CN104558117B - 一种乙酰胆碱受体介导靶向的d构型多肽及其应用 - Google Patents
一种乙酰胆碱受体介导靶向的d构型多肽及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104558117B CN104558117B CN201310513197.4A CN201310513197A CN104558117B CN 104558117 B CN104558117 B CN 104558117B CN 201310513197 A CN201310513197 A CN 201310513197A CN 104558117 B CN104558117 B CN 104558117B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cdx
- delivery system
- peg
- brain
- medicine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 31
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 31
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 31
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 title claims abstract description 9
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 title claims abstract 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 50
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 16
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 230000002164 acetylcholinergic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 71
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical group O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 34
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims description 10
- -1 Polyethylene Polymers 0.000 claims description 8
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 claims description 6
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 6
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 6
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 4
- 229920000375 Poly(ethylene glycol)-block-poly(ε−caprolactone) methyl ether Polymers 0.000 claims description 3
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 3
- PAEZRCINULFAGO-OAQYLSRUSA-N (R)-homocamptothecin Chemical compound CC[C@@]1(O)CC(=O)OCC(C2=O)=C1C=C1N2CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 PAEZRCINULFAGO-OAQYLSRUSA-N 0.000 claims description 2
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 claims description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 claims description 2
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 claims description 2
- 229920001553 poly(ethylene glycol)-block-polylactide methyl ether Polymers 0.000 claims description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 2
- VHXNKPBCCMUMSW-FQEVSTJZSA-N rubitecan Chemical compound C1=CC([N+]([O-])=O)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VHXNKPBCCMUMSW-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 2
- 229950009213 rubitecan Drugs 0.000 claims description 2
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 claims description 2
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 claims 2
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 claims 2
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 claims 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000011201 Ginkgo Nutrition 0.000 claims 1
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 claims 1
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 claims 1
- NMOJAXCSURVGEY-UHFFFAOYSA-N N#CC#N.[S] Chemical compound N#CC#N.[S] NMOJAXCSURVGEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000016408 Podocarpus macrophyllus Nutrition 0.000 claims 1
