CN104607118B - 制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是：取制革废弃皮胶原，粉碎为50～200目的皮块，再水解获得分子量为500D-5000D的胶原多肽；取0.1g胶原多肽，溶于50～200ml液体中，在0～30℃下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4～9，按水解胶原多肽溶液：醇类溶剂为1∶1～15的体积比，震荡下将醇类溶剂滴加入容器中，滴加完，将容器密封，置于摇床中震荡10～60min，再于室温下静置；离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥，即得胶原多肽纳米球。本发明所得胶原多肽纳米球可用于含重金属离子废水的处理，以及矿冶、化工、电镀、机械行业在环境保护和修复方面的处理。
Description
技术领域
本发明属于制革废弃物的再利用，涉及一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法。采用本发明制得的胶原多肽纳米球可用于含重金属离子废水的处理，可广泛用于矿冶、化工、电镀、机械行业在环境保护和修复方面的处理。
背景技术
制革废弃皮胶原往往是由于制革生产中修边、片皮和削匀等操作工序产生大量的边角余料。据统计，我国制革行业中每年产生的废弃皮胶原达140万吨。但该部分天然可再生资源至今仍然没有被很好地利用，不仅是资源的巨大浪费，而且会造成严重的环境污染。因此，回收再利用这些制革废弃皮胶原对制革工业的可持续发展具有重要意义。
制革废弃皮胶原（制革生产中由于修边、片皮和削匀等操作工序会产生大量的边角余料，俗称制革废弃皮胶原，也称制革下脚料；主要成分是胶原蛋白，约占总量的80～90%，富含甘氨酸和脯氨酸残基，前者的含量达到总氨基酸残基的1/3后者则接近1/4。）是宝贵的蛋白资源。在过去，制革废弃皮胶原主要用作生产饲料添加剂，但由于存在基因病的风险，近年来欧美及我国已禁止使用制革下脚料生产饲料添加剂。另一方面，由于蛋白质分子中具有丰富的官能团以及其良好的生物降解性，可从制革废弃皮胶原中提取工业蛋白并以此生产各种助剂。因此，在充分认识胶原蛋白结构的基础上，利用制革废弃皮胶原制备纳米球并应用于相关领域，是制革废弃物的再利用过程，具有显著的经济效益、社会效益和生态效益。
现有技术中，制备胶原多肽纳米球的典型方法是通过自组装过程将多肽与无机纳米粒子表面连接，形成具有一定结构的胶原多肽纳米球。Stucky等（G.D.Stucky,Charge-drivenflocculationofpoly(L-lysine)sgoldnanoparticleassembliesleadingtohollowmicrospheres,JournalofAmericanLeatherandChemistryAssociation,2004,126:5292-5299）利用“分级组装”的原理由聚赖氨酸通过电荷诱导组装形成了以多肽为中心的金纳米粒子和二氧化硅纳米粒子空心球结构。不难看出，该类研究的胶原多肽纳米球主要集中在利用多肽的自组装特性，并通过在无机纳米材料如金、三氧化二铁颗粒表面组装而形成。另一种制备多肽纳/微米球的方法是直接通过乳化固化法和溶胶-凝胶法获得。乳化固化法是一种新的乳液制备方法，其以一定的压力使分散相穿过一个均一的多孔膜进入连续相而获得，该方法简单、耗能低、剪切应力小、表面活性剂用量少，所得乳滴粒径均一。溶胶-凝胶法是往多肽水溶液中加入非溶剂如乙醇等，使多肽去溶剂化而析出形成微球。比较两种方法，膜乳法在保证球粒径均一性上具有明显的优势，而且制备条件温和，但是这种方法由于受到膜孔径的影响，不太适合制备纳米球。而溶胶-凝胶法则较适合于制备多肽纳米球。
现有多肽纳米球的研究一般以纯化多肽为原料，而其价格昂贵的特点限制了大规模应用。以成本低低廉的制革废弃皮胶原多肽为原料制备胶原多肽纳米球更具有后续应用可行性，此类研究尚未见相关报道。
发明内容
本发明的目的旨在克服现有技术中的不足，提供一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法。
本发明的内容是：制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于50～200ml液体中，搅拌5～120min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度0～30℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4～9，将容器置于震荡器（可以采用上海一恒科学仪器有限公司制造的，恒温培养摇床，THZ-103B）上，按水解胶原多肽溶液：醇类溶剂为1∶1～15的体积比取醇类溶剂，在20r/min的震荡频率下，将醇类溶剂滴加入容器内的水解胶原多肽溶液中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡10～60min，再于室温下静置0～10小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液；离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥（可以在-50℃的温度下，冷冻干燥24小时），即制得胶原多肽纳米球。
本发明的内容中：步骤a中所述制革废弃皮胶原是未经铬鞣制的动物皮的边角余料；亦即是动物皮经浸水、去肉、脱脂、脱毛、浸灰膨胀、脱灰、软化等工序处理产生的边角余料；动物皮包括牛皮、羊皮、猪皮等各种动物皮。
本发明的内容中：步骤a中物理粉碎是采用粉碎机在温度不超过37℃条件下将制革废弃皮胶原粉碎，或采用一般剪切工具（例如剪刀、手术刀等）通过剪切过程将制革废弃皮胶原粉碎。
