelado na presente invenção um novo peptídeo não natural de sequência SeqlD:1 e/ou de sequência com similaridade de, pelo menos, 70% em relação ao mesmo. O peptídeo não natural da invenção é particularmente útil como ligante de receptores canabinóides e/ou como modulador da atividade de receptores CB. O peptídeo não natural da invenção, além de ser em geral um ligante superior aos conhecidos da técnica, não interage com a barreira hematoencefálica, proporcionando adicionais vantagens no uso terapêutico de mamíferos.

Do que se depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo os ensinamentos da presente invenção, de forma que a solução aqui proposta, aos olhos dos inventores, possui novidade e atividade inventiva frente ao estado da técnica.

Sumário da Invenção

A presente invenção vem resolver uma série de problemas conhecidos do estado da técnica como, por exemplo, proporcionar: um novo peptídeo não natural; um ligante de receptores canabinóides; um kit e processo in vitro para a avaliação de ligação a receptores de receptores canabinóides; uma entidade molecular que proporcione estes efeitos técnicos sem passar pela barreira hematoencefálica; e proporcionar novas alternativas terapêuticas para tratamento de distúrbios metabólicos e/ou da obesidade. A presente invenção adicionalmente revela, entre outros, o uso do referido peptídeo não natural para a preparação de medicamentos; e uma composição farmacêutica para modular a atividade de receptores CB, sendo portanto útil no o tratamento de desordens metabólicas e/ou para promover a redução de peso estética.

É, portanto, um dos objetos da presente invenção um peptídeo não natural modificado, compreendendo uma sequência com pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AA₁-Asp-AA₂-AA2-Ala-Asp-Asp-AA₃-AA4, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA3 é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

Em uma concretização preferencial, o dito peptídeo modificado compreende pelo menos 90% de similaridade em relação à sequência de aminoácidos SeqlD:1 (ou também referida como Pep 19).

Em uma concretização preferencial, a cauda de aminoácido AA^ é uma cauda funcionalizada. Em uma realização preferencial, a dita cauda é uma cauda TAT com 10 aminoácidos. Em uma concretização preferencial, o aminoácido hidrofóbico AA2 é selecionado do grupo consistindo de: alanina, isoleucina, leucina, fenilalanina, valina, prolina, glicina, ou combinações dos mesmos.

Em uma concretização preferencial, o aminoácido com carga AA₃ é selecionado do grupo consistindo de: arginina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, ou combinações dos mesmos.

Em uma concretização preferencial, a cauda de aminoácido AA₄ é com 0 aminoácido ou a cauda de aminoácido AA4 compreende uma sequência contendo os aminoácidos prolina, leucina e/ou treonina.

Em uma concretização particularmente preferencial, o peptídeo é selecionado dentre: SeqlD:1 , SeqlD:2, SeqlD:3, SeqlD:4, SeqlD:5, SeqlD:6 ou combinações dos mesmos.

Em uma outra concretização preferencial, o peptídeo cíclico se apresenta na forma cíclica das sequências de aminoácidos SeqlD:1 , SeqlD:2, SeqlD:3, SeqlD:4, SeqlD:5 e/ou SeqlD:6.

É um outro objeto da presente invenção um ligante de receptores CB, referido ligante consistindo de pelo menos um peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AArAsp-AA₂-AA₂- Ala-Asp-Asp-AAa-AA-t, em que:

AA-_\ é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA₂ é um aminoácido hidrofóbico;

AA₃ é um aminoácido com carga;

ΑΑ,ι é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

Em uma concretização preferencial, o dito ligante é um agonista, antagonista ou agonista inverso de CB.

Em uma concretização preferencial, o dito ligante é um agonista, antagonista ou agonista inverso de CB1 e/ou um agonista, antagonista ou agonista inverso de receptor CB2.

Em uma concretização particularmente preferencial, o ligante é selecionado dentre: SeqlD:1 , SeqlD:2, SeqlD:3, SeqlD:4, SeqlD:5, SeqlD:6 ou suas formas cíclicas e/ou combinações dos mesmos. São também outros objetos da presente invenção um kit e processo in vitro para a para a avaliação de ligação a receptores CB. O referido processo compreende ao menos uma etapa de contatar uma amostra biológica contendo um receptor CB com pelo menos um peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AAi-Asp-AA₂-AA₂-Ala-Asp-Asp-

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA₂ é um aminoácido hidrofóbico;

AA3 é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

Em uma concretização preferencial, o peptídeo e/ou ligante não natural do kit ou do processo da invenção é quimicamente modificado, para facilitar a detecção/localização de receptor(es) CB. Em uma concretização preferencial, referida modificação química envolve a inclusão, a uma região do peptídeo/ligante, de um ou mais cromóforos e/ou elemento(s) radiativo(s).

Em uma concretização preferencial, o referido kit ou processo in vitro proporciona a ligação seletiva de receptores CB (CB1 e/ou CB2, por exemplo), a quantificação do nível de expressão de tais receptores e/ou a quantificação da intensidade de ligação do peptídeo/ligante a receptores CB, bem como a atividade biológica do receptor.

Referido kit ou processo in vitro é particularmente útil para a detecção de outras entidades moleculares ligantes de receptores CB, ou mesmo de entidades moleculares que afetem a ligação, seletiva ou não, dos peptídeos da invenção aos receptores CB.

Referido kit ou processo in vitro é também particularmente útil para a subsequente personalização de tratamentos terapêuticos baseados em composições farmacêuticas compreendendo o peptídeo não natural da invenção. O kit ou processo da invenção são, portanto, aplicáveis à predição/prognóstico terapêutico da evolução de condições/desordens metabólicas, ou mesmo do potencial sucesso terapêutico no tratamento de: desordens metabólicas compreendendo obesidade, diabetes, hipertensão arterial sistémica (ou doença, estado relacionado e/ou comorbidades associadas); prevenção de sobrepeso; regulação do apetite; indução de saciedade; prevenção de ganho de peso após perda de peso com sucesso; aumento do consumo de energia; redução de peso estética; ou bulimia.

É um outro objeto da presente invenção o uso de pelo menos um peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AA Asp-AA₂-AA₂-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA3 é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos,

para a preparação de um medicamento para modular a atividade de receptores CB, sendo útil no tratamento de síndrome metabólicas e/ou para promover a redução de peso estética em um mamífero.

Em uma concretização particularmente preferencial, o referido uso é de um ou mais peptídeo não natural selecionado dentre: SeqlD:1 , SeqlD:2, SeqlD:3, SeqlD:4, SeqlD:5, SeqlD:6 ou suas formas cíclicas, e/ou combinações dos mesmos.

