CN104531659B - 胰蛋白酶消化液、制备方法及即用型痰消化装置 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种胰蛋白酶消化液、制备方法及即用型痰消化装置。所述胰蛋白酶消化液主要成分为胰蛋白酶与溶液稳定剂，其中，所述溶液稳定剂选自以下物质中的至少一种：糊精、海藻糖、牛血清白蛋白。本发明胰蛋白酶消化液不仅能在工作pH条件下稳定储存，还能在室温及工作浓度下稳定储存，大大减小了存储成本，即取即用，方便快捷。

Description

胰蛋白酶消化液、制备方法及即用型痰消化装置

技术领域

本发明属于痰消化液领域，具体地，涉及一种胰蛋白酶消化液、制备方法及即用型痰消化装置。

背景技术

痰消化液是一种用于消化痰标本、使痰液液化的试剂。作为一种辅助试剂，主要目的是使痰标本液化，均质化，使一些含量较低被包裹在黏蛋白中的致病菌能够释放到溶液中，提高致病菌的检出率，使检验医师在痰涂片和痰培养过程中，能够有更好的检出效果。

目前临床上痰液消化主要有两种途径：1.作用于蛋白质二硫键，且具有还原性质的化合物，如：二硫苏糖醇(DTT)，N-乙酰半胱氨酸(NAC)，三(2-羧乙基)膦(TCEP)，β-巯基乙醇等；2.作用于黏蛋白且具有消化能力的酶，如胰蛋白酶，糜蛋白酶等。胰蛋白酶(CAS：9002-07-7，Trypsin/Parenzyme)作为蛋白酶的一种，最适温度为37℃，最适pH为7.8-8.5，但pH值为2.0-3.0时活性稳定，pH值>5.0时易发生自溶从而导致失活，pH值>9.0时会发生不可逆失活。

研究表明，1.胰蛋白酶能作用于黏蛋白，通过分解黏蛋白来分离出包裹在黏蛋白中的细菌，从而提高致病菌的检出率及活性，为痰涂片和痰培养过程创造更良好条件；2.胰蛋白酶保持稳定的pH和工作pH有较大差异，保持稳定的最佳pH值为2-3，pH值>5时易自溶，而工作pH接近中性，约为7.8-8.5；3.胰蛋白酶的稳定储存的温度与工作温度有较大差异，稳定储存温度最适为-20℃，在室温条件下酶活性迅速降低；4.胰蛋白酶保持稳定的浓度与工作浓度有较大差异，在高胰蛋白酶浓度的条件下冷冻才能稳定储存，在低胰蛋白酶浓度的条件下室温储存稳定性差，24h后酶活性几乎降为0；5.稳定储存时胰蛋白酶浓度约为2.5wt％(-20℃冷冻)，而胰蛋白工作浓度通常为0.25wt％或0.125wt％左右。

现有的胰蛋白酶消化液的使用主要有以下两种形式：1.现配现用型，如英国Sputasol试剂，需要人工从高浓度稀释到低浓度的步骤，且稀释后2-8℃储存活性只能保持48小时。工作量大，效率低，耗时间，需要增加冷藏设备，同时试剂有效期短易造成浪费；2.部分胰蛋白酶商品化试剂需分开低温存储(A液+B液:A液为工作pH缓冲液，B液为高浓度低pH的胰蛋白酶)。使用时，先在痰标本中加入A液，处理一段时间后加入B液，从而达到胰蛋白酶的工作pH及工作浓度，对痰液进行消化。此种方法必然会增加试剂的存储成本，同时也存在工作量大，效率低，耗时间的问题，并且混合液的稳定性差。

采用上述第二种方式的胰蛋白酶商品化试剂甚至需要进行复融操作(A液需要-20℃冷冻)，并且在室温条件下无法长时间保持高活性，需要低温保存，从而大大增加操作时间及成本。

以上胰蛋白酶痰消化液的使用方法均存在步骤过多、操作繁琐等问题，大大增加医生时间成本和存储成本。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能在工作pH、工作浓度条件下，并且室温稳定存储的胰蛋白酶消化液。

另，本发明还提供一种上述胰蛋白酶消化液的制备方法。

此外，本发明还提供一种含有上述胰蛋白酶消化液的即用型痰消化装置。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是：

