KR102631204B1 - 종양의 표적 진단 및 치료용 약물 제조에서의 vap 폴리펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

종양의 표적 진단 및 치료용 약물 제조에서의 vap 폴리펩타이드 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 GRP78 단백질에 대해 높은 결합 활성을 갖는 매우 안정한 D-형 폴리펩타이드 DVAP 및 SVAP를 제공하며, 또한 L-형 폴리펩타이드 LVAP 및 DVAP-또는 SVAP-변형된 모델 약물 및 거대분자 담체 물질, 및 표적 치료를 위한 종양 이미지 및 약물-전달 시스템의 구축에서의 이의 용도를 제공한다.

Description

종양의 표적 진단 및 치료용 약물 제조에서의 VAP 폴리펩타이드 및 이의 용도
본 발명은 의학 분야에 속하며, VAP 펩타이드 및 약물 제조에서의 이의 용도에 관한 것으로, 특히 매우 안정하고, 글루코오스 조절 단백질(glucose-regulated protein) GRP78을 표적으로 할 수 있는 다기능성 D-형 펩타이드, 약물 복합체 및 L-형 펩타이드와 안정한 D-형 펩타이드의 변형된 나노 약물 전달 시스템에 관한 것이다. 특히, 그것은 D-형 펩타이드 DVAP(D-형의 아미노산 서열 DPDADVDRDTDNDS: SEQ ID NO: 1) 및 SVAP(D-형 아미노산 서열 DSDNDTDRDVDADP: SEQ ID NO: 2), L-형 펩타이드 LVAP(아미노산 서열 SNTRVAP: SEQ ID NO: 3) 및 안정한 D-형 펩타이드의 진단 및 치료 약물 복합체, 펩타이드 변형된 고분자 담체 물질 및 리포좀, 고분자 마이셀, 고분자 디스크, 나노입자 등과 같이 그들에 의해 구축된 나노 약물 전달 시스템, 그뿐만 아니라 종양의 진단 및 표적 치료용 약물 제조에서의 용도에 관한 것이다.
문헌에 따르면 종양은 인간의 생명과 건강을 심각하게 위협하는 질병이며, 그것의 사망률은 질병 중에서 가장 높은 것 중 하나이다. 종양 약물 요법의 주요 수단으로서, 전통적인 화학요법은 종양 조직에 대한 낮은 선택성, 높은 독성, 좁은 치료범위 및 다양한 약물 내성 경향 등의 결함이 있다. 그러므로 이들 한계를 극복하기 위해, 능동적 표적화는 최근 몇 년간 종양 부위의 표적화 효율을 개선하기 위한 중요한 전략이 되었다. 정보는 능동적 표적화 전략이 주로 종양 조직 또는 세포에 약물 또는 나노 약물 전달 시스템을 매개하면서 종양 조직에서 높게 발현되는 특이 수용체 또는 트랜스포터에 대한 리간드의 인지 및 결합 능력에 의해 실현됨을 밝힌다. 일반적으로 사용되는 상응하는 리간드는 단클론 항체, 펩타이드, 압타머, 저분자 화합물 등을 포함한다; 리간드 변형된 약물 또는 나노 약물 전달 시스템은 세포 표면 수용체 또는 트랜스포터 및 리간드의 특이적인 인지, 결합 및 내부화를 통해 종양 부위 및 세포에 약물을 전달할 수 있으므로, 종양에 대한 약물의 능동적 표적을 실현할 수 있다.
면역글로불린 중쇄 결합 단백질(Bip)로도 알려진 글루코오스 조절 단백질 GRP78은 소포체의 주요 분자 샤페론 중 하나이며, 단백질 폴딩 및 소포체 스트레스 반응에서 중요한 역할을 담당한다. 연구에 따르면, GRP78의 발현은 몇몇 종양세포주, 고형 종양 및 인간 암 조직 생검 시료에서 유의하게 증가하는 것으로 나타났다. GRP78 단백질의 과발현은 유방암, 간암, 대장암 및 위암과 같은 다양한 종양에서 입증되며, 이들 종양의 발생, 진행, 예후 및 약물 내성과 밀접하게 관련되어 있다. 최근 연구에 따르면, GRP78은 종양 세포에서 세포막의 표면에 전달될 수 있으나, 이 현상은 정상 세포에서는 관찰되지 않는다. 연구에 따르면, 또한 성체 줄기세포 및 종양 줄기세포의 기능을 조절하는 Cripto/GRP78 신호 전달 경로를 통해 GRP78는 암 줄기세포의 조절에 중요한 역할을 담당하고, 그들의 줄기세포성을 유지한다. 그러므로 GRP78 수용체-매개 경로를 통한 약물 또는 나노 약물 전달 시스템의 종양 부위로의 특이적인 전달은 약물의 종양 진단 및 치료 효과를 개선하는데 엄청난 가치가 있다.
LVAP(L-형 아미노산 서열 SNTRVAP: SEQ ID NO: 3)는 파지 디스플레이 기술에 의해 선별된 헵타펩타이드이다. 그것은 GRP78에 높은 친화도를 갖는 것으로 밝혀졌지만, 종양 진단 및 표적 치료에의 적용은 아직까지 보고된 바 없다.
현존 기술에 기초하여, 본 출원의 발명자들은 종양의 진단 및 표적 치료에서의 VAP 펩타이드의 적용을 제공하고자 하며, 인 비보에서 더 나은 종양 표적화 효과를 달성하기 위해 기존 펩타이드의 안정성을 더욱 최적화하고자 한다.
선행기술의 결함을 목표로 하여, 본 발명의 목적은 VAP 펩타이드 및 종양 진단과 표적 치료에서의 이의 적용을 제공하고, 인 비보에서 더 나은 종양 표적 효과를 위해 기존 펩타이드의 안정성을 더욱 최적화하는 것이다.
본 발명의 제1 양태는 D-형 펩타이드를 제공하며, D-형 펩타이드는 DVAP 및/또는 SVAP이고, DVAP의 아미노산 서열은 DPDADVDRDTDNDS(SEQ ID NO: 1)이며, SVAP의 아미노산 서열은 DSDNDTDRDVDADP(SEQ ID NO: 2)이다.
본 발명의 제2 양태는 DVAP 및/또는 SVAP의 펩타이드 복합체를 제공하며, DVAP 및/또는 SVAP 펩타이드 복합체는 제1 양태의 DVAP 및/또는 SVAP에 의해 변형된 말레이미드기-함유 영상화 물질이고, DVAP 및/또는 SVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-X 및/또는 SVAP-X이며, X는 영상 물질이고;
바람직하게는, X는 형광 물질, 근적외선 염료, 자기공명영상화제 및 방사선제로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이며;
보다 바람직하게는, 형광 물질은 플루오레세인, 근적외선 염료는 Cy7, IR820, DiR, 자기공명영상화제는 Gd-DTPA, 방사선제는 99mTc-DTPA이다.
본 발명의 제3 양태는 L-형 펩타이드 LVAP의 펩타이드 복합체를 제공하며, LVAP 펩타이드 복합체는 LVAP에 의해 변형된 말레이미드기-함유 영상화 물질이고, LVAP 펩타이드의 아미노산 서열은 SNTRVAP(SEQ ID NO: 3)이며, LVAP 펩타이드 복합체의 구조는 LVAP-X이고, X는 영상 물질이며;
바람직하게는, X는 형광 물질, 근적외선 염료, 자기공명영상화제 및 방사선제로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이고;
보다 바람직하게는, 형광 물질은 플루오레세인, 근적외선 염료는 Cy7, IR820, DiR, 자기공명영상화제는 Gd-DTPA, 방사선제는 99mTc-DTPA이다.
본 발명의 제4 양태는 DVAP 및/또는 SVAP의 펩타이드 복합체를 제공하며, DVAP 및/또는 SVAP 펩타이드 복합체는 제1 양태의 DVAP 및/또는 SVAP 펩타이드에 의해 변형된 항종양 약물이고, DVAP 및/또는 SVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-Y 및/또는 SVAP-Y이며, Y는 항종양 약물이고;
바람직하게는, 항종양 약물은 독소루비신 또는 에피루비신과 같은 안트라사이클린, 탁솔 및 도세탁셀 및 카바지탁셀과 같은 탁산, 캄토테신 및 히드록시캄토테신 및 이리노테칸과 같은 캄토테신, 빈크리스틴 및 비노렐빈과 같은 빈블라스틴, 보르테조밉 및 카르필조밉과 같은 프로테아좀 저해제, 파르테놀라이드와 같은 락톤, p53 활성화 펩타이드 및 멜리틴, 전갈 독 펩타이드 및 항미생물 펩타이드와 같은 펩타이드 약물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이며;
보다 바람직하게는, 항종양 약물은 케톤 또는 알데히드기를 함유한 독소루비신 또는 에피루비신; 히드록시기 또는 아미노기를 함유한 파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, 히드록시캄토테신, 9-니트로 캄토테신, 빈크리스틴, 에토포사이드, 겜시타빈, 시타라빈, 5-플루오로우라실, 테니포사이드, 모리티닙, 에포틸론, 비노렐빈, 악티노마이신 D, 미토산트론 안트라퀴논, 미토마이신, 블레오마이신, 이리노테칸; 붕산을 함유한 보르테조밉 또는 카르필조밉; 및/또는 p53 활성화 펩타이드, 멜리틴 및 전갈 독 펩타이드의 펩타이드 약물 중 하나로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
본 발명의 제5 양태는 L-형 펩타이드 LVAP의 펩타이드 복합체를 제공하며, LVAP 펩타이드 복합체는 LVAP에 의해 변형된 항종양 약물이고, LVAP 펩타이드의 아미노산 서열은 SNTRVAP(SEQ ID NO: 3)이며, LVAP 펩타이드 복합체의 구조는 LVAP-Y이고, Y는 항종양 약물이며;
바람직하게는, 항종양 약물은 독소루비신 또는 에피루비신과 같은 안트라사이클린, 탁솔 및 도세탁셀 및 카바지탁셀과 같은 탁산, 캄토테신 및 히드록시캄토테신 및 이리노테칸과 같은 캄토테신, 빈크리스틴 및 비노렐빈과 같은 빈블라스틴, 보르테조밉 및 카르필조밉과 같은 프로테아좀 저해제, 파르테놀라이드와 같은 락톤, p53 활성화 펩타이드 및 멜리틴, 전갈 독 펩타이드 및 항미생물 펩타이드와 같은 펩타이드 약물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이며;
보다 바람직하게는, 항종양 약물은 케톤 또는 알데히드기를 함유한 독소루비신 또는 에피루비신; 히드록시기 또는 아미노기를 함유한 파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, 히드록시캄토테신, 9-니트로 캄토테신, 빈크리스틴, 에토포사이드, 겜시타빈, 시타라빈, 5-플루오로우라실, 테니포사이드, 모리티닙, 에포틸론, 비노렐빈, 악티노마이신 D, 미토산트론 안트라퀴논, 미토마이신, 블레오마이신, 이리노테칸; 붕산을 함유한 보르테조밉 또는 카르필조밉; 및/또는 p53 활성화 펩타이드, 멜리틴 및 전갈 독 펩타이드의 펩타이드 약물 중 하나로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
본 발명의 제6 양태는 DVAP 및/또는 SVAP의 펩타이드 복합체를 제공하며, DVAP 및/또는 SVAP 펩타이드 복합체는 제1 양태의 DVAP 및/또는 SVAP에 의해 변형된 고분자 담체 물질이고, DVAP 및/또는 SVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-폴리에틸렌 글리콜-Z 및/또는 SVAP-폴리에틸렌 글리콜-Z이며, Z는 고분자 담체 물질이고;
바람직하게는, 고분자 담체 물질은 인지질, 폴리락트산, 폴리락틱-코-글리콜산 및 폴리카프로락톤으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
본 발명의 제7 양태는 L-형 LVAP의 펩타이드 복합체를 제공하며, LVAP 펩타이드 복합체는 LVAP에 의해 변형된 고분자 담체 물질이고, LVAP 펩타이드의 아미노산 서열은 SNTRVAP(SEQ ID NO: 3)이며, LVAP 펩타이드 복합체의 구조는 LVAP-폴리에틸렌 글리콜-Z이고, Z는 고분자 담체 물질이며;
바람직하게는, 고분자 담체 물질은 인지질, 폴리락트산, 폴리락틱-코-글리콜산 및 폴리카프로락톤으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
본 발명의 제8 양태는 약물 전달 시스템을 제공하며, 약물 전달 시스템은 제6 또는 제7 양태의 복합체를 포함하고;
바람직하게는, 약물 전달 시스템은 리포좀 전달 시스템, 고분자 마이셀 전달 시스템, 고분자 디스크 전달 시스템 또는 나노입자 전달 시스템이다.
