CN104547326B - 温补肾阳抗抑郁的中药组合物及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种温补肾阳抗抑郁的中药组合物及其制备方法与用途。该中药组合物主要包括：仙茅若干重量份、淫羊霍若干重量份配伍组成，仙茅‑淫羊霍的重量比为1׃1.5‑1׃3.0。还包括药学上可接受的辅料。所述的敷料或赋形剂包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂。可制成临床可接受的剂型。所述的剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂、注射剂、气雾剂、栓剂。一种所述的温补肾阳抗抑郁的中药组合物的制备方法，包括采用水提或醇提，优选水提。一种所述的温补肾阳抗抑郁的中药组合物的用途，用于预防或治疗抑郁，适用于阳气郁痹、阳郁神颓、情绪低落、思维缓慢、懒言少动、精神萎靡之抑郁症患者。

Description

温补肾阳抗抑郁的中药组合物及其制备方法与用途

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，特别是涉及一种温补肾阳抗抑郁的中药组合物及其制备方法与用途。

技术背景

抑郁症是严重危害人类身心健康的常见病、多发病，是新世纪危害人类健康的重大疾病之一。目前西药抗抑郁药的作用机制，大多与单胺类递质重吸收或代谢抑制有关，存在明显的毒副作用；事实上，抑郁症临床症候多样，现有西药抗抑郁谱较为狭窄；对于抑郁症的治疗，迄今尚未研制出理想的药物。与西药比较，中草药具有副作用小、适合长期服用等优点，且在治疗抑郁症方面确有一些有效的复方和单味药。因此，从中药中挖掘和研制具有良好抗抑郁作用又能够便于市场推广的创新药物，愈来愈引起医药界的关注。

然而存在的突出问题有二：一是中医对抑郁的理论需要突破与创新。历代中医对对抑郁症认识均强调“肝郁”，认为肝气郁结是抑郁症的共性病机，故中医治疗常佐疏肝解郁，该法固然取得一定疗效，但疗效不稳定，难以根治。二是如何既保留中医中药复方治病的特色与精华，又汲取现代医药寻找有效成分物质基础的思想与理念，对组方进行必要的简化与精炼。即既遵循中医理法方药的基本规律，发挥中药复方治病的优势，保留传统中医理法方药的特点，又在中药配伍与组合上突破窠臼，探讨重新排列组合并优化其固有组方，探索新的中药配方组合，使新组合的疗效与安全性获得显著的进步与提升，与治疗目标—疾病谱更加吻合，这是中医药理论与实践创新的迫切需要，也是中医药现代化的必然要求，也是中药创新发展的一条有效途径。

关于抑郁症，历代中医对该病的认识均强调“肝郁”，认为肝郁是其最基本的病机。中医根据抑郁症肝气郁结的病机共性，治疗常佐疏肝解郁，由此调方遣药在临床实践中能够取得一定疗效，但疗效常常不稳定。当然，中医对抑郁症的认识也在不断深化。

仙茅与淫羊霍，均是传统中医公认的补肾壮阳中药。2010版《中华人民共和国药典》关于仙茅记载：【性味与归经】辛，热，有毒（本品燥烈有毒，不宜久服）；【功能与主治】补肾阳，强筋骨，祛寒湿。用于阳痿精冷，筋骨痿软，腰膝冷痛，阳虚冷泻。可见仙茅具辛通之功，重在辛通肾阳，特别适用于肾阳郁闭之抑郁症。同版药典对淫羊霍记载：【性味与归经】辛，甘，温。归肝、肾经。【功能与主治】补肾阳、强筋骨、祛风湿，用于肾阳虚衰，阳痿遗精，筋骨痿软，风湿痹痛，麻木拘挛。激发脏腑功能以复其常。

仙茅与淫羊霍作为对药（又称药对）在组方中联合使用已有相当长的历史。如“二仙汤”，即是上海中医药大学张伯纳教授20世纪50年代针对围绝经期综合征（更年期综合征）研制出的方剂，它由仙茅、淫羊藿、巴戟天、当归、黄柏、知母组成，有温肾阳、补肾精、交心肾、调冲任等功能。现代临床上有人应用二仙舒郁汤能有效改善更年期抑郁症患者的症状。有报道马学玉等将“二仙汤”用于治疗抑郁症（见陕西中医，2002，23（5）：438-439；刘艳,黄峰.二仙汤治疗抑郁症浅谈[J].中医中药,2011,9(25):130-132。）；彭海燕等自拟“二仙舒郁汤”治疗更年期抑郁症（现代中西医结合杂志，2003，12（23）：2536-2537）；等等。但所有这些报道的中药处方中，仙茅与淫羊霍只是其中的二味药，且在复方中仙茅与淫羊藿的比例比重相等。

近年来，有报道仙茅与淫羊霍各自的提取物或有效成分具有抗抑郁作用。如陈泉生等研究表明，仙茅乙醇浸剂能显著推迟昆明种小鼠防己毒素引起的阵挛性惊厥的潜伏时间和减少惊厥次数，延长睡眠时间；陈纪军等研究认为，仙茅中的仙茅苷和苔黑酚葡萄糖苷等酚性成分是其抗抑郁的物质基础（王开金，李宁，陈纪军，周俊.仙茅属植物化学成分与生物活性研究进展[A].《中国中药杂志》第九届编委会暨中药新药研发理论与技术创新论坛Ⅱ[C],2009.）。同时，也有人研究发现淫羊藿提取物具有一定抗抑郁作用（吴芳.赤芍总苷/淫羊藿总黄酮对实验性抑郁及脑5-HT和β-肾上腺素受体的影响[J].现代预防医学,2005,32(7):744-746.石翠格，李慧，王丽丽等。淫羊藿苷抗抑郁及对皮质酮致PC12细胞损伤的保护作用研究[J].中国药物应用与监测,2013,10(5):268-270.钟海波,潘颖,孔令东.淫羊藿提取物抗抑郁作用研究[J].中草药,2005,36(10):1506-1510.）。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种温补肾阳抗抑郁的中药组合物及其制备方法与用途。