一种胰蛋白酶消化液，其主要成分为胰蛋白酶与溶液稳定剂，其中，所述溶液稳定剂选自以下物质中的至少一种：糊精、海藻糖、牛血清白蛋白。

本发明通过选择特定的溶液稳定剂，从而实现了所述胰蛋白酶消化液能够室温稳定存储，胰蛋白酶酶活性保持较高水平。作为消化液组成的一部分，胰蛋白酶的室温稳定期通常仅为数小时，不超过24小时，因此，通常需要低温储存且在2-8℃低温下稳定存储时间仅为几天至三周左右。而本申请通过在胰蛋白酶消化液中添加使胰蛋白酶稳定的特定的溶液稳定剂，使得消化液在室温下稳定储存至少7-10天，且酶活性保持初始酶活的80％以上。

其中，所述溶液稳定剂的含量可以为0.10-2.00wt％，进一步优选为0.10-1.00wt％。

现有技术中胰蛋白酶只能在高浓度低温条件下稳定储存，而在使用时将胰蛋白酶与工作pH缓冲液相混合配制以达到胰蛋白酶的工作浓度，从而对痰液进行消化，储存及操作繁琐，上述加有特定溶液稳定剂的胰蛋白酶消化液能够在室温下稳定存储，作为其优选，还可直接将所述胰蛋白酶配制至其工作浓度，即，在所述胰蛋白酶消化液中，将所述胰蛋白酶的含量配制为0.10-1.00wt％，进一步优选为0.10-0.60wt％。如此，既不造成胰蛋白酶的浪费，同时低浓度条件使得痰消化液对痰液标本处理过程更加温和。并且本申请发明人还发现，在加有特定溶液稳定剂的胰蛋白酶消化液中，若将胰蛋白酶的含量配制至其工作浓度，还能进一步提高痰消化液的储存稳定性，尤其是室温储存稳定性。

如现有技术中，通常将高浓度低pH胰蛋白酶与工作pH缓冲液相混合，一方面能够将所述胰蛋白酶配制至其工作浓度及工作pH，另一方面，加入的pH缓冲液还能够对消化后的细菌起到一定保护作用，避免细菌因外界环境的突然改变而死亡。

而本发明中作为进一步的优选，可直接将所述胰蛋白酶消化液配制至胰蛋白酶的工作pH条件，一方面节约了存储成本及时间成本，配制后的胰蛋白酶消化液可直接投入使用，而不需再分开存储A液及B液，也避免了现场配制等繁琐操作。另一方面也能对消化后的细菌起到一定保护作用。而要将所述胰蛋白酶消化液配制至胰蛋白酶的工作pH，本领域技术人员可通过加入适宜的pH缓冲液并将该胰蛋白酶消化液调至其工作pH即可，即，将所述胰蛋白酶消化液的PH值调节至4.00-9.00，进一步优选为6.00-8.00。

而本发明中优选生物缓冲剂及pH调节剂相配合使用将所述胰蛋白酶消化液的pH值调至其工作pH，一方面能够对消化后的细菌起到一定保护作用，另一方面还能够对所述胰蛋白酶的活性具有一定的保护作用，从而进一步提高该胰蛋白酶消化液的储存稳定性，尤其是室温储存稳定性，使胰蛋白酶消化液在室温下稳定储存12个月之久，且保持胰蛋白酶酶活性保持初始酶活的80％以上。

其中，所述生物缓冲剂的含量为0.50-3.00wt％，进一步地优选为1.00-2.00wt％。所述生物缓冲剂可以选自以下物质中的一种：N,N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)、N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)、三羟甲基甲胺基丙磺酸(TAPS)、2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)或硼酸。所述生物缓冲剂一方面能够保护胰蛋白酶活性，另一方面还能够使经过痰消化液消化的细菌处在相对中性的环境中，不会造成细菌周围环境的剧烈改变，有利于细菌的存活，从而提高致病菌的检出能力。

其中，所述pH调节剂可以为氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)等金属氢氧化物、或金属氢氧化物的溶液、或三羟甲基氨基甲烷(Tris)等。在胰蛋白酶消化液中添加pH调节剂配合生物缓冲剂使用，能将溶液pH值调至生物缓冲剂的缓冲范围且接近中性，保证消化后细菌不会因为环境的改变而死亡，提高细菌检出率。同时，该pH条件使得胰蛋白酶直接处于工作pH条件下，不需要额外的低pH储存条件，从而简化了A液与B液分开储存再混合的繁琐步骤。