É um outro objeto da invenção uma composição farmacêutica para modular a atividade de receptores CB em um mamífero, referida composição compreendendo: um veículo farmaceuticamente aceitável; e, como princípio ativo, um ou mais peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AArAsp-AA₂-AA₂-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA₂ é um aminoácido hidrofóbico;

AA3 é um aminoácido com carga;

AA é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis do referido(s) peptídeo(s).

Em uma realização preferencial, a referida composição farmacêutica adicionalmente compreende outros princípios ativos. Em uma realização preferencial, a composição farmacêutica se apresenta na forma de tablete, gel, solução injetável ou formas inaláveis ou em adesivo.

Estes e outros objetos do presente pedido de patente serão imediatamente valorizados pelos versados na arte e pelas empresas com interesses no segmento, e serão descritos em detalhes suficientes para sua reprodução na descrição a seguir.

Descrição das Figuras

A descrição detalhada a seguir e as figuras em anexo ilustram as principais características e concretizações da presente invenção, apresentadas detalhadamente para dar melhor suporte ao técnico no assunto, para que o mesmo possa entender e reproduzir o conceito inventivo da invenção em qualquer de suas possíveis concretizações. Tais detalhes não devem ser entendidos de forma limitativa e servem somente para ilustrar algumas das concretizações preferidas da presente invenção.

A figura 1 apresenta um screening de novos ligantes para o receptor

CB1.

A figura 2 apresenta resultados de teste de dor após a administração de uma concretização preferencial de peptídeo da invenção (SeqlD:1) em comparação com outros peptídeos conhecidos da técnica.

A figura 3 apresenta resultados de testes de depressão (nado forçado) após a administração de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ) em comparação com outros peptídeos da técnica.

A figura 4 apresenta resultados de testes de medição de tecido adiposo retroperitoneal após administração de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1).

A figura 5 apresenta resultados de testes de medição de tecido adiposo inguinal após administração de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1).

A figura 6 apresenta resultados de testes de medição de tecido adiposo gonadal após administração de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1).

A figura 7 apresenta resultados de testes de medição de tecido adiposo mesentérico após administração de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD.1).

A figura 8 apresenta resultados de testes de medição de tecido adiposo marrom após administração de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1).

A figura 9 apresenta resultados da medição do índice de adiposidade após administração de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1).

A figura 10 apresenta os resultados experimentais em receptores CB1 para de uma outra concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:2) e comparação ao controle e à SeqlD:1.

A figura 11 apresenta os resultados experimentais em receptores CB2 para uma outra concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:2) e comparação ao controle e à SeqlD:1.

A figura 12 apresenta os resultados experimentais em receptores CB1 para uma outra concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:3) e comparação ao controle e à SeqlD:1.

A figura 13 apresenta os resultados experimentais em receptores CB1 para uma outra concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:4) e comparação ao controle e à SeqlD:1.

A figura 14 apresenta os resultados experimentais em receptores CB1 para uma outra concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:5) e comparação ao controle e à SeqlD:1.

A figura 15 apresenta os resultados experimentais em tecido adiposo retroperitoneal para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 16 apresenta os resultados experimentais em tecido adiposo gonadal para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto. A figura 17 apresenta os resultados experimentais em tecido adiposo inguinal para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 18 apresenta os resultados experimentais em tecido adiposo marrom para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 19 apresenta os resultados experimentais em tecido adiposo mesentérico para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 20 apresenta os resultados experimentais relacionados ao índice de adiposidade para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 21 apresenta os resultados experimentais sobre a concentração de leptina sérica para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 22 apresenta os resultados experimentais sobre a expressão proteica de CB1 e CB2 no tecido adiposo marrom para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 23 apresenta os resultados experimentais em relação ao peso dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 24 apresenta os resultados experimentais em relação a glicemia dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 25 apresenta os resultados experimentais em relação à insulinemia dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 26 apresenta os resultados experimentais em relação aos níveis de colesterol dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 27 apresenta os resultados experimentais em relação aos níveis de triglicerides dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 28 apresenta os resultados experimentais em relação à quantidade de tecido adiposo gonadal dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 29 apresenta os resultados experimentais em relação à quantidade de tecido adiposo mesentérico dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 30 apresenta os resultados experimentais em relação à quantidade de tecido adiposo marrom dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 31 apresenta os resultados experimentais em relação à quantidade de tecido adiposo retroperitonial dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 32 apresenta os resultados experimentais em relação à quantidade de tecido adiposo inguinal dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 33 apresenta os resultados experimentais em relação ao índice de adiposidade dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 34 apresenta os resultados experimentais em relação ao índice de adiposidade dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

A figura 35 apresenta os resultados experimentais em relação à pressão arterial dos animais suplementados com 20% de sacarose para uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1) e comparação ao controle e ao Rimonabanto.

Descrição Detalhada da Invenção

O conceito inventivo comum aos diversos objetos da invenção é prover um peptídeo não natural útil como ligante de receptores CB. A partir deste conceito inventivo, diversas aplicações foram concretizadas pelos inventores usando o referido conceito inventivo, incluindo, entre outros: a modulação, seletiva ou não, da atividade de tais receptores; a obtenção de um kit e um processo in vitro para avaliar a ligação a receptores CB; o uso do referido peptídeo como auxiliar na identificação de outras entidades moleculares ligantes de CB ou que interferem na ligação do peptídeo da invenção a receptores CB; o uso do referido peptídeo para a preparação de composição farmacêutica para modular a atividade de receptores CB.

Para fins da presente invenção as seguintes definições são utilizadas: Peptídeo modificado

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender "peptídeo modificado" como um peptídeo não natural, modificado artificialmente a fim de atingir os objetivos da presente invenção.

Pelo menos 70% de similaridade

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender "pelo menos 70% de similaridade" como o fato de manter-se no mínimo 70% de similaridade e/ou identidade com o peptídeo de (SeqlD:1). No contexto do presente peptídeo, isso seria o mesmo que se modificar até 3 aminoácidos de tal forma que o peptídeo mantenha a mesma atividade apresentada ao longo desse pedido de patente.

Peptídeo cíclico ou circular

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender "peptídeo cíclico" ou "circular" como um peptídeo que teve uma ligação covalente entre as duas extremidades de uma molécula linear de ácido nucleico (simples ou dupla fita) envolvendo a união do 3'-hidroxil ao 5'-fosfato através de qualquer método conhecido da técnica, particularmente pela atividade de enzimas ligase. O peptídeo cíclico pode ser utilizado em substituição ao peptídeo linear devido ao fato de ser mais difícil de ser degradado, já que suas extremidades ou zonas de ataque por enzimas hidrolisantes não estão tão expostas quanto em um peptídeo linear.