本发明的目的在于针对目前抑郁症的治疗困惑与中药基于传统中医治疗抑郁强调“肝郁”着重“疏肝解郁”疗效不稳难以根治，以及二仙汤及单味仙茅或淫羊霍各自在作用疗效与毒副作用方面的缺点与不足，提供一种既符合中医药理论又在组方理论上有所突破、效果上有显著特色和进步（理论上超越传统、组方配伍上打破常规、疗效与安全性上显著进步）的用于治疗抑郁症的中药组合物及其配伍。该中药组合物具有温补肾阳、益肾固精、通交心肾，条达气机之功用，通过充实阳气，使心肾相交，达到疏畅气机，鼓舞脏腑气化，振奋神机，宁神定志，舒怀开郁之目的。适用于阳气郁痹、阳郁神颓、情绪低落、思维缓慢、懒言少动、精神萎靡之抑郁症患者。

我们之所以将仙茅与淫羊霍组合在一起用于治疗抑郁症，一方面是基于上述中医关于“郁证”与“肾阳”关系的理论；更重要的是基于自身的研究工作实践。发明人曾研发一个包含有仙茅与淫羊霍的中药处方，在对其进行安全性试验时，发现该处方具有一定的毒性，经过追踪发现毒性主要来源于仙茅，进一步研究发现仙茅与淫羊霍配伍，能够减毒增效。经过深入研究，发现仙茅与淫羊霍合用，其补肾壮阳与抗抑郁作用明显比各自单用及原二仙汤显著增强，而毒性与副作用则明显减弱；同时还发现仙茅与淫羊霍之间存在适当的配伍比例，当二者配伍比例合适时其药效较强而毒性较小。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种温补肾阳抗抑郁的中药组合物，其特征在于，该中药组合物主要是由下述中药构成：仙茅若干重量份、淫羊霍若干重量份配伍组成，仙茅-淫羊霍的重量比为1׃1.5-1׃3.0。

所述的仙茅-淫羊霍的重量比为1׃2。

由有效量的权利要求1所述中药组合物和药学上可接受的辅料组成。

所述的辅料包括敷料或赋形剂。

所述的敷料或赋形剂包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂。

可制成临床可接受的剂型。

所述的剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂、注射剂、气雾剂、栓剂。

一种所述的温补肾阳抗抑郁的中药组合物的制备方法，包括采用水提或醇提及适用于中药提取的其它方式。

所述的中药组合物在制备预防或治疗抑郁症的药物中的应用。

所述的中药组合物具有温补肾阳抗抑郁作用，用于抑郁症的预防与治疗，适用于阳气郁痹、阳郁神颓、情绪低落、思维缓慢、懒言少动、精神萎靡之抑郁症患者。

本发明的有益效果：

第一，将二仙汤中的仙茅与淫羊霍重新配伍组合，专用于抑郁症的治疗，在配伍法则上继承了传统，在组方思想上发展并实践了中医理论，对中医药现代化具有重要意义。中医学很早就有“郁证”、“百合病”等记载，也传有一些有效的方剂。中医新论认为，抑郁症最终结果为“伤精”，而肾精为一身根本，补阳开郁是治疗抑郁症的关键，阳气实、心肾交则精神旺、气机畅，故温肾阳、补肾精、交心肾、达气机为治疗抑郁症的基本方法，通过充实阳气，心肾相交达到疏畅气机，鼓舞脏腑气化，振奋神机，宁神定志之目的。仙茅与淫羊霍二味药同属温补肾阳药，二者配伍组合能够协同加强补肾壮阳作用。

第二，本发明从药对的配伍剂量上去探寻疗效与副作用平衡之最佳配方，对从传统中医药配方中挖掘开发新产品具有重要的示范与指导意义。迄今所见的处方中，仙茅与淫羊霍均以1׃1配伍使用，按中医用药的传统习惯，通常情况下，很少有人会对其配伍比例进行深入探究。然而事实上，“药对”作为临床上常用的相对固定的两味药物的配伍形式，是方剂配伍中最小的单位，其组成简单却具备中药复方的特点。药对的作用，一方面由组成味药的基本性能决定，另一方面配伍剂量亦有举足轻重的影响，对中药的研究开发，如因循守旧，墨守陈规，忽视剂量关系，不去探索创新，轻则影响治疗效果，重则影响中医药的发展。

本发明的创新与进步具体体现在以下方面：

1、与原“二仙汤”比较，其创新与进步在于：①本发明治疗抑郁症目的明确，针对性强（二仙汤最初专治妇女更年期综合症，也可用于更年期抑郁症，本发明适应症扩大到普通抑郁症）；②组方精炼，药味减少，用药量减少，药理作用增强，治疗效果突出（见附件材料）；③因药味减少疗效增强，有利于开发成适合于患者与市场的产品。

2、与已有的单味仙茅提取物仙茅苷或淫羊霍苷等治疗抑郁症比较，其创新与特色在于：①就仙茅与淫羊霍这一药对而言，虽然有研究表明，单味的仙茅与单味的淫羊霍各自的提取物具有抗抑郁作用，但迄今尚未有将二者进行有效组合用于抗抑郁的报道，更未见有对其组合进行最佳配伍的研究报道。②仙茅是公认的具有毒性的中药（见药典及中药大辞典等），长期服用毒副作用未知。本发明通过仙茅与淫羊霍的有效组合，不仅能够显著增强补益肾阳与抗抑郁的疗效，而且可以明显减低仙茅的毒副作用，即显著提高抗抑郁的疗效与安全性。③中药复方是中医治病的主要形式与鲜明特色，其多中心、多层次、多环节、多靶点发挥作用的特性，即1+1>2的事实已被许多研究所证实。