제8 양태의 약물 전달 시스템에 따르면, DVAP, SVAP 및/또는 LVAP 펩타이드 복합체 외에도, 약물 전달 시스템은 (1) 진단 약물 및/또는 (2) 항종양 약물을 추가로 포함하며;
바람직하게는, (1) 진단 약물은 형광 물질, 근적외선 염료 및 자기공명영상화제로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이고, 보다 바람직하게는, 형광 물질은 플루오레세인이고, 근적외선 염료는 Cy7, IR820, DiR로부터 선택되며, 및/또는 자기공명영상화제는 Gd-DTPA이고, 및/또는
(2) 항종양 약물은 독소루비신 또는 에피루비신과 같은 안트라사이클린, 탁솔 및 도세탁셀 및 카바지탁셀과 같은 탁산, 캄토테신 및 히드록시캄토테신 및 이리노테칸과 같은 캄토테신, 빈크리스틴 및 비노렐빈과 같은 빈블라스틴, 보르테조밉 및 카르필조밉과 같은 프로테아좀 저해제, 파르테놀라이드와 같은 락톤, p53 활성화 펩타이드, 멜리틴, 전갈 독 펩타이드 및 항미생물 펩타이드와 같은 펩타이드 약물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
본 발명의 제9 양태는 제1 양태의 DVAP 및/또는 SVAP 펩타이드, 제2 양태 내지 제7 양태 중 어느 하나의 DVAP, SVAP 및/또는 LVAP 펩타이드 복합체, 제8 또는 제9 양태의 약물 전달 시스템의 종양의 진단, 추적 및/또는 치료용 약물 또는 의약품의 제조에서의 용도를 제공하며,
바람직하게는, 종양은 글루코오스 조절 단백질 GRP78 고 발현 종양이다.
본 발명의 제10 양태는 종양 진단 및/또는 표적 치료 방법을 제공하며,
제1 양태에 따른 D-형 펩타이드;
제2 양태 내지 제7 양태 중 어느 하나에 따른 DVAP, SVAP 및/또는 LVAP 펩타이드 복합체; 및/또는
제8 양태 또는 제9 양태의 약물 전달 시스템을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 안정화된 D-형 VAP 펩타이드는 DVAP 및/또는 SVAP이고, DVAP의 아미노산 서열은 DPDADVDRDTDNDS(SEQ ID NO: 1)이며, SVAP의 아미노산 서열은 DSDNDTDRDVDADP(SEQ ID NO: 2)이다.
상세하게는, 본 발명은 D-형 펩타이드 DVAP 및/또는 SVAP를 설계 및 제조하며, 두 펩타이드는 혈청에 대한 높은 안정성 및 GRP78에 대한 높은 친화도를 가진다.
본 발명에서의 D-형 펩타이드 또는 문헌에 보고된 L-형 펩타이드(LVAP, 아미노산 서열은 SNTRVAP(SEQ ID NO: 3)임)의 복합체인 DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체는 DVAP, SVAP, LVAP에 의해 변형된 영상 물질이고, DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-X, SVAP-X 및/또는 LVAP-X이며, X는 영상 물질이다.
바람직하게는, X는 플루오레세인, 근적외선 염료, 자기공명영상화제 및 방사선제로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다. 보다 바람직하게는, 형광 물질은 플루오레세인이고, 근적외선 염료는 cy7, IR820 및 DiR로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이며, 자기공명영상화제는 Gd-DTPA이고, 방사선 영상화제는 99mTc-DTPA이다.
상세하게는, 설프하이드릴레이티드 후, 본 발명의 DVAP, SVAP 또는 문헌에 보고된 LVAP는 분자 내 설프하이드릴기를 사용하여 말레이미드 기능화된 형광 물질(예컨대, 플루오레세인, 근적외선 염료 cy7, IR820, DiR 등), 말레이미드 기능화된 자기공명영상화제 Gd-DTPA 및 말레이미드 기능화된 방사선 영상화제 99mTc-DTPA와 반응시켜 복합체를 형성할 수 있다.
본 발명의 DVAP, SVAP 또는 문헌에 보고된 LVAP의 복합체, DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체는 DVAP, SVAP, LVAP에 의해 변형된 항종양 약물이고, DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-Y, SVAP-Y 및/또는 LVAP-Y이며, Y는 항종양 약물이다.
바람직하게는, 항종양 약물은 독소루비신 또는 에피루비신과 같은 안트라사이클린, 탁솔 및 도세탁셀 및 카바지탁셀과 같은 탁산, 캄토테신 및 히드록시캄토테신 및 이리노테칸과 같은 캄토테신, 빈크리스틴 및 비노렐빈과 같은 빈블라스틴, 보르테조밉 및 카르필조밉과 같은 프로테아좀 저해제, 파르테놀라이드와 같은 락톤, p53 활성화 펩타이드, 멜리틴, 전갈 독 펩타이드 및 항미생물 펩타이드와 같은 펩타이드 약물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
보다 바람직하게는, 항종양 약물은 케톤 또는 알데히드기를 함유한 독소루비신 또는 에피루비신; 히드록시기 또는 아미노기를 함유한 파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, 히드록시캄토테신, 9-니트로 캄토테신, 빈크리스틴, 에토포사이드, 겜시타빈, 시타라빈, 5-플루오로우라실, 테니포사이드, 모리티닙, 에포틸론, 비노렐빈, 악티노마이신 D, 미토산트론 안트라퀴논, 미토마이신, 블레오마이신, 이리노테칸; 붕산을 함유한 보르테조밉 또는 카르필조밉; 및/또는 p53 활성화 펩타이드, 멜리틴 및 전갈 독 펩타이드의 펩타이드 약물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
상세하게는, 본 발명의 DVAP, SVAP 또는 문헌에 보고된 LVAP에 의해 변형된 약물은, 말레이미도히드라진 유도체(독소루비신 또는 에피루시빈 및 케톤 또는 알데히드기를 함유한 다른 약물들을 포함)의 반응에 의해 pH-감응성 히드라존 결합을 형성하는 펩타이드-약물 복합체, 또는 3-(2-피리딜디티오)프로피온산 유도체(파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, 히드록시캄토테신, 9-니트로 캄토테신, 빈크리스틴, 에토포사이드, 겜시타빈, 시타라빈, 5-플루오로우라실, 테니포사이드, 모리티닙, 에포틸론, 비노렐빈, 악티노마이신 D, 미토산트론 안트라퀴논, 마이토마이신, 블레오마이신, 이리노테칸 및 히드록시기 또는 아미노기를 함유한 다른 약물들을 포함)의 반응에 의해 이황화 결합을 형성하는 펩타이드-약물 복합체, 또는 약물(보르테조밉 및 붕산을 함유한 다른 약물들을 포함)의 도파민 및 붕산기의 반응에 의해 pH-감응성 붕산 에스테르를 형성하는 펩타이드-약물 복합체, 또는 고체상 합성에 의해 직접적으로 아마이드 결합을 형성하는 펩타이드-약물 복합체(p53 활성화 펩타이드, 항미생물 펩타이드, 펩타이드 독소 및 다른 펩타이드 약물을 포함)을 포함한다.
본 발명의 DVAP, SVAP 또는 문헌에 보고된 LVAP의 복합체, DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체는 DVAP, SVAP, LVAP에 의해 변형된 고분자 물질이며, DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-폴리에틸렌 글리콜-Z, SVAP-폴리에틸렌 글리콜-Z 및/또는 LVAP-폴리에틸렌 글리콜-Z이고, Z는 고분자 담체 물질이다.
바람직하게는, 고분자 담체 물질은 인지질, 폴리락트산, 폴리락틱-코-글리콜산 및 폴리카프로락톤으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
상세하게는, 설프하이드릴레이티드 후, 본 발명의 DVAP, SVAP 또는 문헌에 보고된 LVAP는 폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스포에탄올아민(PEG-DSPE), 폴리에틸렌 글리콜-폴리락트산(PEG-PLA), 폴리에틸렌 글리콜-폴리락틱-코-글리콜산(PEG-PLGA), 폴리에틸렌 글리콜-폴리카프로락톤(PEG-PCL)과 같은 말레이미드 기능기를 함유한 고분자 담체 물질을 변형할 수 있어, DVAP, SVAP, LVAP 변형된 리포좀, 고분자 마이셀, 고분자 디스크 및 나노입자와 같은 나노 약물 전달 시스템의 구축에 사용될 수 있다.
본 발명의 약물 전달 시스템은 전술한 DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체를 포함한다. 바람직하게는, 약물 전달 시스템은 리포좀 약물 전달 시스템, 고분자 마이셀 약물 전달 시스템, 고분자 디스크 약물 전달 시스템 및 나노입자 약물 전달 시스템이다.
바람직한 구현예로, 본 발명은 또한 DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체 외에 (1) 진단 약물 및/또는 (2) 항종양 약물을 포함하는 전술한 약물 전달 시스템을 제공한다.
바람직하게는, (1) 진단 약물은 형광 물질, 근적외선 염료 및 자기공명영상화제로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다. 보다 바람직하게는, 형광 물질은 플루오레세인이고, 근적외선 염료는 Cy7, IR820, DiR로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이며, 및/또는 자기공명영상화제는 Gd-DTPA이다. 및/또는 (2) 항종양 약물은 독소루비신 또는 에피루비신과 같은 안트라사이클린, 탁솔 및 도세탁셀 및 카바지탁셀과 같은 탁산, 캄토테신 및 히드록시캄토테신 및 이리노테칸과 같은 캄토테신, 빈크리스틴 및 비노렐빈과 같은 빈블라스틴, 보르테조밉 및 카르필조밉과 같은 프로테아좀 저해제, 파르테놀라이드와 같은 락톤, p53 활성화 펩타이드. 멜리틴, 전갈 독 펩타이드 및 항미생물 펩타이드와 같은 펩타이드 약물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이다.