- 244000162450 Taxus cuspidata Species 0.000 claims 1
- 235000009065 Taxus cuspidata Nutrition 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 claims 1
- 125000000879 imine group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 claims 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 abstract description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 17
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 14
- 210000004781 brain capillary Anatomy 0.000 description 13
- 102000019315 Nicotinic acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 12
- 108050006807 Nicotinic acetylcholine receptors Proteins 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 11
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 7
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000009660 Cholinergic Receptors Human genes 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000015296 acetylcholine-gated cation-selective channel activity proteins Human genes 0.000 description 6
- 108040006409 acetylcholine-gated cation-selective channel activity proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 4
- 108010049990 CD13 Antigens Proteins 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 4
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 4
- SRLOHQKOADWDBV-NRONOFSHSA-M sodium;[(2r)-2,3-di(octadecanoyloxy)propyl] 2-(2-methoxyethoxycarbonylamino)ethyl phosphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCCNC(=O)OCCOC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC SRLOHQKOADWDBV-NRONOFSHSA-M 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 3
- 101710195183 Alpha-bungarotoxin Proteins 0.000 description 3
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 3
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 3
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 3
- 101001105486 Homo sapiens Proteasome subunit alpha type-7 Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 102100021201 Proteasome subunit alpha type-7 Human genes 0.000 description 3
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 3
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- XLTANAWLDBYGFU-UHFFFAOYSA-N methyllycaconitine hydrochloride Natural products C1CC(OC)C2(C3C4OC)C5CC(C(C6)OC)C(OC)C5C6(O)C4(O)C2N(CC)CC31COC(=O)C1=CC=CC=C1N1C(=O)CC(C)C1=O XLTANAWLDBYGFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- LYTCVQQGCSNFJU-LKGYBJPKSA-N α-bungarotoxin Chemical compound C(/[C@H]1O[C@H]2C[C@H]3O[C@@H](CC(=C)C=O)C[C@H](O)[C@]3(C)O[C@@H]2C[C@@H]1O[C@@H]1C2)=C/C[C@]1(C)O[C@H]1[C@@]2(C)O[C@]2(C)CC[C@@H]3O[C@@H]4C[C@]5(C)O[C@@H]6C(C)=CC(=O)O[C@H]6C[C@H]5O[C@H]4C[C@@H](C)[C@H]3O[C@H]2C1 LYTCVQQGCSNFJU-LKGYBJPKSA-N 0.000 description 3
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000006837 decompression Effects 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 2
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 2
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 description 1
- AYDAHOIUHVUJHQ-UHFFFAOYSA-N 1-(3',6'-dihydroxy-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-yl)pyrrole-2,5-dione Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=CC=2)OC(=O)C1=CC=2N1C(=O)C=CC1=O AYDAHOIUHVUJHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022579 ATP dependent 26S protease Proteins 0.000 description 1