Liqante ao receptor CB

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender "ligante ao receptor CB" como um composto ou molécula que interaja com o sistema CB e/ou receptores CB1 ou CB2 de forma a promover algum efeito direto ou indireto de ligação aos ditos receptores.

Aqonista

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender "agonista" como um fármaco, droga, hormônio, neurotransmissor ou outra molécula sinalizadora que forma um complexo com um sítio receptor, dessa forma acionando uma resposta ativa de uma célula.

Aqonista inverso / antagonista

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender "agonista inverso ou antagonista" como agente(s) (por exemplo: fármacos, drogas, hormônios ou enzimas) que se liga(m) aos receptores dos agonistas e produz(em) efeitos farmacológicos opostos aos dos agonistas, de tal forma que a ação de um inibe parcialmente ou totalmente o efeito da outra. Particularmente, um composto será um agonista inverso quando atua na presença de um agonista, mas reduzindo sua atividade, um antagonista será um composto que bloqueará totalmente a atividade do agonista.

Modular a função de receptor CB

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender "modular a função de receptor CB" como uma interação que acarreta na alteração da atividade bioquímica do receptor CB, particularmente CB1 ou CB2. Entende-se que a alteração é positiva quando ocorre um efeito antagonista ou agonista inverso nos receptores CB e que a alteração é negativa quando ocorre um efeito agonista nos receptores CB.

Composição farmacêutica

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender

"composição farmacêutica" como toda e qualquer composição que contenha um princípio ativo, com fins profiláticos, paliativos e/ou curativos, atuando de forma a manter e/ou restaurar a homeostase, podendo ser administrada de forma tópica, parenteral, enteral e/ou intratecal.

Formulação farmaceuticamente aceitável

No contexto do presente pedido de patente, deve-se entender "formulação farmaceuticamente aceitável" uma formulação contendo excipientes e carreadores farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos por técnicos no assunto, como é o desenvolvimento de doses e tratamentos convenientes para uso em composições particulares que podem ser descritas em uma série de regimentos de tratamento, incluindo oral, parenteral, intravenoso, intranasal, intravítreo e intramuscular, intracerebral, intracerebroventricular e intraocular e sua administração e/ou formulação.

Distúrbios metabólicos

No contexto do presente pedido de patente, "distúrbios metabólicos" deve ser entendido como qualquer distúrbio metabólico que altere as funções fisiológicas normais de um ser vivo, em especial mamíferos. No contexto do presente pedido de patente, o termo compreende doenças crónicas e agudas que geram alterações fisiológicas no ser humano, tais como: dislipidemias de causas diversas, obesidade, hipertensão, diabetes melitus, diabetes tipo 1 , síndrome metabólica, aterosclerose, dentre outros distúrbios metabólicos. A presente invenção revela, entre outros objetos, um peptídeo não natural compreendendo pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AA Asp- AA2-AA₂-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA₃ é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

Preferencialmente, o peptídeo não natural modificado tem cauda de aminoácido AA1 funcionalizada.

Preferencialmente, o peptídeo não natural modificado tem o aminoácido hidrofóbico AA2 selecionado do grupo consistindo de: alanina, isoleucina, leucina, fenilalanina, valina, prolina, glicina, ou combinações dos mesmos.

Preferencialmente, o peptídeo não natural modificado tem o aminoácido com carga AA₃ selecionado do grupo consistindo de: arginina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, ou combinações dos mesmos.

Preferencialmente, o peptídeo não natural modificado tem a cauda de aminoácido AA4 com 0 aminoácido, ou a cauda de aminoácido AA4 compreendendo uma sequência contendo os aminoácidos prolina, leucina e/ou treonina.

Preferencialmente, o peptídeo não natural modificado tem pelo menos

90% de similaridade em relação à sequência de aminoácidos SeqlD:1 (Pep 19).

Preferencialmente, o peptídeo não natural modificado é ser selecionado dentre peptídeos de sequência: SeqlD:1 ; SeqlD:2; SeqlD:3; SeqlD:4; SeqlD:5; SeqlD:6; suas formas cíclicas; ou combinações dos mesmos

A presente invenção também proporciona um kit e processo in vitro para a para a avaliação de ligação a receptores CB. O referido processo compreende ao menos uma etapa de contatar uma amostra biológica contendo um receptor CB com pelo menos um peptídeo não natural da invenção.

Preferencialmente, o peptídeo e/ou ligante não natural do kit ou do processo da invenção é quimicamente modificado, para facilitar a detecção/localização de receptor(es) CB. Em uma concretização preferencial, referida modificação química envolve a inclusão, a uma região do peptídeo/ligante, de um ou mais cromóforos e/ou elemento(s) radiativo(s).

O referido kit ou processo in vitro proporciona a ligação seletiva de receptores CB (CB1 e/ou CB2, por exemplo), a quantificação do nível de expressão de tais receptores e/ou a quantificação da intensidade de ligação do peptídeo/ligante a receptores CB. O referido kit ou processo in vitro é particularmente útil para a detecção de outras entidades moleculares ligantes de receptores CB, ou mesmo de entidades moleculares que afetem a ligação, seletiva ou não, dos peptídeos da invenção aos receptores CB.

O peptídeo da invenção tem diversas aplicações, sendo particularmente útil, dentre outras aplicações, para modular a atividade de receptores CB, sendo útil para o tratamento de condições metabólicas ou doenças associadas à modulação da atividade de receptores canabinóides (CB) - sem que ocorram efeitos indesejáveis conhecidos dos congéneres disponíveis no estado da técnica. O peptídeo da invenção é particularmente útil como um antagonista ou agonista inverso de CB1 e/ou de CB2, agindo de forma superior aos congéneres disponíveis na técnica e não atravessando a barreira hematoencefálica.

Adicionalmente, conforme será demonstrado nos exemplos subsequentes, o peptídeo da invenção é administrável oralmente a um mamífero, ou seja, não se degrada durante a ingestão oral. Essa característica é particularmente inesperada, uma vez que as enzimas naturais de um indivíduo não degradam ou degradam muito pouco o peptídeo quando no trato digestivo e o mesmo atua eficazmente quando administrado pela via oral. O presente pedido de patente revela uma composição farmacêutica que compreende o peptídeo do presente pedido de patente. A presente composição farmacêutica compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e pode adicionalmente compreender outros ativos e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, o dito peptídeo sendo o componente ativo da composição, que é administrada na forma de tablete, gel, solução injetável ou outras formas de administração adequadas para fins farmacêuticos e médicos.

Em uma realização preferencial, o peptídeo do presente pedido de patente atua como ligante de receptor CB1 e, mais preferencialmente, o dito peptídeo é agonista, antagonista ou agonista inverso de CB1.