总之，本发明在中医药理论与现代技术的指导下，通过提炼优化二仙药对之配伍组合，使其固有的毒副作用明显降低，新增的温肾开郁作用明显提升，无论与二仙汤比还是与单味仙茅或单味淫羊霍及传统的仙茅-淫羊霍1׃1配伍方比，在疗效与安全性方面均具有显著的进步。本发明保留并汲取了中药复方之精华，又使组方高度凝练，达到增效减毒配伍效果，利于推广应用与开发，符合中医药现代化发展的要求与方向。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1 仙茅淫羊藿不同配伍方的毒性比较及毒性与含量相关性研究

仙茅乃温肾补阳之专药，淫羊藿亦能益精气补肾阳，二药配伍，相须为用，相得益彰，其补肾壮阳，强筋健骨，祛风除湿功力益强。古今对于仙茅性味记载是味辛或甘，性温或热，有毒。从理论上来说，“二仙”配伍可能会产生增效减毒，但是否确能增效减毒，且其增效减毒的配伍比例、与成分含量的相关性及药理机制等有待阐明。以下研究着重对二仙药对不同配伍方的水提物与醇提物的毒性进行测定比较，并分析其中仙茅苷、淫羊藿苷的含量，探讨毒性与含量之间的相关性及其毒性的可能来源。现将研究结果总结如下：

1、材料

1.1药材 仙茅（生产厂家：亳州市京皖中药饮片厂，批号：130501，产地：四川）；淫羊藿（生产厂家：亳州市京皖中药饮片厂，批号：130301，产地：东北）；上述药材均经浙江省中药研究所药材室鉴定确认。

1.2动物 清洁级ICR小鼠，雌雄各半，18-22g，由浙江省医学科学院动物中心提供，合格证号：SCXK（浙）2008-0033。

1.3仪器 HK不锈钢万能粉碎机（广州旭朗机械设备有限公司），TC-15恒温电热套（浙江新华医疗器械厂），SENCO R-501旋转蒸发器（上海申顺生物科技有限公司），W501升降恒温水浴锅（上海申顺生物科技有限公司），SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），METTLER AB204-S电子天平（浙江中研检测技术服务有限公司），Agilent 1100高效液相色谱仪（浙江中研检测技术服务有限公司），KQ-100DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）

2、方法

2.1 药物的制备

2.1.1 仙茅-淫羊霍水提物的制备

仙茅经粉碎，过十目筛，二仙汤各配伍组分别精密称取总量为80g的药材，10倍水回流2次，每次2小时，合并水提液，过滤，滤液水浴上浓缩至相对密度1.16～1.30的浸膏，临用时用蒸馏水配成0.5g/ml溶液（按总生药量算），4度冰箱保存待用。

2.1.2 仙茅-淫羊霍醇提物的制备

仙茅经粉碎，过十目筛，二仙药对各配伍组分别精密称取总量为200g的药材，10倍90%乙醇回流2次，每次2小时，旋转蒸发器上回收乙醇，合并乙醇提取液，过滤，水浴上浓缩至滤液浓缩至相对密度1.20～1.25的浸膏，临用时用蒸馏水配成0.5g/ml溶液（按总生药量算），4度冰箱保存待用。

2.2 各配伍提取物小鼠最大给药量急性毒性测定

ICR小鼠100只，雌雄各半，随机分为10组，每组10只，各组仙茅﹕淫羊藿配伍情况如表1，即水提物5组，醇提物5组。水提各组药材浸膏配成1.98g（生药）/ml溶液、醇提各组药材浸膏配成5.71g（生药）/ml溶液，二种提取物均为小鼠最大可给药浓度，保证每组溶液均能通过16号小鼠灌胃针。各组小鼠实验前禁食不禁水18小时，给药剂量为0.4ml/10g。给药后立即观察和记录动物的中毒症状（精神状态、运动功能等）及死亡情况，观察期为7d。

2.3 仙茅苷、淫羊藿苷含量检测

按照2010版药典中仙茅苷、淫羊藿苷含量测定方法进行。

2.4 统计学处理

相关分析采用spss软件17.0双变量直线分析。

3、结果

3.1各配伍提取物小鼠最大给药量（急性毒性）测定

结果见表1。结果表明，醇提各组均出现中毒症状，而水提各组小鼠均未出现明显中毒症状和死亡现象。醇提各组出现中毒症状主要表现为：呼吸困难、急促，困倦，俯卧等，推测可能与其影响了小鼠的呼吸系统有关，各醇提物组出现小鼠死亡数不完全一致，各组毒性大小顺序为：醇提仙茅﹕淫羊藿（1﹕0）组＞醇提仙茅﹕淫羊藿（2﹕1）组＞醇提仙茅﹕淫羊藿（1﹕1）组＞醇提仙茅﹕淫羊藿（1﹕2）组＞醇提仙茅﹕淫羊藿（0﹕1）组＞各水提组。说明二仙汤的毒性成分主要存在于醇提物中。

表1 各配伍提取物小鼠最大给药量（急性毒性）测定（n=10）

3.2各配伍提取物中仙茅苷含量与毒性相关性

结果见表2。以仙茅苷含量为自变量（X），小鼠死亡率为因变量（Y），做线性回归，得直线方程：Y=0.8647X-0.0417，R²=0.9768。通过SPSS软件，对仙茅苷含量和小鼠死亡率做双变量直线相关分析，结果：相关系数r（Pearson 相关性）=0.988＞0.9，接近于完全正相关r=1，双侧显著性检验（t检验，0.01水平上）结果P=0.000<0.01，接受仙茅苷含量与小鼠死亡率之间有直线相关关系。说明仙茅苷含量与小鼠死亡率呈显著性正相关，即仙茅苷含量多的组别毒性相对比较大。