- 101710178126 Candoxin Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000006845 Michael addition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 101000963954 Naja atra Cobrotoxin-b Proteins 0.000 description 1
- 101000822877 Naja naja Cobrotoxin homolog Proteins 0.000 description 1
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 description 1
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- JCABVIFDXFFRMT-DIPNUNPCSA-N [(2r)-1-[ethoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCC)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC JCABVIFDXFFRMT-DIPNUNPCSA-N 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001348 anti-glioma Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004782 brain capillary endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 201000007983 brain glioma Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 229930184727 ginkgolide Natural products 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000002861 polymer material Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- YNQYZBDRJZVSJE-UHFFFAOYSA-M sodium;2,3-dihydroxypropyl 2,3-di(octadecanoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP([O-])(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC YNQYZBDRJZVSJE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明属药学领域，涉及一种高度稳定且可介导靶向乙酰胆碱受体高表达细胞，并跨越相对应屏障膜的D构型多肽及其纳米递药系统，以及体内外脑靶向性和在治疗脑部等疾病中的应用。经试验结果显示：DCDX与乙酰胆碱受体结合IC50为84.5nM，在血清中稳定并耐受蛋白酶的水解；DCDX所携带模型药物被表达乙酰胆碱受体的阳性细胞特异性摄取，具有跨越该类细胞所构成屏障的能力；DCDX修饰的高分子载体材料所构建的纳米递药系统可将所包载模型药物递送至靶组织，并显著提高药物效果。本发明的D构型多肽DCDX可介导药物或纳米递药系统主动寻靶，在多种疾病的诊治中具备良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属药学领域，涉及一种高度稳定且可介导靶向乙酰胆碱受体高表达细胞，并跨越相对应屏障膜（如血脑屏障）的D构型多肽及其纳米递药系统，具体涉及多肽DCDX（氨基酸序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDF）及其修饰的高分子载体材料所构建的脂质体和聚合物胶束等纳米递药系统，以及体内外脑靶向性和在治疗脑部等疾病中的应用。
背景技术
脑部疾病是一类危害人类生命和健康的重大疾病。由于血脑屏障的存在，大约98%的小分子药物和几乎100%的大分子药物包括蛋白和基因等难以入脑，严重影响了脑部疾病的治疗。本领域公知，血脑屏障（BBB）是一个由脑毛细血管内皮细胞、星形胶质细胞、周细胞和紧密连接蛋白等共同构成的结构和功能屏障，它能够选择性地输送营养物质和必需的内源性物质入脑，并排出脑内毒性代谢物以及进入脑内的外源性物质，维持大脑内环境的稳定。血脑屏障也是阻碍药物进入脑部组织的主要障碍，然而脑毛细血管内皮细胞上存在多种特异性的受体，如转铁蛋白受体、低密度脂蛋白受体和乙酰胆碱受体等，以上述受体的配体或抗体作为靶向分子对纳米递药系统进行修饰或与药物形成复合物，通过受体介导的胞吞转运（receptor mediated transcytosis，RMT）将药物递送入脑是目前最成熟的脑靶向递药策略之一。因此，研究和开发可穿透血脑屏障的靶向分子，介导药物或递药系统穿透血脑屏障而实现药物的脑内传输，具有重要的现实意义。研究表明，肿瘤细胞也高表达各种相关受体，利用受体对应的配体作为靶向分子介导靶向递药是临床肿瘤治疗及诊断实践中最常用的策略。
烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs）是在脑组织包括组成血脑屏障的脑毛细血管内皮细胞、部分肿瘤细胞（如肺癌细胞）表达的一种门控型离子通道受体。本发明的申请人前期研究表明，一种起源于短神经毒素Candoxin的LoopⅡ区域、氨基酸序列为FKESWREARGTRIERG的L构型多肽LCDX，与nAChRs具有高亲和力，可携带递药系统穿透血脑屏障入脑。但因其稳定性较差，在血液中易被降解，降低了其体内脑靶向效果，而D构型多肽是解决其不足的最佳方案之一。多肽逆序合成被广泛用于设计与L构型多肽具有类似生物活性的高度稳定D构型多肽的制备方法。
针对上述问题，本申请的发明人拟提供一种D构型多肽靶向分子DCDX（氨基酸序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDF），旨在提高靶向分子的稳定性，从而改善其所修饰的纳米递药系统跨越血脑屏障或靶向肿瘤细胞的能力，实现对脑部疾病和肿瘤靶向诊治的目标。
目前，未见可跨越血脑屏障的D构型多肽或DCDX修饰的纳米递药系统的研究报道。
多肽逆序合成法制备
发明内容
本发明的目的是制备一种具有高稳定性的D构型多肽靶向分子，并用其修饰高分子载体材料，构建包载药物的纳米递药系统，以提高对脑组织和肿瘤的靶向递药效果。
本发明采用多肽逆序合成技术，设计并制备了具有高稳定性并与烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs）具有更高亲和力的D构型多肽DCDX（氨基酸序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDF）。