作为本发明中的进一步优选，为使配制后的胰蛋白酶消化液的致病菌检出率更高，保护消化后的细菌避免其死亡，所述胰蛋白酶消化液还包括1.00-8.00wt％的离子强度调节剂，进一步地优选为3.00-6.00wt％。所述离子强度调节剂可以为以下物质中的至少一种：氯化钙(CaCl₂)，氯化镁(MgCl₂)，氯化钠(NaCl)。所述离子强度调节剂能够保证细菌细胞膜内外渗透压的平衡，不会因为消化后细菌内外渗透压发生强烈变化导致细菌裂解，有利于细菌的存活。

其中，所述胰蛋白酶消化液还包括作为溶剂的水，更进一步为纯化水。

本发明还提供一种以上胰蛋白酶消化液的制备方法，包括以下步骤：

a.取部分溶剂，加入所述比例的生物缓冲剂混匀后，用pH调节剂调节溶液的pH值至4.00-9.00；

b.加入所述比例的溶液稳定剂及离子强度调节剂至溶解；

c.加入所述比例的胰蛋白酶至溶解，将剩余溶剂加入，过滤，即可制得胰蛋白酶消化液；

其中，所述溶液稳定剂选自以下物质中的至少一种：糊精、海藻糖、牛血清白蛋白。

更具体地，上述胰蛋白酶消化液的制备方法还可以具体为以下步骤：

取部分纯化水冷却至5-20℃，加入所述比例的能够保护胰蛋白酶活性的生物缓冲剂，搅拌混合；混合后用pH调节剂调pH值至4.00-9.00；在5-20℃条件下，加入所述比例的溶液稳定剂和离子强度调节剂混匀，再加入所述比例的胰蛋白酶，搅拌至胰蛋白酶溶解，静置，定容，经孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，即制得可用于痰液消化的胰蛋白酶消化液。

通过本发明所述的方法及配方即可制得所述胰蛋白酶消化液，该消化液既能在室温下保持稳定，也能在工作浓度下保持稳定，还能在工作pH条件下稳定存储，即取即用，而不需在2-8℃和-20℃的低温储存条件，节约成本。而将该消化液装入痰培养瓶/痰培养皿中即可制成即用型痰消化装置，将痰液标本加入该即用型痰消化装置中，经过10-40min的消化后，将均质化处理后的痰标本在洁净玻片上涂片或接种至恰当的培养基上，即可进行染色或培养等后续操作步骤。整个过程方便快捷，大大减少了医生的工作量和时间。且将该即用型痰消化装置置于室温、避光的条件下可稳定储存12个月，胰蛋白酶仍能保持较高的活性，即取即用，性能优良。

综上，本发明的有益效果是：由本发明所述配方组成的胰蛋白酶消化液能保证胰蛋白酶在室温条件下保持稳定，减少了低温存储的成本，省时省力，方便快捷。

附图说明

图1为痰液标本的培养结构对照图，其中，A为经过本发明实施例1所述的胰蛋白酶处理后的痰液的培养结果，B为未经过处理的痰液的培养结果；

图2为痰液标本的培养结构对照图，其中，A为经过本发明实施例2所述的胰蛋白酶处理后的痰液的培养结果，B为未经过处理的痰液的培养结果；

图3为痰液标本的培养结构对照图，其中，A为经过本发明实施例3所述的胰蛋白酶处理后的痰液的培养结果，B为未经过处理的痰液的培养结果。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，但本发明的实施方式并不限于此。

实施例1

1.配方：

2.工艺步骤

(1)取料：按上述配方取合格的HEPES，NaOH，NaCl，糊精，胰蛋白酶以及纯化水；

(2)配制：先取60％(v/v)配制用纯化水，加入HEPES，搅拌混匀，用NaOH调节pH至6.50；

(3)加入NaCl和糊精，搅拌溶解，过滤；

(4)加入胰蛋白酶，搅拌溶解，加入剩余纯化水定容至痰消化液的体积为1L，经孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，得到痰消化液。