상세하게는, 본 발명에 의해 설계된 DVAP, SVAP, LVAP에 의해 변형된 나노 약물 전달 시스템은 독소루비신 또는 에피루비신과 같은 안트라사이클린, 탁솔 및 도세탁셀 및 카바지탁셀과 같은 탁산, 캄토테신 및 히드록시캄토테신 및 이리노테칸과 같은 캄토테신, 빈크리스틴 및 비노렐빈과 같은 빈블라스틴, 보르테조밉 및 카르필조밉과 같은 프로테아좀 저해제, 파르테놀라이드와 같은 락톤, p53 활성화 펩타이드, 멜리틴, 전갈 독 펩타이드 및 항미생물 펩타이드와 같은 펩타이드 약물 등을 캡슐화할 수 있다; 그리고, 그것은 또한 플루오레세인, Cy7, IR820, DiR, Gd-DTPA 등과 같은 형광 물질, 근적외선 염료 및 자기공명영상화제를 캡슐화할 수 있다.
본 발명은 또한 종양의 진단, 추적 또는 치료용 약물 또는 의약품의 제조에서의 전술한 DVAP, SVAP 펩타이드, 전술한 DVAP, SVAP, LVAP의 펩타이드 복합체, 전술한 약물 전달체의 용도를 제공한다.
바람직하게는, 종양은 GRP78 고 발현 종양이다.
상세하게는, 본 발명의 제1 양태의 DVAP, SVAP 또는 문헌에 보고된 LVAP는 종양의 진단 및 표적 치료를 위해 GRP78 고 발현 세포 및 조직을 표적으로 하는 약물 또는 나노 약물 전달 시스템을 매개할 수 있다.
본 발명은 또한 종양의 진단, 추적 및/또는 치료용 병용 제품을 제공하며, 병용 제품은 전술한 DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체 및 전술한 약물 전달 시스템으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 성분을 포함한다.
바람직하게는, 병용 제품은 키트이고, 및/또는
종양은 GRP78 고 발현 종양이다.
본 발명의 종양의 진단, 추적 및/또는 치료 방법은 유효량의 전술한 DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드 복합체, 전술한 약물 전달 시스템 및 전술한 병용 제품으로부터 선택된 하나 이상의 물질을 환자에게 경구 또는 비-경구 경로를 통해 투여하는 것을 포함한다.
바람직하게는, 종양은 GRP78 고 발현 종양이고; 및/또는
바람직하게는, 경구 또는 비-경구 경로는 구강, 주사, 패치, 스프레이 및 다른 공지의 환자로의 전달 경로 중 하나 이상일 수 있다. 유효량은 하나 이상의 증상의 상태를 치료, 감소, 완화, 경감, 제거하는데 유효한 양을 포함할 수 있고, 상기 상태를 치료하고자 하거나, 대안으로 피하려고 하거나, 또는 그렇지 않으면 임상적으로 확인 가능한 호의적인 변화가 그 상태 또는 이의 효과에서 일어난다.
본 발명은 종양 표적 제품의 제조에서의 전술한 DVAP, SVAP, LVAP 펩타이드의 용도를 제공한다. 바람직하게는, 종양 표적 제품은 GRP78이 고 발현되는 종양을 표적화하기 위한 것이고; 및/또는 종양 표적 제품은 종양의 진단, 추적 및/또는 치료용 약물, 실험 시약 및/또는 의약품이다. 본 발명은 LVAP 펩타이드(SNTRVAP: SEQ ID NO: 3) 변형된 약물 복합체 및 나노 약물 전달체를 제공한다; 그리고, L-형 펩타이드가 인 비보에서 안정성이 떨어지고 혈액에서 쉽게 분해되어 종양 표적능을 감소시킬 수 있는 문제점을 목표로 하여, 본 발명은 높은 안정성과 GRP78에 대한 높은 친화도를 갖는 D-형 펩타이드 표적 분자 DVAP(D-형 아미노산 서열 DPDADVDRDTDNDS: SEQ ID NO: 1) 및 SVAP (D-형 아미노산 서열 DSDNDTDRDVDADP: SEQ ID NO: 2)를 제공하고, 그것의 약물 복합체 및 변형된 나노 약물 전달 시스템을 구축하여 종양의 진단 및 표적 치료를 달성하고, 인 비보에서 더 나은 종양 표적화 효과를 얻을 수 있다.
상세하게는, 본 발명은 높은 안정성을 갖는 D-형 펩타이드 표적 분자, D-형 펩타이드 DVAP(D-형 아미노산 서열 DPDADVDRDTDNDS: SEQ ID NO: 1) 및 SVAP(D-형 아미노산 서열 DSDNDTDRDVDADP: SEQ ID NO: 2)을 제조하고, LVAP(L-형 아미노산 서열 SNTRVAP: SEQ ID NO: 3), DVAP 및 SVAP에 의해 약물 분자 또는 고분자 담체 물질을 변형하여 VAP 약물 복합체 및 VAP 변형된 나노 약물 전달 시스템을 만든다.
본 발명에서, D-형 펩타이드 표적 분자 DVAP(D-형 아미노산 서열 DPDADVDRDTDNDS: SEQ ID NO: 1) 및 SVAP(D-형 아미노산 서열 DSDNDTDRDVDADP: SEQ ID NO: 2)은 고체상 폴리펩타이드 합성 기술에 의해 설계 및 제조되며, 두 펩타이드는 혈청에 대한 높은 안정성과 GRP78에 대한 높은 친화도를 가진다.
본 발명에서, 시스테인과 연결된 후, LVAP 또는 설계된 DVAP, SVAP는 분자 내 설프하이드릴이 말레이미드 기능성 영상화 물질(플루오로세인과 같은 형광 물질, Cy7, IR820, DiR과 같은 근적외선 염료, Gd-DTPA와 같은 자기공명영상화제, 99mTc-DTPA와 같은 방사선 영상화제 등)과 반응하여 복합체를 형성할 수 있다.
본 발명에서, LVAP 또는 설계된 DVAP, SVAP는 말레이미도히드라진 유도체(독소루비신 또는 에피루비신 및 케톤 또는 알데히드기를 함유한 다른 약물을 포함)의 반응에 의해 pH-감응성 히드라존 결합을 형성하는 펩타이드 약물 복합체, 또는 3-(2-피리딜디티오)프로피온산 유도체(파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, 히드록시캄토테신, 9-니트로 캄토테신, 빈크리스틴, 에토포사이드, 겜시타빈, 시타라빈, 6-플루오로우라실, 테니포사이드, 모리티닙, 에포틸론, 비노렐빈, 악티노마이신 D, 미토산트론 안트라퀴논, 마이토마이신, 블레오마이신, 이리노테칸 및 히드록시 또는 아미노기를 함유한 다른 약물을 포함)의 반응에 의해 이황화 결합을 형성하는 펩타이드 약물 복합체, 또는 약물(보르테조밉 및 붕산을 함유한 다른 약물 포함) 내 도파민 및 붕산기의 반응에 의해 pH-감응성 붕산 에스테르를 형성하는 펩타이드 약물 복합체, 또는 고체상 합성에 의해 직접적으로 아마이드 결합을 형성하는 펩타이드 약물 복합체(p53 활성화 펩타이드, 항미생물 펩타이드, 펩타이드 독소 및 다른 펩타이드 약물을 포함)를 포함한 약물을 변형할 수 있다.
본 발명에서, 시스테인과 연결된 후, 본 발명의 DVAP, SVAP 또는 문헌에 보고된 LVAP는 폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스포에탄올아민(PEG-DSPE), 폴리에틸렌 글리콜-폴리락트산(PEG-PLA), 폴리에틸렌 글리콜-폴리락틱-코-글리콜산(PEG-PLGA), 폴리에틸렌 글리콜-폴리카프로락톤(PEG-PCL)과 같은 말레이미드 기능기를 함유한 고분자 담체 물질을 변형할 수 있고, DVAP, SVAP, LVAP에 의해 변형된 리포좀, 고분자 마이셀, 고분자 디스크 및 나노입자와 같은 나노 약물 전달 시스템의 구축에 사용될 수 있다.
본 발명에서, DVAP, SVAP, LVAP에 의해 변형된 나노 약물 전달 시스템은 독소루비신 또는 에피루비신과 같은 안트라사이클린, 탁솔 및 도세탁셀 및 카바지탁셀과 같은 탁산, 캄토테신 및 히드록시캄토테신 및 이리노테칸과 같은 캄토테신, 빈크리스틴 및 비노렐빈과 같은 빈블라스틴, 보르테조밉 및 카르필조밉과 같은 프로테아좀 저해제, 파르테놀라이드와 같은 락톤, p53 활성화 펩타이드 및 멜리틴, 전갈 독 펩타이드 및 항미생물 펩타이드와 같은 펩타이드 약물 등을 캡슐화한다. 또는, 그것은 또한 플루오레세인, Cy7, IR820, DiR과 같은 근적외선 염료, 자기공명영상화제 Gd-DTPA 등과 같은 영상화 물질을 캡슐화할 수 있다.
본 발명의 DVAP, SVAP 및 LVAP는 종양의 진단 및 표적 치료를 위해 글루코오스 조절 단백질 GRP78의 고 발현을 갖는 세포 및 조직을 표적으로 하는 약물 또는 나노 약물 전달 시스템을 매개할 수 있다.
본 발명은 DVAP 및 SVAP를 위한 제조 및 특성 조사 및 종양 진단 및 치료 약물을 제조하기 위한 상기-언급된 LVAP, DVAP 및 SVAP 변형된 약물 복합체 및 나노 약물 전달 시스템에 대한 물질 기초를 제공하며; 다음을 포함하는 인 비보에서 LVAP, DVAP 및 SVAP-매개된 능동적 표적화 실험을 수행한다:
1. VAP, VAP-Cys 및 그들의 형광 유도체의 합성(VAP-플루오레세인, VAP-Cy7)
LVAP, LVAP-Cys, DVAP, DVAP-Cys, SVAP, SVAP-Cys는 고체상 합성에 의해 제조되었다. LVAP-플루오레세인, DVAP-플루오레세인, SVAP-플루오레세인, LVAP-Cy7, DVAP- Cy7, SVAP-Cy7는 설프하이드릴기와 말레이미드기의 미첼 추가 반응에 의해 합성되었다. 산물은 HPLC 및 MS에 의해 특성규명 되었다.
2. VAP 안정성 및 수용체 친화도 평가
혈청 안정성, 글루코오스 조절 단백질 GRP78에 대한 결합능 및 DVAP 및 SVAP의 GRP78 고 발현 세포에 의한 세포 섭취가 시험되었다: DVAP, SVAP 및 LVAP는 37℃에서 마우스 혈청과 각각 인큐베이션 되었고, 안정성 비교를 위해 펩타이드의 농도가 시간대별로 측정되었다. GRP78에 대한 DVAP, SVAP 및 LVAP의 결합능을 평가하기 위해 표면 플라즈몬 공명 방법이 사용되었고, GRP78 고발현 세포(예를 들어, 인간 제대 정맥 내피 세포 HUVEC) 및 모델 종양 세포(예를 들어, 신경 교종 세포 U87)의 인 비트로 표적능이 비교되며, DVAP-플루오레세인, SVAP-플루오레세인, LVAP-플루오레세인에 대한 인 비트로 3D 종양 스페로이드 모델의 섭취능이 비교되었다.
