CN104547151B - 一种中药提取物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药提取物及制备方法，属于中医药技术领域。本发明通过将白花蛇舌草、半枝莲和夏枯草或其中药组合物经加热、煎煮制成水煎剂，再利用71％的乙醇过夜沉淀处理，获得醇溶物和醇沉物，分别进行浓缩或干燥，获得粗提取物，粗提物再分离纯化，获得含有不同比例总萜类和总黄酮的提取物。本发明所提供的中药提取物，具有抗肿瘤、延长寿命的作用，经实验验证，平均生命延长率可达24.14％，平均抑瘤率可达31.98％。

Description

一种中药提取物及制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药提取物及制备方法，属于中医药技术领域。

背景技术

白花蛇舌草，又名:蛇总管，茜草科草本属植物。在我国主要分布于广东、广西、云南、福建等南方各省。归胃、大肠经、小肠经,性寒、味微酸。全株连根入药。具清热解毒、清热利湿，消炎退肿、抗癌等功效。白花蛇舌草是较为常用的中药，研究热点主要为有效活性成分的鉴定与提取，药理作用及机理的研究以及临床应用方面。

现代研究表明其化学成分主要为蒽醌类化合物、甾醇及其苷类化合物、含酸的化合物、萜类化合物、黄酮和黄酮醇苷类化合物、多糖类、微量元素、挥发性成分。白花蛇舌草还含有少量的生物碱、强心苷、三十一烷、白花蛇舌草素(香豆精类化合物)、二甲醚衍生物、东莨菪内酯、5-羟色胺等。白花蛇舌草抗肿瘤活性成分主要有黄酮类、萜类、多糖、甾醇类以及微量元素等。

白花蛇舌草作为抗肿瘤常用中药，常以复方形式存在，中药配伍化学活性优于单味药。白花蛇舌草分别与半枝莲、夏枯草相配伍，从化学分子水平探索白花蛇舌草及配伍化学成分溶出量、化学成分变化、是否产生新成分等增减效应，对阐明白花蛇舌草抗肝癌作用的具有重要意义，为中药新药研制提供依据。

中医临床用药须熟悉每味药的药性及药味间的配伍。前人们在使用单味药时发现当病情复杂时，单味药不能解决问题；而某些单味药具有一定的毒性，应用上具有一定的限制，需用其它药物进行调整。先贤从单味药应用到多味药组成方剂的过程中逐渐体会到药物配合运用较之单味药更具优势，因此药物通过配伍使用才能体现出中药的药效或药性。中药方剂配伍具有多靶点性、多效性等优点。

为了解决中药复方既能发挥作用又能便于作用机制的研究这两者之间的协调问题，历代医药工作者在长期医疗实践中总结经验，选择性地将两味中药结合配伍，即药对配伍。药对配伍研究已成为继拆方试验和正交试验之后方剂配伍规律研究的又一重点方向。针对药物配伍组合、配伍效应及其物质基础等方面的研究是进行方剂配伍研究的基础,药物成对配伍的研究可在一定水平上阐述方剂配伍的原则,药物配伍的研究是研究方剂配伍规律的新方法、新方向、新途径。

由于中药成分及各成分间相互作用的复杂性，通过现有方法很难获得某种特定比例成分的中药提取物。原因在于从单味中药应用到多味中药方剂的过程中，药物间的相互作用，会存在中药药效、药性以及有效成分含量的加减现象。中药配伍后在熬制过程中，中药成分间也会存在相互作用，溶出的化学成分间会产生加减与叠加变化的现象。不同中药组合物溶出的化学成分间既可以是相互促进，也可以是相互抑制，也可以呈现出对一种成分溶出的促进作用，而对另一种成分溶出的抑制作用。因此，各成分间的相互作用会对中药最终提取物组成会产生影响，从而导致中药以及配伍中药其提取物成分比例不同，同时，提取物的成分及成分比例也会因提取条件不同而有所不同，相应的成分比例不同的提取物及不同提取部分的作用效果也会产生差异。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种中药提取物及制备方法，采用的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种中药提取物及制备方法，该方法是一种中药提取物，提取自以下三种中药的任意一种或任意组合：

