CN104548083A - 一种疫苗组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种疫苗组合物，该疫苗组合物包括免疫量的圆环病毒2型抗原以及左旋咪唑或其衍生物。该疫苗组合物可以大幅度提高疫苗的免疫效力，同时可以用作冻干的活病毒抗原的稀释剂，且该疫苗组合物具有稳定性，长时间保藏后其免疫效力测定均与0天刚配制时无差异。

Description

一种疫苗组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种疫苗组合物，具体地说，涉及一种圆环病毒疫苗组合物。

背景技术

猪圆环病毒（PCV）是迄今发现的一种最小的动物病毒。现已知PCV有两个血清型，即PCV1和PCV2。PCV1为非致病性的病毒。PCV2为致病性的病毒，它是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原。PMWS的临床特征有消瘦、皮肤苍白、呼吸困难、腹泻、黄疽等。病理变化可见全身淋巴结肿大，特别是腹股沟淋巴结肿大可达5～10倍；肺主要呈弥散性、间质性肺炎变化，质地硬如橡皮，表面一般呈灰褐色的斑驳状外观；肾的变化较多，可见皮质和髓质散在大小不一的白色坏死灶，由于水肿而导致其呈现蜡样外观；脾轻度肿大；大多病猪的肝有不同程度的萎缩、纤维化。

除PMWS外，猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、增生性坏死性肺炎（PNP）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV2感染有重要关联。PCV2相关的猪病，死亡率达10%～30%不等，较严重的猪场在暴发时死淘率高达40%，给养猪业造成严重的经济损失。现有技术通过全病毒灭活疫苗和PCV2的CAP蛋白制备的亚单位疫苗用于预防PMWS，然而全病毒灭活疫苗，由于PCV的细胞产量不高造成成本较高，而亚单位疫苗具有不在动物体内增殖，无外源性核酸，因此不具传染性等优点，但同时也存在纯化成本高的问题。现有技术需要一种成本低廉且高效的针对圆环病毒的疫苗。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供一种圆环病毒疫苗，包含：圆环病毒2型抗原、左旋咪唑或其衍生物、聚合物和药学上可以接受的载体。

本发明的主要目的在于提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括免疫量的圆环病毒2型抗原以及左旋咪唑或其衍生物。

术语“猪圆环病毒2型抗原”是指含有至少一种PCV2抗原形式的任何组合物，所述抗原接种猪可诱导、刺激或增强抵抗PCV2感染的免疫应答。所述PCV2抗原可以是PCV2全病毒、如灭活的PCV2全病毒、含有PCV2免疫原性氨基酸序列（如ORF2蛋白）的嵌合病毒，任何其它至少含PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位或其他成分。PCV2抗原还可以包含以下组合物的任一种抗原：如梅里亚公司（Merial）的辉瑞公司（Pfizer）的PCV2；哈尔滨维科生物技术开发公司的猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）；福州大北农生物技术有限公司的猪圆环病毒2型灭活疫苗（DBN-SX07株）和基因工程亚单位疫苗（如勃林格殷格翰公司（Boehringer-Ingelheim）的Ingelvac等等）因PCV2基因组大小为1767bp或1768bp，不同毒株之间核苷酸序列同源性较高，均在90%以上，因此PCV2SH株（GenBank登录号为AY686763）、PCV2LG株（GenBank登录号为HM038034）、PCV2DBN-SX07-2（GenBank登录号为HM641752）均在本发明之内。

优选地，所述圆环病毒2型抗原为PCV2ORF2蛋白，所述PCV2ORF2蛋白为2～300微克/mL，更优选2～60微克/mL，最优选60微克/mL。

优选地，所述圆环病毒2型抗原为灭活的猪圆环病毒2型全病毒抗原，所述猪圆环病毒2型全病毒抗原为灭活前≥10^6.0TCID₅₀。

本发明所述圆环病毒2型抗原，优选亚单位抗原或灭活后的全病毒抗原。作为本发明的一种实施方式，全病毒抗原为SH株全病毒抗原，可按照专利申请CN101240264A公开的方法、菌株制备，作为本发明的另外一种实施方式，抗原为PCV2ORF2蛋白，可按照专利申请CN103173470A公开的方法、基因来源制备。

所述SH菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2008年3月4日，保藏号为CGMCC No.2389。