3. VAP 약물 복합체의 제조
시스테인과 연결된 후, LVAP, DVAP 및 SVAP는 약물의 말레이미도히드라진 유도체와 반응하여 pH-감응성 히드라존 결합을 함유한 펩타이드 약물 복합체를 형성한다. 관련된 약물은 독소루비신 및 에피루비신 등과 같은 케톤 또는 알데히드기를 함유한 약물을 포함한다;
시스테인과 연결된 후, LVAP, DVAP 및 SVAP는 약물의 3-(2-피리딜디티오)프로피온산 유도체와 반응하여 이황화 결합을 함유한 펩타이드 약물 복합체를 형성한다. 관련된 약물은 히드록시기 또는 아미노기를 함유한 파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, 히드록시캄토테신, 9-니트로캄토테신, 빈크리스틴 등을 포함한다;
도파민과 연결된 후, LVAP, DVAP 및 SVAP는 약물의 붕산기와 반응하여 pH-감응성 붕산을 함유한 펩타이드 약물 복합체를 형성하고, 관련된 약물은 보르테조밉 등과 같은 붕산기를 함유한 약물을 포함한다;
LVAP, DVAP 및 SVAP는 고체상 합성에 의해 펩타이드 약물과 직접적으로 축합되어 융합 펩타이드를 형성하고, 관련된 약물은 p53 활성화 펩타이드, 항미생물 펩타이드, 펩타이드 독소 등과 같은 펩타이드 약물을 포함한다.
4. VAP-독소루비신 복합체의 인 비보 약력학 및 약동학
시스테인과 연결된 후, DVAP는 독소루비신 말레이미도히드라진 유도체(MAL-DOX)와 축합하여 DVAP-독소루비신 복합체(DVAP-DOX)를 형성한다. 약물은 U87이 피하 이식된 종양을 보유한 누드 마우스 모델의 꼬리 정맥을 통해 투여되었고, 항종양 효과는 종양 체적, 종양 무게 및 종양 억제율로 평가되었다. 약물은 U87이 두개 내 이식된 종양을 보유한 누드 마우스 모델의 꼬리 정맥을 통해 투여되었고, 인 비보에서 그것의 항종양 효과를 평가하기 위한 지표로서 중앙 생존기간이 사용되었다. 약동학 곡선 및 인 비보에서의 분포는 마우스 꼬리에서의 정맥주사 후 형광 방법에 의해 조사되었다.
5. VAP-PEG-PLA 마이셀 전달 시스템의 구축 및 특성규명
우선, LVAP, DVAP 및 SVAP 변형된 고분자 물질 LVAP-PEG-PLA, DVAP-PEG-PLA 및 SVAP-PEG-PLA가 합성되었다. 물질의 합성은 Mal-PEG-PLA에서 말레이미드기와 시스테인-연결된 펩타이드 상에서 유리 설프하이드릴기의 반응에 의해 달성되었다. Mal-PEG-PLA는 아세토나이트릴에 용해되었고, 회전 증발시켜 박막을 형성하고 나서, 펩타이드가 포함된 PBS(pH 8.0)를 첨가하여 LVAP-PEG-PLA, DVAP-PEG-PLA 및 SVAP-PEG-PLA를 제조하였다.
그리고 나서, LVAP, DVAP 및 SVAP 변형된 마이셀(LVAP-마이셀, DVAP-마이셀, SVAP-마이셀)을 각각 제조하였다. 마이셀은 필름 형성 방법에 의해 특정 함량의 VAP-PEG-PLA, mPEG-PLA 및 약물(쿠마린 C6, DiR 또는 파클리탁셀)로 제조되었고, 평균 크기 및 다분산지수(PDI)를 확인하기 위해 동적 광 산란(DLS)에 의해 특성규명되었다.
6. VAP-마이셀의 인 비트로 및 인 비보 종양 표적화 평가
인 비트로에서 U87 세포, HUVEC 세포 및 U87 종양 스페로이드에서 LVAP-마이셀/C6, DVAP-마이셀/C6, SVAP-마이셀/C6 및 mPEG-마이셀/C6의 섭취를 조사하였다.
LVAP-마이셀/DiR, DVAP-마이셀/DiR, SVAP-마이셀/DiR 및 mPEG-마이셀/DiR을 U87 피하 이식된 종양을 보유한 누드 마우스의 꼬리 정맥을 통해 투여하고, 각 시간대에서 상이한 그룹의 종양 내 분포를 비교하였다.
7. VAP-마이셀/PTX의 인 비보 항종양 효과의 평가
LVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX 및 mPEG-마이셀/PTX, 탁솔 및 식염수의 임상적 제제를 U87 피하 이식된 종양을 보유한 누드 마우스의 꼬리 정맥을 통해 투여하고, 상이한 파클리탁셀 제형의 인 비보에서의 항종양 효과는 종양 체적, 종양 무게, 종양 세포의 세포사멸, 신생혈관형성 및 혈관형성 의태의 수에 의해 평가되었다.
본 발명은 DVAP 및 SVAP를 위한 제조 및 특성 조사 및 종양 진단 및 치료 약물을 제조하기 위한 상기-언급된 LVAP, DVAP 및 SVAP 변형된 약물 복합체 및 나노 약물 전달 시스템에 대한 물질 기초를 제공한다. 본 발명의 실험 결과는 LVAP, DVAP 및 SVAP가 인 비보에서 능동적 종양 표적화를 매개할 수 있고, LVAP와 비교하여, DVAP 및 SVAP는 더 좋은 안정성을 가지므로, 그들은 인 비보에서 더 나은 능동적 종양 표적화 효과를 달성하였음을 나타낸다.
도 1은 DVAP의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법: 컬럼(YMC, C18): 150×4.6mm; 이동상 A: 물(0.1% 트리플루오로아세트산 포함), 이동상 B: 아세토나이트릴(0.1% 트리플루오로아세트산 포함); 용출 과정: 0-30분 5% B-65% B; 유속: 0.7 mL/min; 컬럼 온도: 40℃; 검출: UV 214nm, 정체 시간: 11.1분. ESI-MS: 743.5, 이론적 분자량에 따름.
도 2는 DVAP-Cys의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 12.0분이었다. ESI-MS: 846.5, 이론적 분자량에 따름.
도 3은 sVAP의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 10.8분이었다. ESI-MS: 743.5, 이론적 분자량에 따름.
도 4는 SVAP-Cys의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 11.5분이었다. ESI-MS: 846.5, 이론적 분자량에 따름.
도 5는 LVAP의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 9.5분이었다. ESI-MS: 743.5, 이론적 분자량에 따름.
도 6은 LVAP-Cys의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 9.6분이었다. ESI-MS: 846.5, 이론적 분자량에 따름.
도 7은 DVAP-플루오레세인의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 15.3분이었다. ESI-MS: 1274.4, 이론적 분자량에 따름.
도 8은 SVAP-플루오레세인의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 16.9분이었다. ESI-MS: 1274.4, 이론적 분자량에 따름.
도 9는 LVAP-플루오레세인의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 16.5분이었다. ESI-MS: 1274.4, 이론적 분자량에 따름.
도 10은 DVAP-Cy7의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 26.5분이었다. ESI-MS: 1535.8, 이론적인 분자량에 따름.
도 11은 SVAP-Cy7의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 26.5분이었다. ESI-MS: 1535.8, 이론적 분자량에 따름.
도 12는 LVAP-Cy7의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 상기와 같으며, 정체 시간은 26.5분이었다. ESI-MS: 1535.8, 이론적 분자량에 따름.
도 13은 DVAP-DOX의 HPLC 및 ESI-MS 스펙트럼을 나타낸다:
크로마토그래피 방법은 이동상으로서 0.1% 트리플루오로아세트산이 0.1% 포름산으로 대체되는 것을 제외하고 상기와 같으며, 정체 시간은 15.5분이었다. ESI-MS: 1599.6, 이론적 분자량에 따름.
도 14는 DVAP-PEG3000-PLA2000, SVAP-PEG3000-PLA2000 및 LVAP-PEG3000-PLA2000의 1H-NMR 스펙트럼을 나타낸다:
Mal-PEG-PLA의 핵자기 스펙트럼은 6.7ppm의 말레이미드 피크를 나타내는 반면, 이 피크는 VAP-PEG-PLA의 핵자기 스펙트럼에서는 사라져 VAP-PEG-PLA의 말레이미드기가 완전히 반응하였음을 나타낸다.
도 15는 DVAP, SVAP 및 LVAP의 혈청 안정성을 나타낸다:
그래프의 종축은 손상되지 않은 폴리펩타이드의 잔류 비율이다. 50% 마우스 혈청에서의 DVAP 및 SVAP의 안정성은 LVAP보다 유의적으로 더 높다는 것을 알 수 있다. 2시간 인큐베이션 후, LVAP는 완전히 분해되나, DVAP 및 SVAP는 거의 분해되지 않았다.
도 16은 GRP78에 대한 DVAP, SVAP 및 LVAP의 결합능을 보여준다:
DVAP, SVAP 및 LVAP는 각각 4.010μM, 5.223μM 및 2.696μM의 KD 값으로 GRP78에 대한 유사한 결합능을 가지고 있고, DVAP 및 SVAP는 LVAP 보다 약간 더 약하다. 3종의 펩타이드의 해리 패턴은 각각 0.02091 1/s, 0.02826 1/s 및 0.01898 1/s의 Kd 값을 가져 유사하다.
도 17은 GRP78의 세포내 분포를 나타낸다:
GRP78은 종양 세포 U87 및 HUVEC(인간 제대 정맥 내피 세포)의 세포막 및 세포질에 광범위하게 분포하고 있는 반면, HEK293(정상세포)의 세포막에서는 거의 분포하지 않고 세포질에는 소량 분포한다.
도 18은 신경 교종 세포 U87에 의한 플루오레세인-표지된 펩타이드의 섭취를 나타낸다:
도면 A 및 B는 플루오레세인-표지된 DVAP, SVAP 및 LVAP과 U87 세포의 4시간 동안의 상호작용의 레이저 공초점 사진 및 플로우 사이토메트리 검출 결과를 나타낸다.
U87 세포에 의한 DVAP, SVAP 및 LVAP의 섭취는 유리 플루오레세인보다 유의적으로 더 높고, DVAP 및 SVAP의 섭취에서의 유의적인 차이는 없으며, LVAP보다 약간 더 약함을 나타낸다.
도 19는 HUVECs(인간 제대 정맥 내피 세포)에 의한 플루오레세인-표지된 펩타이드의 섭취를 나타낸다:
도면 A 및 B는 플루오레세인-표지된 DVAP, SVAP 및 LVAP과 HUVEC 세포의 4시간 동안의 상호작용의 레이저 공초점 사진 및 플로우 사이토메트리 검출 결과를 나타낸다.
HUVEC 세포에 의한 DVAP, SVAP 및 LVAP의 섭취는 유리 플루오레세인보다 유의적으로 더 높고, DVAP 및 SVAP의 섭취에서의 유의적인 차이는 없으며, LVAP보다 약간 더 약함을 나타낸다.
도 20은 U87 종양 스페로이드에 의한 플루오레세인-표지된 펩타이드 및 VAP-마이셀/C6의 섭취를 나타낸다:
도면은 U87 종양 스페로이드에 의한 플루오레세인-표지된 펩타이드 및 VAP 마이셀 각각의 섭취를 나타낸다. 도면으로부터 각각의 플루오레세인-표지된 펩타이드 및 VAP 마이셀은 U87 종양 스페로이드에 의해 잘 섭취될 수 있고 FAM 및 단순 마이셀과 유의적으로 다름을 볼 수 있다.