1)白花蛇舌草；

2)半枝莲；

3)夏枯草；

所述中药为中药植物的全草。

所述提取物的制备方法是将权利要求1所述中药或中药组合物经加热、煎煮制成水煎剂，再利用71％的乙醇过夜沉淀处理，获得醇溶物和醇沉物，分别进行浓缩或干燥，获得粗提取物，粗提物再分离纯化，获得中药提取物。

所述方法步骤如下：

1)对中药或中药组合物进行预处理，获得预处理中药；

2)将步骤1)所得的预处理中药熬制成水煎剂；

3)将步骤2)所得水煎剂用乙醇进行过液沉淀处理，获得醇溶物和醇沉物；

4)将步骤3)所得醇溶物与醇沉物分别进行浓缩或干燥，获得中药粗提物；

5)再利用硅胶快速色谱技术、高效液相色谱技术对步骤4)所得粗提取物进行分离纯化，

获得中药提取物。

步骤1)所述中药是白花蛇舌草、半枝莲和夏枯草中的任意一种；所述中药组合物是白花蛇舌草、半枝莲和夏枯草中任意两种或三种的组合，经过本实验室对大量配伍比例的优化得到效果较佳的组合物配伍比例为：白花蛇舌草：半枝莲＝1:1，白花蛇舌草：夏枯草＝2:1，半枝莲：夏枯草＝2:1，白花蛇舌草：半枝莲：夏枯草＝2:2:1。

步骤1)所述预处理，是用水浸泡中药或中药组合物，浸泡条件为室温浸泡24小时，水的添加量为草药总药量的30倍。

步骤2)所述制成水煎剂，是将预处理中药或中药组合物，在100℃煮沸条件下，熬制1.5小时，收集熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，收集熬制液，合并两次药液，静置过夜，次日先收集上清液，沉淀物用3000rpm离心20分钟收集上清液，全部上清液在100℃煮沸条件下浓缩至500mL，最后100℃水浴，浓缩至100mL水煎剂，备用。

步骤3)所述乙醇过夜沉淀处理，是向100mL水煎剂浓缩液中加入300mL95％无水乙醇，使之成为71％乙醇，室温过夜24小时，获得醇溶物和醇沉物。

步骤4)所述中药粗提物，是将醇溶物和醇沉物，分别用3层滤纸过滤，将滤液置于蒸发皿中于100℃水浴锅中进行浓缩，直至蒸成膏状，然后于80℃干燥箱中干燥，制成中药粗提物。

本发明所述方法，适用于提取中药、中药水煎剂或粗提取物中的活性成分。

本发明有益效果：

1.利用本发明提供的中药提取物的制备方法熬制的汤剂更符合中药的性、味、归、经的要求，更好的诠释中药方剂配伍君、臣、佐、使的用法，通过用法发挥药物之间的相生相克作用。

2.利用本发明提供的中药提取物的制备方法，能够在一定程度上实现对中药提取物中黄酮类物质和萜类物质组成比例的控制，获得特定比例的中药提取物，更好的体现中药汤剂有效成分的药效与药性。

3.本发明所提供的中药提取物，具有抗肿瘤、延长寿命的作用。经实验验证，本发明所制备的中药提取物可以延长实验对象生命，平均生命延长率可达24.14％，同时可以抑制肿瘤，平均抑瘤率可达31.98％。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。经过对配伍比例进行优化后，根据得到的具有较佳效果的配伍比例，列举如下配伍组合作进一步说明：实施例1：白花蛇舌草、半枝莲和夏枯草组合物的提取物的制备