表2 各配伍提取物中仙茅苷、淫羊藿苷含量与小鼠死亡率

3.3各配伍提取物中淫羊藿苷含量与毒性相关性

结果见表3。以淫羊藿苷含量为自变量（X），小鼠死亡率为因变量（Y），做线性回归，得直线方程：Y=-0.0319X+0.3437，R²=0.1265。通过SPSS软件对淫羊藿苷含量和小鼠死亡率做双变量直线相关分析，结果：相关系数r（Pearson 相关性）=-0.365，远离于完全正相关（r=1）和完全负相关（r=-1），双侧显著性检验（t检验，0.01水平上）结果P=0.313>0.05，拒绝淫羊藿苷含量与小鼠死亡率之间有直线相关关系。说明淫羊藿苷含量与小鼠死亡率呈显著不相关，即淫羊藿苷含量与毒性间无明显相关性。

表3 各配伍提取物中仙茅苷、淫羊藿苷含量与小鼠死亡率

4、讨论与小结

药对又称对药，是中药最基本、最简洁的一种特殊配伍方式，为研究中药方剂配伍规律提供了有效便捷的途径。淫羊藿和仙茅为传统中药，是中医温肾补阳药对。药对配伍的优势主要体现在相须为用，相得益彰，其现代诠释即增效减毒，表现在配伍后效应强度、作用时间、毒性大小、成分含量的变化上。

上述研究结果表明：①相对于水提物，仙茅淫羊藿醇提物中仙茅苷含量较高，毒性也较大，毒性大小与仙茅苷正相关，与淫羊藿苷高度不相关，故推测其毒性主要来源于仙茅。②二仙药对的毒性大小虽与淫羊藿苷高度不相关，但淫羊藿的加入对仙茅的毒性具有制衡作用，即有减毒作用。总之，仙茅-淫羊藿药对配伍的毒性成分主要来自于仙茅，且易富集于醇提物中；不同配伍方的毒性大小与仙茅苷含量正相关。在仙茅-淫羊藿药对中，淫羊藿的加入对仙茅的毒性具有制衡降低作用。

实施例2 仙茅淫羊藿不同配伍方与二仙汤原方补益肾阳作用比较研究

二仙汤是名医张伯纳1950年代创制的中药复方，由仙茅、淫羊藿、巴戟天、当归、黄柏、知母组成。二仙汤温补肾阳，荣血益气，主治更年期综合征。中医认为更年期综合征主要是由肾虚所致，而仙茅-淫羊藿是“二仙汤”中的两味君药，仙茅是温肾补阳之专药，淫羊藿亦有养精气补肾阳的功效，中医常将二者以1׃1配伍入方。我们的前期研究表明，二者配伍可降低仙茅之毒，但是否能增强补益肾阳作用及其增效减毒的的最佳配伍组合有待进一步探明。本实验研究通过氢化可的松与腺嘌呤所致的肾阳虚小鼠模型，对仙茅-淫羊藿药对不同配伍方及其二仙汤原方的补肾壮阳作用进行比较。现将结果总结如下：

1.材料

1.1 药材与药物

仙茅、淫羊藿，来源批号同实施例1；氢化可的松注射液（生产厂家：天津金耀氨基酸有限公司，批号：H12020887）；腺嘌呤（生产厂家：上海伯奥生物科技有限公司，批号：130104）；桂附地黄丸（生产厂家：河南省宛西制药股份有限公司，批号：Z41021898）；二仙汤：由仙茅15g、淫羊霍15g、巴戟天10g、当归10g、黄柏10g、知母10g组成。

1.2 试剂与试剂盒

冰乙酸（AR，杭州化学试剂有限公司，批号：20111013），SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20130722），MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20130722）。福尔马林（杭州化学试剂有限公司，批号：20111013），cAMP试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20130926，抗体进口批号：Santacruz sc-130063；垂体促肾上腺皮质激素（ACTH）试剂盒，，北京北方生物技术研究所产品，批号：20130621。

1.3 仪器

501S型超级恒温水槽（上海跃进医疗器械厂）；L-550台式低速大容量离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；HX103T型电子天平（慈溪市天东衡器厂）；INFINITE M200 pro型酶标仪，TECAN伯乐公司。

1.4动物

清洁级ICR小鼠，雌雄各半，18-22g，由浙江省医学科学院动物中心提供，合格证号：SCXK（浙）2008-0033。

2、方法

2.1 药物的制备

2.1.1 仙茅-淫羊霍水提物的制备

同实施例1。

2.1.2 仙茅-淫羊霍醇提物的制备

同实施例1。

2.1.3 二仙汤制备

按照二仙汤处方取10倍处方量的药材，加水10倍浸渍1小时后煮沸回流2次，每次2小时，合并水提液，过滤，滤液浓缩至相对密度1.20～1.25的浸膏，临用时用蒸馏水配成0.5g/ml溶液（按总生药量算），冰箱保存备用。

2.2仙茅淫羊藿不同配伍方对氢化可的松所致的肾阳虚小鼠的补肾壮阳作用

雄性ICR小鼠140只，体重18-20g，随机分为14组，每组10只，组别分别为：对照组，模型组，阳性药组，二仙汤组；水提5组：仙茅-淫羊藿1׃0组（简称水提仙茅）、仙茅-淫羊藿2׃1组（简称水提2׃1）、仙茅-淫羊藿1׃1组（简称水提1׃1）、仙茅-淫羊藿1׃2组（简称水提1׃2）、仙茅-淫羊藿0׃1组（简称水提淫羊藿）；醇提5组（配伍比例同水提）：仙茅-淫羊藿1׃0组（简称醇提仙茅）、仙茅-淫羊藿2׃1组（简称醇提2׃1）、仙茅-淫羊藿1׃1组（简称醇提1׃1）、仙茅-淫羊藿1׃2组（简称醇提1׃2）、仙茅-淫羊藿0׃1组（简称醇提淫羊藿）。

除对照组外，其余小鼠均皮下注射氢化可的松（25mg/kg），连续12d，最后两天改为肌肉注射（25mg/kg），饮食、饮水自由，造模结束后，观测小鼠饮食，体重，皮毛光泽，精神状态，自主活动等方面的变化，确定模型成功与否；造模的同时各给药组灌胃给予相应的药液（总生药量均为5g/kg），阳性药组灌胃给予桂附地黄丸（生药量3g/kg），连续12天。