도 21은 DVAP, SVAP 및 LVAP의 경쟁적 억제를 나타낸다:
DVAP, SVAP 및 LVAP는 서로 완전히 억제하는 것으로 보일 수 있고, 3종의 폴리펩타이드 모두 GRP78 단백질의 동일 부위에 결합함이 입증된다.
도 22는 피하 이식된 종양에서 Cy7-표지된 펩타이드의 분포를 나타낸다:
도면 A는 U87 피하 이식 종양을 보유한 누드 마우스에서 1시간 동안 Cy7-표지된 펩타이드의 주사 후 종양에서 엑스 비보 형광 이미지를 나타낸다. 도면 B는 투여 후 각 시간대 별 형광 반-정량적 결과를 나타낸다. 도면 C는 종양 및 장기에서 엑스 비보 형광 이미지를 나타낸다. 도면 D는 종양에서 형광 강도의 엑스 비보 반-정량적 분석이다. 종양에서 Cy7-표지된 DVAP, SVAP 및 LVAP의 축적은 유리 Cy7보다 유의적으로 더 높았고(***p<0.001), 종양 표적화 효과는 이다.
도 23은 DVAP-DOX의 피하 종양 성장 억제를 나타낸다:
도면 A는 시간에 따른 누드 마우스의 각 그룹의 종양 체적의 변이를 보여주는 곡선이다. 식염수 군과 비교하여, 각 투여군은 종양 성장을 억제하였다. 동일한 Dox 투여량에서 DVAP-DOX의 효과는 DOX 및 MAL-DOX보다 유의적으로 더 좋았으며, RGD-DOX보다 명백히 더 좋았다. 도면 B는 누드 마우스를 희생시키고 종양 조직을 채취한 후 무게 및 통계 분석 결과를 나타낸다. 도면 C는 엑스 비보 종양 조직의 사진이다. DVAP-DOX 군의 종양 크기 및 종양 무게는 동일한 Dox 투여량에서 다른 군보다 유의적으로 더 낮았다.
도 24는 DVAP-DOX에 의해 처리된 두개 내 종양을 보유한 누드 마우스 모델의 생존 곡선을 나타낸다:
PBS 군, DOX 군, MAL-DOX 군, DVAP-DOX 군(높은, 중간, 낮은 투여량에서) 및 DVAP 군의 평균 생존 시간은 각각 36, 36, 48, 58, 52, 48.5 및 45.5일이었다.
다른 군과 비교하여, DVAP-DOX 군의 두개 내 종양을 보유한 누드 마우스 모델의 생존 시간이 가장 길어졌고, 낮은 투여량에서 DVAP-DOX는 4배 높은 투여량에서 MAL-DOX의 동일한 항-뇌 신경교종 효과를 가지는 결과를 나타냈다.
도 25는 마우스에서 DVAP-DOX의 약동학 곡선 및 분포를 나타낸다:
도면 A는 약동학 곡선을 나타내고, 도면 B는 마우스의 주요 장기에서의 분포를 나타낸다. DVAP-DOX의 AUC는 MAL-DOX보다 유의적으로 더 낮은 결과를 보여주었으나, 유리 DOX보다는 유의적으로 더 높았다. 더욱이, 인 비보에서 주요 장기에서의 분포로부터, DVAP-DOX는 심장에서 약물의 분포를 유의적으로 감소시킬 수 있어 심장에서 독소루비신의 부작용을 줄일 수 있다.
도 26은 피하 종양에서 DiR 로딩된 VAP 마이셀의 분포를 나타낸다:
도면 A는 꼬리 정맥 주사 24시간 후 인 비보 형광 이미지를 나타낸다. 좌측에서 우측까지는 PBS 군, mPEG-마이셀/DiR 군, LVAP-마이셀/DiR 군, DVAP-마이셀/DiR 군 및 SVAP-마이셀/DiR 군이다. 도면 B는 장기의 형광 이미지이다. 결과는 DVAP 또는 SVAP 변형된 마이셀이 종양 부위를 보다 효과적으로 표적화함을 나타낸다.
도 27은 파클리탁셀이 로딩된 마이셀의 입자 크기를 나타낸다:
도면은 각 파클리탁셀 마이셀 제형의 입자 크기 분포를 나타낸다. 도면에 나타난 바와 같이, 상이한 제형 간의 크기의 유의적인 차이는 없다.
도 28은 U87 및 HUVEC 세포에 대한 파클리탁셀 로딩된 마이셀의 억제 곡선을 나타낸다:
도면 A 및 B는 U87 세포 및 HUVEC 세포에 대한 mPEG-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, LVAP-마이셀/PTX 및 탁솔 각각의 억제 곡선을 나타낸다. 도면 A는 4시간 동안 투여되고 72시간 동안 배양된 후 U87 세포에 대한 mPEG-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, LVAP-마이셀/PTX 및 탁솔의 IC50이 0.73, 0.09, 0.12, 0.59 및 0.75μM임을 나타낸다. 모든 마이셀은 인 비트로에서 U87 세포의 성장을 억제할 수 있다. DVAP-마이셀/PTX 및 SVAP-마이셀/PTX의 활성은 각각 LVAP-마이셀/PTX의 6.56배 및 4.92배였다. 도면 B는 4시간 동안 투여되고 72시간 동안 배양된 후 HUVEC 세포에 대한 PEG-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, LVAP-마이셀/PTX 및 탁솔 각각의 IC50가 0.52, 0.04, 0.04, 0.23 및 0.74 μM임을 나타낸다. 모든 마이셀은 인 비트로에서 HUVEC 세포의 성장을 억제할 수 있다. DVAP-마이셀/PTX 및 SVAP-마이셀/PTX의 활성은 LVAP-마이셀/PTX의 5.75배였다.
도 29는 파클리탁셀이 로딩된 마이셀에 의한 신생혈관형성의 형성의 인 비트로 억제를 나타낸다:
도면은 인 비트로 신생혈관형성 모델에서 mPEG-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, LVAP-마이셀/PTX 및 탁솔의 억제를 나타내며, LVAP-마이셀/PTX과 비교하여 DVAP-마이셀/PTX 및 SVAP-마이셀/PTX는 신생혈관형성의 형성을 보다 유의적으로 억제하였다.
도 30은 파클리탁셀이 로딩된 마이셀에 의한 혈관형성 의태의 형성의 인 비트로 억제를 나타낸다:
도면은 혈관형성 의태 모델에서 mPEG-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, LVAP-마이셀/PTX 및 탁솔의 억제를 나타내며, LVAP-마이셀/PTX와 비교하여 DVAP-마이셀/PTX 및 SVAP-마이셀/PTX는 혈관형성 의태의 형성을 보다 유의적으로 억제하였다.
도 31은 파클리탁셀이 로딩된 마이셀의 피하 종양 성장 억제를 나타낸다:
도면 A는 누드 마우스에서 각 군의 시간별 종양 체적 변화를 보여주는 곡선이고, 각 투여군은 종양 성장을 억제하였다. DVAP-마이셀/PTX 및 SVAP-마이셀/PTX는 LVAP-마이셀/PTX와는 현저하게 다르다(n=8, ***p<0.001). 누드 마우스를 희생시킨 후, 채취된 종양의 무게를 재고 통계적으로 분석하였다(도면 B). DVAP-마이셀/PTX 및 SVAP-마이셀/PTX 군의 종양 무게는 LVAP-마이셀/PTX보다 유의적으로 더 낮았다(n=8, ***p<0.001).
도 32는 TUNEL 염색 결과를 나타낸다:
도면은 종양 세포사멸을 촉진하는 mPEG-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, LVAP-마이셀/PTX의 TUNEL 염색 그림을 나타내고(바=50㎛), 세포사멸 세포는 갈색빛의 노란색 또는 황갈색의 핵을 보였다.
도 33은 CD31/PAS 이중 염색 결과를 나타낸다:
도면은 신생혈관형성을 억제하는 mPEG-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, LVAP-마이셀/PTX의 CD31/PAS 염색 사진을 나타내고(바=100㎛), 신생혈관형성 세포의 핵은 갈색빛의 노란색 또는 황갈색이다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 더 잘 이해될 것이나, 본 발명은 하기 설명의 범위에 한정되지 않는다.
<실시예 1> VAP, VAP-플루오레세인, VAP-Cy7, VAP-약물, VAP-PEG-PLA의 합성 및 특성규명
1. DVAP, SVAP 및 LVAP, DVAP-Cys, SVAP-Cys 및 LVAP-Cys의 합성 및 특성규명
D-형 아미노산으로 구성된 설계된 DVAP(서열 DPDADVDRDTDNDS: SEQ ID NO: 1), DVAP-Cys(서열 DCDPDADVDRDTDNDS: SEQ ID NO: 4) 및 SVAP(서열 DSDNDTDRDVDADP: SEQ ID NO: 2), SVAP-Cys(서열 DSDNDTDRDVDADPDC: SEQ ID NO: 5) 및 L-형 아미노산으로 구성된 LVAP(서열 SNTRVAP: SEQ ID NO: 3) 및 LVAP-Cys(서열 SNTRVAPC: SEQ ID NO: 5)는 고체상 펩타이드 합성에 의해 합성되었다.
구체적인 방법: 표준 Boc-기반 고체상 펩타이드 합성 방법에 따라, 아미노산은 순차적으로 PAM 수지에 커플링되고, 축합제로 HBTU/DIEA를, 탈보호제로 TFA를 사용하여 반응을 수행하였다. 모든 아미노산이 커플링된 후, P-크레졸을 함유한 플루오르화수소에 의해 수지를 절단하고 아이스 배스에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 하에서 플루오르화수소를 제거하고, 침전물이 형성되며, 아이스 디에틸 에테르로 3회 세척하였다. 침전물을 20% 아세토나이트릴에 다시 녹이고, 여과물을 수집하고 나서 회전 증발시켜 미정제의 펩타이드 용액을 얻었다. 미정제의 펩타이드는 용출제로 아세토나이트릴/물(0.1% TFA 함유)을 사용하여 preparative HPLC에 의해 정제되었다. DVAP, DVAP-Cys, SVAP, SVAP-Cys, LVAP 및 LVAP-Cys의 순도 및 분자량(Mw)은 HPLC 및 ESI-MS에 의해 특성규명되었다. HPLC 스펙트럼 및 질량 스펙트럼은 도 1, 2, 3, 4, 5 및 6에 도시된다.
2. VAP-플루오레세인 및 VAP-Cy7의 합성 및 특성규명
상기 단계에서 얻은 DVAP-Cys, SVAP-Cys 또는 LVAP-Cys는 0.1M PBS 용액(pH 7.2)에 녹이고, 플루오레세인-5-말레이미드는 DMF에 녹였다. 혼합 후, 반응 용액을 자석으로 교반하고, HPLC로 모니터링 하였다. DVAP-Cys, SVAP-Cys 또는 LVAP-Cys가 완전히 반응하였을 때 반응을 멈추고, 반응용액은 용출제로 아세토나이트릴/물(0.1% TFA 포함)을 사용하여 preparative HPLC로 정제하고, 동결-건조하여 DVAP-플루오레세인, SVAP-플루오레세인 또는 LVAP-플루오레세인을 얻었다. HPLC 스펙트럼 및 질량 스펙트럼은 도 7, 8 및 9에 도시하였다.