向60g白花蛇舌草，60g半枝莲和30g夏枯草三种全草中加中药总药量(150g)的30倍水，于室温下浸泡24小时，得到预处理中药。将所得的预处理中药在100℃下，熬制1.5小时，利用4层纱布过滤熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，利用4层纱布过滤熬制液去药渣。两次药液合并，静置过夜。次日，取上清液，沉淀离心过滤(3000rpm，20分钟)，合并所有上清液，煮沸浓缩至500mL，然后100℃水浴锅将上清液浓缩至100mL水煎剂，再用71％的乙醇沉淀浓缩液，得到乙醇沉淀物和溶解物，再分别经过3层滤纸过滤，100℃浓缩，80℃干燥，最终获得粗提取物。利用硅胶快速色谱技术、高效液相色谱技术对粗提取物进行分离纯化，获得中药提取物。

采用聚酰胺树脂法，以芦丁为标准品考查乙醇溶解部分的总黄酮类，采用大孔树脂法，以齐墩果酸为标准品考查乙醇溶解部分总萜类含量的变化，采用HCL水解法考查醇沉部分多糖含量的变化，以分离纯化目标化合物。

检测结果如下：150g全草中醇溶解部分的总黄酮含量为185.27mg；总萜类38.82mg；醇沉部分多糖含量为2.43g。

实施例2：白花蛇舌草和夏枯草组合物的提取物的制备

向60g白花蛇舌草和30g夏枯草两种全草中加中药总药量(90g)的30倍水，于室温下浸泡24小时，得到预处理中药。将所得的预处理中药在100℃下，熬制1.5小时，利用4层纱布过滤熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，利用4层纱布过滤熬制液去药渣。两次药液合并，静置过夜。次日，取上清液，沉淀离心过滤(3000rpm，20分钟)，合并所有上清液，煮沸浓缩至500mL，然后100℃水浴锅将上清液浓缩至100mL水煎剂，再用71％的乙醇沉淀浓缩液，得到乙醇沉淀物和溶解物，再分别经过3层滤纸过滤，100℃浓缩，80℃干燥，最终获得粗提取物。利用硅胶快速色谱技术、高效液相色谱技术对粗提取物进行分离纯化，获得中药提取物。

采用聚酰胺树脂法，以芦丁为标准品考查乙醇溶解部分的总黄酮类，采用大孔树脂法，以齐墩果酸为标准品考查乙醇溶解部分总萜类含量的变化，采用HCL水解法考查醇沉部分多糖含量的变化，以分离纯化目标化合物。

检测结果如下：90g全草中醇溶解部分的总黄酮含量为61.88mg；总萜类26.92mg；醇沉部分多糖含量为1.46g。

实施例3：白花蛇舌草和半枝莲组合物的提取物的制备

向60g白花蛇舌草和60g半枝莲两种全草中加中药总药量(120g)的30倍水，于室温下浸泡24小时，得到预处理中药。将所得的预处理中药在100℃下，熬制1.5小时，利用4层纱布过滤熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，利用4层纱布过滤熬制液去药渣。两次药液合并，静置过夜。次日，取上清液，沉淀离心过滤(3000rpm，20分钟)，合并所有上清液，煮沸浓缩至500mL，然后100℃水浴锅将上清液浓缩至100mL水煎剂，再用71％的乙醇沉淀浓缩液，得到乙醇沉淀物和溶解物，再分别经过3层滤纸过滤，100℃浓缩，80℃干燥，最终获得粗提取物。利用硅胶快速色谱技术、高效液相色谱技术对粗提取物进行分离纯化，获得中药提取物。

采用聚酰胺树脂法，以芦丁为标准品考查乙醇溶解部分的总黄酮类，采用大孔树脂法，以齐墩果酸为标准品考查乙醇溶解部分总萜类含量的变化，采用HCL水解法考查醇沉部分多糖含量的变化，以分离纯化目标化合物。