本发明的内容中：步骤a中所述采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽，可以是采用酸水解、碱水解或酶水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；其中，酸水解、碱水解及酶水解的条件可参考侯小东发表的文章（侯小东，章川东，胶原的水解方法及其水解状况的检测，皮革科学与工程，2005）。
所述采用酶水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽，其具体工艺步骤可以如下：称取100g皮块加入到300～800g水中，浸泡2～5小时，用1mol/L氢氧化钠或氢氧化钙溶液调节体系pH至7～9，再加入0.2～1g1398蛋白酶（产品的生产销售企业有：诺维信(中国)生物技术有限公司、南宁庞博生物工程有限公司、邢台思倍特生物科技有限公司等）或胃蛋白酶（产品的生产销售企业有：诺维信(中国)生物技术有限公司、南宁庞博生物工程有限公司、邢台思倍特生物科技有限公司等），于40～70℃温度下反应2～6小时，将温度升至100℃下加热（灭活）5分钟，过滤，冷冻干燥，即制得胶原多肽。
本发明的内容中：步骤b中所述溶于50～200ml液体中，可以是溶解于50～200ml的蒸馏水、质量百分比浓度为0.5～1%氯化钠水溶液、质量百分比浓度为0.5～1%硫酸钠水溶液或质量百分比浓度为0.5～1%硝酸钠水溶液等液体中，以获得水解胶原多肽溶液。
本发明的内容中：步骤c中所述的醇类溶剂可以是甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丁醇中的一种或两种以上的混合物。
制得的胶原多肽纳米球的性能测试如下：
胶原多肽纳米球粒径测试采用激光粒度分析法，美国布鲁克海文，90plus，粒径测试范围0.3nm～6μm。
胶原多肽纳米球形貌观察采用透射电子显微镜法观察，200kV场发射透射电子显微镜，德国蔡司，Libra200FE，放大倍率8-1,000,000X。
与现有技术相比，本发明具有下列特点和有益效果：
（1）采用本发明方法，以来源广泛、成本低廉的制革废弃皮胶原为原料，通过水解获得特定范围分子量（分子量在500-5000D）的水解胶原多肽，配置水解胶原多肽溶液，并采用溶胶-凝胶法制备的胶原多肽纳米球，赋予其量子尺寸效应、小尺寸效应、表面效应和宏观量子隧道效应等优异性能（当材料尺寸进入纳米量级时，其本身具有，比如它比普通材料具有更大的比表面积和更多的表面原子）等，同时，其自身分子结构中含有丰富的氨基、羧基、羰基等活性官能团，这些为后期进一步应用开发提供了必要的基础；
（2）采用本发明的溶剂法，首先，在少量的不良溶剂情况下形成假胶乳；然后，两液相自动分离，慢慢聚集成为不稳定的液滴，同时不断地合并和破裂；最后随着无水乙醇体积比例的增加，形成相对稳定的纳米球体系；
（3）本发明以制革废弃物为原料，对制革工业的节能减排和生物质资源的再利用具有积极作用；本发明方法采用溶胶-凝胶法，生产过程对环境污染小，属于绿色清洁化技术；
（4）由于胶原多肽的结构特性如分子结构中富含羧基、氨基等络合基团，以及根据制革化学原理即一些金属离子如Cr3+、Al3+、Zr2+等与胶原有较强的结合作用，从而对金属离子有较强的结合作用；因此采用本发明制得的胶原多肽纳米球可用于含重金属离子废水的处理，可广泛用于矿冶、化工、电镀、机械行业的在环境保护和修复方面的处理；
（5）本发明方法生产过程简单，操作性强，易于推广，所得产品有较高的附加值，具有良好的应用前景，如污水处理、化工催化剂应用等，实用性强。
附图说明
图1是实施例1所得胶原多肽纳米球通过激光粒度分析法测得的粒径测试结果，其中纳米球平均粒径为47.8nm，中值粒径为44.2nm，表明所制备的圆球属于纳米级，且其粒径分布范围均匀；
图2是实施例2所得胶原多肽纳米球的透射电镜观察结果，结果显示所得胶原多肽纳米球为较为规则的圆球状，且其表面光滑；
图3是实施例3所得胶原多肽纳米球的透射电镜观察结果，结果显示所得胶原多肽纳米球粒径较1号实施例有显著增加，平均粒径为113.5nm，中值粒径为112.6nm。但其外形较为规整，表面仍然光滑。
具体实施方式
下面给出的实施例拟对本发明作进一步说明，但不能理解为是对本发明保护范围的限制，该领域的技术人员根据上述本发明的内容对本发明作出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于100ml液体中，搅拌60min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度25℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、并将容器置于震荡器上，按水解胶原多肽溶液：无水乙醇为1∶8的（体积比）取醇类溶剂，调节体系pH值为7，在20r/min的震荡频率下将醇类溶剂滴加入容器中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡30min，再于室温下静置1小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液，离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥（可以在-50℃的温度下，冷冻干燥24小时，后同）得到胶原多肽纳米球。所制得胶原多肽纳米球平均粒径为47.8nm，中值粒径为44.2nm。