VAP-Cy7의 제조 방법은 상기와 동일하였다. HPLC 스펙트럼 및 질량 스펙트럼은 도 10, 11 및 12에 도시하였다.
3. VAP-DTPA-Gd 및 VAP-DTPA-99mTc의 제조
DMF에 녹인 말레이미드-DTPA를 상기와 같은 반응을 위해 DVAP-Cys, SVAP-Cys 또는 LVAP-Cys가 포함된 PBS 용액과 혼합하고 교반하였다. preparative HPLC 및 동결 건조를 적용하여 순수 DVAP-DTPA, SVAP-DTPA 또는 LVAP-DTPA를 얻은 다음, Gd 또는 99mTc로 킬레이팅하여 VAP-DTPA-Gd 또는 VAP-DTPA-99mTc를 얻었다.
4. VAP-약물 복합체의 제조
VAP-독소루비신 복합체는 케톤 또는 알데히드기를 함유하는 약물과 컨쥬게이트 된 VAP의 예시로서 제조되었다. 9.4mg의 티올화된 VAP(DVAP 또는 SVAP 또는 LVAP)를 3mL의 PBS(0.1mM, pH 7.0)에 녹이고, 10배 몰 함량의 트리스(2-카르복시에틸) 포스핀(TCEP)를 첨가하여 4℃에서 20분간 교반하였다. 그리고 나서, 4배 몰 함량의 독소루비신 말레이미도히드라진 유도체(MAL-DOX)를 첨가하고 실온의 암 상태에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액은 preparative HPLC로 정제하고, 동결 건조하여 LVAP 또는 DVAP 또는 SVAP-독소루비신 복합체를 얻었다. 복합체는 HPLC 및 MS에 의해 특성규명되었다. 결과는 도 13에 도시하였다.
VAP-파클리탁셀 복합체는 이황화 결합에 의해 하이드록시기 또는 아미노기를 함유한 약물과 컨쥬게이트 된 VAP의 복합체의 예시로서 제조되었다. 200mg의 파클리탁셀을 10mL의 클로로포름에 녹이고, 0-5℃에서 냉각시키고, 39.99mg의 DCC 및 60.4mg의 3-(2-피리딜디티오)프로피온산을 연달아 첨가하고 나서, 반응 용액을 실온까지 올려 밤새도록 반응시켰다. 반응 용액을 여과하고 컬럼 크로마토그래피(CHCl3/MeOH = 50:1 - 15:1, V/V 용출)로 정제하여 파클리탁셀 3-(2-피리디닐)-프로피온산 유도체를 얻었다. 파클리탁셀 3-(2-피리디닐)-프로피온산 유도체를 5mL의 DMF에 녹이고, 1.5배 몰 함량의 VAP-Cys를 PBS/DMF에 녹였다. 파클리탁셀 3-(2-피리디닐)-프로피온산 유도체를 티올 펩타이드 용액에 한 방울씩 첨가하고, 용액의 pH는 4-5에서 유지되며, 실온에서 6시간 동안 반응시켰다. VAP-파클리탁셀 복합체는 preparative HPLC 정제 및 동결 건조에 의해 얻었다.
VAP-보르테조밉 복합체는 붕산기 함유 약물과 컨쥬게이트 된 VAP의 예시로서 제조되었다. VAP의 합성에 따라 아미노산이 순차적으로 수지에 커플링되고, 트리플루오로아세트산이 질소 말단에서 Boc 보호를 제거한 후, 3배 몰 함량의 무수호박산과 DMF에 녹인 DIEA를 첨가하고 실온에서 30분 동안 반응시켰다. 수지를 세척한 후, 도파민 보호를 위해 5배 몰 함량의 트리메틸클로로실란을 첨가하여 실온에서 1시간 동안 반응시키고, 축합제로 HBTU/DIEA를 사용하였다. 플루오르화수소로 수지를 절단하고, VAP-도파민 유도체는 preparative HPLC로 정제하였다. VAP-도파민 유도체는 pH7.4의 버퍼에서 1:1의 몰 비율로 보르테조밉과 혼합하여 VAP-보르테조밉 복합체를 얻었다.
VAP-PMI는 펩타이드 약물과 컨쥬게이트 된 VAP의 예시로서 제조되었다. VAP-약물 복합체는 고체상 펩타이드 합성 방법에 의해 직접적으로 얻었다. 구체적인 방법은, VAP-PMI 폴리펩타이드 서열을 설계한 후, VAP-PMI의 아미노산을 VAP의 제조와 같은 방법에 의해 수지에 순차적으로 커플링시키고, VAP-PMI 융합 펩타이드는 플루오르화수소 절단 및 정제 후 얻었다.
5. VAP-PEG-PLA의 합성 및 특성규명
고분자 물질의 합성은 Mal-PEG-PLA의 말레이미드기와 펩타이드의 유리 설프하이드릴기의 반응에 의해 달성되었다. 40mg Mal-PEG-PLA를 5mL의 아세토나이트릴에 녹이고, 회전 증발시켜 필름을 형성하였으며, 3mL PBS(pH8.0, 0.2M)를 수화물에 첨가하여 37℃에서 마이셀을 형성하고 나서, 8시간 이내에 9.6mg VAP-Cys를 첨가하여 밤새도록 반응시켰다. 과량의 VAP-Cys는 투석을 통해 제거되고, 반응은 HPLC에 의해 검출되었다. VAP-PEG-PLA를 동결 건조하고 1H-NMR에 의해 특성규명되었다(도 14).
<실시예 2> VAP의 혈청 안정성의 조사
DVAP, SVAP 및 LVAP를 1mg/mL의 증류수에 각각 녹이고 나서, 각 VAP 용액 0.1mL을 0.9mL 25% 마우스 혈청에 첨가하고 37℃에서 인큐베이션 하였다. 0 및 15분, 0.5, 1, 2 및 4시간째에, 100㎕의 용액을 얻고, 4℃에서 20분간 정치한 후, 20㎕의 트리클로로아세트산(TCA)을 첨가하여 혈청의 단백질을 침전시키고, 용액을 12,000rpm에서 10분간 원심분리하였다. HPLC 분석을 위해 20㎕의 상등액을 얻었다. 혈청 안정성 결과(도 15)는 DVAP 및 SVAP가 LVAP 보다 더 좋은 혈청 안정성을 가지고 있음을 나타낸다.
<실시예 3> 글루코오스 조절 단백질 GRP78에 대한 VAP의 결합 활성 실험
예비-결합 분석은 바이아코어 시스템에 의해 수행되었고, CM5 칩에 대한 GRP78의 결합을 위한 최적 pH로 pH5.0을 선택하였다. 재조합 인간 GRP78은 CM5 칩에 커플링되었고, RU 값은 예정된 값에 도달하였다. DVAP, SVAP 및 LVAP 용액은 각각 0.3125, 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10 및 20μM의 농도로 준비되었다. 샘플을 저농도에서 고농도까지 주입하였다. 단백질에 대한 DVAP, SVAP 및 LVAP의 결합 활성은 바이아코어 T2000 평가 소프트웨어로 분석되었고, KD 값 및 Kd 값을 각각 계산하였다(도 16).
<실시예 4> GRP78의 세포 내 분포 조사
GRP78 분포 실험을 위해 3종류의 세포(U87, HUVEC 및 HEK293)를 선택하고, 막의 파열 및 막의 파열이 없는 세포에서 GRP78의 분포를 조사하였다. 세포를 공초점의 접시에 접종하고, PBS로 3회 세척하고, 10μM DIO 파라포름알데히드 용액으로 8분간 고정하였다. 1% BSA로 37℃에서 30분 동안 차단하고, PBS로 3회 세척한 후, 세포에 1% BSA로 희석된 항-GRP78 항체를 첨가하고 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션 하였다. 그리고 나서 PBS로 2회 세포를 세척하고 PBS로 5분 마다 2회 세척하였다. DAPI로 10분간 염색하고 PBS로 3회 세척하고 글리세린으로 밀봉한 후, 공초점 레이저 현미경에서 세포를 관찰하였다. 결과는 도 17에 도시하였다.
<실시예 5> VAP의 인 비트로 세포 표적화 분석
1. 신경교종 세포 U87에 대한 VAP의 인 비트로 표적화
지수기의 단층 배양된 신경교종 세포(U87 세포)를 0.25% 트립신으로 분해하였다. 단일 세포 현탁액을 제조하기 위해 10% 우태아혈청을 함유한 DMEM 배양 용액을 사용하였다. 배양 플레이트를 이산화탄소 인큐베이터로 옮기고, 12-웰 플레이트에서 1mL의 웰 부피로 웰당 1×105 세포의 밀도로 37℃, 5% CO2 및 포화된 습기에서 밤새도록 세포를 배양하였다. 그리고 나서, DMEM 배지는 10% 우태아혈청을 함유한 DMEM 배양 용액으로 제조된 5μM의 농도의 FAM, DVAP-플루오레세인, SVAP-플루오레세인 및 LVAP-플루오레세인 용액으로 교체되고, 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션 하고, 상등액이 흡인되었다. PBS 용액으로 3회 세포를 세척하고, 포름알데히드로 고정하며, DAPI로 염색하였다. 형광 이미지는 공초점 레이저 현미경에서 캡쳐하였다. 세포 내부화의 사진은 도 18A에 도시하였다. PBS로 3회 세포를 세척하고 나서 플로우 사이토메트리에 의해 검출되었다. 플로우 사이토메트리의 결과는 도 18B에 도시하였다.
2. 인간 제대 정맥 내피세포에 대한 VAP의 인 비트로 표적화
지수기의 단층 배양된 인간 제대 정맥 내피세포(HUVEC 세포)를 상기와 같이 시험하고, 내부화 사진은 도 19A에 도시하고, 플로우 사이토메트리 분석 결과는 도 19B에 도시하였다.
3. 인 비트로에서 U87 종양 스페로이드에 대한 VAP의 표적화
2% 저분자량의 아가로스 용액을 뜨거운 상태로 48-웰 플레이트에 웰당 150㎕씩 첨가하고, 냉각 및 고체화를 위해 실온에 정치하였다. 그리고 나서, 웰당 400㎕의 U887 세포 현탁액을 접종하였고, 세포 밀도는 2×103 세포/웰이었다. 종양 스페로이드는 이산화탄소 배양기에서 37℃, 5% CO2 및 포화 습기에서 7일 동안 인큐베이션하여 달성하였다. 그리고 나서, 배양 용액은 10% 우태아혈청을 함유한 DMEM 배양 용액으로 제조된 5μM 농도의 FITC, DVAP-플루오레세인, SVAP-플루오레세인 및 LVAP-플루오레세인 용액으로 37℃에서 4시간 동안 교체되었고, 상등액이 흡인되었다. 종양 스페로이드를 PBS로 3회 세척하고, 파라포름알데히드로 15분 동안 고정하고 나서 공초점 현미경에서 관찰하였다. 사진도는 도 20A에 도시하였다.
