CN104561178A

CN104561178A - 采用柚苷酶从淫羊藿苷获得淫羊藿苷元的方法

Info

Publication number: CN104561178A
Application number: CN201410274823.3A
Authority: CN
Inventors: 许明淑; 陆波; 卢珊
Original assignee: Shandong University Weihai
Current assignee: Shandong University Weihai
Priority date: 2014-06-19
Filing date: 2014-06-19
Publication date: 2015-04-29

Abstract

一种利用生物酶反应将淫羊藿苷转变为淫羊藿苷元以提高其生物活性的方法。在柚苷酶的作用下，浓度为30％-70％的乙醇水溶液中进行反应。所述反应温度为40-70℃，反应时间为1-30小时。淫羊藿苷羟基上的糖基被切下来，转为具更高药理活性的淫羊藿苷元。本发明还提高了淫羊藿苷的可加工性，同时可扩大其实际应用范围。

Description

采用柚苷酶从淫羊藿苷获得淫羊藿苷元的方法

技术领域

本发明涉及利用淫羊藿苷转为淫羊藿苷元的一种方法，尤其涉及利用柚苷酶反应获得淫羊藿苷元的方法。

背景技术

淫羊藿苷（Icratin)分子式为C₃₃H₄₀O₁₅，化学结构式如式所示。淡黄色针状结晶。

淫羊藿苷来源于天然产物。天然活性物质淫羊藿苷及淫羊藿苷元具有很大开发价值。目前淫羊藿苷及淫羊藿苷元用途多在于临床心血管疾病的治疗。

淫羊藿苷具明显抑制心肌收缩力，降低左心室压力的上升速率，表明其能降低心肌耗氧量，同时降低外周阻力，减轻心脏后负荷，对心肌缺血和心律失常等心血管疾病具有改善作用。

淫羊藿苷对内分泌系统有明显作用。可明显促进睾酮的基础分泌和环磷酸腺苷的生成上也有促进作用，表现为性激素样作用。

淫羊藿苷可促进抗原激活的淋巴细胞增殖，提高血清溶血素抗体生成水平。可明显抑制端粒酶活性，对白血病细胞均有较明显的诱导分化和抑制增殖作用。

但在医学实践中，天然淫羊藿苷的分子结构并不是活性最佳的状态,需经肠道菌酶系作用下转化为苷元后才能被吸收而发挥药效。

体外生物酶法将淫羊藿苷转为淫羊藿苷元，具特异性好,无污染和转化效率高等优点。

高价（1g淫羊藿苷元约4万元人民币）、高活性单体淫羊藿苷元在工业上如何进一步提高其产量是极有研究意义的领域。现有生产淫羊藿苷元或低糖基淫羊藿苷的方法中多使用丙酮、丁酮等对机体有毒害有机溶剂进行提取。而天然植物体内的苷元或是低糖苷元的含量并不高，收率低等问题。将淫羊藿苷（1g淫羊藿苷约5千元人民币）用生物酶法转为淫羊藿苷元（1g淫羊藿苷元约4万元人民币），可避免使用对机体有害的有机溶剂提取过程，操作方便、反应温和，可得到极纯的苷元，可应用于淫羊藿苷元的工业大规模生产。

从而得知如果将淫羊藿苷转变为淫羊藿苷元或是低糖淫羊藿苷，不仅提高生理活性及应用价值，也促进工业化生产。

通过生物酶的加入将一些生理活性不高、或没有生理活性的成分的结构转变为高活性分子结构，不仅提高提取物的生理活性及应用价值，降低生产成本也促进工业化生产。由于淫羊藿苷元相对于淫羊藿苷更易于吸收，而且苷元的药理活性高于苷。

发明内容

本发明的目的是为了提高淫羊藿苷的生物活性和应用价值，提出一种用酶反应将淫羊藿苷转化成淫羊藿苷元的方法。

本发明的技术方案如下：一种将淫羊藿苷转化成淫羊藿苷元的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

1）将淫羊藿苷加入到 30%-70%乙醇体系中，调节pH(4-8），体系达到一定温度（40-70℃），搅拌下控温反应30小时;

2）2）在上述反应体系中加入柚苷酶，(标准活力475AGUPg)，为含有β-葡萄糖苷酶的一种生物酶。

本发明所述酶优选为柚苷酶。

在上述技术方案的基础上，本发明的技术方案还在于：所述乙醇的浓度为30％。

本发明提供了一种应用柚苷酶反应使淫羊藿苷转变为淫羊藿苷元以提高其生物活性的方法。在生物酶的作用下，淫羊藿苷羟基上的糖基被切下来成为更高市场价的淫羊藿苷元。本发明可显著提高淫羊藿苷的药理活性，使其在实验室研究中易于有效使用并为淫羊藿中成药制剂的开发提供原料；并且提高淫羊藿苷转化成苷元的转化率，提供生产淫羊藿苷元，或降低提取的难度；同时可扩大淫羊藿苷的加工性及实际应用范围。

