CN104519884A

CN104519884A - 轻度认知障碍的预防和/或治疗剂

Info

Publication number: CN104519884A
Application number: CN201380031661.4A
Authority: CN
Inventors: 猪原匡史; 真木崇州; 田口明彦
Original assignee: Foundation for Biomedical Research and Innovation at Kobe
Current assignee: Foundation for Biomedical Research and Innovation at Kobe
Priority date: 2012-06-15
Filing date: 2013-06-14
Publication date: 2015-04-15
Also published as: BR112014031154A2; WO2013187075A1; JP5715303B2; IL236226A0; AU2013275628A1; KR20150027800A; EP2862572A1; EP2862572B1; US20150152084A1; US20170312265A1; CA2876371A1; JP2015110665A; EP2862572A4; US20160008348A1; US10016409B2; RU2015101100A; ZA201409134B; US9737524B2; JP6188737B2; MX2014015310A

Abstract

提供一种轻度认知障碍的预防和/或治疗药，改善脑血管等的间质流以充分清除聚积在大脑内的有害蛋白质。该预防和/或治疗药以6-[4-(1-环己基-1H-戊四唑-5-基)丁氧基]-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮或其盐为有效成分。由此，血管周围的间质液在双排出通路内的流动得到改善，从而排出有毒蛋白质。本发明的轻度认知障碍的预防和/或治疗药可为口服给药制剂、口服给药液体制剂或注射剂。本发明的轻度认知障碍的预防和/或治疗药能够用于脑淀粉样血管病的预防和/或治疗，也能够用于改善路易体病、唐氏综合症或黄斑变性。

Description

轻度认知障碍的预防和/或治疗剂

技术领域

本发明涉及一种轻度认知障碍的预防和/或治疗剂，所述轻度认知障碍的预防和/或治疗剂通过改善中枢神经系统内的有害蛋白质的排出通路，即脑间质流动功能，来提高脑神经功能。

背景技术

轻度认知障碍(MCI：Mild cognitive impairment)是指发生没有达到痴呆症程度的认识功能障碍的病例，虽然处于不妨碍基本日常生活的状态，但是为一种产生忘记重要约定，难以旅行到最初位置等症状的疾病。

在MCI中，不管聚积的有害蛋白质的种类是哪一种，在初期会观察到轻度认知功能障碍，但此时大多尚未发生脑神经组织的不可逆变性。另一方面，在已发生伴随脑淀粉样血管病的痴呆症、额颞叶型痴呆症、路易体型痴呆症、阿尔茨海默型痴呆症、伴随帕金森氏病的痴呆症等痴呆症的患者中，在病理上也大多认为不可逆的神经变性。

MCI并非只是伴随脑淀粉样血管病的痴呆症、额颞叶型痴呆症、路易体型痴呆症、阿尔茨海默型痴呆症、伴随帕金森氏病的痴呆症、朊病毒疾病等特定痴呆症的前期，在MCI患者中，观察到路易体性变化、进行性核上性麻痹性变化、阿尔茨海默变化、嗜银颗粒性变化、血管障碍性变化等各种各样的病理性变化，与单一病理变化相对(非专利文献1)。

如上所述，MCI应定位为区别于公知的各种痴呆症的疾病，实际上也是如此。一般社团法人日本神经学会在网站上公布的“痴呆症疾病治疗指南”(http://www.neurology-jp.org/guidelinem/nintisyo.html)中，MCI与一般痴呆症并列地设立项目，作为区别于痴呆症的单独疾病对待。在MCI诊断中，在确认“是否妨碍日常生活活动”、“认知功能下降”、“不能称之为痴呆症”等而判断为MCI之后，根据有无记忆障碍而分类为遗忘症MCI(amnestic MCI)或非遗忘症MCI(non-amnestic MCI)，引入对其进一步细分的概念(请参照本指南第四章经过与治疗计划、B.轻度认知障碍、项目CQ IV B-1、108-109页)。

MCI患者可能一直停留在MCI状态，也不知道转化为上述各种痴呆症中的哪一种。因此，即使统计学上示出了假设某种药剂对阿尔茨海默型痴呆症或脑血管性痴呆症、路易体型痴呆症、额颞叶型痴呆症、伴随帕金森氏病的痴呆症等某种特定痴呆症是有效的，但该药剂对MCI是否有效仍完全不知。因此，当诊断为MCI时，如上述一样，由于MCI可能转化为各种类型的痴呆症，因此显然，希望特别是65岁以上的高龄者进行早期的风险管理与MCI治疗。