检测结果如下：120g全草中醇溶解部分的总黄酮含量为99.05mg；总萜类29.21mg；醇沉部分多糖含量为1.57g。

实施例4：半枝莲和夏枯草组合物的提取物的制备

向60g半枝莲和30g夏枯草两种全草中加中药总药量(90g)的30倍水，于室温下浸泡24小时，得到预处理中药。将所得的预处理中药在100℃下，熬制1.5小时，利用4层纱布过滤熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，利用4层纱布过滤熬制液去药渣。两次药液合并，静置过夜。次日，取上清液，沉淀离心过滤(3000rpm，20分钟)，合并所有上清液，煮沸浓缩至500mL，然后100℃水浴锅将上清液浓缩至100mL水煎剂，再用71％的乙醇沉淀浓缩液，得到乙醇沉淀物和溶解物，再分别经过3层滤纸过滤，100℃浓缩，80℃干燥，最终获得粗提取物。利用硅胶快速色谱技术、高效液相色谱技术对粗提取物进行分离纯化，获得中药提取物。

采用聚酰胺树脂法，以芦丁为标准品考查乙醇溶解部分的总黄酮类，采用大孔树脂法，以齐墩果酸为标准品考查乙醇溶解部分总萜类含量的变化，采用HCL水解法考查醇沉部分多糖含量的变化，以分离纯化目标化合物。

检测结果如下：150g全草中醇溶解部分的总黄酮含量为55.26mg；总萜类23.64mg；醇沉部分多糖含量为1.37g。

实施例5：白花蛇舌草提取物的制备

向60g白花蛇舌草全草中加中药总药量(60g)的30倍水，于室温下浸泡24小时，得到预处理中药。将所得的预处理中药在100℃下，熬制1.5小时，利用4层纱布过滤熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，利用4层纱布过滤熬制液去药渣。两次药液合并，静置过夜。次日，取上清液，沉淀离心过滤(3000rpm，20分钟)，合并所有上清液，煮沸浓缩至500mL，然后100℃水浴锅将上清液浓缩至100mL水煎剂，再用71％的乙醇沉淀浓缩液，得到乙醇沉淀物和溶解物，再分别经过3层滤纸过滤，100℃浓缩，80℃干燥，最终获得粗提取物。利用硅胶快速色谱技术、高效液相色谱技术对粗提取物进行分离纯化，获得中药提取物。

采用聚酰胺树脂法，以芦丁为标准品考查乙醇溶解部分的总黄酮类，采用大孔树脂法，以齐墩果酸为标准品考查乙醇溶解部分总萜类含量的变化，采用HCL水解法考查醇沉部分多糖含量的变化，以分离纯化目标化合物。

检测结果如下：150g全草中醇溶解部分的总黄酮含量为58.95mg；总萜类15.97mg；醇沉部分多糖含量为0.99g。

实施例6：半枝莲提取物的制备

向60g半枝莲全草中加中药总药量(60g)的30倍水，于室温下浸泡24小时，得到预处理中药。将所得的预处理中药在100℃下，熬制1.5小时，利用4层纱布过滤熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，利用4层纱布过滤熬制液去药渣。两次药液合并，静置过夜。次日，取上清液，沉淀离心过滤(3000rpm，20分钟)，合并所有上清液，煮沸浓缩至500mL，然后100℃水浴锅将上清液浓缩至100mL水煎剂，再用71％的乙醇沉淀浓缩液，得到乙醇沉淀物和溶解物，再分别经过3层滤纸过滤，100℃浓缩，80℃干燥，最终获得粗提取物。利用硅胶快速色谱技术、高效液相色谱技术对粗提取物进行分离纯化，获得中药提取物。

采用聚酰胺树脂法，以芦丁为标准品考查乙醇溶解部分的总黄酮类，采用大孔树脂法，以齐墩果酸为标准品考查乙醇溶解部分总萜类含量的变化，采用HCL水解法考查醇沉部分多糖含量的变化，以分离纯化目标化合物。