圆环病毒的抗原含量，至少包含2微克PCV2ORF2蛋白/剂量，优选2～300微克PCV2ORF2蛋白/剂量，更优选20-150微克PCV2ORF2蛋白/剂量，更优选50-100微克PCV2ORF2蛋白/剂量，更优选60微克PCV2ORF2蛋白/剂量。

全病毒的灭活疫苗灭活前病毒含量述猪圆环病毒抗原为1×10^5.0TCID₅₀/剂量以上，优选10^6.0TCID₅₀/剂量以上。

优选地，左旋咪唑衍生物为左旋咪唑盐酸盐或磷酸盐，所述左旋咪唑或其衍生物的含量为0.1～10毫克/mL，更优选1.5～3毫克/mL。

术语左旋咪唑为分子式C₁₁H₁₂N₂S化合物，左旋咪唑的衍生物是指左旋咪唑衍生物是其盐酸盐或磷酸盐，使用时按其分子量折算为左旋咪唑的量。

左旋咪唑或衍生物优选0.1毫克～10毫克/剂量，更优选0.5毫克g～5毫克/剂量，更优选1.0毫克～3毫克/剂量，更优选1.5毫克～2毫克/剂量最优选1.5毫克/剂量。

优选地，所述疫苗组合物进一步包括聚合物，所述聚合物包括DEAE葡聚糖、聚乙二醇、聚丙烯酸，以及聚甲基丙烯酸，优选聚丙烯酸，更优选卡波姆，所述聚合物含量为0.1～500毫克/mL，更优选2毫克//mL。

疫苗组合物还可包括一或多种聚合物，诸如，例如：DEAE葡聚糖、聚乙二醇和聚丙烯酸，以及聚甲基丙烯酸。这类物质可自市场购得。适合用于佐剂组合物中的聚合物的量取决于所使用的聚合物的性质。优选地，本发明所述聚合物为聚丙烯酸；更优选地，所述聚合物为商品名为卡波姆（Carbomer）的聚丙烯酸；

本发明所述聚合物的量为0.1毫克～500毫克/剂量，优选1毫克～20毫克剂量,更优选5毫克～10毫克/剂量，更优选1毫克～3毫克剂量，最优选2mg/剂量。

优选地，所述疫苗组合物进一步包括DDA，DDA含量为1～5000微克/mL，更优选50～150微克/mL。

作为本发明的另一种实施方式，组合物中还含有DDA，所述DDA为双十八烷基二甲基溴化铵的简称。通常为每剂量约1微克至约5000微克。其使用量亦可为每剂量约1微克至约4000微克、每剂量约1微克至约3000微克、每剂量约1微克至约2000微克及每剂量约1微克至约1000微克。其使用量亦可为每剂量约5微克至约750微克、每剂量约5微克至约500微克、每剂量约5微克至约200微克、每剂量约5微克至约100微克、每剂量约15微克至约100微克及每剂量约30微克至约75微克。

优选地，所述疫苗组合物进一步包括药学上可以接受的载体，所述药学上可以接受的载体包括任何可用的溶剂、分散介质、稳定剂、等渗剂、稀释剂、或防腐剂。

术语“药学上可以接受的载体包括任何所用溶剂、等渗剂、分散介质、稳定剂、稀释剂、防腐剂。如稀释剂包括但不限于水、磷酸盐缓冲溶液，盐水、乙醇、甘油，等渗剂包括但不限于氯化钠、右旋糖苷、葡萄糖；稳定剂包括蛋白或乙二胺四乙酸二钠，由于蛋白可以和蛋白酶结合，因此具有稳定作用。

组合物中还可以含有抗生素或防腐剂，包括，例如：庆大霉素、硫柳汞、或氯甲酚；本领域技术人员公知可以选用不同类别的抗生素或防腐剂。

优选地，所述疫苗组合物包括PCV2ORF2蛋白抗原20微克/mL，盐酸左旋咪唑1.8mg/mL，卡波姆10毫克/mL，以及DDA100微克/mL；或所述疫苗组合物包括PCV2ORF2蛋白20ug/mL，盐酸左旋咪唑1.8mg/mL，卡波姆2mg/mL，以及DDA50微克/mL；或所述疫苗组合物包括PCV2ORF2蛋白60μg/mL，盐酸左旋咪唑1.8mg/mL，卡波姆2mg/mL，以及DDA100微克/mL。

作为本发明的一个优选实施方式、圆环病毒亚单位抗原20微克/剂量，盐酸左旋咪唑1.8mg/剂量（相当于左旋咪唑1.5毫克/剂量），卡波姆10毫克/剂量、DDA100微克/剂量。