Em uma realização preferencial, o peptídeo do presente pedido de patente atua como agonista, antagonista ou agonista inverso de CB2.

O peptídeo do presente pedido de patente é também útil para a preparação de medicamentos para o tratamento de aterosclerose, hipertensão, diabetes, diabetes tipo 2, tolerância comprometida de glicose (ITG), dislipidemia, doenças coronárias do coração, doenças da vesícula biliar, pedra na vesícula, osteoartite, câncer, disfunções sexuais e riscos de morte prematura. O peptídeo da invenção é também útil para preparar um medicamento para promover a redução de peso estética em um indivíduo Por "perda de peso estética", entende-se a perda de peso de um indivíduo que não possua nenhuma indicação médica para sua a redução de sua massa corpórea.

Adicionalmente, conforme será demonstrado nos exemplos subsequentes, o presente peptídeo é administrável oralmente a um mamífero, ou seja, não se degrada durante a ingestão oral. Essa característica é particularmente inesperada, uma vez que as enzimas naturais de um indivíduo não degradam ou degradam muito pouco o peptídeo quando no trato digestivo e o mesmo atua eficazmente quando administrado pela via oral.

Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar algumas das diversas maneiras de se concretizar a invenção, contudo, sem limitar o escopo da mesma.

Exemplos de Concretização Preferencial

Exemplo 1. Peptídeo Asp-lle-lle-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr

Em uma concretização da invenção, o peptídeo tem sequência Asp-lle- lle-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr (indicado na sequência de aminoácidos SeqlD:1 ou Pep 19 e identificado com o método de screening de GPCR) e proporcionou ação como agonista inverso do receptor CB1. A figura 1 demonstra o referido ligante para o receptor CB1 através de ELISA com membranas de stirato (5 g/poço) tratadas com 1 Μ de cada droga por 2 horas em temperatura ambiente e incubadas com o anticorpo anti-CB1 (1 :500). A porcentagem de ativação do receptor foi calculada em relação ao controle, membrana não tratada (100%). Os resultados são mostrados como média +- SEM (n=5). Diferenças significativas estão indicadas e p<0,05.

Através da detecção da efetiva interação com o receptor CB1 foram subsequentemente realizados os testes de dor constantes na Figura 2 que apresenta a atividade antihiperalgésica do peptídeo da presente invenção, hemopressina e outros peptídeos, in vivo. Foi feita análise comparativa da administração intraplantar do peptídeo sobre a hiperalgesia induzida por carragenana. Ratos foram tratados com o peptídeo (20g por pata) imediatamente antes da administração intraplantar de carragenana (200g por pata) e foram avaliados usando um aparato de pressão Ugo Basileantes (Oh e patas vazias) e 3h após administração de carragenana (patas pretas). Os ratos administrados intraplantarmente com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (grupo controle) e os resultados foram apresentados como média SEM, n=6-8.

A figura 3 apresenta os efeitos da aplicação do peptídeo da presente invenção em um modelo de depressão (nado forçado) e foi constatado que o peptídeo, ao contrário do rimonabanto, não causa depressão. O teste de nado forçado foi realizado baseado em testes prévios ([Harkin et al., 2004], [Petit- Demouliere et al., 2005] e [Treit e Menard, 1998]). Os ratos foram postos em uma piscina com água (24+-1 °C) até 1m do fundo (para que o rato não possa tocar o fundo) e 20cm da piscina o tempo de imobilidade (quando o animal não se move exceto de pequenos movimentos necessários para sua flutuação); o procedimento foi gravado por 3 experimentos após 1 , 6 e 9 minutos.

Além disso, em um modelo agudo de tratamento (3 dias de tratamento via oral em ratos wistar não obesos) verificou-se a ativação do tecido adiposo marrom, a redução dos tecidos adiposos retroperitonial, inguinal e marrom, bem como do índice de adiposidade (figuras 4 a 9), efeitos não observados com o com rimonabanto.

Particularmente, pode-se verificar que o presente peptídeo possui atividade mesmo quando administrado pela via oral. Esse fato é de difícil ocorrência na técnica e possui diversas vantagens em termos farmacêuticos e de administração comercial de um medicamento.

Exemplo 2: Peptídeo Asp-lle-Leu-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr

Em uma concretização da invenção, o peptídeo tem sequência Asp-lle- Leu-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr (indicado na sequência de aminoácidos SeqlD:2 e identificado com o método de screening de GPCR) e proporcionou ação como agonista inverso do receptor CB2 (figuras 10 e 11). A figura 10 mostra os resultados do referido peptídeo em comparação com controle e o peptídeo de sequência Seq.lD:1 para o receptor CB1 através de ELISA com membranas de stirato (5pg/poço) tratadas com 1 μΜ de cada droga por 2 horas em temperatura ambiente e incubadas com o anticorpo anti-CB1 (1 :500). A porcentagem de ativação do receptor foi calculada em relação ao controle, membrana não tratada (100%). Os resultados são mostrados como média +- SEM (n=5). Diferenças significativas estão indicadas e p<0,05.

A figura 11 mostra os resultados do peptídeo deste exemplo em comparação com controle e o peptídeo de sequência Seq.lD:1 para o receptor CB2 através de ELISA com membranas de stirato (5 g/poço) tratadas com 1 μΜ de cada droga por 2 horas à temperatura ambiente e incubadas com o anticorpo anti-CB1 (1 :500). A porcentagem de ativação do receptor foi calculada em relação ao controle, membrana não tratada (100%). Os resultados são mostrados como média +- SEM (n=5). Diferenças significativas estão indicadas e p<0,05.

A partir dos resultados obtidos para o exemplo 2, conclui-se que a alteração de hidrofobicidade no terceiro aminoácido da sequência SeqlD:1 faz surgir uma atividade de agonista inverso em receptores CB2. Desse modo, a presença de um aminoácido hidrofóbico nesta posição é importante para a manutenção da atividade errí receptores CB1.

Foi realizado também experimento em que o terceiro aminoácido da SeqlD:1 (aminoácido isoleucina) foi substituído pela treonina. Entretanto, tal substituição causou a perda de atividade biológica esperada para o peptídeo estudado. Desse modo, concluiu-se que é importante a presença de aminoácido hidrofóbico na terceira posição da SeqlD:1.

Exemplo 3: Peptídeo Asp-lle-lle-Ala-Asp-Asp-Ala-Pro-Leu-Thr

Em uma concretização da invenção, o peptídeo tem sequência Asp-lle- lle-Ala-Asp-Asp-Ala-Pro-Leu-Thr (indicado na sequência de aminoácidos SeqlD:3 e identificado com o método de screening de GPCR) e proporcionou menor atividade em receptores CB1 (figura 12) em relação à atividade obtida pela sequência de aminoácidos SeqlD:1. Entretanto, o efeito farmacológico foi mantido.