3.性能测试

以苯甲酰L—苯精氨酸乙酯(英文为benzoyl L-arginine ethyl ester，缩写为BAEE)为底物，用紫外吸收法进行测定。苯甲酰L—精氨酸乙酯在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲酰L—精氨酸(英文缩写为BA)。在胰蛋白酶的催化下，随着酯键的水解，苯甲酰L—精氨酸逐渐增多，反应体系的紫外吸收也随之相应增加。

胰蛋白酶酶活单位定义：在光程1cm、波长253nm、温度25℃、测量体积3ml的条件下，吸光值每分钟递增0.001(ΔA_253nm/min＝0.001)为1个BAEE酶活性单位。

采用Sigma公司推荐的苯甲酰精氨酸乙酯(benzoyl L-arginine ethyl ester，BAEE)法，用紫外可见光分光光度计(波长λ＝253nm)测定胰蛋白酶的活性，记录胰蛋白酶与BAEE的吸光度变化值(ΔA_253nm/min)并依据吸光度变化值计算胰蛋白酶活性，观察试剂的稳定性。

将一份痰液标本均分为两组，其中一组加入上述制得的痰消化液消化作为实验组，另一组作为空白对照组，实验组经过10-40min的消化后，将两组痰标本接种至恰当的培养基上培养48h后如图1所示结果，可以看出，经过本实施例1所示的胰蛋白酶消化液处理后，培养皿中的致病菌生长较好，说明被包含在痰液中的致病菌得到有效释放，致病菌的检出率得到提高。

表1 实施例1测试数据

实施例2

1.配方：

2.工艺步骤

(1)取料：按上述配方取合格的MES，NaOH，MgCl₂，海藻糖，胰蛋白酶以及纯化水；

(2)配制：先取60％(v/v)配制用纯化水，加入MES，搅拌混匀，用KOH调节pH至7.50，

(3)加入MgCl₂和海藻糖，搅拌溶解，过滤；

(4)加入胰蛋白酶，搅拌溶解，加入剩余纯化水定容至痰消化液的体积为1L，经孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，得到痰消化液。

3.性能测试

采用与实施例1相同的方法测试上述痰消化液的吸光度变化值及胰蛋白酶活性，并记录于下表2中。

将一份痰液标本均分为两组，其中一组加入上述制得的痰消化液消化作为实验组，另一组作为空白对照组，实验组经过10-40min的消化后，将两组痰标本接种至恰当的培养基上培养48h后如图2所示结果，可以看出，经过本实施例2所示的胰蛋白酶消化液处理后，培养皿中的致病菌生长较好，说明被包含在痰液中的致病菌得到有效释放，致病菌的检出率得到提高。

表2 实施例2测试数据

实施例3

1.配方：

2.工艺步骤

(1)取料：按上述配方取合格的TAPS，NaOH，MgCl₂，NaCl，BSA，胰蛋白酶以及纯化水；

(2)配制：先取60％(v/v)配制用纯化水，加入TAPS，搅拌混匀，用NaOH调节pH至8.00；

(3)加入MgCl₂、NaCl以及BSA，搅拌溶解，过滤；

(4)加入胰蛋白酶，搅拌溶解，加入剩余纯化水定容至痰消化液的体积为1L，经孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，得到痰消化液。

3.性能测试

采用与实施例1相同的方法测试上述痰消化液的吸光度变化值及胰蛋白酶活性，并记录于下表3中。

将一份痰液标本均分为两组，其中一组加入上述制得的痰消化液消化作为实验组，另一组作为空白对照组，实验组经过10-40min的消化后，将两组痰标本接种至恰当的培养基上培养48h后如图3所示结果，可以看出，经过本实施例3所示的胰蛋白酶消化液处理后，培养皿中的致病菌生长较好，说明被包含在痰液中的致病菌得到有效释放，致病菌的检出率得到提高。

表3 实施例3测试数据

参照例1

1.配方：

2.工艺步骤

(1)取料：按上述配方取合格的MES，NaOH，MgCl₂，PEG6000，胰蛋白酶以及纯化水；

(2)配制：先取60％(v/v)配制用纯化水，加入MES，搅拌混匀，用NaOH调节pH至7.50；

(3)加入MgCl₂和PEG6000，搅拌溶解，过滤；

(4)加入胰蛋白酶，搅拌溶解，加入剩余纯化水定容至痰消化液的体积为1L，经孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，得到痰消化液。

