CN104523679A - 青蒿琥酯在制备治疗、预防中枢神经损伤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了青蒿琥酯在制备治疗、预防中枢神经损伤药物中的新用途。本发明提出青蒿琥酯对体外培养的神经干细胞的增殖具有促进作用，同时可以有效减少脑梗塞大鼠的梗死灶，并改善脑卒中造成的神经功能缺损，且安全，无明显毒、副作用。

Description

青蒿琥酯在制备治疗、预防中枢神经损伤药物中的应用

技术领域

本发明涉及青蒿琥酯的新用途，具体涉及青蒿琥酯在制备治疗、预防中枢神经损伤的药物中的应用。

背景技术

脑血管病是威胁我国中老年人健康的最大致死致残病因。对它现有的治疗手段并不能带来让人满意的预后。神经干细胞(Neural Stem Cells，NSCs)主要存在于侧脑室壁的室管膜下区和海马的齿状回区，是一群可以自我更新、干性维持和分化为有功能神经元的特殊细胞。

青蒿琥酯(Artesunate，ART)是半倍萜内酯化合物青蒿素的水溶性衍生物，其具有高效、低毒的抗疟作用，易通过血脑屏障，在临床中被广泛用于疟疾的治疗(郭兴伯等.青蒿琥酯中治疗恶性疟疾100例的临床观察.中华医学杂志，1989：69(9)：515)。而目前为止，没有关于该药对NSCs影响的报道发表。

发明内容

本发明的目的在于提供青蒿琥酯的新用途。

青蒿琥酯在制备治疗、预防中枢神经损伤药物中的应用。其在神经创伤后血管神经网络修复中起作用。

青蒿琥酯在制备治疗、预防缺血性脑卒药物中的应用。

青蒿琥酯在制备减轻或消除脑梗塞缺血灶药物中的应用。

青蒿琥酯在制备促进神经干细胞增殖药物中的应用。进一步地，青蒿琥酯促进大脑室管膜下区(Subventricular Zone，SVZ)神经干细胞(Neural Stem Cells，NSCs)增殖的应用。

经实验证明，青蒿琥酯对神经干细胞增殖有促进作用；体外可诱导神经干细胞增殖；体内可有效减少脑梗塞的缺血灶。以青蒿琥酯为活性成分可制备成治疗缺血性脑卒中的药物。

上述药物中可以加入一种或多种药理学上可接受的辅料。所述辅料包括药学领域中常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活化剂、润滑剂或稳定剂等。

上述药物可以制成水溶液或粉剂等适用于注射用的药物形式，其中，水溶液为优选剂型。

上述药物在使用时可静脉滴注或肌肉注射，一般1天应用1次，7天为一个疗程。

有益效果

1.本发明提出青蒿琥酯可促进NSCs在脑内神经细胞受到损伤后激活、增殖、分化为神经前体细胞(Neuroblasts)并向损伤灶迁移，在损伤的神经网络系统中重新整合，修复损伤的神经网络结构并可替代坏死神经元发挥相应的神经功能。脑缺血发生后，由于神经元对血氧的特殊依耐性，短期内就会有大量的有功能神经细胞死亡，给预后带来极其不利的影响。青蒿琥酯通过早期激活内源性NSCs的增殖替代缺血灶周围坏死神经元而发挥功能，可用于脑梗塞的治疗。

2.本发明细胞实验证明：青蒿琥酯对体外培养的神经干细胞的增殖具有促进作用；动物实验表明，青蒿琥酯可以有效的减少脑梗塞大鼠的梗死灶并改善脑卒中造成的神经功能缺损，且安全，无明显毒、副作用。以青蒿琥酯为活性成分可制备成治疗缺血性脑卒中的药物。

附图说明

图1 实施例1中通过CCK8法测得各种剂量的ART对NSC数目和活性的影响，800nmol/L组较对照组细胞数目活性显著提高；

图2 实施例1免疫荧光结果显示：ART组的NSC增殖数量较对照组明显增加；

图3 实施例2中MCAO动物72h后的MRI照片，可见ART组动物脑梗死灶较对照组显著缩小

图4 实施例2中MCAO动物处理后72h的MRI照片，可见ART组动物脑梗死灶较对照组显著缩小(标示的红色箭头所指向和图中线条圈出的区域为梗死区域，与图3为同一图)