A figura 12 mostra os resultados do peptídeo deste exemplo para o receptor CB1 através de ELISA com membranas de stirato (5pg/poço) tratadas com 1 μΜ de cada droga por 2 horas em temperatura ambiente e incubadas com o anticorpo anti-CB1 (1 :500). A porcentagem de ativação do receptor foi calculada em relação ao controle, membrana não tratada (100%). Os resultados são mostrados como média +- SEM (n=5). Diferenças significativas estão indicadas e p<0,05.

Desse modo, a partir dos resultados obtidos para este exemplo e comparando-se com os resultados obtidos nos outros exemplos, conclui-se que um aminoácido com carga na sétima posição (tomando-se como base a sequência SeqlD:1 , em que o sétimo aminoácido é o ácido glutâmico) não é fundamental para a atividade em receptores CB1 mas altera esta atividade.

Exemplo 4: Peptídeo Asp-lle-lle-Ala-Asp-Asp-Glu

Em uma concretização da invenção, o peptídeo tem sequência Asp-lle- lle-Ala-Asp-Asp-Glu (indicado na sequência de aminoácidos SeqlD:4 e identificado com o método de screening de GPCR) e proporcionou melhorada atividade de agonista inverso em receptores CB1 , quando comparada à atividade obtida com a sequência SeqlD:1. Desse modo, os sete aminoácidos desta sequência são essenciais para a atividade do peptídeo como agonista inverso em CB1.

A figura 13 mostra os resultados do peptídeo deste exemplo para o receptor CB1 através de ELISA com membranas de stirato (5 g/poço) tratadas com 1 μΜ de cada droga por 2 horas em temperatura ambiente e incubadas com o anticorpo anti-CB1 (1 :500). A porcentagem de ativação do receptor foi calculada em relação ao controle, membrana não tratada (100%). Os resultados são mostrados como média +- SEM (n=5). Diferenças significativas estão indicadas e p<0,05.

Particularmente, pode-se verificar que o presente peptídeo possui atividade mesmo quando administrado pela via oral. Esse fato é de difícil ocorrência na técnica e possui diversas vantagens em termos farmacêuticos e de administração comercial de um medicamento. Exemplo 5; Peptídeo Asp-lle-lle-Ala-Asp-Asp-Glu-Ala-Leu-Thr

Em uma concretização da invenção, o peptídeo tem sequência Asp-lle- lle-Ala-Asp-Asp-Glu-Ala-Leu-Thr (indicado na sequência de aminoácidos SeqlD:5 e identificado com o método de screening de GPCR) e proporcionou, em doses baixas, atividade agonista inverso e, em doses altas, apresentou atividade agonista nos receptores endocanabinóides.

Portanto, a partir deste experimento, conclui-se que o oitavo aminoácido da sequência original SeqlD:1 (Prolina) é um componente agonista do peptídeo, já que a substituição do aminoácido prolina (Pro) pelo aminoácido alanina (Ala) resultou na melhora da atividade agonista inverso do peptídeo em questão.

Pode-se concluir também que a retirada da propriedade de dobra conformacional proporcionada pela presença de prolina (Pro) na oitava posição da sequência SeqlD:1 faz surgir uma atividade agonista em receptores endocanabinóides.

A figura 14 mostra os resultados do peptídeo deste exemplo para o receptor CB1 através de ELISA com membranas de stirato (5Mg/poço) tratadas com diferentes doses de cada droga por 2 horas em temperatura ambiente e incubadas com o anticorpo anti-CB1 (1 :500). A porcentagem de ativação do receptor foi calculada em relação ao controle, membrana não tratada (100%). Os resultados são mostrados como média +- SEM (n=5). Diferenças significativas estão indicadas e p<0,05.

Exemplo 6: Peptídeo cíclico -Asp-lle-lle-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr-

Em uma concretização da invenção, o peptídeo é cíclico, tem sequência Asp-lle-lle-Ala-Asp-Asp-Glu-Pro-Leu-Thr (indicado na sequência de aminoácidos SeqlD:5 porém cíclico e identificado com o método de screening de GPCR) e proporcionou semelhante atividade biológica quando comparado ao mesmo peptídeo não cíclico. Entretanto, a ciclização é interessante principalmente no que se refere ao aumento de tempo da meia-vida do peptídeo no organismo (in vivo). Também se verificou que o presente peptídeo possui atividade mesmo quando administrado pela via oral. Esse fato é de difícil ocorrência na técnica e possui diversas vantagens em termos farmacêuticos e de administração comercial de um medicamento.

A tabela 1 sumariza os dados dos resultados de testes feitos com o peptídeo da invenção em várias de suas concretizações preferenciais, em amplo contraste com os resultados de uso do peptídeo natural conhecido na técnica anterior.

Tabela 1

ID Sequência Resultado Conclusão

Sequência Não foi detectada nenhuma natural DIIADDEPLT utilidade com relação ao

- sistema canabinóide

{prior art)

Diminui a

atividade em

Peptídeo DILADDEPLT Alterando a hidrofobicidade na Modificado 1 relação a CB1 ,

mas surge uma posição 3 (substituindo lie por (Seq ID 1)

forte atividade Leu) faz surgir uma atividade agonista inverso em CB2.

em CB2

Diminui a Ter um aminoácido com carga atividade em na posição 7 é importante,

Peptídeo DIIADDAPLT

Modificado 2 relação a CB1 mas não é fundamental para a (Seq ID 2) (comparativaatividade CB1 , como no caso mente a de aminoácido hidrofóbico na SeqlD:1 ). posição 3.

Os 3 últimos aminoácidos não parecem essenciais para a

Peptídeo DIIADDE Aumenta a atividade do peptídeo como Modificado 3 atividade em

(Seq ID 3) agonista inverso de CB1 , e relação a CB1

essa sequência mínima poderia ser economicamente mais viável dependendo da preservação de seus efeitos in vivo.

A posição 8 é um componente agonista do peptídeo, uma vez

Peptídeo DIIADDEALT Em doses baixas que sem ela melhorou a

Modificado 4 não foi detectada atividade agonista inverso. (Seq ID ) atividade Tirando a propriedade de

agonista inverso; dobra conformacional e em doses altas proporcionada pela presença virou agonista. de Pro na posição 9, surge

uma atividade agonista.

In vitro não foi detectada diferença, mas pode ter

Peptídeo DIIADDEPLT Não foi detectada grande diferença in vivo, por Modificado 5 (cíclica) mudança na mudança no tempo da meia (Seq ID 5) atividade vida do peptídeo.