3.性能测试

采用与实施例1相同的方法测试上述痰消化液的吸光度变化值及胰蛋白酶活性，并记录于下表4中。

表4 参照例1测试数据

参照例2

1.配方：

2.工艺步骤

(1)取料：按上述配方取合格的TAPS，NaOH，MgCl₂，NaCl，蔗糖，胰蛋白酶以及纯化水；

(2)配制：先取60％(v/v)配制用纯化水，加入TAPS，搅拌混匀，用NaOH调节pH至8.0；

(3)加入MgCl₂、NaCl以及蔗糖，搅拌溶解，过滤；

(4)加入胰蛋白酶，搅拌溶解，加入剩余纯化水定容至痰消化液的体积为1L，经孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤，得到痰消化液。

3.性能测试

采用与实施例1相同的方法测试上述痰消化液的吸光度变化值及胰蛋白酶活性，并记录于下表5中。

表5 参照例2测试数据

实施例4

将20.00g(2.00wt％)糊精与部分纯化水混合搅拌均匀，加入1.00g(0.10wt％)胰蛋白酶，混匀后，加入纯化水至溶液的体积为1L。

采用与实施例1相同的方法测试上述制得的溶液的吸光度变化值及胰蛋白酶活性，并记录于下表6中，观察稳定性。

表6 实施例4测试数据

实施例5

取部分配制用纯化水，加入11.92g(1.19wt％)HEPES，搅拌混匀，用NaOH调节pH至6.50，加入8.00g(0.80wt％)糊精，搅拌溶解，加入25.00g(2.50wt％)胰蛋白酶，搅拌溶解，加入剩余纯化水定容至溶液的体积为1L，经孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤即可。

采用与实施例1相同的方法测试上述痰消化液的吸光度变化值及胰蛋白酶活性，并记录于下表7中。

表7 实施例5测试数据

实施例6

取部分配制用纯化水，加入11.92g(1.19wt％)HEPES，搅拌混匀，用NaOH调节pH至7.40，加入5.00g(0.50wt％)海藻糖，加入5.00g糊精(0.50wt％)，搅拌溶解，加入5.00g(0.50wt％)胰蛋白酶，搅拌溶解，加入剩余纯化水定容至溶液的体积为1L，经孔径为0.45μm和0.22μm的滤膜过滤即可。

采用与实施例1相同的方法测试上述痰消化液的吸光度变化值及胰蛋白酶活性，并记录于下表8中。

表8 实施例6测试数据

通过本发明实施例1-6，可以看出，本发明通过对所述溶液稳定剂进行特定选择，即，选自本发明所述的糊精、海藻糖、或牛血清白蛋白中的至少一种，使得所述胰蛋白酶能够在室温下稳定储存至少7-10天，且胰蛋白酶的酶活性仍能保持初始酶活的80％以上。

通过实施例1-3与参照例1-2相对比，可以看出，相比于选用本领域常用的其他溶液稳定剂(具体如聚乙二醇PEG6000和蔗糖等)，采用本发明所特定选择的溶液稳定剂(糊精、海藻糖、或牛血清白蛋白中的至少一种)，可以明显改善制备得到的胰蛋白酶消化液的室温储存稳定性。从表1-5中室温保存的胰蛋白酶活性的数据来看，参照例1制备的痰消化液中的胰蛋白酶活性仅仅在第1天时就下降至初始酶活的54％，第14天时更是下降至初始酶活的13％，参照例2制备的痰消化液中的胰蛋白酶活性仅仅在第1天时就下降至初始酶活的46％，第14天时更是下降至初始酶活的7％，而实施例1-3制备的痰消化液中的胰蛋白酶活性在第14天时仍能保持初始酶活的97％以上，在12个月时仍能保持初始酶活的80％以上。

通过实施例1-4及实施例6与实施例5相对比，可以看出，在痰消化液中加入本发明所选择的特定溶液稳定剂后，不仅能使高浓度的胰蛋白酶在室温下稳定存储，更能使低浓度(即，工作浓度)的胰蛋白酶在室温下稳定存储，作为优选，将胰蛋白酶配制至工作浓度(即，0.10-1.00wt％)，一方面有利于简化痰消化的处理步骤，另一方面还能保证胰蛋白酶在室温下更为长久的存储，如表1-3及7-8所示数据显示，当胰蛋白酶含量为0.10-1.00wt％范围内时，该痰消化液可在室温下稳定存储12个月甚至13个月之久，而胰蛋白酶的活性仍能保持初始酶活性的80％以上，当胰蛋白酶含量不在上述范围内时，痰消化液在室温下的稳定存储性能有所下降，存储至第7天时酶活性仍能保持初始酶活的81％左右，而至第14天时酶活性降至初始酶活的44％。