检测结果如下：150g全草中醇溶解部分的总黄酮含量为29.14mg；总萜类8.48mg；醇沉部分多糖含量为0.64g。

实施例7：夏枯草提取物的制备

向30g夏枯草全草中加中药总药量(30g)的30倍水，于室温下浸泡24小时，得到预处理中药。将所得的预处理中药在100℃下，熬制1.5小时，利用4层纱布过滤熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，利用4层纱布过滤熬制液去药渣。两次药液合并，静置过夜。次日，取上清液，沉淀离心过滤(3000rpm，20分钟)，合并所有上清液，煮沸浓缩至500mL，然后100℃水浴锅将上清液浓缩至100mL水煎剂，再用71％的乙醇沉淀浓缩液，得到乙醇沉淀物和溶解物，再分别经过3层滤纸过滤，100℃浓缩，80℃干燥，最终获得粗提取物。利用硅胶快速色谱技术、高效液相色谱技术对粗提取物进行分离纯化，获得中药提取物。

采用聚酰胺树脂法，以芦丁为标准品考查乙醇溶解部分的总黄酮类，采用大孔树脂法，以齐墩果酸为标准品考查乙醇溶解部分总萜类含量的变化，采用HCL水解法考查醇沉部分多糖含量的变化，以分离纯化目标化合物。

检测结果如下：150g全草中醇溶解部分的总黄酮含量为7.78mg；总萜类2.83mg；醇沉部分多糖含量为0.74g。

实施例8：实施例1-7粗提取物主要成分的比较

将实施例1-7不同中药组合物粗提取物纯化前总黄酮类、总萜类、多糖类化合物的溶出量比对如表1：

表1 实施例1-7的粗提取物主要成分的溶出量

由表1可以知道：白花蛇草、半枝莲和夏枯草组合物的粗提取物，总萜类与总黄酮的比例为1：4.8；白花蛇草与夏枯草组合物的粗提取物，总萜类与总黄酮的比例为1：2.3；白花蛇草与半枝莲组合物的粗提取物，总萜类与总黄酮的比例为1：3.4；半枝莲与夏枯草组合物的粗提取物，总萜类与总黄酮的比例为1：2.3；白花蛇舌草的粗提取物，总萜类与总黄酮的比例为1:3.7；半枝莲的粗提取物，总萜类与总黄酮的比例为1：3.4；夏枯草的粗提取物，总萜类与总黄酮的比例为1：2.7。

通过对比各实施例总黄酮类、总萜类及多糖的指标：①通过对比实施例5、6、7可以看出：质量相同的白花蛇舌草、半枝莲、夏枯草中总黄酮类、总帖类、多糖的含量均不相同，在质量相同的情况下夏枯草中多糖的含量最高；②通过对比实施例3、5、6可以看出：白花蛇舌草与半枝莲1：1配伍组合物中总黄酮及总萜类的含量都有所上升，多糖没有明显析出；③通过对比实施例2、5、7可以看出：白花蛇舌草与夏枯草2：1配伍组合物中总萜类溶出增加，总黄酮、多糖的溶出率具有下降趋势；④通过对比实施例4、6、7可以看出：半枝莲与夏枯草2：1配伍后，总黄酮与总萜类大幅度提升，但多糖析出没有明显增加⑤通过对比实施例1、5、6、7可以看出：三者配伍后，总黄酮类与三萜类化合物含量都有所增加，但多糖析出变化不明显。

综上所述，白花蛇舌草、半枝莲分别都受到夏枯草的影响，两两配伍后夏枯草会提升白花蛇舌草总萜类的析出率，总黄酮、多糖的量微量减少；两两配伍后夏枯草会显著提升半枝莲总黄酮的析出，对半枝莲多糖析出没有较大影响，只是含量的叠加。夏枯草对1：1配伍的白花蛇舌草与半枝莲的影响仍是总黄酮含量的析出增多，多糖类的含量变化不明显。