实施例2：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽（或简称胶原多肽）；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于100ml液体中，搅拌60min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度25℃条件下，取上述水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4～9中、并将容器置于震荡器上，按水解胶原多肽溶液：无水乙醇为1∶6的（体积比）取无水乙醇，在20r/min的震荡频率下将醇类溶剂无水乙醇滴加入容器中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡30min，再于室温下静置1小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液，离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥得到胶原多肽纳米球。所制得胶原多肽纳米球平均粒径为86.5nm，中值粒径为78.9nm。
实施例3：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于100ml液体中，搅拌60min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度5℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4～9中、并将容器置于震荡器上，按水解胶原多肽溶液：丁二醇为1∶6的（体积比）取丁二醇，在20r/min的震荡频率下将醇类溶剂丁二醇滴加入容器中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡30min，再于室温下静置1小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液，离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥得到胶原多肽纳米球。所制得胶原多肽纳米球平均粒径为113.5nm，中值粒径为112.6nm。
实施例4：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于100ml液体中，搅拌60min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度25℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4～9中、并将容器置于震荡器上，按水解胶原多肽溶液：无水乙醇为1∶6的（体积比）取无水乙醇，在50r/min的震荡频率下将醇类溶剂无水乙醇滴加入容器中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡30min，再于室温下静置1小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液，离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥得到胶原多肽纳米球。所制得胶原多肽纳米球平均粒径为98.5nm，中值粒径为100.6nm。
实施例5：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于100ml液体中，搅拌60min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度5℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4～9中、并将容器置于震荡器上，按水解胶原多肽溶液：无水乙醇为1∶6的（体积比）取无水乙醇，在20r/min的震荡频率下将醇类溶剂无水乙醇滴加入容器中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡60min，再于室温下静置2小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液，离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥得到胶原多肽纳米球。所制得胶原多肽纳米球平均粒径为168.4nm，中值粒径为175.1nm。
实施例6：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于50ml液体中，搅拌5min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度0℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4，将容器置于震荡器（可以采用上海一恒科学仪器有限公司制造的，恒温培养摇床，THZ-103B）上，按水解胶原多肽溶液：醇类溶剂为1∶1的体积比取醇类溶剂，在20r/min的震荡频率下，将醇类溶剂滴加入容器内的水解胶原多肽溶液中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡10min，，制得含胶原多肽纳米球的溶液；离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥（可以在-50℃的温度下，冷冻干燥24小时），即制得胶原多肽纳米球。