指标检测

实验第11d，给药1h后，各组小鼠眼后静脉丛取血，水浴30min，3500转/min离心10min，按照小鼠SOD、MDA试剂盒说明书操作，SOD 的检测采用黄嘌呤氧化酶法，MDA 的检测采用硫代巴比妥酸( TBA) 比色分析法，测定血清中SOD、MDA的含量。

实验第12d，给药1h后，观测以下指标：①体重，分别称取给药前后各组小鼠的体重；②低温游泳时间，将小鼠放入长50cm、宽40cm、水深20cm的方形盒子中，通过冰袋把水温控制在10±1℃，记录其入水至溺死的游泳存活时间.。③脏器指数，记录完小鼠的游泳存活时间后，即刻将小鼠取出进行解剖，取胸腺、脾脏、双侧肾脏和睾丸（含附睾），称湿重，计算脏器指数，脏器指数=脏器重量/体重，取下的脏器放入10%的甲醛溶液中保存。

2.3仙茅淫羊藿不同配伍方对腺嘌呤所致的肾阳虚小鼠的补肾壮阳作用

雄性ICR小鼠140只，体重18-22g，随机分为14组，每组10只，组别同2.2。除正常对照组外，其余小鼠均灌胃给予腺嘌呤混悬液，第一周每天灌胃一次，剂量为300 mg/kg，后两周隔天灌胃一次，剂量调整为200 mg/kg，灌胃前腺嘌呤均需摇匀；饮食、饮水自由，造模结束后，观测小鼠饮食，体重，皮毛光泽，精神状态，自主活动等方面的变化，确定模型成功与否。造模的同时各给药组灌胃给予相应的二仙汤配伍方（总生药量均为5g/kg），阳性药组灌胃给予桂附地黄丸（生药量3g/kg）。连续给药3周。

指标检测

体重测定，给药前、给药一周、两周、三周后，电子天平称取各组小鼠体重并记录。

自主活动检测：取长宽高为40×30×15cm的箱子，底部分割成8×6cm的小格，实验三周结束时，各组小鼠给药1h后，放入箱内，适应1min，测定2min内小鼠穿越的格子数。

血浆ACTH与cAMP含量测定：实验第22d，各组小鼠末次给药1h后，眼后静脉丛取血0.5ml，每管以10μL浓度为625u/ml的肝素钠抗凝，之后3500转/min离心10min，上清液为小鼠血浆，按照小鼠血浆cAMP试剂盒说明书操作，酶标仪测定血浆中cAMP的含量。ACTH含量测定，与cAMP前处理一样，按照其试剂盒说明书操作，酶标仪测定。

脏器指数：各组小鼠取完血后，脱颈椎致死，即刻解剖，取胸腺、脾脏、双侧肾脏和睾丸（含附睾），称重，计算脏器指数，脏器指数=脏器重量/体重，取下的脏器放入10%的甲醛溶液中保存。

2.4 数据处理

所有实验数据结果以平均值±s表示，采用SPSS17.0统计软件处理。组间比较采用t检验。

3、结果

3.1仙茅淫羊藿不同配伍方对氢化可的松所致的肾阳虚小鼠的补肾壮阳作用

3.1.1对氢化可的松致肾阳虚小鼠体重的影响

结果见表4。对给药前和给药后各组小鼠体重分别进行方差齐性检验，给药前和给药后体重均通过了方差齐性检验（P>0.05），因此，对给药前后小鼠体重进行单因素方差分析。结果表明，给药前各组体重之间没有显著性差别（P>0.05）。给药后，对照组与模型组比较，体重显著增加，说明阳虚小鼠模型复制成功。与模型组相比，阳性药组、水提1:1组、水提1:2组、醇提1:1组、醇提1:2组小鼠体重显著增加，以水提1:2或醇提1:2组小鼠体重增加最为明显。与二仙汤组、单味仙茅及单味淫羊霍组比较，仙茅-淫羊藿水提1:2组小鼠体重显著增加。

表4 对氢化可的松致肾阳虚小鼠体重变化的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

3.1.2 对氢化可的松致肾阳虚小鼠低温游泳时间的影响

结果见表5。对各组进行方差齐性检验，显著性P=0.003<0.05，故各组数据间方差不齐；通过对数函数转换，把各组数据转化为LG₁₀低温游泳时间，再进行方差齐性检验，此时显著性 P=0.487>0.05，说明转换后各组方差齐性，因此，对各组LG₁₀低温游泳时间进行单因素方差分析。结果表明，与模型组比较，阳性药组、二仙汤组、水提2:1组、水提1:1组、水提1:2组、水提淫羊藿组、醇提2:1组、醇提1:1组、醇提1:2组、醇提淫羊藿组低温游泳时间均显著增加，其中以水提1:2、醇提1:2组增加最多。与二仙汤组、单味仙茅及单味淫羊霍组比较，水提1:2、醇提1:2组小鼠的低温游泳时间显著增加。

表5 对氢化可的松致肾阳虚小鼠低温游泳时间的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

3.1.3 对氢化可的松致肾阳虚小鼠胸腺、肾脏、睾丸（含附睾）等的影响

结果见表6与表7。先分别对胸腺、脾脏、肾脏和睾丸（含附睾）的脏器指数进行方差齐性检验，各脏器指数均通过方差齐性检验（P>0.05），因此，对各脏器指数进行单因素方差分析。结果表明，①模型组小鼠胸腺与脾脏指数均比对照组明显减少，说明造模型成功。②与模型组比较，二仙汤组、水提1:1组、水提1:2组及醇提1:2组小鼠的胸腺指数显著增大。③与模型组比较，阳性药组及各给药组小鼠的脾脏指数均显著增大。④与模型组比较，阳性药组、二仙汤组、水提1:1组、水提1:2组、醇提1:2组小鼠的肾脏指数显著增大。⑤与模型组比较，水提1:2组、醇提1:2组小鼠的睾丸指数显著增大。⑥与二仙汤组、单味仙茅及单味淫羊霍组比较，水提1:2组小鼠的胸腺指数、脾脏指数与睾丸指数显著增加。