本发明制备的DCDX在连接半胱氨酸后，可利用其分子中巯基与马来酰亚胺功能化的荧光物质反应形成复合物，所述的荧光物质选自FAM、近红外染料Cy5.5、IR820、DiR等。
本发明制备的DCDX经上述巯基化后，可修饰在聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（PEG-DSPE）、聚乙二醇-聚乳酸（PEG-PLA）、聚乙二醇-乳酸羟基乙酸共聚物（PEG-PLGA）、聚乙二醇-聚己内酯（PEG-PCL）等高分子载体材料上，用于构建DCDX修饰的脂质体、聚合物胶束、聚合物圆盘、纳米粒等纳米递药系统。
本发明中，DCDX修饰的纳米递药系统可包载紫杉醇、多烯紫杉醇，阿霉素、表阿霉素，喜树碱、羟基喜树碱、9-硝基喜树碱，长春新碱，硼替唑米，DPMI-theta等抗肿瘤药物；也可包载治疗神经退行性疾病的药物，如银杏内酯、神经营养因子等药物；还可包载荧光物质，如FAM、近红外染料Cy5.5、IR820、DiR等。
本发明的DCDX可介导纳米递药系统靶向烟碱型乙酰胆碱受体高表达的细胞及其组织，可用于跨越血脑屏障递药治疗脑部疾病，或针对外周肿瘤的靶向诊治。
本发明提供了DCDX制备方法和性质考察以及上述所修饰的纳米递药系统用于脑部疾病或肿瘤治疗的物质基础。
本发明尽进行了下述制备以及评价试验：
1.DCDX、DCDX-Cys及其荧光标记物（DCDX-Fluorescein）的合成
根据逆序多肽合成技术，采用固相合成的方法制备DCDX和DCDX-Cys；通过马来酰亚胺基团与巯基的Michael加成反应合成DCDX-Fluorescein。HPLC、MS表征结构。
2.DCDX稳定性和受体亲和性评价
从血清稳定性、氨肽酶稳定性、与烟碱型乙酰胆碱受体蛋白结合能力和与高表达烟碱型乙酰胆碱受体的肿瘤细胞摄取能力等方面进行DCDX性质的考察，将DCDX、LCDX分别与大鼠血清和氨肽酶M在37℃进行孵育，在不同时间点检测DCDX、LCDX的浓度以进行稳定性的比较，采用放射竞争结合法评价DCDX、LCDX与烟碱型乙酰胆碱受体蛋白的结合能力，比较DCDX-Fluorescein、LCDX-Fluorescein对烟碱型乙酰胆碱受体蛋白高表达的脑毛细血管内皮细胞（如：脑毛细血管内皮细胞bEnd.3）和模型肿瘤细胞（如：小细胞肺癌细胞NCI-H82）的体外靶向性，比较烟碱型乙酰胆碱受体蛋白高表达的血脑屏障模型对DCDX-Fluorescein、LCDX-Fluorescein的转运能力。
3.DCDX修饰的纳米递药系统的构建与表征
（1）DCDX-PEG-脂质体递药系统的构建与表征
首先合成靶向分子修饰的高分子材料DCDX-PEG-DSPE和LCDX-PEG-DSPE。将DCDX-Cys与Mal-PEG-DSPE在pH7.2的PBS和DMF的混合溶液中反应得到DCDX-PEG-DSPE。将LCDX-Cys与Mal-PEG-DSPE按上述方法反应得到LCDX-PEG-DSPE。
然后分别制备DCDX、LCDX修饰的脂质体（DCDX-PEG-脂质体和LCDX-PEG-脂质体）。以一定比例的HSPC/Chol/mPEG2000-DSPE/DCDX-PEG-DSPE或LCDX-PEG-DSPE为膜材料，采用成膜水化法制备DCDX-PEG-脂质体和LCDX-PEG-脂质体，用挤压过膜的方法减小脂质体粒径，并分别包载DiR、FAM、阿霉素（DOX），构建平均粒径在90nm的脂质体。动态光散射法测定粒径分布，负染色电镜法观察脂质体形态；
（2）DCDX-PEG-DSPE胶束递药系统的构建与表征
以一定比例的mPEG2000-DSPE/DCDX-PEG-DSPE为膜材料，分别以DiR和紫杉醇（PTX）为模型药物，采用成膜水化法制备DCDX-PEG-DSPE胶束，构建平均粒径为10nm的胶束；
4.DCDX-PEG-DSPE胶束递药系统的体内脑靶向性评价
对正常ICR小鼠静脉注射DCDX-PEG-DSPE胶束/DiR、LCDX-PEG-DSPE胶束/DiR和PEG-DSPE胶束/DiR，比较不同递药系统的脑内分布；
5.DCDX-PEG-脂质体递药系统的体内外脑靶向性评价
考察bEnd.3细胞对DCDX-PEG-脂质体/FAM、LCDX-PEG-脂质体/FAM和PEG-脂质体/FAM的摄取情况，比较两种递药系统对脑毛细血管内皮细胞的体外亲合能力；
对正常ICR小鼠静脉注射DCDX-PEG-脂质体/DiR、LCDX-PEG-脂质体/DiR和PEG-脂质体/DiR，比较不同递药系统在各时间点的脑内分布；
6.DCDX-PEG-脂质体递药系统的体内抗肿瘤效果评价
对荷原位脑胶质瘤动物模型静脉注射DCDX-PEG-脂质体/DOX、LCDX-PEG-脂质体/DOX、PEG-脂质体/DOX、游离阿霉素和生理盐水，以生存时间为指标评价不同载阿霉素递药系统的体内抗肿瘤效果。
结果表明：DCDX比LCDX在血清中具有更高的稳定性，且具有更强的nAChRs及其高表达nAChRs的模型细胞亲和活性；与LCDX修饰的纳米递药系统相比，本DCDX修饰的纳米递药系统显示出了更好的脑靶向性和更强的抗脑胶质瘤效果。
本发明的具有高稳定性且与乙酰胆碱受体具有高结合活性的D构型多肽DCDX及其及其构建的主动靶向纳米递药系统，具有如下优点：
DCDX与乙酰胆碱受体结合IC50为84.5nM，在血清中稳定并耐受蛋白酶的水解；DCDX所携带模型药物（如FAM等）被表达乙酰胆碱受体的阳性细胞（如脑毛细血管内皮细胞等）特异性摄取，具有跨越该类细胞所构成屏障（如血脑屏障BBB）的能力；DCDX修饰的高分子载体材料所构建的纳米递药系统（如脂质体、聚合物胶束、聚合物圆盘、纳米粒等）可将所包载模型药物递送至靶组织（如体外跨BBB、体内进入脑组织等），并显著提高药物效果（如包载阿霉素可延长脑胶质瘤模型动物的生存期）。所述的D构型多肽DCDX可介导药物或纳米递药系统主动寻靶，在多种疾病的诊治中具备良好的应用前景。
附图说明
图1、DCDX的HPLC和ESI-MS图谱，其中，
色谱方法：色谱柱（YMC，C18）：150×4.6mm；流动相A：水（含0.1%三氟乙酸），流动相B：乙腈（含0.1%三氟乙酸）；洗脱程序：0-45min5%B-65%B；流速：0.7mL/min；柱温：40℃；检测：UV214nm，保留时间：12.7min。ESI-MS：1978.2，与理论分子量相符合。
图2、DCDX-Cys的HPLC和ESI-MS图谱，其中。
色谱方法同图1所述，保留时间：13.3min。ESI-MS：2081.6，与理论分子量相符合。
图3、DCDX-Fluorescein的HPLC和ESI-MS图谱，
色谱方法同图1所述，保留时间：16.4min。ESI-MS：2508.7，与理论分子量相符合。
图4、DCDX-PEG3400-DSPE的1H-NMR图谱，
图中显示，Mal-PEG-DSPE的核磁图谱于6.7ppm显示出马来酰亚胺峰，而DCDX-PEG-DSPE的核磁图谱中该峰消失，显示Mal-PEG-DSPE中的马来酰亚胺基团已与DCDX反应。
图5、DCDX对α-Bungarotoxin与乙酰胆碱受体结合的竞争抑制曲线，
其中，CDX的浓度为10-5～10-11M时，对α-Bungarotoxin与乙酰胆碱受体结合竞争抑制效果，DCDX的IC50值为84.5nM，其与乙酰胆碱受体的结合活性约为LCDX（IC50值为441.6nM）的5倍。
图6、DCDX的血清稳定性，