实施例7：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于200ml液体中，搅拌120min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度30℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为9，将容器置于震荡器（可以采用上海一恒科学仪器有限公司制造的，恒温培养摇床，THZ-103B）上，按水解胶原多肽溶液：醇类溶剂为1∶15的体积比取醇类溶剂，在20r/min的震荡频率下，将醇类溶剂滴加入容器内的水解胶原多肽溶液中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡60min，再于室温下静置10小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液；离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥（可以在-50℃的温度下，冷冻干燥24小时），即制得胶原多肽纳米球。
实施例8：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于120ml液体中，搅拌65min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度15℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为7，将容器置于震荡器（可以采用上海一恒科学仪器有限公司制造的，恒温培养摇床，THZ-103B）上，按水解胶原多肽溶液：醇类溶剂为1∶8的体积比取醇类溶剂，在20r/min的震荡频率下，将醇类溶剂滴加入容器内的水解胶原多肽溶液中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡35min，再于室温下静置5小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液；离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥（可以在-50℃的温度下，冷冻干燥24小时），即制得胶原多肽纳米球。
实施例9～15：
一种制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于50～200ml液体（实施例9～15分别为60ml、80ml、100ml、130ml、150ml、170ml、190ml）中，搅拌5～120min（实施例9～15分别为10min、30min、50min、70min、90min、100min、110min），得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度0～30℃（实施例9～15分别为5℃、8℃、10℃、15℃、18℃、22℃、25℃）条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4～9中，将容器置于震荡器（可以采用上海一恒科学仪器有限公司制造的，恒温培养摇床，THZ-103B）上，按水解胶原多肽溶液：醇类溶剂为1∶1～15的体积比（实施例9～15分别为1∶2、1∶4、1∶6、1∶7、1∶9、1∶12、1∶14）取醇类溶剂，在20r/min的震荡频率下，将醇类溶剂滴加入容器内的水解胶原多肽溶液中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡10～60min（实施例9～15分别为15min、20min、30min、35min、40min、50min、55min），再于室温下静置0～10（实施例9～15分别为1、3、4、6、7、8、9）小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液；离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥（可以在-50℃的温度下，冷冻干燥24小时），即制得胶原多肽纳米球。
上述实施例中：步骤a中所述制革废弃皮胶原是未经铬鞣制的动物皮的边角余料；亦即是动物皮经浸水、去肉、脱脂、脱毛、浸灰膨胀、脱灰、软化等工序处理产生的边角余料。动物皮包括牛皮、羊皮、猪皮等各种动物皮。
上述实施例中：步骤a中物理粉碎是采用粉碎机在温度不超过37℃条件下将制革废弃皮胶原粉碎，或采用一般剪切工具（例如剪刀、手术刀等）通过剪切过程将制革废弃皮胶原粉碎。
上述实施例中：步骤a中所述采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽，是采用酸水解、碱水解或酶水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；其中，酸水解、碱水解及酶水解的条件可参考侯小东发表的文章（侯小东，章川东，胶原的水解方法及其水解状况的检测，皮革科学与工程，2005），为现有技术。
所述采用酶水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽，其具体工艺步骤可以如下：称取100g皮块加入到300～800g水中，浸泡2～5小时，用1mol/L氢氧化钠或氢氧化钙溶液调节体系pH至7～9，再加入0.2～1g1398蛋白酶（产品的生产销售企业有：诺维信(中国)生物技术有限公司、南宁庞博生物工程有限公司、邢台思倍特生物科技有限公司等）或胃蛋白酶（产品的生产销售企业有：诺维信(中国)生物技术有限公司、南宁庞博生物工程有限公司、邢台思倍特生物科技有限公司等），于40～70℃温度下反应2～6小时，将温度升至100℃下加热（灭活）5分钟，过滤，冷冻干燥，即制得水解胶原多肽。