4. VAP 상호 경쟁 억제 시험
VAP 펩타이드 간의 상호 경쟁 억제를 조사하기 위해 각 군 당 3개의 튜브에 9개의 군(빈 대조군, LVAP-플루오레세인, DVAP-플루오레세인, SVAP-플루오레세인, LVAP-플루오레세인(+LVAP), LVAP-플루오레세인(+DVAP), LVAP-플루오레세인(+SVAP), DVAP-플루오레세인(+LVAP), DVAP-플루오레세인(+DVAP), DVAP-플루오레세인(+SVAP), SVAP-플루오레세인(+LVAP), SVAP-플루오레세인(+DVAP), SVAP-플루오레세인(+SVAP))을 설정하였다. U87 세포를 트립신으로 분해하고, EP 튜브로 옮기고, PBS로 3회 세척하여 트립신을 제거하고, 4℃에서 20분 동안 전처리하였다. 제조된 펩타이드 용액(비-형광 표지) 또한 저온 전처리를 위해 4℃에서 정치하고 나서, 펩타이드 용액을 세포와 혼합하고, 2시간 동안 쇼크를 주어 세포 표면의 수용체 단백질이 포화하도록 하였다. 그리고 나서, 형광-표지된 펩타이드 용액을 첨가하였다. 4℃에서 밤새도록 정치한 후 PBS로 3회 세포를 세척하고 플로우 사이토메트리에 의해 분석하였다(도 21에 도시됨).
<실시예 6> VAP의 인 비보 종양 표적화 분석
우선, 피하 종양 동물 모델을 다음과 같이 구축하였다: 지수기의 U87 세포를 트립신으로 분해하고 나서, 3×107/mL 농도의 100㎕의 세포 현탁액을 누드 마우스의 오른쪽 등에 접종하였다. 마우스는 SPF 등급에서 자랐고, 종양 크기는 정기적으로 관찰되었다. 종양 크기가 200mm3일 때, 괴사 없고, 일정한 종양 형태를 갖는 종양-보유 누드 마우스를 선별하고 그룹 내에서 시험하였다. Cy7 및 DVAP-Cy7, SVAP-Cy7 및 LVAP-Cy7 용액을 꼬리 정맥을 통해 마우스당 0.15μmol의 투여량으로 종양-보유 누드 마우스에 주사하였다. 2시간 후, 누드 마우스를 희생시키고, 종양을 채취하고 IVIS 영상 시스템에 의해 엑스 비보 형광 이미징에 노출하였다(도 22A에 도시됨). 이외에, 형광 강도의 반-정량적 분석을 계산하였다(도 22B에 도시됨).
<실시예 7> DVAP-DOX의 약력학 및 약동학 검증
1. U87 피하 종양의 억제 효능 시험
U87 피하 종양-보유 마우스 모델을 구축하고, 종양 크기가 100mm3일 때 그룹 내에서 시험하였다. 피하 종양-보유 모델 마우스에 식염수, DOX, MAL-DOX(고 및 저 투여량) 및 DVAP-DOX(고 및 저 투여량) 및 RGD-DOX(인테그린 리간드 c(RGDyK) 및 MAL-DOX를 사용하여 VAP-DOX에 따라 같은 방법으로 제조된 약물 복합체)를 5회 투여하고, 각 투여량 간의 간격은 2일이었다. 저 투여량을 위한 1.25mg/kg을 제외하고 DOX의 총 투여량은 2.5mg/kg이었다. 매일 버니어 캘리퍼스로 종양의 장경(a)과 단경(b)을 측정하고, 누드 마우스의 종양 체적을 식에 따라 계산하여 종양 체적 변화의 시간 경과에 따른 곡선을 플로팅하며, 각 그룹의 통계적 차이를 계산하였다. 종양 체적은 다음 식에 따라 계산하였다:
V tumor volume = 0.5 (a × b2)
투여 후 21일에, 모든 누드 마우스를 희생시키고, 채취한 피하 종양의 무게를 측정하며, 각 그룹의 통계적 차이 및 종양 억제율을 계산하였다(도 23).
2. 두개 내 신경교종의 항-교모세포종 효능 시험
누드 마우스를 마취시키고, 정위기로 고정한 후, 지수기의 U87 세포(각 마우스에 대해 5㎕의 PBS 버퍼에 분산된 5×105 세포를 오른쪽 선조체에 이식하여(앞 장골능선 앞면 0.6mm, 측면 방향 1.8mm, 깊이 3mm) 두개 내 U87 종양 보유 모델을 누드 마우스에 확립하였다. 네이키드 마우스의 상태를 정기적으로 관찰하였다. 마우스의 꼬리 정맥에 PBS, DOX, MAL-DOX, DVAP, DVAP-DOX(고, 중간 및 저 투여량)를 각각 이식 후 10, 13, 16, 19 및 22일에 투여하였다. DOX의 총 투여량은 저 투여량의 2.5mg/Kg, 중간 투여량의 5mg/kg를 제외하고 10mg/Kg이었다. DVAP 투여량은 고 투여량의 DVAP-DOX에 포함된 DVAP의 함량이었다. 마우스의 생존 시간을 기록하였다(도 24).
3. DVAP-DOX의 약동학 연구
ICR 마우스에 200㎕의 DOX, DVAP-DOX 및 MAL-DOX(10mg/kg의 DOX 함유) 각각을 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 1, 5, 15, 30 및 45분, 1, 2, 4 및 6시간 후, 50㎕의 혈액 샘플을 수집하고, PBS로 4배 희석하여 형광 Ex 485/Em 590에 의해 측정하고, 약물 농도-시간 곡선 및 주 조직에서의 분포량을 플로팅하였다(도 25).
<실시예 8> 마이셀의 인 비트로 종양 스페로이드 표적화 능력의 평가
1. 쿠마린 6이 로딩된 마이셀의 제조
1mg VAP-PEG-PLA, 9mg mPEG-PLA 및 5㎍ 쿠마린 6(C6)을 2mL의 아세토나이트릴에 녹이고, 37℃ 수조에서 감압으로 증발시켜 박막을 형성하고, 2mL의 생리식염수로 수화시키고 유리 쿠마린은 CL-4B 컬럼 크로마토그래피에 의해 제거하여 쿠마린 6-로딩된 마이셀을 얻었다(VAP-마이셀/C6).
2. VAP-마이셀/C6 마이셀의 인 비트로 U87 종양 스페로이드 표적화 분석
2% 저분자량의 아가로스 용액을 뜨거운 채로 웰당 150㎕로 48-웰 플레이트에 첨가하고, U87 세포는 48-웰 플레이트에 웰당 2×103/400㎕의 밀도로 씨딩하였다. 37℃, 5% CO2 및 포화 습기에서 7일 동안 이산화탄소 인큐베이터에서 인큐베이션한 후 종양 스페로이드가 형성되었다. 그리고 나서, 배양 용액은 10% FBS를 함유한 DMEM 배양 용액으로 제조된 5ng/mL 농도의 마이셀/C6, DVAP 마이셀/C6, SVAP 마이셀/C6 및 LVAP 마이셀/C6으로 대체되었다. 37℃에서 4시간 인큐베이션 후, 상등액을 휘발시키고, 종양 스페로이드를 PBS로 3회 세척하고, 파라포름알데히드로 15분간 고정하고 나서, 공초점 현미경을 이용하여 이미지를 얻었다. 사진은 도 20B에 도시한다.
<실시예 9> VAP 마이셀의 인 비보 표적화 검증
1. DiR 로딩된 마이셀의 제조
1mg VAP-PEG-PLA, 9mg mPEG-PLA 및 1mg DiR의 무게를 재고, 쿠마린 6이 로딩된 마이셀의 방법에 따라 DiR이 로딩된 마이셀(VAP-마이셀/DiR)을 제조하였다.
2. VAP-마이셀/DiR의 인 비보 표적화 검증
U87 피하 종양을 보유한 누드 마우스 모델에 꼬리 정맥을 통해 100㎕의 PBS, mPEG-마이셀/DiR, DVAP-마이셀/DiR, SVAP-마이셀/DiR 및 LVAP-마이셀/DiR를 각각 주사하였다. 2, 4, 8, 12 및 24시간에 누드 마우스를 마취시키고, 누드 마우스 내 DiR 형광 분포는 IVIS 이미징 시스템에 의해 기록하고, 형광 강도의 반-정량적 계산을 수행하였다(도 26에 도시됨).
<실시예 10> 파클리탁셀이 로딩된 VAP 마이셀의 항-신경교종 효능의 인 비트로 평가
1. 파클리탁셀이 로딩된 마이셀의 제조 및 특성규명
1mg의 VAP-PEG-PLA, 9mg의 mPEG-PLA 및 2mg의 파클리탁셀의 무게를 재고, 쿠마린 6이 로딩된 마이셀의 방법에 따라 파클리탁셀이 로딩된 VAP 마이셀(VAP-마이셀/PTX)을 제조하였다. 입자 크기 및 분포는 도 27에 도시한다.
2. 항-신경교종 효능의 인 비트로 평가
U87 세포를 4.0×103 세포/웰로 96-웰 플레이트에 접종하였다. 24시간 후, 배양 용액은 일련의 농도의 DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX, LVAP-마이셀/PTX 및 mPEG-마이셀/PTX 및 탁솔 200㎕로 대체되었다. 72시간 후, 20㎕의 MTT 용액을 각 웰에 첨가하고, 4시간 동안 인큐베이션 하였다. 배양 용액을 버리고, 150㎕의 DMSO를 첨가하고 보라색 입자가 녹을 때까지 용액을 흔들었다. 흡광도 값은 590nm에서 마이크로플레이트 리더에 의해 측정되었고, 세포 생존능은 MTT 분석에 의해 측정되었으며, 세포 생존능 및 중간 치사량이 계산되었다(도 28에 도시됨).
3. 신생혈관형성에 대한 VAP-마이셀/PTX의 억제 분석
50㎕의 마트리젤 베이스먼트를 24-웰 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 응고를 위해 37℃ 인큐베이터에서 30분 동안 인큐베이션 하였다. HUVEC 세포를 0.25% 트립신으로 분해하고, 1μM 파클리탁셀 VAP 마이셀 또는 유리 파클리탁셀 약물 용액을 함유한 DMEM 배지와 혼합하여 단일 세포 현탁액을 제조하고, 예비코팅된 24-웰 배양 플레이트에서 웰당 1×105 세포로 37℃, 5% CO2 및 포화 습기에서 배양하였다. 맥관 형성은 12시간 후 관찰하였다(도 29에 도시됨).
4. VAP-마이셀/PTX에 의한 혈관형성 의태의 억제 분석
50㎕의 마트리젤 베이스먼트를 24-웰 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 응고를 위해 37℃ 인큐베이터에서 30분 동안 인큐베이션 하였다. U87 세포를 0.25% 트립신으로 분해하고, 1μM 파클리탁셀 VAP 마이셀 또는 유리 파클리탁셀 약물 용액을 함유한 DMEM 배지와 혼합하여 단일 세포 현탁액을 제조하고, 예비코팅된 24-웰 배양 플레이트에서 웰당 1×105 세포로 37℃, 5% CO2 및 포화 습기에서 배양하였다. 맥관 형성은 12시간 후 관찰하였다(도 30에 도시됨).
