CN104542288B - 一种铁皮石斛组织培养液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.4‑0.6％第一母液、0.4‑0.7％第二母液、0.4‑0.6％第三母液和98‑99％第四母液；第一母液的组分包括：碘化钾0.1‑0.2g/L，硫酸锰2‑3g/L，硫酸锌1‑2g/L，硼酸1‑2g/L，钼酸钠0.05‑0.15g/L，硫酸铜0.008‑0.012g/L，氯化钴0.01‑0.03g/L；第四母液组分包括：香蕉泥70‑72g/L，硝酸铵0.7‑1g/L，硝酸钾0.8‑1.2g/L，氯化钙0.2‑0.3g/L，硫酸镁0.15‑0.2g/L，磷酸二氢钙0.05‑0.13g/L，白糖39‑42g/L，琼脂3.8‑4.3g/L。

Description

一种铁皮石斛组织培养液
技术领域
本发明涉及植物培养领域，尤其涉及一种铁皮石斛组织培养液。
背景技术
铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐-5℃的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药，中药名：石斛，属补益药中的补阴药，《中国药典》：益胃生津，滋阴清热。由于过度采挖和自然环境的破坏，1978年呗国家列为重点保护的濒危中药材。目前，在铁皮石斛人工培养的过程中，虽已经获得成功，但周期长，成活率低，出苗率低，导致产量和规模上不去，难以满足社会应用的需要。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种铁皮石斛组织培养液，配伍合理，不仅为铁皮石斛提供全面的营养物质，而且能使铁皮石斛快速促根生茎，还可提高铁皮石斛中多糖含量。
本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.4-0.6％第一母液、0.4-0.7％第二母液、0.4-0.6％第三母液和98-99％第四母液；第一母液的组分包括：碘化钾0.1-0.2g/L，硫酸锰2-3g/L，硫酸锌1-2g/L，硼酸1-2g/L，钼酸钠0.05-0.15g/L，硫酸铜0.008-0.012g/L，氯化钴0.01-0.03g/L；第二母液的组分包括：硫酸亚铁0.008-0.012mol/L，乙二胺四乙酸二钠0.01-0.05mol/L；第三母液的原料按重量份包括：肌醇4-8×103份，烟酸12-17份，盐酸吡哆醇25-35份，盐酸硫胺素3-9份，甘氨酸55-65份，蒸馏水1.5-2.5×105份；第四母液的组分包括：香蕉泥70-72g/L，硝酸铵0.7-1g/L，硝酸钾0.8-1.2g/L，氯化钙0.2-0.3g/L，硫酸镁0.15-0.2g/L，磷酸二氢钙0.05-0.13g/L，白糖39-42g/L，琼脂3.8-4.3g/L。
优选地，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均为水溶液。
优选地，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液的体积比为0.42-0.5：0.42-0.63：0.41-0.49：98-99。
优选地，第一母液的组分包括：碘化钾0.13-0.17g/L，硫酸锰2.3-2.5g/L，硫酸锌1.3-1.6g/L，硼酸1.6-1.9g/L，钼酸钠0.08-0.12g/L，硫酸铜0.009-0.011g/L，氯化钴0.015-0.025g/L。
优选地，第二母液中，硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的摩尔浓度比为0.9-1.1：2-4。
优选地，第三母液中，烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸的重量比为14-16：27-33：5-7：58-62。
优选地，第四母液的组分包括：香蕉泥70.5-71.5g/L，硝酸铵0.8-0.9g/L，硝酸钾0.9-1g/L，氯化钙0.21-0.24g/L，硫酸镁0.17-0.2g/L，磷酸二氢钙0.08-0.11g/L，白糖40-41g/L，琼脂4-4.2g/L。
本发明配伍合理，使氮磷钾等常量元素和微量元素的处于合理的比例之中，能够为铁皮石斛提供全面的营养物质，而有机物质和无机盐相互配合，能使铁皮石斛快速促根生茎，香蕉泥和白糖相互配合，大大提高本发明中的糖分含量，提高了铁皮石斛的能量供给，能够提高铁皮石斛中多糖含量，而且加入烟酸等维生素和甘氨酸，能够提高铁皮石斛中氨基酸等含量，提高铁皮石斛的生根率和生长速度，显著提高铁皮石斛的存活率。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.4％第一母液、0.7％第二母液、0.4％第三母液和98.5％第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾0.1g/L，硫酸锰3g/L，硫酸锌1g/L，硼酸2g/L，钼酸钠0.05g/L，硫酸铜0.012g/L，氯化钴0.01g/L；第二母液的组分包括：硫酸亚铁0.012mol/L，乙二胺四乙酸二钠0.01mol/L；第三母液的原料按重量份包括：肌醇8×103份，烟酸12份，盐酸吡哆醇35份，盐酸硫胺素3份，甘氨酸65份，蒸馏水1.5×105份；第四母液的组分包括：香蕉泥72g/L，硝酸铵0.7g/L，硝酸钾1.2g/L，氯化钙0.2g/L，硫酸镁0.2g/L，磷酸二氢钙0.05g/L，白糖42g/L，琼脂3.8g/L。
实施例2
本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.6％第一母液、0.4％第二母液、0.6％第三母液和98.4％第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾0.2g/L，硫酸锰2g/L，硫酸锌2g/L，硼酸1g/L，钼酸钠0.15g/L，硫酸铜0.008g/L，氯化钴0.03g/L；第二母液的组分包括：硫酸亚铁0.008mol/L，乙二胺四乙酸二钠0.05mol/L；第三母液的原料按重量份包括：肌醇4×103份，烟酸17份，盐酸吡哆醇25份，盐酸硫胺素9份，甘氨酸55份，蒸馏水2.5×105份；第四母液的组分包括：香蕉泥70g/L，硝酸铵1g/L，硝酸钾0.8g/L，氯化钙0.3g/L，硫酸镁0.15g/L，磷酸二氢钙0.13g/L，白糖39g/L，琼脂4.3g/L。