目前市场上现配现用的胰蛋白酶消化液的稳定期通常仅为数小时，不超过24小时，而为保证胰蛋白酶的酶活性通常是将胰蛋白酶置于低pH(约为2.0-3.0)低温(2-8℃或-20℃)的环境条件中储存，使用时再进行配制，这样不仅提高了成本，还增加了操作的复杂度，并且此种方法的胰蛋白酶的储存稳定性仍较差，通常在-20℃下也仅能稳定存储6个月左右。而本发明中通过选择特定的溶液稳定剂，使得胰蛋白酶在工作pH(4.00-9.00)的环境中也能保持高的酶活至少7-10天，在室温下存储7天仍能达到初始酶活的80％以上，而在胰蛋白酶含量满足本发明所述范围时，制得的痰消化液还能达到室温稳定存储13个月之久。

采用本发明所述的胰蛋白酶消化液还能用于制备即用型痰消化装置，即，将上述各实施例制备的胰蛋白酶消化液装于痰杯中，在密闭、避光的条件下储存，可稳定储存12个月之久。本发明中所述的稳定储存的意思均是指储存预定时间后，消化液中的胰蛋白酶活性与刚配制得到的消化液中的胰蛋白酶活性相差不大，至少保持初始酶活性的80％以上。需要使用时，直接将痰标本加入到上述装有胰蛋白酶消化液的痰杯中(此步骤可由病人或医生完成)，经过10-40min的消化后，将均质化处理后的痰标本在洁净玻片上涂片或接种至恰当的培养基上，进行染色或培养的后续操作步骤，方便简单，大大减少了医生的工作量和时间。

综上所述，由本发明所述配方组成的胰蛋白酶消化液能保证胰蛋白酶能够在工作pH条件下保持稳定，且可直接置于室温下存储，即取即用，而不需在2-8℃和-20℃的低温储存条件，节约成本。

如上所述，可较好的实现本发明。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，依据本发明的技术实质，在本发明的精神和原则之内，对以上实施例所作的任何简单的修改、等同替换与改进等，均仍属于本发明技术方案的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种胰蛋白酶消化液，其特征在于，由以下重量份组分组成：4-羟乙基哌嗪乙磺酸11.92g，氢氧化钠0.83g，氯化钠45.00g，糊精8.00g，胰蛋白酶1.00g，将上述组分用纯化水定容至1L；或由以下重量份组分组成：2-(N-吗啉)乙磺酸19.50g，氢氧化钾1.40g，氯化镁32.00g，海藻糖5.00g，胰蛋白酶2.50g，将上述组分用纯化水定容至1L；或由以下重量份组分组成：三羟甲基甲胺基丙磺酸12.10g，氢氧化钠1.80g，氯化镁25.00g，氯化钠9.00g，牛血清白蛋白6.50g，胰蛋白酶5.00g，将上述组分用纯化水定容至1L。

2.一种如权利要求1所述的胰蛋白酶消化液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.取部分溶剂，加入生物缓冲剂混匀后，用pH调节剂调节溶液的pH值至4.00-9.00，所述生物缓冲剂为4-羟乙基哌嗪乙磺酸或2-(N-吗啉)乙磺酸或三羟甲基甲胺基丙磺酸，所述pH调节剂为氢氧化钠或氢氧化钾；

b.加入溶液稳定剂及离子强度调节剂至溶解，所述溶液稳定剂为糊精或海藻糖或牛血清白蛋白，所述离子强度调节剂为氯化镁或氯化钠；

c.加入胰蛋白酶至溶解，将剩余溶剂加入，过滤，即可制得胰蛋白酶消化液；

其中，所述溶液稳定剂选自以下物质中的至少一种：糊精、海藻糖、牛血清白蛋白。

3.一种装有如权利要求1所述的胰蛋白酶消化液的即用型痰消化装置。