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步详细说明。以下实施例仅限于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1 青蒿琥酯在离体条件下对神经干细胞增殖的影响

选取孕14.5d SD大鼠，5％水合氯醛腹腔麻醉，打开腹膜，取出胚胎，去除头皮、头骨和硬膜，剥离鼠脑。在解剖显微镜下，以嗅球为中心矢状位纵切，于室管膜下区取材。加入增殖培养基(DMEM/F12，bFGF 20ng/mL，EGF 20ng/mL，2％B27)，经200目滤网过滤后，台盼蓝染色后细胞计数，调整细胞数为1×10⁶/ml，转入培养瓶，放入5％CO2、37℃恒温孵箱中培养，三天传代一次。

取对数期生长的NSCs，0.25％EDTA胰蛋白酶消化2min，10％DMEM/F12终止消化后，调整细胞数至8000/100μL，接种于的96孔板，置于5％CO2、37℃恒温培育箱中。24h后贴壁生长，弃上清，设置空白对照组和400nmol/L ART组、800nmol/L ART组、1.6μmol/L ART组、3.2μmol/L ART组，6.4umol/L ART组，所述浓度是指每孔中ART终浓度，每组6个复孔，孵育72h后取出。每孔加入10μL CCK-8，孵育2.5小时后，使用多功能读数仪(Thermo Scientific)比色读数，设定波长450nm，分别测定光密度值，结果如图1。

取对数期生长的NSCs，0.25％EDTA胰蛋白酶消化2min，10％DMEM/F12终止消化后，调整细胞数至8000/100μL，接种于的96孔板，置于5％CO2、37℃恒温培育箱中。24h后贴壁生长，弃上清，设置空白对照组、800nmol/L ART组共两组。每组6个复孔，孵育72h后取出。PBS缓冲液清洗3次，75％乙醇固定30min，PBS缓冲液清洗3次，加入0.5％的Triton X-100，静置20min，缓冲液洗3次，BSA封闭20min，分别加入Ki67一抗(细胞增殖标志物)。4℃过夜，缓冲液洗3次，加入相应的荧光二抗，37℃下反应1h，用缓冲液洗3次，复染DAPI，甘油封片。在相差倒置显微镜下观察Ki67阳性细胞并拍照计数，如图2(merge组是指KI67和DAPI的融合荧光)。

实施例2 青蒿琥酯对大脑中动脉闭塞模型大鼠缺血灶的影响

大鼠大脑中动脉线栓法建立大鼠MCAO模型。实验动物5％水合氯醛腹腔注射全麻，经颈前正中切口、暴露并分离右侧颈总动脉(common carotid artery，CCA)及颈动脉分叉，眼科剪直视下于颈总动脉剪一小口，将栓线经此小口置入颈总动脉内向前推进至大脑中动脉分叉发出处，梗阻大脑中动脉血流。设置对照组(术后腹腔注射等量生理盐水)和实验组(术后腹腔注射青蒿琥酯水溶液100mg/kg)，每组六只动物。72h后行小动物7.0T头颅MR检查，检查结果如图3。

对照组和实验组两组动物在注射生理盐水和青蒿琥酯水溶液后，活动正常，无明显毒性呈现，连续观察14天无动物发生死亡，两组间无明显的毒性差异。

Claims (5)

1.青蒿琥酯在制备治疗、预防中枢神经损伤药物中的应用。

2.青蒿琥酯在制备治疗、预防缺血性脑卒药物中的应用。

3.青蒿琥酯在制备减轻或消除脑梗塞缺血灶药物中的应用。

4.青蒿琥酯在制备促进神经干细胞增殖药物中的应用。

5.青蒿琥酯促进大脑室管膜下区神经干细胞增殖的应用。