实施例3
本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.42％第一母液、0.63％第二母液、0.41％第三母液和98.54％第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾0.13g/L，硫酸锰2.5g/L，硫酸锌1.3g/L，硼酸1.9g/L，钼酸钠0.08g/L，硫酸铜0.011g/L，氯化钴0.015g/L；第二母液的组分包括：硫酸亚铁0.011mol/L，乙二胺四乙酸二钠0.02mol/L；第三母液的原料按重量份包括：肌醇7×103份，烟酸14份，盐酸吡哆醇33份，盐酸硫胺素5份，甘氨酸62份，蒸馏水1.8×105份；第四母液的组分包括：香蕉泥71.5g/L，硝酸铵0.8g/L，硝酸钾1g/L，氯化钙0.21g/L，硫酸镁0.2g/L，磷酸二氢钙0.08g/L，白糖41g/L，琼脂4g/L。
实施例4
本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.5％第一母液、0.42％第二母液、0.49％第三母液和98.59％第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾0.17g/L，硫酸锰2.3g/L，硫酸锌1.6g/L，硼酸1.6g/L，钼酸钠0.12g/L，硫酸铜0.009g/L，氯化钴0.025g/L；第二母液的组分包括：硫酸亚铁0.009mol/L，乙二胺四乙酸二钠0.04mol/L；第三母液的原料按重量份包括：肌醇5×103份，烟酸16份，盐酸吡哆醇27份，盐酸硫胺素7份，甘氨酸58份，蒸馏水2.2×105份；第四母液的组分包括：香蕉泥70.5g/L，硝酸铵0.9g/L，硝酸钾0.9g/L，氯化钙0.24g/L，硫酸镁0.17g/L，磷酸二氢钙0.11g/L，白糖40g/L，琼脂4.2g/L。
实施例5
本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.45％第一母液、0.43％第二母液、0.42％第三母液和98.7％第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾0.15g/L，硫酸锰2.39g/L，硫酸锌1.47g/L，硼酸1.74g/L，钼酸钠0.10g/L，硫酸铜0.01g/L，氯化钴0.02g/L；第二母液的组分包括：硫酸亚铁0.01mol/L，乙二胺四乙酸二钠0.03mol/L；第三母液的原料按重量份包括：肌醇6×103份，烟酸15份，盐酸吡哆醇30份，盐酸硫胺素6份，甘氨酸60份，蒸馏水2×105份；第四母液的组分包括：香蕉泥70.91g/L，硝酸铵0.82g/L，硝酸钾0.96g/L，氯化钙0.22g/L，硫酸镁0.19g/L，磷酸二氢钙0.09g/L，白糖40.52g/L，琼脂4.14g/L。
在无菌条件下取长有2-3节茎段的长度为1.5-2cm的有腋芽的铁皮石斛茎段作为外植体，将外植体分别置于实验组(实施例5制得的营养液)和对照组(普通MS培养液)中培养30天后进行比较，其中培养条件如下：温度为23-25℃，光照强度为1300-1800Lux，光照时间为12-13h/d。实验结果如下：
有上表可以看出：利用本发明制备的营养液进行培养铁皮石斛，大大提高铁皮石斛的生根率，能够显著提高铁皮石斛的生长速率，而且能大幅提高铁皮石斛中的多糖含量。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种铁皮石斛组织培养液，其特征在于，其原料按体积百分比为：0.4％-0.6％第一母液、0.4％-0.7％第二母液、0.4％-0.6％第三母液和98.4％-98.7％第四母液；
第一母液的组分包括：碘化钾0.1-0.2g/L，硫酸锰2-3g/L，硫酸锌1-2g/L，硼酸1-2g/L，钼酸钠0.05-0.15g/L，硫酸铜0.008-0.012g/L，氯化钴0.01-0.03g/L；
第二母液的组分包括：硫酸亚铁0.008-0.012mol/L，乙二胺四乙酸二钠0.01-0.05mol/L；
第三母液的原料按重量份包括：肌醇4×103-8×103份，烟酸12-17份，盐酸吡哆醇25-35份，盐酸硫胺素3-9份，甘氨酸55-65份，蒸馏水1.5×105-2.5×105份；
第四母液的组分包括：香蕉泥70-72g/L，硝酸铵0.7-1g/L，硝酸钾0.8-1.2g/L，氯化钙0.2-0.3g/L，硫酸镁0.15-0.2g/L，磷酸二氢钙0.05-0.13g/L，白糖39-42g/L，琼脂3.8-4.3g/L。
2.根据权利要求1所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均为水溶液。
3.根据权利要求1或2所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第一母液的组分包括：碘化钾0.13-0.17g/L，硫酸锰2.3-2.5g/L，硫酸锌1.3-1.6g/L，硼酸1.6-1.9g/L，钼酸钠0.08-0.12g/L，硫酸铜0.009-0.011g/L，氯化钴0.015-0.025g/L。
4.根据权利要求1或2所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第二母液中，硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的摩尔浓度比为0.9-1.1：2-4。
5.根据权利要求1或2所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第四母液的组分包括：香蕉泥70.5-71.5g/L，硝酸铵0.8-0.9g/L，硝酸钾0.9-1g/L，氯化钙0.21-0.24g/L，硫酸镁0.17-0.2g/L，磷酸二氢钙0.08-0.11g/L，白糖40-41g/L，琼脂4-4.2g/L。
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