Peptídeo

0 peptídeo não

Modificado 6 DITADDEPLT Parece ser importante ter um (Seq ID 6) demonstra

aminoácido hidrofóbico na atividade frente a

posição 3

CB1 ou CB2

Interessante ressaltar o peptídeo modificado 6 (SeqlD:6), apesar dos respectivos testes não terem demonstrado atividade detectável frente a CB1 ou CB2, pode ser útil em combinações com outros peptídeos modificados indicados acima em kits, para avaliação de eventual competição por substrato e avaliação de outros efeitos.

Os testes in vitro reportados dão suporte aos usos correspondentes reivindicados. Adicionalmente, foram feitos diversos e detalhados testes in vivo, para dar suporte à aplicabilidade terapêutica, conforme sumarizado a seguir.

Exemplo 7: Teste em Tecido adiposo Retroperitoneal

A figura 15 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) em um modelo de tecido adiposo retroperitoneal onde Ratos wistar magros foram tratados com uma dose de Rimonabanto (100 ug/Kg) ou peptídeo 19 (Pep 19 100 ug/Kg) durante 3 dias por via oral. A medida do tecido adiposo foi feita após o término do tratamento. Os resultados estão expressos pelo peso do tecido adiposo retroperitoneal medido ao fim do tratamento (escala de g/100g). Ratos administrados com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (controle). Resultados estão apresentados como média e desvio padrão da média SEM, n=4-5.

Os resultados indicam que a massa do tecido adiposo retroperitoneal foi menor nos animais que receberam o Pep 19 em comparação com os grupos que receberam rimonabanto e/ou salina.

Exemplo 8: Teste em Tecido adiposo Gonadal

A figura 16 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) em um modelo de tecido adiposo gonadal onde Ratos wistar magros foram tratados com uma dose de Rimonabanto (100 ug/Kg) ou peptídeo 19 (Pep 19 100 ug/Kg) durante 3 dias por via oral. A medida do tecido adiposo foi feita após o término do tratamento. Os resultados estão expressos pelo peso do tecido adiposo gonadal medido ao fim do tratamento (escala de g/100g). Ratos administrados com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (controle). Resultados estão apresentados como média e desvio padrão da média SEM, n=5.

Os resultados indicam que não há diferença na massa do tecido adiposo gonadal entre os animais que receberam o Pep 19 em comparação com os grupos que receberam rimonabanto e/ou salina.

Exemplo 9: Teste em Tecido adiposo Inquinai

A figura 17 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) em um modelo de tecido adiposo inguinal onde Ratos wistar magros foram tratados com uma dose de Rimonabanto (100 ug/Kg) ou peptídeo 19 (Pep 19 100 ug/Kg) durante 3 dias por via oral. A medida do tecido adiposo foi feita após o término do tratamento. Os resultados estão expressos pelo peso do tecido adiposo inguinal medido ao fim do tratamento (escala de g/100g). Ratos administrados com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (controle). Resultados estão apresentados como média e desvio padrão da média SEM, n=5.

Os resultados indicam que a massa do tecido adiposo inguinal foi menor nos animais que receberam o Pep 19 em comparação com os grupos que receberam rimonabanto e/ou salina.

Exemplo 10: Teste em Tecido adiposo Marrom

A figura 18 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) em um modelo de tecido adiposo marrom onde Ratos wistar magros foram tratados com uma dose de Rimonabanto (100 ug/Kg) ou peptídeo 19 (Pep 19 100 ug/Kg) durante 3 dias por via oral. A medida do tecido adiposo foi feita após o término do tratamento. Os resultados estão expressos pelo peso do tecido adiposo marrom medido ao fim do tratamento (escala de g/100g). Ratos administrados com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (controle). Resultados estão apresentados como média e desvio padrão da média SEM, n=5.

Os resultados indicam que a massa do tecido adiposo marrom foi menor nos animais que receberam o Pep 19 em comparação com os grupos que receberam rimonabanto e/ou salina.

Exemplo 11 : Teste em Tecido adiposo Mesentérico

A figura 19 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) em um modelo de tecido adiposo mesentérico onde Ratos wistar magros foram tratados com uma dose de Rimonabanto ( 00 ug/Kg) ou peptídeo 19 (Pep 19 100 ug/Kg) durante 3 dias por via oral. A medida do tecido adiposo foi feita após o término do tratamento. Os resultados estão expressos pelo peso do tecido adiposo mesentérico medido ao fim do tratamento (escala de g/100g). Ratos administrados com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (controle). Resultados estão apresentados como média e desvio padrão da média SEM, n=5.

Os resultados indicam que não há diferença na massa do tecido adiposo mesentérico entre os animais que receberam o Pep 19 em comparação com os grupos que receberam rimonabanto e/ou salina.

Exemplo 12: Determinação do índice de Adiposidade

A figura 20 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre o índice de adiposidade dos animais. Ratos wistar magros foram tratados com uma dose de Rimonabanto (100 ug/Kg) ou peptídeo 19 (Pep 19 100 ug/Kg) durante 3 dias por via oral. A medida do índice de adiposidade foi feita após o término do tratamento utilizando a fórmula (%), (l=∑ depósitos de gordura/peso corpóreo x 100). Os resultados estão expressos pelo peso do animal medido ao fim do tratamento (escala de g/100g). Ratos administrados com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (controle). Resultados estão apresentados como média e desvio padrão da média SEM, n=5.

Os resultados indicam que o índice de adiposidade foi menor nos animais que receberam o Pep 19 em comparação com os grupos que receberam rimonabanto e/ou salina.

Exemplo 13: Determinação da Concentração de Leptina Sérica

A figura 21 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a concentração de leptina sérica dos animais. Ratos wistar magros foram tratados com uma dose de Rimonabanto (100 ug/Kg) ou peptídeo 19 (Pep 19 100 ug/Kg) durante 3 dias por via oral. A medida da concentração de leptina sérica foi feita após o término do tratamento. Os resultados estão expressos ng/mL. Ratos administrados com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (controle). Resultados estão apresentados como média e desvio padrão da média SEM, n=5. Os resultados indicam que a concentração de leptina sérica foi menor nos animais que receberam o Pep 19 em comparação com o grupo que recebeu salina.

Exemplo 14: Determinação da Expressão Proteica de CB1 e CB2 no Tecido adiposo Marrom

A figura 22 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a expressão proteica de CB1 e CB2 no tecido adiposo marrom dos animais. Ratos wistar magros foram tratados com uma dose de Rimonabanto (100 ug/Kg) ou peptídeo 19 (Pep 19 100 ug/Kg) durante 3 dias por via oral. A medida da expressão proteica foi feita após o término do tratamento. Os resultados estão expressos cell/mm². Ratos administrados com veículo (salina) foram submetidos ao mesmo protocolo (controle). Resultados estão apresentados como média e desvio padrão da média SEM, n=5.