显示CDX在25%大鼠血清中的稳定性，A和B分别为LCDX和DCDX在15min和24h的液相HPLC；C为各时间点残留的完整多肽百分比，DCDX具有比LCDX更高的血清稳定性。
图7、DCDX的氨肽酶稳定性，
显示CDX在10mg/mL的氨肽酶M溶液中的稳定性，A和B分别为LCDX和DCDX在0min和4h的液相HPLC；C为各时间点残留的完整多肽百分比，DCDX具有比LCDX更高的氨肽酶M稳定性。
图8、脑毛细血管内皮细胞bEnd.3对Fluorescein标记CDX的摄取，
其中，A和B分别为Fluorescein标记的CDX多肽于37℃分别与bEnd.3细胞作用2h后的激光共聚焦照片和流式结果，bEnd.3细胞对DCDX的摄取明显高于LCDX以及游离的FITC。
图9、小细胞肺癌NCI-H82对Fluorescein标记的CDX的摄取，
显示了Fluorescein标记的CDX多肽于37℃分别与NCI-H82细胞作用12h后的流式结果，NCI-H82细胞对DCDX的摄取明显高于LCDX。
图10、DCDX的BBB体外转运实验，
显示了Fluorescein标记的CDX多肽的体外BBB模型转运结果，图A说明37℃DCDX于各时间点转运至下室的量均大于LCDX，而4℃时各时间点下室两者的量均很少且无明显差别，图B说明经过烟碱型乙酰胆碱天然配体α-Bgt抑制后，各时间点下室两者的量均减少。
图11、脑毛细血管内皮细胞对包载5-FAM脂质体的摄取，
其中图A和B分别为包载5-FAM的各处方脂质体于37℃分别与bEnd.3细胞作用2h后的激光共聚焦照片和流式结果，bEnd.3细胞对DCDX修饰脂质体的摄取明显高于LCDX修饰脂质体以及无靶头脂质体。
图12、载近红外染料的PEG-脂质体的脑内分布，
显示正常老鼠分别注射PEG-脂质体/DiR（LS）、LCDX-PEG-脂质体/DiR（LCDX-LS）和DCDX-PEG-脂质体/DiR（DCDX-LS）后1h和4h的脑和各组织离体成像分布结果，与无靶头脂质体相比，DCDX可以通过乙酰胆碱受体介导递药系统穿透血脑屏障，且效果优于LCDX。
图13、载近红外染料的PEG-DSPE胶束的脑内分布，
显示正常裸鼠分别注射包载DiR的DCDX-PEG-DSPE胶束（DCDX-micelle）和PEG-DSPE胶束（M-micelle）的活体及离体成像分布结果，与无靶头胶束相比，DCDX-PEG-DSPE胶束在4h时脑部有明显荧光分布，说明DCDX-PEG-DSPE可以通过乙酰胆碱受体介导递药系统穿透血脑屏障。
图14、载阿霉素脂质体的粒径和电镜照片，
其中图A、D分别为PEG-脂质体/DOX的粒径和电镜照片，B、E分别为LCDX-PEG-脂质体/DOX的粒径和电镜照片，C、F分别为DCDX-PEG-脂质体/DOX的粒径和电镜照片，三者大小和形态均无显著差异。
图15、脑胶质瘤原位肿瘤模型裸鼠的生存曲线，
其中，生理盐水组、游离阿霉素组、PEG-脂质体/DOX组、LCDX-PEG-脂质体/DOX组和DCDX-PEG-脂质体/DOX组平均生存时间为24、26.5、27、28和33.5天，结果表明，与生理盐水组相比，LCDX-PEG-脂质体/DOX和DCDX-PEG-脂质体/DOX显著延长荷瘤裸鼠的生存时间，且DCDX-PEG-脂质体/DOX的效果优于LCDX-PEG-脂质体/DOX。
具体实施方式
通过下述实施例将有助于进一步理解本发明，但本发明不局限于如下描述范围。
实施例1
DCDX、DCDX-Fluorescein、DCDX-PEG-DSPE的合成与表征
1.DCDX以及DCDX-Cys的合成与表征
采用逆序固相多肽合成法，设计并合成了由非天然D构型氨基酸所构成的DCDX（序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDFD）和DCDX-Cys（序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDFDCD）。HPLC和ESI-MS表征DCDX及DCDX-Cys的纯度和分子量（Mw）。HPLC图谱、质谱图如图1、图2所示。
2.DCDX-Fluorescein的合成与表征
将上述步骤得到的DCDX-Cys溶于0.1M的PBS溶液中（pH7.2），取Fluorescein-5-maleimide溶于DMF，两者混合后磁力搅拌反应，HPLC监测，待DCDX-Cys反应完全后停止反应，制备液相纯化，冷冻干燥得DCDX-Fluorescein纯品。HPLC图谱、质谱图如图3所示。
3.DCDX-PEG-DSPE的合成与表征
将DCDX-Cys溶于0.1M的PBS溶液中（pH7.2），取Mal-PEG-DSPE溶于DMF，两者混合后磁力搅拌反应，HPLC监测，待Mal-PEG-DSPE反应完全后停止反应，过量的DCDX-Cys和DMF透析（截留分子量3.5kDa）除去，冷冻干燥得DCDX-PEG-DSPE，NMR表征其结构（如图4所示）。
实施例2
DCDX竞争结合烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs）的亲和性试验
1.大鼠海马nAChRs膜蛋白的提取
Wister大鼠（220～260g）断头处死后迅速分离出海马，称重后加入10倍体积的Tris-HCl缓冲液（50mM Tris-HCl，5mM MgCl2·6H2O，1mM EDTA，0.5%(W/V)BSA，0.1%NaN3，0.32M sucrose，pH7.4），用匀浆器10000转/分钟进行匀浆，每次30sec，共3次。匀浆液经1000×g离心10min，取上清液再于4℃12000转/分钟离心30min，收集沉淀，用原重量10倍体积Tris-HCl缓冲液（pH7.4）重新悬液，离心10min，取沉淀再用相同缓冲液洗涤，12000转/分钟离心10min，将沉淀用以上缓冲液悬浮即得nAChRs，分装后-80℃保存备用。BCA法测定蛋白质含量。
2.DCDX竞争结合nAChRs的亲和性试验
在37℃反应器所有管中均加入50μgnAChRs蛋白。测试管中依次加入20μL一定浓度的DCDX或LCDX，非特异结合管中加入50μL非标记配体α-Bungarotoxin（α-Bgt），终浓度为10μM，预先反应50min。全部管依次加入30μL125I-α-Bgt，终浓度为2nM，并用Tris-HCl缓冲液pH7.4补足体积至200μL，37℃孵育2h。点样于49型玻璃纤维滤膜上，负压抽滤，再用冰冷的缓冲液洗涤3次，每次2ml，抽干滤膜，γ计数器测量。DCDX和LCDX在不同浓度时对nAChRs与125I-α-Bgt结合的竞争性抑制作用结果（如图5所示）表明，DCDX具有竞争抑制α-Bgt对nAChRs结合的活性，其IC50值为84.5nM，对nAChRs的亲和活性是LCDX（IC50=441.6nM）的5倍。
实施例3DCDX的稳定性考察
1.DCDX的血清稳定性考察
将DCDX或LCDX配成1mg/mL水溶液，取0.1mL加入0.9mL的25%大鼠血清中，37℃孵育，分别于0.25、0.5、1、2、4、8、12和24h取出100μL反应液，加入20μL乙腈沉淀血清中蛋白，4℃静置20min，12000转/分钟离心10min，取上清液20μL进行HPLC分析。DCDX的血清稳定性结果（如图6所示）表明，DCDX具有比LCDX更高的血清稳定性。
2.DCDX的氨肽酶稳定性考察