圆环病毒亚单位抗原20ug/剂量，盐酸左旋咪唑1.8mg/剂量，卡波姆2mg/剂量，DDA50微克/剂量。

本发明的PH优选6.9-7.5。

本发明的另一目的在于提供一种制备所述疫苗组合物的方法，所述方法包括：

（1）将免疫量的所述圆环病毒2型抗原加入到载体中；

（2）将左旋咪唑或其衍生物添加到所述圆环病毒2型抗原中。

本发明疫苗组合物的制备方法，包括如下步骤：

A)在缓冲液中制备抗原成分的组合物；

B)将所述的左旋咪唑或其衍生物加入步骤A中；

C)将所述DDA加入步骤B的组合物中；

D)将聚合物加入步骤C的组合物中。

本发明的再一目的在于提供所述疫苗组合物在制备治疗和预防猪圆环病毒相关疾病的药物中的应用。

由上可以看出，本发明的用于治疗或预防猪感染性疾病的疫苗佐剂组合物至少有以下优点：

1.可以提高疫苗免疫保护力，没有副作用：通过本发明后续实施例可以看出，本发明的疫苗佐剂可以大幅度提高疫苗的免疫效力，显著优于不加佐剂组和只加卡波姆组。

2.本发明的疫苗可以用作冻干的活病毒抗原的稀释剂。

3.经长期实验证明，本发明的疫苗组合物具有稳定性。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

本实施例中所用的剂量也成“免疫量”又称“头份”，是指提供针对PCV-2免疫剂量，主要取决于以下因素：被免疫动物的物种、品种、年龄、重量大小、健康状态以及动物之前是否接受过对抗同样病毒的疫苗。

“TCID50”是指“组织培养感染剂量”，且定义为感染50％指定批次的经接种的细胞培养物时所需要的病毒稀释量。可使用多种方法来计算TCID50，包括本说明书全文中所使用的斯皮尔曼-卡伯法(Spearman-Karbermethod)。斯皮尔曼-卡伯法的描B.W.Mahy&H.O.Kangro，VirologyMethods Manual，p.25-46(1996）。

本发明中所述的“PBS”是指磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer Saline）的英文缩写，本发明中使用的是0.01mM的pH7.4的PBS，按《分子克隆》第三版所述配制。

实施例1盐酸左旋咪唑溶液

将盐酸左旋咪唑，溶解在去离子水中，制备成100毫克/毫升的储备溶液，用0.2微米过滤器过滤。

实施例2.DDA溶液

将二甲基双十八烷基溴化铵(DDA；Fluka Analytical)溶解在乙醇中，制备15毫克/毫升的储备溶液，用0.2微米滤器过滤DDA储备溶液。

实施例3.卡波姆溶液

将卡波姆溶解在去离子水中，制备500毫克/毫升的储备溶液。

实施例4.DDA/卡波姆溶液

依实施例2制备DDA储备溶液。依实施例3制备500毫克/毫升的卡波姆储备溶液，将溶液混合以取得所需的最终浓度。

实施例5.左旋咪唑/卡波姆溶液

将实施例1制备的左旋咪唑溶液中加入实施例3制备的卡波姆溶液以取得所需的最终浓度，以NaOH或HCl调整该溶液的pH值以取得所需的最终pH(通常在6.9至7.5的范围内)。

实施例6左旋咪唑/DDA/卡波姆溶液

将实施例l制备的盐酸左旋咪唑溶液中缓慢加入实施例2制备的DDA溶液，然后加入实施例3制备的卡波姆溶液加入以取得所需的最终浓度。以NaOH或HCl调整该溶液的pH值以取得所需的最终pH(通常在6.9至7.5的范围内)。

实施例7：本试验用于验证左旋咪唑佐剂对PCV2ORF2蛋白产生中和抗体促进作用

1.疫苗的配制按照表1的量，在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中加入PCV2ORF2蛋白，然后加入左旋咪唑卡波姆的混合溶液，用pH=7.4的磷酸盐缓冲定容至体积。

表1：组合物的配制表

2.猪体中和抗体试验

将35头30日龄左右的PCV2阴性健康仔猪，随机分为7组，每组5头。将上述6种疫苗分别注射第1～6组仔猪，1mL/头；第7组注射等量的生理盐水作为空白对照组。免疫后4周测定其中和抗体效价。