附图说明

图1、2为淫羊藿苷转苷产物用乙酸乙酯萃取液分析结果。图中：1为淫羊藿苷标准品；2为淫羊藿苷元为底物的反应产物。

具体实施方式

实例1：向1000mL三角瓶中，加入10mg淫羊藿苷标准品及400ml30%乙醇水溶液，用1M NaOH溶液调pH值至4.0，体系达到一定温度50℃ ，后加入0.5g柚苷酶(标准活力475AGUPg)，最后，在50℃、200 rpm下，搅拌反应30小时。反应结束后，用与相同体积的乙酸乙酯萃取而去除糖类和酶蛋白杂质，萃取液以G硅胶板（100mm×25mm），氯仿：甲醇＝8：2为流动相展开，在245nm紫外光下观察并用TLC发进行定性分析，结果如图1所示（1.R_{f淫羊藿苷标准品}＝0.50，

2.R_{f反应产物}＝0.8），反应产物R_f值0.8远大于标准品R_f值0.5表明通过酶反应产生了极性小于淫羊藿苷的淫羊藿苷元，反应机理可用下述化学方程式表示：

反应机理可用下述化学方程式表示：

实例2：向1000ml三角瓶中，加入10mg淫羊藿苷标准品及400ml40%乙醇水溶液，用1M NaOH溶液调pH值至4.0，体系达到一定温度50℃ ，后加入0.5g柚苷酶(标准活力475AGUPg)，最后，在50℃、200 rpm下，搅拌反应30小时。反应结束后，用与相同体积的乙酸乙酯萃取而去除糖类和酶蛋白杂质，萃取液以G硅胶板（100mm×25mm），氯仿:甲醇:水=7.5:2.5:0.25为流动相展开，在245nm紫外光下观察并用TLC发进行定性分析，结果如图2所示（R_{f淫羊藿苷标准品}＝0.42，2.R_{f反应产物}＝＝0.8）反应产物R_f值0.8远大于标准品R_f值0.42表明通过酶反应产生了极性小于淫羊藿苷的淫羊藿苷元，反应机理与实例1相同。

实例3：向1000ml三角瓶中，加入10mg淫羊藿苷标准品及400ml30%乙醇水溶液，用1M NaOH溶液调pH值至6.0，体系达到一定温度60℃ ，后加入0.5g柚苷酶(标准活力475AGUPg)，最后，在60℃、200 rpm下，搅拌反应30小时。反应结束后，用与相同体积的乙酸乙酯萃取而去除糖类和酶蛋白杂质，萃取液以G硅胶板（100mm×25mm），氯仿:甲醇:水=7.5:2.5:0.25为流动相展开，在245nm紫外光下观察并用TLC发进行定性分析，结果如图2所示（R_{f淫羊藿苷标准品}＝0.42，2.R_{f反应产物}＝0.8）反应产物R_f值0.8远大于标准品R_f值0.42表明通过酶反应产生了极性小于淫羊藿苷的淫羊藿苷元，反应机理与实例1相同。

实例4：向1000ml三角瓶中，加入10mg淫羊藿苷标准品及400ml30%乙醇水溶液，用1M NaOH溶液调pH值至5.0，体系达到一定温度50℃ ，后加入0.5g柚苷酶(标准活力475AGUPg)，最后，在50℃、200 rpm下，搅拌反应30小时。反应结束后，用与相同体积的乙酸乙酯萃取而去除糖类和酶蛋白杂质。萃取液以G硅胶板（100mm×25mm），氯仿：甲醇＝8：2为流动相展开，在245nm紫外光下观察并用TLC发进行定性分析，结果如图1所示（1.R_{f淫羊藿苷标准品}＝0.50，

2.R_{f反应产物}＝0.8），反应产物R_f值0.8远大于标准品R_f值0.5表明通过酶反应产生了极性小于淫羊藿苷的淫羊藿苷元，反应机理与实例1相同。

实例5：向1000ml三角瓶中，加入10mg淫羊藿苷标准品及400ml20%乙醇水溶液，用1M NaOH溶液调pH值至6.0，体系达到一定温度50℃ ，后加入0.5g柚苷酶(标准活力475AGUPg)，最后，在50℃、200 rpm下，搅拌反应30小时。反应结束后，用与相同体积的乙酸乙酯萃取而去除糖类和酶蛋白杂质。萃取液以G硅胶板（100mm×25mm），氯仿：甲醇＝8：2为流动相展开，在245nm紫外光下观察并用TLC发进行定性分析，结果如图1所示（1.R_{f淫羊藿苷标准品}＝0.50，2.R_{f反应产物}＝0.8），反应产物R_f值0.8远大于标准品R_f值0.5表明通过酶反应产生了极性小于淫羊藿苷的淫羊藿苷元，反应机理与实例1相同。

Claims

1.一种生成淫羊藿苷元的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

1）将淫羊藿苷标准品加入到30%-70%乙醇中， pH值为4-8，体系温度为40℃到70℃;

2）在上述体系中加入柚苷酶，反应时间为30时小时。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于柚苷酶由β-鼠李糖苷酶和β-葡萄糖苷酶组成。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：温度为50℃。

4.按照权利要求1、2、3所述的方法，其特征在于:所述pH值为6。