表6 对氢化可的松致肾阳虚小鼠胸腺与脾脏指数的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

表7对氢化可的松致肾阳虚小鼠肾脏和睾丸（含附睾）指数的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

3.1.4 对氢化可的松致肾阳虚小鼠血清中SOD、MDA含量的影响

结果见表8。经方差齐性分析，SOD、MDA含量均未通过方差齐性检验（P<0.05）；各组数据经函数转换（开平方、自然对数等）后均达到方差齐性要求，故对SOD活力、MDA含量的各组数据进行秩和检验。结果表明，与正常对照组比较，模型组小鼠血清中SOD活力显著降低，MDA含量明显增加，证明造模成功。与模型组组比较，水提1:2组、醇提1:2组小鼠血清中SOD活力显著升高，血清MDA含量显著降低。

表8 对氢化可的松致肾阳虚小鼠血清中SOD、MDA的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

3.2仙茅淫羊藿不同配伍方对腺嘌呤所致的肾阳虚小鼠的补肾壮阳作用

3.2.1对腺嘌呤致肾阳虚小鼠体重的影响

给药前、给药一周、两周、三周后各组小鼠体重如表9所示。给药前、给药一周和两周小鼠体重均通过了方差齐性检验（显著性P>0.05），对其进行单因素方差分析；给药三周后小鼠体重未通过方差齐性检验（显著性P<0.05），故对其采用秩和检验。与模型组比较，阳性药组、二仙汤组、水提1׃1组、醇提1׃1组、水提1׃2组、醇提1׃2组小鼠的体重显著增加；与二仙汤组比较，水提1׃2组、醇提1׃2组小鼠的体重增加得更为显著。

表9 对腺嘌呤致肾阳虚小鼠体重的影响（n=10）

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

3.2.2对腺嘌呤致肾阳虚小鼠自主活动的影响

各组小鼠自主活动次数如表10所示。方差齐性检验结果见表8，显著性P>0.05，通过了方差齐性检验，因此，对其进行单因素方差分析。与模型组比较，阳性药组、仙茅-淫羊藿各配伍水提或醇提组小鼠的自主活动次数显著增加；与二仙汤组比较，水提1׃2组、醇提1׃2组小鼠的自主活动次数增加得更为显著。

表10 对腺嘌呤致肾阳虚小鼠自主活动的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

3.2.3对腺嘌呤致肾阳虚小鼠脏器指数的影响

各组脏器指数如表11与表12所示。先分别对胸腺、脾脏、肾脏和睾丸（含附睾）的脏器指数进行方差齐性检验，仅睾丸附睾指数通过了方差齐性检验（显著性P>0.05），故对睾丸附睾指数进行单因素方差分析；其余各脏器指数进行秩和检验。结果表明：①胸腺指数：与模型组比较，阳性药组、二仙汤组、水提1׃1组、醇提组、水提1׃2组、醇提1׃2组小鼠的胸腺指数明显增加。②脾脏指数：与模型组比较，各配伍组脾脏指数无显著差异。③双侧睾丸（含附睾）指数：与模型组比较，各配伍中，仅1׃2水提或醇提组睾丸指数显著增加。④双侧肾脏指数：与模型组比较，阳性药组、二仙汤组及各配伍水提或醇提组小鼠的肾脏指数均显著增加，其中以水提1׃2组、醇提1׃2组增加得更为显著。

表11 对腺嘌呤致肾阳虚小鼠胸腺与脾脏指数的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

表12 对腺嘌呤致肾阳虚小鼠睾丸与附睾及肾脏指数的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

3.2.4对腺嘌呤致肾阳虚小鼠血浆cAMP含量的影响

各组小鼠血浆cAMP含量如表13所示，方差齐性检验结果见表20，显著性P<0.05，未通过了方差齐性检验，因此对其进行秩和检验。由表10可见，正常对照组小鼠血浆中的cAMP和ACTH含量较高，肾阳虚小鼠cAMP和ACTH水平明显降低。与模型组比较，阳性药组、二仙汤组、1׃2组水提或醇提组小鼠血浆cAMP含量显著升高。与二仙汤组和仙茅-淫羊藿1׃1组比较，水提1׃2组、醇提1׃2组小鼠血浆cAMP含量显著升高。

表13对腺嘌呤致肾阳虚小鼠血浆中cAMP和ACTH含量的影响

与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。与二仙汤组比较：#p＜0.05

4、讨论与小结

实验1通过以体重、低温游泳时间、脏器指数、血清SOD活性及MDA含量为指标，比较各配伍方的疗效。实验1结果表明，二仙汤配伍方对小鼠的体重、低温游泳时间、脏器指数、血清SOD活力及MDA含量等均具有改善作用，显示有温补肾阳虚的药理作用，在各配伍方中，以水提和醇提仙茅-淫羊藿1:2组的疗效最为显著。

实验2在实验1的基础上，选择腺嘌呤致小鼠肾阳虚这又一经典模型来观察仙茅、淫羊藿不同配伍方及其单方的温肾壮阳疗效，以进一步证明仙茅淫羊霍临床最适宜的配伍用药规律。实验2通过体重、自主活动次数、脏器指数、血浆垂体促肾上腺皮质激素（ACTH）和环磷酸腺苷（cAMP）含量为指标，比较各配伍方的疗效。实验2结果表明，补肾阳疗效最显著的为水提1:2组和醇提1:2组。

现代研究表明，肾阳虚证具有下丘脑—垂体—肾上腺皮质轴功能紊乱的表现。而cAMP作为机体的第二信使，具有广泛的生物学效应，参与了多种生理及病理过程，cAMP影响着机体稳定的生理状态和疾病的转归。实验2结果显示，水提1:2组、醇提1:2组小鼠血浆中cAMP活力显著升高。