中和抗体的检测法如下：不同稀释度灭活血清与病毒混合，37℃水浴作用1h，取出后加入已长满细胞单层的PK-15细胞，每孔100μL，每个血清稀释度接种4孔，同时设定只接种病毒PCV2的阳性对照孔、正常细胞阴性对照孔和阴性血清对照孔。病毒终浓度为1000TCID₅₀/mL。24h后用300mmol/L的D-氨基葡萄糖处理，然后再培养48h，进行间接免疫荧光试验。以减少70%或更多荧光的血清最高稀释度的倒数为中和抗体效价。

2.仔猪后中和抗体水平

1-4组中和抗体效价在1:220～1:240之间。组与组之间差异不显著，5组、6组为1:120～1:130两组之间差异不显著，1-4组跟5-6组差异显著。

表2各试验组的中和抗体

组别	1	2	3	4	5	6
							中和抗体	1：240	1:220	1:240	1:230	1:130	1:120

试验的结果显示，左旋咪唑的浓度在一定范围内产生免疫其增强作用，且没有明显的量效关系，超出一定剂量反而不发生免疫增强作用。

实施例8：组合物的免疫攻毒试验

1.疫苗的配制

按照表3的量，在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中加入PCV2ORF2蛋白，然后加入左旋咪唑、DDA卡波姆的混合溶液，用pH=7.4的磷酸盐缓冲液定容至体积。

表3：组合物的配制表

猪体攻毒保护试验

将30头30日龄左右的PCV2阴性健康仔猪，随机分为6组，每组5头。将上述5种疫苗分别注射第1～5组仔猪，1mL／头；第6组注射等量的生理盐水作为空白对照组。免疫后4周测定其中和抗体效价PCV攻毒：m后35d，各试验组和对照组仔猪各用PCV2SH株（含106.0TCID₅₀/ml）滴鼻1ml/头、肌肉注射2ml/头，攻毒后第4、7日，分别在每头攻毒猪的两侧腋下及两侧臀部共4个点对所有猪接种用弗氏不完全佐剂乳化的钥匙孔血蓝蛋白（KLH/ICFA，0.5mg/ml），每个点接种1ml（4ml/头），同时腹腔接种巯基乙酸培养基，10ml/头；攻毒后第11、19日再次腹腔接种巯基乙酸培养基，10ml/头。攻毒后连续观察25日，于攻毒后第25日称重后扑杀，剖检。根据体温、相对日增重和病毒抗原检测结果进行判定，体温变化情况见表3，疫苗A、疫苗B和疫苗C免疫组仔猪没有出现体温升高现象，而疫苗D和疫苗E仅有个别猪只出现一过性体温升高现象，体温升高一天后很快恢复正常，无其它临床症状；对照组猪只攻毒后所有猪只体温升高40.5℃以上，持续3～5天，食欲减退、精神沉郁、被毛粗乱、消瘦和生长速度减缓。

攻毒后发病及保护情况见表4、5。疫苗A、B、C免疫仔猪攻毒后未出现明显临床症状，未观察到特异性病理变化，抗原PCR检测均为阴性，保护效果达5/5；疫苗D、疫苗E免疫仔猪攻毒后，均有1头猪发病，保护效果达4/5。而对照组仔猪全部发病，临床症状，病理变化明显，病原PCR检测均为阳性。但至攻毒观察结束，疫苗A、疫苗B和疫苗C疫苗D免疫仔猪平均日增重无显著差异，与对照组相比，各疫苗组仔猪平均日增重均极显著高于对照组。

表4PCV2攻毒后各组试验猪体温超40.5℃的天数比较

表5PCV攻毒后各组试验动物发病判定结果

PCV攻毒后符合以下3项中的任何2项，即可判为发病。

A.临床症状：仔猪体温升高（≥40℃），应至少持续3日，出现明显食欲减退、精神沉郁、被毛粗乱、消瘦和生长速度减缓；

B.病理变化：腹股沟和气管淋巴结水肿、肺脏轻度水肿，肾脏发黄或有点状坏死。组织学病变为淋巴结有明显淋巴细胞侵入，或有多核巨细胞；

C.病毒检测：用PCR检测淋巴结组织，检测到PCV2。

表6免疫仔猪PCV攻毒后保护情况

仔猪后中和抗体水平

各试验组的中和抗体水平见表7，由表7结果可知A-C组中和抗体效价在1:280～1:300之间。组与组之间差异不显著，E组为1:130，与A-C组差异显著，D组低于A-C组中和抗体水平，但显著高于E组。