将DCDX或LCDX多肽溶于50mM的Tris-HCl缓冲液（pH7.4），与0.01mg/mL的氨肽酶M于37℃孵育，分别于0、0.5、1、2和4h取样100μL，加入20μL冰醋酸终止反应后，进行HPLC分析。DCDX和LCDX的氨肽酶M稳定性结果（如图7所示）表明，DCDX具有比LCDX更高的氨肽酶M稳定性。
实施例4DCDX的体外细胞靶向性验证
DCDX对脑毛细血管内皮细胞的体外靶向性验证
取对数生长期的单层培养的脑毛细血管内皮细胞（bEnd.3细胞），用0.25%胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10%胎牛血清的DMEM培养液配成单细胞悬液，以每孔1×105个细胞接种于12孔培养板中，每孔体积1mL，将培养板移入二氧化碳培养箱中，37℃，5%CO2及饱和湿度条件下培养24h后，用含10%胎牛血清的DMEM培养液配制浓度为5μM的FITC、LCDX-Fluorescein及DCDX-Fluorescein溶液。将培养板中的培养液吸出，加入5μM的FITC、LCDX-Fluorescein和DCDX-Fluorescein溶液，37℃孵育2h，吸弃上清液。用PBS溶液洗三次，甲醛固定液固定细胞，DAPI进行细胞核染色后，激光共聚焦观察，细胞内化照片如图8A所示，另用PBS洗三次后，进行流式细胞仪分析，结果如图8B所示。
DCDX对小细胞肺癌细胞的体外靶向性验证
取对数生长期的悬浮NCI-H82细胞，分别与含10%胎牛血清的DMEM培养液配制浓度为5μM的LCDX-Fluorescein及DCDX-Fluorescein溶液在37℃，5%CO2及饱和湿度条件下孵育12h后，离心，用PBS洗三次后，进行流式细胞仪分析，结果如图9所示。
实施例5DCDX的体外血脑屏障模型（BBB）转运试验
1．原代脑毛细血管的提取及体外BBB模型的建立
4周龄SD大鼠断头后取脑，于冰冷的D-Hanks溶液中迅速分离得到大脑皮层，除去脑膜和脑部大血管后剪碎，加入胶原酶和DNA酶37℃消化90min后，1000转/分钟离心8min，弃去上清，转移至20%的BSA中，1000g/分钟4℃离心20min，弃去中上层液体，将底部微血管转移至培液中，1000转/分钟离心5min，用含20%胎牛血清的DMEM培养液配成微血管段悬液，接种于预先铺有鼠尾胶原的24孔transwell中，将transwell移入二氧化碳培养箱中，37℃，5%CO2及饱和湿度条件下培养24h，换成含有嘌呤霉素的内皮专用培养液继续培养72h后，再换成含有细胞生长因子的内皮专用培养液培养72h，测得电阻超过200Ω/cm2，即体外BBB模型成功建立。
2．体外BBB转运试验
用含10%胎牛血清的无酚红DMEM培养液配制浓度为50μM的LCDX-Fluorescein及DCDX-Fluorescein溶液。将transwell上室的培养液吸出，加入50μM的LCDX-Fluorescein和DCDX-Fluorescein溶液，下室加入500μl的PBS，于4℃和37℃孵育，分别于30min、1h、1.5h、2h取出下室液体100μl进行HPLC分析，并补加100μL新鲜的PBS。结果（如图10A所示）表明，37℃DCDX于各时间点转运至下室的量均大于LCDX，而4℃时各时间点下室两者的量均很少且无明显差别。体外BBB转运抑制实验时，预先加入150μM的α-Bgt孵育1h后进行如上实验。结果（如图10B所示）表明，经过烟碱型乙酰胆碱天然配体α-Bgt抑制后，各时间点下室两者的量均减少。
实施例6DCDX-PEG-脂质体的体外细胞靶向性验证
1.DCDX-PEG-脂质体/FAM的制备
PEG-脂质体膜材料处方组成为HSPC/Chol/mPEG2000-DSPE(52:43:5,mol/mol)，CDX修饰的PEG脂质体膜材料处方为HSPC/Chol/mPEG2000-DSPE/CDX-PEG-DSPE(52:43:3:2,mol/mol)。称取上述膜材料溶于氯仿，减压旋转蒸发除去有机溶媒，得均匀脂质膜，真空干燥24h。加入5-FAM水溶液水化，60℃水浴震荡2h，得脂质体混悬液。在60℃水浴中，使用高压均质机（若脂质体体积少于10mL则改用微型挤出器）依次将脂质体挤压过400、200、100和50nm核孔膜，使其粒径减小。然后以生理盐水为洗脱液过葡聚糖凝胶G-50柱分离除去未包封的5-FAM，得到包载5-FAM的脂质体。
2.DCDX-PEG-脂质体对脑毛细血管内皮细胞的体外靶向性验证
取对数生长期的单层培养的脑毛细血管内皮细胞bEnd.3，用0.25%胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10%胎牛血清的DMEM培养液配成单细胞悬液，以每孔1×105个细胞接种于12孔培养板中，每孔体积1mL，将培养板移入二氧化碳培养箱中，37℃，5%CO2及饱和湿度条件下培养24h后，将培养板中的培养液吸出，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液配制的荧光浓度为5μM的PEG-脂质体/FAM、LCDX-PEG-脂质体/FAM和DCDX-PEG-脂质体/FAM溶液，37℃孵育2h，吸弃上清液。用PBS溶液洗三次，甲醛固定液固定细胞，DAPI进行细胞核染色后，激光共聚焦观察，细胞内化照片如图11A所示，另用PBS洗三次后，进行流式细胞仪分析，结果如图11B所示。
实施例7DCDX-PEG-脂质体的体内靶向性验证
1.DCDX-PEG-脂质体/DiR的制备
脂质体膜材料处方同上，将上述膜材料及DiR溶于氯仿，减压旋转蒸发除去有机溶媒，得均匀脂质膜，真空干燥24h。加入生理盐水溶液水化，60℃水浴震荡2h，得脂质体混悬液。在60℃水浴中，使用高压均质机（若脂质体体积少于10mL则改用微型挤出器）依次将脂质体挤压过400、200、100和50nm核孔膜，使其粒径减小。然后以生理盐水为洗脱液过葡聚糖凝胶G-50柱分离除去未包封的DiR，得脂质体。
2.DCDX-PEG-脂质体的体内靶向性验证
将ICR小鼠（约25g）分别尾静脉注射100μL PEG-脂质体/DiR、LCDX-PEG-脂质体/DiR和DCDX-PEG-脂质体/DiR。分别在1h、和4h水合氯醛麻醉，用生理盐水心脏灌流，分别收集心、肝、脾、肺、肾和脑等主要器官，用活体成像仪检测各个脏器的荧光分布，结果如图12所示，与无靶头脂质体相比，DCDX可以通过乙酰胆碱受体介导递药系统穿透血脑屏障，且效果优于LCDX。
实施例8DCDX-PEG-DSPE胶束的体内靶向性验证
将制备的DCDX-PEG-DSPE胶束材料，按照重量为5%的比例与mPEG2000-DSPE共溶在氯仿中，加入DiR，成膜水化，制备包埋近红外染料DiR的DCDX-PEG-DSPE胶束，同法制备载DiR的mPEG-DSPE胶束（M-micelle），裸鼠尾静脉注射100μL。于4h进行水合氯醛麻醉，进行活体成像后，用生理盐水心脏灌流，分别收集心、肝、脾、肺、肾和脑等主要器官，用活体成像仪检测各个脏器的荧光分布，结果如图13所示，与无靶头胶束相比，DCDX-PEG-DSPE胶束在4h时脑部有明显荧光分布，说明DCDX-PEG-DSPE可以通过乙酰胆碱受体介导递药系统穿透血脑屏障。
实施例9载阿霉素的DCDX-PEG-脂质体体内药效学试验