Exemplo 15: Determinação do Peso dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 23 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre o peso dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 pg/Kg. Os resultados foram apresentados em % a partir do peso dos animais tratados com SALINA (controle negativo), e analisados pelo teste Two- way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 na concentração de 100 pg/Kg apresentaram as menores porcentagens de peso da 3^a até a 5^a semana de tratamento.

Exemplo 16: Determinação do Peso dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose A figura 24 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a glicemia dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50 g/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 g/Kg. Os dados foram coletados antes e após 60 dias de suplementação e no 15° e 30° dias de tratamento e foram apresentados em média±SEM e analisados pelo teste Two-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com os animais tratados com Rimonabanto (controle positivo) e Peptídeo 19 na concentração de 100 g/Kg apresentaram as menores glicemias no 15° e 30° dias de tratamento.

Exemplo 17: Determinação da Insulinemia dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 25 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a insulinemia dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 9 (Pep 9) na concentração de 50 g/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 g/Kg. Os dados foram apresentados em média±SEM e analisados pelo teste One-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 na concentração de 100 pg/Kg apresentaram a menor média de insulinemia após 30 dias de tratamento.

Exemplo 18: Determinação do Colesterol dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose A figura 26 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre os níveis de colesterol dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 Mg/Kg. Os resultados foram coletados antes e depois do 15° e 30° dias de tratamento e apresentados em % a partir do colesterol dos animais tratados com SALINA (controle negativo), analisados pelo teste Two- way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 nas concentrações de 100 e 50 g/Kg apresentaram as menores porcentagens de colesterol após 30 dias de tratamento.

Exemplo 19: Determinação de Triqlicerides dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 27 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre os níveis de triglicérides dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 pg/Kg. Os resultados foram coletados antes e depois do 15° e 30° dias de tratamento e apresentados em % a partir do triglicérides dos animais tratados com SALINA (controle negativo), analisados pelo teste Two-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 na concentração de 100pg/Kg apresentaram as menores porcentagens de triglicérides após 30 dias de tratamento. Exemplo 20: Determinação da Quantidade de Tecido Adiposo Gonadal dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 28 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a quantidade de tecido adiposo gonadal dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 pg/Kg. Os resultados foram coletados após 30° dias de tratamento e corrigidos pelo peso corpóreo de cada animal, apresentados em média±SEM e analisados pelo teste One-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 na concentração de 00pg/Kg apresentaram as menores porcentagens de tecido adiposo gonadal em comparação aos demais grupos.

Exemplo 21: Determinação da Quantidade de Tecido Adiposo Mesentérico dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 29 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a quantidade de tecido adiposo mesentérico dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 pg/Kg. Os resultados foram coletados após 30° dias de tratamento e corrigidos pelo peso corpóreo de cada animal, apresentados em média±SEM e analisados pelo teste One-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10. Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 nas concentrações de 50 e 100pg/Kg apresentaram as menores porcentagens de tecido adiposo mesentérico em comparação aos demais grupos.

Exemplo 22: Determinação da Quantidade de Tecido Adiposo Marrom dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 30 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a quantidade de tecido adiposo marrom dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 pg/Kg. Os resultados foram coletados após 30° dias de tratamento e corrigidos pelo peso corpóreo de cada animal, apresentados em média±SEM e analisados pelo teste One-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Exemplo 23: Determinação da Quantidade de Tecido Adiposo Retroperitonial dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 31 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a quantidade de tecido adiposo retroperitonial dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 pg/Kg. Os resultados foram coletados após 30° dias de tratamento e corrigidos pelo peso corpóreo de cada animal, apresentados em média±SEM e analisados pelo teste One-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Exemplo 24: Determinação da Quantidade de Tecido Adiposo Inguinal dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose A figura 32 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a quantidade de tecido adiposo inguinal dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 pg/Kg. Os resultados foram coletados após 30° dias de tratamento e corrigidos pelo peso corpóreo de cada animal, apresentados em média±SEM e analisados pelo teste One-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 na concentração de 100pg/Kg apresentaram as maiores quantidades de tecido adiposo inguinal em comparação aos demais grupos.

Exemplo 25: Determinação do índice de Adiposidade dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 33 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre o índice de adiposidade dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 50pg/Kg e Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 pg/Kg. A massa de tecido adiposo total foi corrigida pelo peso corpóreo de cada animal, apresentadas em média±SEM e analisadas pelo teste One-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 na concentração de 100pg/Kg apresentaram as maiores quantidades de tecido adiposo em comparação aos demais grupos.

Exemplo 26: Determinação do índice de Adiposidade dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose A figura 34 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre o índice de adiposidade dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100 g/Kg, 300 g/Kg e 600 g/Kg. A massa de tecido adiposo total foi corrigida pelo peso corpóreo de cada animal, apresentadas em média±SEM e analisadas pelo teste One-way ANOVA e pós-teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 na concentração de 600pg/Kg apresentaram as menores quantidades de tecido adiposo em comparação aos demais grupos.

Exemplo 27: Determinação da Pressão Arterial dos Animais Suplementados com 20% de Sacarose

A figura 35 apresenta os efeitos da aplicação de uma concretização preferencial de peptídeo da presente invenção (SeqlD:1 ou Pep 19) sobre a pressão arterial dos animais suplementados com 20% de sacarose. Foram utilizados ratos wistar alimentados com dieta padrão suplementada com 20% de sacarose na água de beber durante 60 dias antes e durante o tratamento de 30 dias com SALINA (controle negativo), Rimonabanto (controle positivo), Peptídeo 19 (Pep 19) na concentração de 100pg/Kg, 300pg/Kg e 600pg/Kg. A massa de tecido adiposo total foi corrigida pelo peso corpóreo de cada animal, apresentadas em média±SEM e analisadas pelo teste One-way ANOVA e pós- teste Bonferroni, n=10.

Os resultados indicam que os animais tratados com Peptídeo 19 na concentração de 600pg/Kg apresentaram a menor pressão arterial em comparação aos demais grupos.

Os versados na arte imediatamente valorizarão os conhecimentos aqui revelados e saberão, a partir dos exemplos de concretização ensinados, reproduzi-la em outras modalidades, devendo ser consideradas dentro do escopo da invenção e das reivindicações anexas.