同样，垂体促肾上腺皮质激素（ACTH），是维持机体肾上腺正常形态和功能的重要激素。ACTH与肾上腺皮质类固醇激素具有密切关系。实验2观察到仙茅淫羊霍配伍方对肾阳虚小鼠血浆中ACTH有一定上调作用，尤其是仙茅-淫羊霍1:2配伍方能显著增加肾阳虚小鼠血液中ACTH含量。

综合上述二个肾阳虚实验结果表明，与单用仙茅、单用淫羊霍、二仙汤原方比较，仙茅-淫羊霍1:2配伍方的补肾壮阳作用明显增强，其补肾壮阳作用与上调ACTH含量和增强cAMP活力有关。

实施例3 仙茅淫羊霍不同配伍方与二仙汤原方抗抑郁作用比较研究

抑郁症是指由各种原因引起的心理障碍，是严重危害人类身心健康的常见病、多发病，目前缺乏治疗抑郁症的高效低毒药物。仙茅与淫羊藿（又叫仙灵脾）是称之为“二仙”的中医知名药对，也是中医“二仙汤”中的两味主药。研究表明，仙茅具有抗抑郁作用；其抗抑郁的物质基础为仙茅苷和苔黑酚葡萄糖苷等酚性成分；同样淫羊藿提取物也具有一定的抗抑郁作用，其抗抑郁作用与神经细胞保护作用有关。但目前尚未见有将二仙组合在一起进行抗抑郁研究的相关报道，更未见二仙不同配伍方抗抑郁的研究。为此，本实验设计仙茅与淫羊霍多种配伍组合，以盐酸氯米帕明和二仙汤原方为参照，研究比较二仙药对不同配伍方的抗抑郁作用，以探明二仙配伍是否具有抗抑郁作用及抗抑郁作用的最适配伍方等。现将结果总结如下：

1 材料

1.1 动物

ICR小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由浙江省实验动物中心提供，动物合格证号为：SCXK（浙）2008-0033。

1.2 药物与试剂

仙茅、淫羊藿，来源批号同实施例1；仙茅淫羊霍药对不同配伍方。盐酸氯米帕明片，湖南洞庭药业股份有限公司生产，规格为25mg/片，批号为H10900027。二仙汤：由仙茅15g、淫羊霍15g、巴戟天10g、当归10g、黄柏10g、知母10g组成。

1.3 仪器

TC-15恒温加热套，海宁市华星仪器厂生产。自主活动箱，规格为45 cm×30 cm×15cm的长方形塑料箱，底部垫以白纸，分割为40个8.5cm×6cm的小格。小鼠悬尾实验装置与小鼠游泳箱，上海华光仪器厂。

2 方法

2.1 提取物配制

2.1.1 仙茅-淫羊霍水提物的制备

同实施例1。

2.1.2 仙茅-淫羊霍醇提物的制备

同实施例1。

2.1.3 二仙汤制备

同实施例2。

2.2 对小鼠自主活动、悬尾失望时间、游泳不动时间的影响

2.2.1 动物分组及给药

250只小鼠随机分为25组，每组10只，即空白对照组、盐酸氯米帕明组、二仙汤组、水提仙茅-淫羊藿0׃1组（简称水提淫羊霍）、水提仙茅-淫羊藿1׃0组（简称水提仙茅）、水提仙茅-淫羊藿1׃1组（简称水提1׃1组）、水提仙茅-淫羊藿1׃1.5组（简称水提1׃1.5组）、水提仙茅-淫羊藿1׃2组（简称水提1׃2组）、水提仙茅-淫羊藿1׃2.5组（简称水提1׃2.5组）、水提仙茅-淫羊藿1׃3组（简称水提1׃3组）、水提仙茅-淫羊藿1׃3.5组（简称水提1׃3.5组）、水提仙茅-淫羊藿1׃4组（简称水提1׃4组）、水提仙茅-淫羊藿1׃4.5组（简称水提1׃4.5组）、水提仙茅-淫羊藿1׃5组（简称水提1׃5组）。同理，按照上述水提同样比例可得到：醇提淫羊藿、醇提仙茅、醇提1׃1组、醇提1׃1.5组、醇提1׃2组、醇提1׃2.5组、醇提1׃3组、醇提1׃3.5组、醇提1׃4组、醇提1׃4.5组、醇提1׃5组。共25组。各给药组按体重0.1ml/10g灌胃给药，对照组给予等量蒸馏水，每天1次，连续12天。

2.2.2 对小鼠自主活动的影响

于第8天给药1h后，将小鼠单个地置于自主活动箱中，待其适应1min后，测定2min内各给药组和对照组小鼠的穿越格子数。每只小鼠测定结束后，倒去箱子中的粪便，减少小鼠间的相互影响。

2.2.3 对小鼠悬尾失望时间的影响

于第10天给药后1h，小鼠尾部1/3处以细绳捆绑（以使小鼠无法挣脱，又不造成伤害为度），细绳另一端捆绑在与水平面平行的横杆上（小鼠距地面约50cm），使小鼠处于倒立状态，小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间后表现出明显的失望，呈现不动静止状态。待其适应1min后，记录5min内各给药组和对照组小鼠的不动时间，视为失望时间。

2.2.4 对小鼠游泳不动时间的影响

于第12天给药后1h，将小鼠单个地放入盛有水的自主活动箱中（45 cm×30 cm×15cm，水深约8cm，水温保持在20-22℃），待其适应1min后，测定各给药组和对照组小鼠在5min内在水面上保持漂浮不动的时间。小鼠不动行为的评判标准是小鼠微卷躯体，但保持垂直姿势，漂浮于水中，鼻孔露出水面，四肢保持不动。

2.3 对色胺致小鼠惊厥的影响试验

ICR小鼠250，雌雄各半，随机分为25组，具体分组情况同2.2.1。各给药组按体重0.1ml/10g灌胃给药，对照组给予等量蒸馏水，每天1次，连续8天。于第8天，给药1h后腹腔注射新配的色胺盐酸溶液（170mg/Kg），观察小鼠惊厥发生的情况。以后肢强直为标准，记录惊厥潜伏期及各组惊厥率。