脂质体膜材料处方同上，采用硫酸铵梯度法制备包载阿霉素（DOX）的各脂质体。动态光散射法测定粒径分布，负染色电镜法观察脂质体形态（如图14所示），脑胶质瘤原位肿瘤模型裸鼠尾静脉分别注射生理盐水、游离阿霉素、PEG-脂质体/DOX、LCDX-PEG-脂质体/DOX和DCDX-PEG-脂质体/DOX各100μL。给药剂量为8mg/Kg，分别在肿瘤种植后第6、9、12和15天给药，记录裸鼠的生存时间，裸鼠生存曲线如图15所示，与其它组相比，DCDX-PEG-脂质体/DOX显著延长原位肿瘤裸鼠生存时间。
Claims (10)
1.乙酰胆碱受体介导靶向的D构型多肽DCDX在制备脑靶药物分子或纳米递药系统中的用途；所述的D构型多肽DCDX其氨基酸序列为GDRDEDIDRDTGDRDADEDRDWDSDEDKDF。
2.按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的D构型多肽DCDX巯基化后与含有马来酰亚胺基团的物质反应获得DCDX-X复合物，复合物中X是荧光物质FAM和近红外染料cy5.5、IR820或DiR。
3.按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的D构型多肽DCDX巯基化后与马来酰亚胺化的聚乙二醇-Y复合物连接获得DCDX-聚乙二醇-Y复合物，复合物中Y选自磷脂、聚乳酸(PLA)、乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)或聚己内酯(PCL) 。
4.按权利要求1的用途，其特征在于所述的D构型多肽DCDX介导乙酰胆碱受体将药物分子或纳米递药系统实现肿瘤靶向递送。
5.按权利要求2的用途，其特征在于，所述的DCDX-复合物用于制备用作脑部疾病的影像诊断和示踪制剂。
6.按权利要求3的用途，其特征在于，所述的DCDX-聚乙二醇-磷脂复合物用于制备脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统或聚合物圆盘递药系统。
7.按权利要求3的用途，其特征在于，其中的DCDX-聚乙二醇-聚乳酸复合物、 DCDX-聚乙二醇-乳酸羟基乙酸共聚物复合物、DCDX-聚乙二醇-聚己内酯复合物用于制备聚合物胶束递药系统或纳米粒递药系统。
8.按权利要求6或7所述的用途，其中所述的脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统、聚合物圆盘递药系统或纳米粒递药系统用于包载诊断药物，所述的包载药物选自异硫氰荧光素FITC或近红外染料Cy5.5、IR820或DiR，所述的诊断药物用于脑部疾病和乙酰胆碱受体高表达的外周肿瘤的影像诊断和示踪。
9.按权利要求6或7所述的用途，所述的脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统、聚合物圆盘递药系统或纳米粒递药系统包载抗肿瘤药物，所包载药物选自阿霉素、表阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、喜树碱、羟基喜树碱、9-硝基 喜树碱、长春新碱、硼替唑米或DPMI-δ，所述的抗肿瘤药物用于脑肿瘤和高表达乙酰胆碱受体外周肿瘤的靶向治疗。
10.按权利要求6或7所述的用途，其中所述的脂质体递药系统、聚合物胶束递药系统、聚合物圆盘递药系统或纳米粒递药系统包载治疗神经退行性疾病药物，所包载药物是银杏内酯或神经营养因子，用于神经退行性疾病的靶向治疗。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310513197.4A CN104558117B (zh) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | 一种乙酰胆碱受体介导靶向的d构型多肽及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310513197.4A CN104558117B (zh) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | 一种乙酰胆碱受体介导靶向的d构型多肽及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104558117A CN104558117A (zh) | 2015-04-29 |
| CN104558117B true CN104558117B (zh) | 2018-01-16 |
Family
ID=53075274
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310513197.4A Expired - Fee Related CN104558117B (zh) | 2013-10-25 | 2013-10-25 | 一种乙酰胆碱受体介导靶向的d构型多肽及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104558117B (zh) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3319980B8 (en) * | 2015-07-10 | 2021-11-03 | Peptinovo Biopharma Inc. | Formulations for improving the efficacy of hydrophobic drugs |
| CN106333926A (zh) * | 2015-07-10 | 2017-01-18 | 复旦大学 | 一种稳定性多肽介导跨屏障膜的脑部肿瘤多重靶向递药系统 |
| CN106565825A (zh) * | 2015-10-12 | 2017-04-19 | 复旦大学 | 稳定化a7r多肽及其在构建肿瘤靶向诊治递药系统中的用途 |
| CN106699845A (zh) * | 2015-11-12 | 2017-05-24 | 复旦大学 | stapled-RGD多肽及其在肿瘤靶向递送中的应用 |
| CN106632616B (zh) * | 2016-07-18 | 2020-12-25 | 复旦大学附属妇产科医院 | 具有卵巢肿瘤靶向d构型多肽的基因递释系统 |
| KR102631204B1 (ko) * | 2016-12-07 | 2024-02-01 | 푸단 유니버시티 | 종양의 표적 진단 및 치료용 약물 제조에서의 vap 폴리펩타이드 및 이의 용도 |
| CN108570094A (zh) * | 2017-03-13 | 2018-09-25 | 复旦大学 | Ae多肽及其在制备肿瘤靶向诊治递药系统中的用途 |
| CN108939089B (zh) * | 2017-05-17 | 2021-11-02 | 复旦大学 | 群体感应多肽及其在制备肿瘤靶向诊治递药系统中的用途 |
| CN109248328A (zh) * | 2017-07-13 | 2019-01-22 | 复旦大学 | 一种霍乱毒素b链蛋白介导的靶向递送系统 |
| CN109384850A (zh) * | 2017-08-11 | 2019-02-26 | 复旦大学 | 全过程靶向多肽及其在构建肿瘤靶向诊治递药系统中的应用 |
| CN109422801B (zh) * | 2017-08-31 | 2022-07-08 | 复旦大学 | 多功能靶向多肽rap及其在制备肿瘤靶向递送系统中的用途 |