表7各试验组的中和抗体

组别	A	B	C	D	E
						中和抗体	1：300	1:280	1:280	1:220	1:130

实施例9疫苗相容性检验

全病毒灭活疫苗的制备：按照表8的量在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中加入PCV2全病毒抗原，然后加入左旋咪唑、DDA、卡波姆的混合溶液，用pH=7.4的磷酸盐缓冲定容至体积。

表8、PCV2全病毒灭活疫苗的配制

取猪繁殖与呼吸综合征活疫苗（JXA1-R株）（普莱柯生物工程股份有限公司，批号1202031），用实施例8制备的疫苗A～D以及全病毒灭活疫苗和参考稀释液（无菌注射用水），按照使用说明，灭活疫苗部分1头份/瓶（2ml）复原。20±3℃放置2h，依照猪繁殖与呼吸综合征活疫苗滴定方法检验。通过与参考稀释液的比较，评估待检稀释液对病毒活性组分的影响，病毒组分的滴定结果如表9，差值均不超过0.7log10（欧洲兽用疫苗标准）。本发明的疫苗可以用作冻干的活病毒抗原的稀释剂。

表9疫苗相容性检验结果

实施例10PCV2亚单位疫苗防治PCV2感染的功效

1.疫苗的配制

按照表10的量，在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中加入PCV2ORF2蛋白，然后加入左旋咪唑、DDA卡波姆的混合溶液，用pH=7.4的磷酸盐缓冲定容至体积。

表10组合物的配制表

本实施例测试了5种PCV2候选疫苗的效果，进一步确定了接触PCV2强毒株后的效率参数。将35只初生不吃初乳的9-14日龄小猪随机分成相同大小的7组，每组5头。第1组颈部肌肉注射PCV2亚单位疫苗V1（60μg/ml）1ml，第2组颈部肌肉注射PCV2亚单位疫苗V2（30μg/ml）1ml，第3组颈部肌肉注射PCV2亚单位疫苗V3（10μg/ml）1ml，第4组颈部肌肉注射PCV2亚单位疫苗V4（5μg/ml）1ml，第5组颈部肌肉注射PCV2亚单位疫苗V5（2μg/ml）1ml，第6组不免疫，作为攻毒对照组，第7组不免疫不攻毒，作为空白对照组。免疫前及免疫后7d、14d、21d、28d各采血，分离血清。免疫后25日，对所有猪只分别两侧腋下及两侧臀部共4个点接种用弗氏不完全佐剂乳化的钥匙孔血蓝蛋白（KLH/ICFA，0.5mg/ml），每个点接种1ml（4ml/头）。免疫后28日称重、攻毒，第1、2、3、4、5、6、7、8组各用PCV2HL株（含10^6.0TCID₅₀/ml）滴鼻2.5ml、肌肉注射2.5ml。攻毒后第4、7日，对所有猪再次分别两侧腋下及两侧臀部共4个点接种用弗氏不完全佐剂乳化的钥匙孔血蓝蛋白（KLH/ICFA，0.5mg/ml），每个点接种1ml（4ml/头）。攻毒后7、14、21、28日对所有猪只采血。攻毒后连续观察28日，每日测量体温及记录临床症状，于第28日称重，剖杀（第1组和第8组留下不杀继续饲养），观察病理变化并取新鲜组织（扁桃体、肺脏、肠系膜淋巴结、气管支气管淋巴结及腹股沟淋巴结）一份置-20保存，一份用10%福尔马林固定。对新鲜组织和福尔马林固定组织分别进行PCV2PCR检测（普通PCR及荧光定量PCR检测）和IHC检测，对采集的血清进行PCV2PCR检测（普通PCR及荧光定量PCR检测）和PCV2抗体检测（ELISA和IFA）。根据增重情况和PCV2抗原检测结果来评估保护效果。表11列出了本实施例的总体研究设计。

表11仔猪分组及处理

结果

平均每日体重增量（ADWG）结果见表12，第7组作为不免疫不攻毒阴性对照组其ADWG最高（1.07+0.20kg/日），其次是免疫疫苗V1的第1组（0.98+0.22kg/日），最低的是不免疫的第6组（0.48+0.30kg/日），其余不同抗原含量疫苗免疫组ADWG差别不大。