2.7 统计方法

所有实验结果均以X±S表示，采用spss17.0进行统计，结果以t检验进行两组间差异分析。

3 结果

3.1 对小鼠自主活动的影响

结果见表14。与对照组比较，盐酸氯米帕明组的穿越格子数明显增加（p<0.05），二仙汤无明显差异。二仙配伍方中的水提水提1׃1组、1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组、1׃3.5组、1׃4组、1׃4.5组、1׃5组和醇提1׃1组、1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组、1׃3.5组的穿越格子数明显增加（P<0.05或P<0.01）。其中水提1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组和醇提1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组的穿越格子数增加最为显著（p<0.001）；与二仙汤比较，上述8组小鼠的自主活动穿格子数明显增多，差异显著（P<0.05）；又在这8组中，以水提1׃2和醇提1׃2组的作用最为显著。

表14 药物对小鼠自主活动的影响

与对照组比较：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；与二仙汤比较：#p<0.05

3.2 对小鼠悬尾失望时间的影响

结果见表15。与对照组比较，盐酸氯米帕明组小鼠悬挂5min内的失望时间明显减少，二仙配方组中，水提1׃1组、1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组、1׃3.5组、1׃4组及醇提1׃1组、1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组、1׃3.5组、1׃4组、1׃4.5组均能明显缩短小鼠悬挂的失望时间。与二仙汤组比较，上述各组中以二仙配伍方水提或醇提1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组小鼠的悬尾失望时间缩短明显，差异显著；其中水提1׃2组和醇提1׃2组缩短小鼠悬挂失望时间作用尤为突出。

表15 对小鼠悬尾失望时间的影响

与对照组比较：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；与二仙汤比较：#p<0.05

3.3 对小鼠游泳不动时间的影响

结果见表16。与对照组相比，除单味仙茅组与二仙汤组外，盐酸氯米帕明与二仙配伍方水提与醇提各组小鼠游泳5min内的不动时间均明显减少。与二仙汤组比较，上述各组中以二仙配伍方水提或醇提1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组小鼠5min内游泳不动时间缩短较为明显；其中水提1׃2组和醇提1׃2组作用尤为显著。

表16 对小鼠游泳不动时间的影响

与对照组比较：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；与二仙汤比较：#p<0.05

3.4 对色胺致小鼠惊厥的影响

结果见表17。与对照组比较，盐酸氯米帕明组小鼠的惊厥潜伏期明显缩短、惊厥率明显升高（p<0.05）。与对照组比较，二仙汤组小鼠的惊厥潜伏期与惊厥率均无明显差异。与对照组比较，二仙配伍方中的水提1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组和醇提1׃1组、醇提1׃2组、醇提1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组小鼠的惊厥潜伏期明显缩短（P<0.05）；其中水提1׃2组和醇提1׃2组的惊厥潜伏期缩短最为显著（P<0.01）。与二仙汤组比较，二仙配伍方中水提1׃2组和醇提1׃2组小鼠惊厥潜伏期明显缩短，惊厥率显著增高，差异显著（P<0.05）。

表17 对色胺致小鼠惊厥的影响

与对照组比较：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；与二仙汤比较：#p<0.05

4 小结

小鼠悬尾实验和小鼠游泳实验均是较为常用与可靠的抑郁症动物模型，在评价抗抑郁药物药效中应用较多；色胺试验与自主活动测定试验，在抗抑郁药物的初筛中也经常选用。因此，本研究选用这上述模型与试验来开展仙茅淫羊霍不同配伍方与二仙汤抗抑郁作用比较研究是合适的。

研究结果表明：仙茅淫羊霍药对合理配伍具有抗抑郁作用，其中以水提和醇提仙茅-淫羊藿1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组抗抑郁作用较强；上述4种配伍方的抗抑郁作用明显强于二仙汤原方、单味仙茅或单味淫羊霍方及传统的仙茅-淫羊藿1׃1配伍方；其中仙茅-淫羊藿1׃2配伍方的抗抑郁作用更为突出。

综合实施例1、实施例2、实施例3的研究结果，可以得出以下结论：

实施例1的研究结果表明，仙茅-淫羊霍配伍组合，可以明显降低仙茅的毒性；

实施例2的研究结果表明，仙茅-淫羊霍配伍具有补益肾阳作用，相对作用较强的配伍组合为：仙茅-淫羊霍1﹕2；

实施例3的研究表明，仙茅-淫羊霍治疗抑郁症较好的配伍组合为：仙茅-淫羊霍1׃1.5组、1׃2组、1׃2.5组、1׃3组；其中1﹕2组抗抑郁作用相对突出。

综上，本发明的治疗抑郁症的中药组合物，既能补益肾阳，又能治疗抑郁症，具有温补肾阳、益肾固精、通交心肾，条达气机之功效，能充实阳气，疏畅气机，振奋神机，宁神定志，舒怀开郁。适用于阳气郁痹、阳郁神颓、情绪低落、思维缓慢、懒言少动、精神萎靡之抑郁症患者。

Claims (8)

1.一种温补肾阳抗抑郁的中药组合物，其特征在于，该中药组合物是由仙茅、淫羊霍配伍组成，所述的仙茅-淫羊霍的重量比为1׃2。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，由有效量的权利要求1所述中药组合物和药学上可接受的辅料组成。

3.如权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，所述的辅料包括赋形剂。

4.如权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，所述的赋形剂包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂。

5.如权利要求1-4任一项所述的中药组合物，其特征在于，制成临床可接受的剂型。

6.如权利要求5所述的中药组合物，其特征在于，所述的剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液体制剂。

7.一种如权利要求1所述的温补肾阳抗抑郁的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括采用水提或醇提。

8.一种如权利要求1-4任一项所述的中药组合物在制备预防或治疗抑郁症的药物中的应用。