| CN109897089B (zh) * | 2017-12-10 | 2023-08-22 | 复旦大学 | 一种整合素配体vs多肽及其在制备肿瘤靶向诊治递药系统中的应用 |
| CN110604821A (zh) * | 2018-06-14 | 2019-12-24 | 复旦大学 | 一种淀粉样蛋白β短肽介导的脑靶向递送系统 |
| CN110669101B (zh) * | 2018-06-14 | 2022-08-26 | 复旦大学 | 特异性靶向乙酰胆碱受体和具有跨生物膜效应的d8多肽及其脑靶向递药系统 |
| CN109821021B (zh) * | 2019-03-27 | 2020-12-25 | 复旦大学 | P-糖蛋白抑制剂在cdx修饰的递药系统中的应用 |
| CN112823811B (zh) * | 2019-11-18 | 2022-07-29 | 深圳先进技术研究院 | 一种跨越血脑屏障和特异性靶向脑胶质瘤治疗药物的投递系统的制备方法 |
| CN112315909B (zh) * | 2020-11-05 | 2023-02-17 | 南开大学 | 一种功能化聚合物胶束pm-tlk及其制备方法和应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6204360B1 (en) * | 1999-12-16 | 2001-03-20 | Usa Universe Bioengineering, Inc. | Retro-inverso thymosin alpha 1 hybrids |
| CN102151336A (zh) * | 2010-02-12 | 2011-08-17 | 复旦大学 | 一种乙酰胆碱受体介导跨越血脑屏障的主动靶向递药系统 |
| CN102212116A (zh) * | 2010-04-02 | 2011-10-12 | 复旦大学 | 一种乙酰胆碱受体介导脑靶向多肽及其应用 |
| CN102552105A (zh) * | 2011-10-17 | 2012-07-11 | 复旦大学 | 一种级联脑部靶向药物递送系统及其制备方法和用途 |
| CN103012562A (zh) * | 2011-09-24 | 2013-04-03 | 复旦大学 | 一种双重靶向的d构型多肽及其递药系统 |
-
2013
- 2013-10-25 CN CN201310513197.4A patent/CN104558117B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6204360B1 (en) * | 1999-12-16 | 2001-03-20 | Usa Universe Bioengineering, Inc. | Retro-inverso thymosin alpha 1 hybrids |
| CN102151336A (zh) * | 2010-02-12 | 2011-08-17 | 复旦大学 | 一种乙酰胆碱受体介导跨越血脑屏障的主动靶向递药系统 |
| CN102212116A (zh) * | 2010-04-02 | 2011-10-12 | 复旦大学 | 一种乙酰胆碱受体介导脑靶向多肽及其应用 |
| CN103012562A (zh) * | 2011-09-24 | 2013-04-03 | 复旦大学 | 一种双重靶向的d构型多肽及其递药系统 |
| CN102552105A (zh) * | 2011-10-17 | 2012-07-11 | 复旦大学 | 一种级联脑部靶向药物递送系统及其制备方法和用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104558117A (zh) | 2015-04-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104558117B (zh) | 一种乙酰胆碱受体介导靶向的d构型多肽及其应用 | |
| CN104906076B (zh) | 程序化多重靶向的树状大分子组装体药物递送系统及其制备方法和应用 | |
| CN106333926A (zh) | 一种稳定性多肽介导跨屏障膜的脑部肿瘤多重靶向递药系统 | |
| CN106699845A (zh) | stapled-RGD多肽及其在肿瘤靶向递送中的应用 | |
| US20210252168A1 (en) | Amyloid b short peptide mediated brain targeted delivery system, preparation method therefor and use thereof | |
| CN106137968A (zh) | 内膜具有正电的可逆交联生物可降解聚合物囊泡及其制备方法与在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN105999299B (zh) | 一种小分子胶束纳米载药系统及其制备方法与应用 | |
| CN107029239B (zh) | 一种多功能靶向分子及其用途 | |
| CN106565825A (zh) | 稳定化a7r多肽及其在构建肿瘤靶向诊治递药系统中的用途 | |
| CN106214640A (zh) | 一种肿瘤靶向递药的脂质体递药系统及制备方法和应用 | |
| CN109384850A (zh) | 全过程靶向多肽及其在构建肿瘤靶向诊治递药系统中的应用 | |
| CN110114367B (zh) | Vap多肽及其在制备靶向诊疗肿瘤药物中的应用 | |
| CN108524469B (zh) | 一种主动靶向生物膜纳米制剂的制备方法 | |
| CN110772645A (zh) | 功能化穿膜肽修饰的药物递送系统 | |
| CN104341488A (zh) | c(LyP-1)多肽及其构建的纳米递药系统和应用 | |
| CN109422801B (zh) | 多功能靶向多肽rap及其在制备肿瘤靶向递送系统中的用途 | |
| CN110840844A (zh) | 生物素与葡萄糖共同修饰的乳腺癌靶向脂质体的制备和应用 | |
| CN107028882B (zh) | 一种物理包裹的肿瘤靶向纳米递药系统及制备方法和应用 | |
| CN110051854A (zh) | 腺苷单磷酸amp复合物及其在制备肿瘤靶向纳米递药系统中的应用 | |
| CN110669101B (zh) | 特异性靶向乙酰胆碱受体和具有跨生物膜效应的d8多肽及其脑靶向递药系统 | |
| CN104174024B (zh) | 一种肉豆蔻酸介导的脑靶向聚合物胶束递药系统及其制备方法和应用 | |
| CN108939089B (zh) | 群体感应多肽及其在制备肿瘤靶向诊治递药系统中的用途 | |
| CN109897089A (zh) | 一种整合素配体vs多肽及其在制备肿瘤靶向诊治递药系统中的应用 | |
| CN109248328A (zh) | 一种霍乱毒素b链蛋白介导的靶向递送系统 | |
| CN110964086B (zh) | 整合素β3受体高亲和力的多肽及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180116 |