表12组间平均每日体重增量（ADWG）结果比较

PCV2血清学检测结果见表13、14。在免疫0日所有血清都是PCV2抗原和抗体均为阴性，免疫后第14日，免疫疫苗V2的组别效价最高，其范围是256～640，效价最低的是非免疫第6组和第7组，其余免疫不同抗原含量的组别PCV2抗体效价差别不大。免疫后第28日，免疫疫苗V2的组别效价最高，其范围是6400～25600，效价最低的是非免疫第6组和第7组，其余免疫不同抗原含量的组别PCV2抗体效价差别不大。攻毒后第14日，第7组PCV2抗原检测为阴性，第6组PCV2抗原检出量最高，为2.15×10⁶copy/ml，其余组别差异不大。攻毒后第28日，第7组PCV2抗原检测为阴性，第6组PCV2抗原检出量最高，为5.49×10⁹copy/ml，其余组别差异不大。

表13.组间PCV2抗原检测结果比较（荧光PCR）

表14组间PCV2抗体检测结果（平均值）比较（ELISA）

攻毒前所有猪只没有出现任何明显的临床症状，攻毒后第6组猪只出现连续体温超过40℃现象，并出现1头死亡，死亡前呼吸急促、连续高烧，其余组别仔猪一切正常。剖杀后通过免疫组化检测PCV2抗原，第6组仔猪脏器检出率为100%，第7组检出率为0%，其余组别检出率在0%～20%。详细结果见表15。

表15.组间PCV2临床症状及剖检症状比较

实施例11

本实施例研究本发明疫苗组合物的稳定性。

实施例10制备的5组疫苗V1～V5置于2～8℃保存1个月、6个月、12个月、18个月、24个月和27个月，取出后分别进行物理性状监察，均无沉淀出现，对仔猪的免疫效力测定均与0天刚配制时无差异。

由于DDA不溶于水，而左旋咪唑在中性和碱性条件下不稳定，容易分解和沉淀，但令人意外的是本发明的组合物具有稳定性，保存1个月、6个月、12个月、18个月、24个月和27个月，取出后分别进行物理性状监察，均无沉淀出现，但只加DDA，和左旋咪唑组配制过程基本不能溶解。

经长期实验证明，本发明实施例10制备的V1～V5的5组疫苗组合物具有稳定性。

以上所述仅是本发明的优选实施例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，虽然本发明已以优选实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案的范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括免疫量的圆环病毒2型抗原以及左旋咪唑或其衍生物。

2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述圆环病毒2型抗原为PCV2ORF2蛋白，所述PCV2ORF2蛋白为2～300微克/mL，更优选2～60微克/mL，最优选60微克/mL。

3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述圆环病毒2型抗原为灭活的猪圆环病毒2型全病毒抗原，所述猪圆环病毒2型全病毒抗原为灭活前≥10^6.0TCID₅₀。

4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，左旋咪唑衍生物为左旋咪唑盐酸盐或磷酸盐，所述左旋咪唑或其衍生物的含量为0.1～10毫克/mL，更优选1.5～3毫克/mL。

5.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物进一步包括聚合物，所述聚合物包括DEAE葡聚糖、聚乙二醇、聚丙烯酸，以及聚甲基丙烯酸，优选聚丙烯酸，更优选卡波姆，所述聚合物含量为0.1～500毫克/mL，更优选2毫克//mL。

6.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物进一步包括DDA，DDA含量为1～5000微克/mL，更优选50～150微克/mL。

7.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物进一步包括药学上可以接受的载体，所述药学上可以接受的载体包括任何可用的溶剂、分散介质、稳定剂、等渗剂、稀释剂、或防腐剂。

8.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括PCV2ORF2蛋白抗原20微克/mL，盐酸左旋咪唑1.8mg/mL，卡波姆10毫克/mL，以及DDA100微克/mL；或

所述疫苗组合物包括PCV2ORF2蛋白20μg/mL，盐酸左旋咪唑1.8mg/mL，卡波姆2mg/mL，以及DDA50微克/mL；或

所述疫苗组合物包括PCV2ORF2蛋白60μg/mL，盐酸左旋咪唑1.8mg/mL，卡波姆2mg/mL，以及DDA100微克/Ml。

9.一种制备权利要求1所述疫苗组合物的方法，所述方法包括：

（1）将免疫量的所述圆环病毒2型抗原加入到载体中；

（2）将左旋咪唑或其衍生物添加到所述圆环病毒2型抗原中。

10.权利要求1～8任一项所述疫苗组合物在制备治疗和预防猪圆环病毒相关疾病的药物中的应用。