<실시예 11> VAP-마이셀/PTX의 인 비보 항-신경교종 효능 분석
1. 인 비보 항-신경교종 효능 분석
U87 피하 종양 동물 모델을 구축하고, 종양 크기가 100mm3일 때 그룹에서 시험하였다. 피하 종양을 보유한 모델 마우스에 100㎕의 식염수, 탁솔, LVAP-마이셀/PTX, DVAP-마이셀/PTX, SVAP-마이셀/PTX 및 mPEG-마이셀/PTX를 3일 마다 5회 주사하고, 각 투여량 간의 간격은 2일이었다. 파클리탁셀의 총 투여량은 25 mg/kg이었다. 종양의 장경(a) 및 단경(b)은 버니어 캘리퍼로 매일 측정하였고, 누드 마우스의 종양 체적은 하기 식에 따라 계산되었으며, 시간별 종양 체적 변화 곡선을 플롯팅하고, 각 그룹의 통계적 차이를 계산하였다. 누드 마우스의 각 그룹의 종양 체적은 다음 식에 따라 계산되었다:
V tumor volume = 0.5 (a × b2)
투여(접종 후 24일) 후 18일에, 모든 누드 마우스를 희생시키고, 채취한 피하 종양의 무게를 재고 각 그룹의 통계적 차이를 계산하였다(도 31에 도시됨).
2. VAP-마이셀/PTX의 전-세포사멸(proapoptosis) 분석
투여를 끝낸 후 14일째에, 종양을 보유한 누드 마우스의 종양을 채취하고 동결 절편을 위해 고정하고, 종양의 세포사멸을 TUNEL로 분석하였다. 세포의 세포사멸을 검출하기 위해 수행된 TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling) 과정은 다음과 같이 기술되었다: 파라핀 절편은 통상적으로 탈왁스 처리된다; 시간대별로 3분씩 3회 PBS로 세척된다; 실온에서 20분 동안 0.3% H2O2 용액으로 처리된다; 20㎍/mL proteinase K에 의해 37℃에서 20분 동안 분해된다; 시간대별로 3분씩 3회 PBS로 세척된다; 각 절편에 30㎕의 TUNEL 용액(TDT 및 비오틴-dNTP)을 첨가하고 37℃에서 60분 동안 정치되었다. 양성 결과는 핵이 갈색빛의 황색 또는 황갈색이고, 핵 내 양성의 갈색 입자들은 세포사멸 세포로 간주하였다. 광학 현미경 하에서 5개의 확대된 영역에서 세포사멸 양성 세포의 수를 연속적으로 계수하고, 영역 내 양성 세포의 비율이 세포사멸 지수이며, 결과는 도 32에 도시한다.
3. VAP-마이셀/PTX의 혈관형성 억제 분석
투여를 끝낸 후 14일째에, 종양을 보유한 누드 마우스의 종양을 채취하고 파라핀에 고정하고 매립시켜 절편을 만들었다. CD31 면역조직화학 염색/과요오드산 Schiff(PAS) 이중 염색을 수행하였다. 5개의 확대된 영역에서 CD31 양성 혈관의 수는 광학 현미경 하에서 연속적으로 계수하고, 결과는 도 33에 도시한다.
<110> FUDAN UNIVERSITY <120> VAP POLYPEPTIDE AND USE THEREOF IN PREPARATION OF DRUG FOR TARGETED DIAGNOSIS AND TREATMENT OF TUMOR <130> I19O10C0055P/CN <140> 10-2019-7019624 <141> 2019-07-05 <150> CN 201611115191.1 <151> 2016-12-07 <160> 5 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: DVAP <400> 1 Pro Ala Val Arg Thr Asn Ser 1 5 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: SVAP <400> 2 Ser Asn Thr Arg Val Ala Pro 1 5 <210> 3 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: LVAP <400> 3 Ser Asn Thr Arg Val Ala Pro 1 5 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: DVAP-Cys <400> 4 Cys Pro Ala Val Arg Thr Asn Ser 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic: LVAP-Cys / SVAP-Cys <400> 5 Ser Asn Thr Arg Val Ala Pro Cys 1 5

Claims (16)

  1. GRP78에 높은 친화도를 갖는 D-형 펩타이드로, D-형 펩타이드는 DVAP 또는 SVAP이고, DVAP의 아미노산 서열은 DPDADVDRDTDNDS(SEQ ID NO: 1)이며, SVAP의 아미노산 서열은 DSDNDTDRDVDADP(SEQ ID NO: 2)인 것을 특징으로 하는 D-형 펩타이드.
  2. DVAP 또는 SVAP의 펩타이드 복합체로, DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체는 제1항의 DVAP 또는 SVAP에 의해 변형된 말레이미드기-함유 영상화 물질이고, DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-X 또는 SVAP-X이며, X는 영상 물질인 것을 특징으로 하는 DVAP 또는 SVAP의 펩타이드 복합체.
  3. 제2항에 있어서,
    X는 형광 물질, 근적외선 염료, 자기공명영상화제 및 방사선제로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 펩타이드 복합체.
  4. 제3항에 있어서,
    형광 물질은 플루오레세인이고, 근적외선 염료는 Cy7, IR820 및 DiR로부터 선택되며, 자기공명영상화제는 Gd-DTPA이며, 방사선제는 99mTc-DTPA인 것을 특징으로 하는 펩타이드 복합체.
  5. DVAP 또는 SVAP의 펩타이드 복합체로, DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체는 제1항의 DVAP 또는 SVAP 펩타이드에 의해 변형된 항종양 약물이고, DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-Y 또는 SVAP-Y이며, Y는 항종양 약물인 것을 특징으로 하는 DVAP 또는 SVAP의 펩타이드 복합체.
  6. 제5항에 있어서,
    항종양 약물은 안트라사이클린, 탁산, 캄토테신, 빈블라스틴, 프로테아좀 저해제, 락톤 및 펩타이드 약물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 펩타이드 복합체.
  7. 제6항에 있어서,
    항종양 약물은 케톤 또는 알데히드기를 함유한 독소루비신 또는 에피루비신;
    히드록시기 또는 아미노기를 함유한 파클리탁셀, 도세탁셀, 캄토테신, 히드록시캄토테신, 9-니트로 캄토테신, 빈크리스틴, 에토포사이드, 겜시타빈, 시타라빈, 5-플루오로우라실, 테니포사이드, 모리티닙, 에포틸론, 비노렐빈, 악티노마이신 D, 미토산트론 안트라퀴논, 미토마이신, 블레오마이신 또는 이리노테칸;
    붕산을 함유한 보르테조밉 또는 카르필조밉; 및
    p53 활성화 펩타이드, 멜리틴 및 전갈 독 펩타이드로 구성된 군에서 선택된 펩타이드 약물;
    로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 펩타이드 복합체.
  8. DVAP 또는 SVAP의 펩타이드 복합체로, DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체는 제1항의 DVAP 또는 SVAP에 의해 변형된 고분자 담체 물질이고, DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체의 구조는 DVAP-폴리에틸렌 글리콜-Z 또는 SVAP-폴리에틸렌 글리콜-Z이며, Z는 고분자 담체 물질인 것을 특징으로 하는 DVAP 또는 SVAP의 펩타이드 복합체.
  9. 제8항에 있어서,
    고분자 담체 물질은 인지질, 폴리락트산, 폴리락틱-코-글리콜산 및 폴리카프로락톤으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 펩타이드 복합체.
  10. 제8항의 복합체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약물 전달 시스템.
  11. 제10항에 있어서,
    약물 전달 시스템은 리포좀 전달 시스템, 고분자 마이셀 전달 시스템, 고분자 디스크 전달 시스템 또는 나노입자 전달 시스템인 것을 특징으로 하는 약물 전달 시스템.
  12. 제10항에 있어서,
    DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체 외에, 약물 전달 시스템은 (1) 진단 약물 또는 (2) 항종양 약물을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 약물 전달 시스템.
  13. 제12항에 있어서,
    (1) 진단 약물은 형광 물질, 근적외선 염료 및 자기공명영상화제로 구성된 군에서 선택된 하나 이상이고, 및
    (2) 항종양 약물은 안트라사이클린, 탁산, 캄토테신, 빈블라스틴, 프로테아좀 저해제, 락톤, 및 펩타이드 약물로 구성된 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약물 전달 시스템.
  14. 제13항에 있어서,
    형광 물질은 플루오레세인이고, 근적외선 염료는 Cy7, IR820 및 DiR로부터 선택되며, 자기공명영상화제는 Gd-DTPA인 것을 특징으로 하는 약물 전달 시스템.
  15. 제1항의 DVAP 또는 SVAP 펩타이드, 또는 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항의 DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체를 포함하는 종양의 진단, 추적 또는 치료용 의약품으로, 종양은 글루코오스 조절 단백질 GRP78 고 발현 종양인, 의약품.
  16. 제1항에 따른 D-형 펩타이드;
    제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 DVAP 또는 SVAP 펩타이드 복합체; 및
    제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 약물 전달 시스템;
    으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상을 인체가 아닌 대상체에게 투여하는 것을 특징으로 하는 종양 진단 또는 표적 치료 방법으로서,
    종양은 글루코오스 조절 단백질 GRP78 고 발현 종양인 것을 특징으로 하는 종양 진단 또는 표적 치료 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111375072A (zh) * 2018-12-29 2020-07-07 复旦大学 可靶向葡萄糖调节蛋白grp78高表达肿瘤的放射性核素药物及其应用
CN113171468A (zh) * 2020-01-23 2021-07-27 复旦大学 一种全过程靶向分子及其在构建递药系统中的应用
WO2021163097A1 (en) * 2020-02-14 2021-08-19 Chang Gung Memorial Hospital Tandem repeat cancer-targeting peptides for molecular conjugation or engineering and uses thereof in cancer theranostics
CN114028537B (zh) * 2021-11-27 2024-03-29 上海万锦医药科技有限公司 一种含有svhrsp蝎毒肽的药物组合物及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080003200A1 (en) * 2003-12-31 2008-01-03 Wadih Arap GRP78 targeting peptides and methods employing same

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5493714B2 (ja) * 2009-10-30 2014-05-14 国立大学法人信州大学 クラスリン結合性ペプチド誘導体
US8530429B2 (en) * 2009-11-24 2013-09-10 Arch Cancer Therapeutics, Inc. Brain tumor targeting peptides and methods
CN102151336B (zh) * 2010-02-12 2013-05-29 复旦大学 一种乙酰胆碱受体介导跨越血脑屏障的主动靶向递药系统
CN101787119A (zh) * 2010-03-25 2010-07-28 复旦大学 一种具有肿瘤组织pH响应性的聚合物及其胶束
CN102212116B (zh) * 2010-04-02 2013-07-10 复旦大学 一种乙酰胆碱受体介导脑靶向多肽及其应用
US20130224237A1 (en) * 2010-07-20 2013-08-29 University Of Miami Inhibition of nonsense mediated decay pathways
CN103012562B (zh) * 2011-09-24 2015-01-28 复旦大学 一种双重靶向的d构型多肽及其递药系统
CN104558117B (zh) * 2013-10-25 2018-01-16 复旦大学 一种乙酰胆碱受体介导靶向的d构型多肽及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080003200A1 (en) * 2003-12-31 2008-01-03 Wadih Arap GRP78 targeting peptides and methods employing same

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Fortunato Ferrara et al., "Targeted molecular-genetic imaging and ligand-directed therapy in aggressive variant prostate cancer", PNAS, Vol. 113, No. 45, pp. 12786-12791, 2016.11.08.*
Min Liu et al., "D-Peptides as Recognition Molecules and Therapeutic Agents", THE CHEMICAL RECORD, Vol. 16, No. 4, pp. 1772-1786, 2016.08.*
Yasufumi Katanasaka et al., "Cancer antineovascular therapy with liposome drug delivery systems targeted to BiP/GRP78", International Journal of Cancer, Vol. 127, pp. 2685-2698, 2010.02.22.*

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