所述采用酶水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽，其工艺步骤可以具体如下：称取100g皮块加入到550g水中，浸泡3.5小时，用1mol/L氢氧化钠或氢氧化钙溶液调节体系pH至7～9中，再加入0.6g1398蛋白酶（产品的生产销售企业有：诺维信(中国)生物技术有限公司、南宁庞博生物工程有限公司、邢台思倍特生物科技有限公司等）或胃蛋白酶（产品的生产销售企业有：诺维信(中国)生物技术有限公司、南宁庞博生物工程有限公司、邢台思倍特生物科技有限公司等），于60℃温度下反应4小时，将温度升至100℃下加热（灭活）5分钟，过滤，冷冻干燥，即制得水解胶原多肽。
上述实施例中：步骤b中所述溶于50～200ml液体中，是溶解于50～200ml的蒸馏水、质量百分比浓度为0.5～1%氯化钠水溶液、质量百分比浓度为0.5～1%硫酸钠水溶液或质量百分比浓度为0.5～1%硝酸钠水溶液等液体中，以获得水解胶原多肽溶液。
上述实施例中：步骤c中所述的醇类溶剂可以是甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丁醇中的一种或两种以上的混合物。
胶原多肽纳米球的性能测试中：胶原多肽纳米球粒径测试采用激光粒度分析法，美国布鲁克海文，90plus，粒径测试范围0.3nm～6μm。胶原多肽纳米球形貌观察采用透射电子显微镜法观察，200kV场发射透射电子显微镜，德国蔡司，Libra200FE，放大倍率8-1,000,000X。
上述实施例中：所采用的各原料均为市售产品。
上述实施例中：所采用的百分比例中，未特别注明的，均为质量（重量）百分比例或本领域技术人员公知的百分比例；所述质量（重量）份可以均是克或千克。
上述实施例中：各步骤中的工艺参数(温度、时间、浓度、pH值等)和各组分用量数值等为范围的，任一点均可适用。
本发明内容及上述实施例中未具体叙述的技术内容同现有技术。
本发明不限于上述实施例，本发明内容所述均可实施并具有所述良好效果。
Claims (8)
1.制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是步骤为：
a、取制革废弃皮胶原，经物理粉碎为50～200目的皮块，再采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽；
b、称取0.1g水解胶原多肽，溶于50～200ml液体中，搅拌5～120min，得到水解胶原多肽溶液；
c、在温度0～30℃条件下，取水解胶原多肽溶液置于容器中、调节pH值为4～9，将容器置于震荡器上，按水解胶原多肽溶液：醇类溶剂为1∶1～15的体积比取醇类溶剂，在20r/min的震荡频率下，将醇类溶剂滴加入容器内的水解胶原多肽溶液中，滴加完毕后，将容器密封，置于摇床中，震荡10～60min，再于室温下静置0～10小时，制得含胶原多肽纳米球的溶液；离心分离，弃去上清液，余留物经冷冻干燥，即制得胶原多肽纳米球。
2.按权利要求1所述制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是：步骤a中所述制革废弃皮胶原是未经铬鞣制的动物皮的边角余料。
3.按权利要求1所述制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是：步骤a中物理粉碎是采用粉碎机在温度不超过37℃条件下将制革废弃皮胶原粉碎，或采用剪切工具通过剪切过程将制革废弃皮胶原粉碎。
4.按权利要求1所述制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是：步骤a中所述采用水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽，是采用酸水解、碱水解或酶水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽。
5.按权利要求4所述制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是：所述采用酶水解方法获得分子量为500D-5000D的水解胶原多肽，其具体工艺步骤如下：称取100g皮块加入到300～800g水中，浸泡2～5小时，用1mol/L氢氧化钠或氢氧化钙溶液调节体系pH至7～9，再加入0.2～1g1398蛋白酶或胃蛋白酶，于40～70℃温度下反应2～6小时，将温度升至100℃下加热5分钟，过滤，冷冻干燥，即制得水解胶原多肽。
6.按权利要求1或5所述制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是：步骤b中所述溶于50～200ml液体中，是溶解于50～200ml的蒸馏水、质量百分比浓度为0.5～1%氯化钠水溶液、质量百分比浓度为0.5～1%硫酸钠水溶液或质量百分比浓度为0.5～1%硝酸钠水溶液中。
7.按权利要求1或5所述制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是：步骤c中所述的醇类溶剂是甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丁醇中的一种或两种以上的混合物。
8.按权利要求6所述制革废弃皮胶原制备胶原多肽纳米球的方法，其特征是：步骤c中所述的醇类溶剂是甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丁醇中的一种或两种以上的混合物。
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
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Granted publication date: 20160420 Termination date: 20161230 |