实施例9：实施例1-7水粗提取物喂养小鼠的抗肿瘤效果实验

黄酮类、萜类、多糖、甾醇类等均是抗肿瘤的活性成分。为了考察本发明提取物的抗肿瘤效果，采取了以下实验进行验证：

选取64只小鼠，分成8组，每组6只，分别命名为空白组、实施例1水粗提取物组、实施例2水粗提取物组、实施例3水粗提取物组、实施例4水粗提取物组、实施例5水粗提取物组、实施例6水粗提取物组、实施例7水粗提取物组。利用H22诱发肿瘤，空白组小鼠正常饲料喂养，各个实施例组用添加了相应实施例的水粗提取物(水煎剂浓缩液)的饲料进行喂养，检测抗肿瘤指标，观察提取物的抗肿瘤效果。实施例1-7提取物喂养小鼠的抗肿瘤效果如表2所示。

表2 实施例1-7提取物喂养小鼠的抗肿瘤效果

由表2数据可知，经过添加各实施例提取物的饲料喂养的小鼠相较于空白组小鼠存活天数均有延长，抑瘤率相较于空白组均有显著提高，平均生命延长率可达24.14％，平均抑瘤率可达31.98％，瘤重、肝脾指数、体重均低于空白组。因此通过对比实施例组与空白组小鼠的各个抗肿瘤指标，可以看出本发明得到的提取物具有良好的抗肿瘤作用。

通过对比各组与空白对照组的生长延长率，抑瘤率，肝脾指数等指标，可以看出白花蛇舌草、半枝莲、夏枯草三种药物各自均呈现出抗肿瘤作用，白花蛇舌草、半枝莲单独用药时表现出较好的抗肿瘤效果，夏枯草单独用药时的抗肿瘤作用弱于白花蛇舌草和半枝莲单独用药时的抗肿瘤作用，同时三种草药同时配伍时相互作用具有很好的效果，但当白花蛇舌草和半枝莲分别与夏枯草配伍时抗肿瘤活性低于半枝莲单独用药时的抗肿瘤活性，高于白花蛇舌草单独用药时的抗肿瘤活性；而白花蛇舌草与半枝莲配伍时的抗肿瘤作用呈现出了弱化现象。综上，中药配伍使用的效果，可能与配伍比例、组合前后总黄酮、总萜类、多糖类的析出有关，与多糖的免疫辅助作用有关。

虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (5)

1.一种具有抗肿瘤功效的中药提取物，其特征在于，提取自由白花蛇舌草、半枝莲和夏枯草组成的中药组合物，所述白花蛇舌草、半枝莲和夏枯草的质量比为2:2:1；所述白花蛇舌草、半枝莲和夏枯草均为中药植物的全草；所述中药提取物的制备方法是将上述中药组合物进行预处理，将预处理中药组合物经加热煎煮制成水煎剂，再进行71％的乙醇条件下过夜沉淀处理，获得醇溶物和醇沉物，将醇溶物和醇沉物分别用滤纸过滤，将滤液于100℃浓缩，直至蒸成膏状，然后于80℃干燥。

2.一种权利要求1所述提取物的制备方法，其特征在于，将权利要求1所述中药组合物进行预处理，将预处理中药组合物经加热煎煮制成水煎剂，再进行71％的乙醇条件下过夜沉淀处理，获得醇溶物和醇沉物，将醇溶物和醇沉物分别用滤纸过滤，将滤液于100℃浓缩，直至蒸成膏状，然后于80℃干燥。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述预处理，是用水浸泡中药组合物，浸泡条件为室温浸泡24小时，水的添加量为草药总药量的30倍。

4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述制成水煎剂，是将预处理中药组合物，在100℃煮沸条件下，熬制1.5小时，收集熬制液，再加入15倍水，熬制1小时，收集熬制液，合并两次药液，静置过夜，次日先收集上清液，沉淀物用3000rpm离心20分钟收集上清液，全部上清液在100℃煮沸条件下浓缩至500mL，最后100℃水浴，浓缩至100mL水煎剂，备用。

5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述乙醇过夜沉淀处理，是向100mL水煎剂浓缩液中加入300mL95％无水乙醇，使之成为71％乙醇，室温过夜24小时，获得醇溶物和醇沉物。