Claims

Reivindicações Peptídeo Modificado, Ligante de Receptores CB, Kit, Processo in vitro para Avaliação de Ligação a Receptores CB, Usos, Composição Farmacêutica para Modular a Atividade de Receptores CB

1. Peptídeo não natural modificado caracterizado por compreender uma sequência com pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AAi-Asp- AA₂-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA₄, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA3 é um aminoácido com carga;

AA₄ é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

2. Peptídeo não natural modificado de acordo com a reivindicação 1 caracterizado pelo fato de que a cauda de aminoácido AA1 é uma cauda funcionalizada.

3. Peptídeo não natural modificado de acordo com a reivindicação 1 ou 2 caracterizado pelo fato de que o aminoácido hidrofóbico AA₂ é selecionado do grupo consistindo de: alanina, isoleucina, leucina, fenilalanina, valina, prolina, glicina, ou combinações dos mesmos.

4. Peptídeo não natural modificado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-3 caracterizado pelo fato de que o aminoácido com carga AA3 é selecionado do grupo consistindo de: arginina, lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico, ou combinações dos mesmos.

5. Peptídeo não natural modificado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4 caracterizado pelo fato de que a cauda de aminoácido AA4 é com 0 aminoácido ou a cauda de aminoácido AA4 compreende uma sequência contendo os aminoácidos prolina, leucina e/ou treonina.

6. Peptídeo não natural modificado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5 caracterizado por compreender pelo menos 90% de similaridade em relação à sequência de aminoácidos SeqlD:1.

7. Peptídeo não natural modificado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-6 caracterizado por ser selecionado dentre peptídeos de sequência: SeqlD:1 ; SeqlD:2; SeqlD:3; SeqlD:4; SeqlD:5; SeqlD:6; suas formas cíclicas; ou combinações dos mesmos.

8. Ligante de receptores CB caracterizado por consistir de pelo menos um peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AArAsp-AA2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA₃ é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

9. Ligante de acordo com a reivindicação 8 caracterizado por ser agonista, antagonista ou agonista inverso de CB.

10. Ligante de acordo com a reivindicação 9 caracterizado por ser um agonista, antagonista ou agonista inverso de CB1 e/ou um agonista, antagonista ou agonista inverso de receptor CB2.

11. Ligante de acordo com qualquer uma das reivindicações 8-10 caracterizado por ser selecionado dentre: SeqlD:1 , SeqlD:2, SeqlD:3, SeqlD:4, SeqlD:5, ou suas formas cíclicas e/ou combinações dos mesmos.

12. Kit para a avaliação de ligação a receptores CB caracterizado por compreender pelo menos um peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AA₁-Asp-AA₂-AA2-Ala-Asp-Asp-AA₃-

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA₃ é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

13. Kit de acordo com a reivindicação 12 caracterizado pelo fato de que o peptídeo e/ou ligante não natural é quimicamente modificado com um ou mais cromóforos e/ou elemento(s) radiativo(s).

14. Processo in vitro para a avaliação de ligação a receptores CB caracterizado por compreender a contactação de uma amostra biológica contendo receptores CB com pelo menos um peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AAi-Asp-AA₂-AA₂- Ala-Asp-Asp-AA₃-AA4, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA₃ é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos.

15. Processo in vitro de acordo com a reivindicação 14 caracterizado pelo fato de que a detecção/localização de receptores CB é feita por sinal ótico, ou radiativo.

16. Processo in vitro de acordo com a reivindicação 14 ou 15 caracterizado pelo fato de que a detecção/localização é seletiva para receptores CB1 e/ou CB2.

17. Processo in vitro de acordo com qualquer uma das reivindicações 14-16 caracterizado pelo fato de que a avaliação da ligação a receptores CB1 e/ou CB2 proporciona a quantificação do nível de expressão de tais receptores; e/ou a quantificação da intensidade de ligação do peptídeo/ligante a receptores CB.

18. Processo in vitro para a detecção de entidades moleculares ligantes de receptores CB e/ou de entidades moleculares que afetem a ligação, seletiva ou não, dos peptídeos da invenção aos receptores CB caracterizado por compreender a contactação de:

- um ou mais receptores CB;

- pelo menos um peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AAi-Asp-AA₂-AA₂-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4, em que:

AA! é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA₂ é um aminoácido hidrofóbico;

AA3 é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos; e - pelo menos uma outra entidade molecular cuja atividade de ligação a CB, ou de interferência de ligação de CB ao peptideo não natural referido acima, se deseja detectar e/ou quantificar .

19. Uso de pelo menos um peptideo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptideo AAi-Asp-AA₂-AA₂-Ala-Asp-Asp-AA3- AA4, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA3 é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos,

para a preparação de um kit para a avaliação de ligação a receptores CB e/ou para a detecção de entidades moleculares ligantes de receptores CB e/ou de entidades moleculares que afetem a ligação do referido peptideo a receptores CB.

20. Uso de pelo menos um peptideo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptideo AAi-Asp-AA2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA₃-

AA: é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA₂ é um aminoácido hidrofóbico;

AA₃ é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos,

para a preparação de um medicamento para modular a atividade de receptores CB, sendo útil no tratamento de desordens metabólicas e/ou para promover a redução de peso estética em um mamífero.

21. Uso de acordo com a reivindicação 20 caracterizado pelo fato de que o referido peptideo consiste de pelo menos um peptideo não natural selecionado dentre: SeqlD:1 , SeqlD:2, SeqlD:3, SeqlD:4, SeqlD:5, SeqlD:6 ou suas formas cíclicas, e/ou combinações dos mesmos.

22. Composição farmacêutica para modular a atividade de receptores CB em um mamífero caracterizada por compreender:

- um veículo farmaceuticamente aceitável; e - como princípio ativo, pelo menos um peptídeo não natural que compreende pelo menos 70% de similaridade ao peptídeo AA1-ASP-AA2-AA2- Ala-Asp-Asp-AA₃-AA4, em que:

AAi é uma cauda com entre 0 - 10 aminoácidos;

AA2 é um aminoácido hidrofóbico;

AA₃ é um aminoácido com carga;

AA4 é uma cauda com entre 0 - 13 aminoácidos,

e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis do referido(s) peptídeo(s).

23. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 22 caracterizada pelo fato de compreender um peptídeo com pelo menos 90% de similaridade em relação à sequência de aminoácidos SeqlD:1.

24. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 22-23 caracterizada por compreender pelo menos um peptídeo selecionado dentre peptídeos de sequência: SeqlD:1 ; SeqlD:2; SeqlD:3; SeqlD:4; SeqlD:5; SeqlD:6; suas formas cíclicas; ou combinações dos mesmos.

25. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 22-24 caracterizada por adicionalmente compreender outros princípios ativos.

26. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 22-25 caracterizada por se apresentar na forma de tablete, gel ou solução injetável.