实际上，对于公知的痴呆症治疗药，以确认对MCI的效果为目的进行了很多临床试验。然而，根据上述“痴呆症疾病治疗指南”，对于作为痴呆症治疗药有名的乙酰胆碱酯酶抑制剂，即多奈哌齐(安理申)、利凡斯的明(艾斯能)及加兰他敏(利忆灵)，最终结果为对MCI患者的效果极其有限或者无效，因此，认为这些药剂不具有从MCI向痴呆症或阿尔茨海默症的转化预防效果(请参照本指南第四章经过与治疗计划、115页)。这也明确记载在非专利文献2中(请参照585页第3项)。

而且该指南还示出了在以没有痴呆症的65岁以上闭经女性为对象的随机对比试验中(RCT)，雌激素违反本意地显著提高痴呆症或MCI发病风险(本指南115-116页第2项、其他药剂(1))，即使给药非甾体性抗炎药的罗非昔步(rofecoxib)(COX-2抑制剂)也没有呈现出预防效果(本指南116页第2项、其他药剂(2))。或者，对于最近作为痴呆症治疗药使用的Ginkgo biloba(银杏叶提取物)或维生素E，在以MCI患者为对象的RCT中也没有呈现出痴呆症预防效果或向阿尔茨海默症转化的预防效果(本指南116页第2项、其他药剂(3)及(4))。在此基础上，还存在维生素E或多奈哌齐不影响从MCI向阿尔茨海默症转化的报告(非专利文献3)。

因此，可以说目前不存在对预防从MCI向痴呆症转化的有效药及对MCI治疗有用的方法或药剂，希望早期开发MCI预防及治疗剂。

西洛他唑是由大冢制药有限公司以“培达”商品名销售，除此之外还存在许多后期产品的抗血小板药。西洛他唑在抑制血栓形成的同时，具有血管扩张作用。因此，西洛他唑被用于脑梗塞治疗已众所周知(非专利文献4)，西洛他唑对血管内皮的保护效果(非专利文献5)或由内皮非依赖性血管扩张产生的血流改善效果(非专利文献6)也是公知的。而且，西洛他唑减少淀粉样β(下面有时简单地记载为“Aβ”)蛋白质的聚积也众所周知。

另外，对于将西洛他唑应用于具体疾病也存在一些文献，例如公开了用于治疗淀粉样β蛋白质诱发性认知障碍、阿尔茨海默症(非专利文献7)或治疗痴呆症也有效(非专利文献8)。另外，已知西洛他唑抑制淀粉样β蛋白诱发性认知障碍或氧化应激(非专利文献9)。而且，专利文献1中示出了使用西洛他唑能够治疗阿尔茨海默症。然而，在这些文献中只是使用模型动物验证其治疗效果，并未示出西洛他唑对人的治疗效果。

另一方面，非专利文献10中公开了通过向阿尔茨海默症患者给药西洛他唑来抑制认知功能下降，但认为在Mini-Mental State Examination(MMSE)中没有变化，另外对于评价阿尔茨海默症的认知功能的其他评价方法(ADAS-Jcog、WMS-R、TMT-A)也很难说有很大改善(另外，在认知功能的诊断中，MMSE是最优的筛检被记载在上述指南的第II章、32页中)。或者，非专利文献11中记载了由于组合给药西洛他唑与多奈哌齐，从而确认了阿尔茨海默症患者的MMSE评分改善倾向，但这不能称之为西洛他唑的单独效应。

终究，对于西洛他唑单独对MCI患者的治疗是否有用，目前实质上并未与数据一起示出，不管MCI是否被定位为各种痴呆症或阿尔茨海默症的前期疾病，都不存在有效的治疗剂。

另外，在中枢神经系统的大脑中，Tau蛋白或突触核蛋白、泛素化蛋白、淀粉样蛋白、朊病毒蛋白等有害蛋白质聚积导致脑神经功能的功能下降，但在高龄者中很少仅聚积这些有害蛋白质中的一种，在大多数病例中有多种有害蛋白质聚积，其种类或程度在每个人中都是不相同(非专利文献1、12)。

认为由于这种有害蛋白质聚积，导致MCI那样的认知障碍发生。例如，在60％-70％的MCI患者中确认到有淀粉样β聚积(非专利文献13)，认为该排出有助于MCI的预防及治疗。

作为这种有害蛋白质共用的排出通路，存在经由血管周围淋巴排液通路(间质流)的排出(非专利文献14)，在目前状况下，并不知道使血管周围淋巴排液通路(间质流)充分活性化的方法或药剂。

专利文献

专利文献1：专利第4590397号公报

非专利文献

非专利文献1：Neuropathology.2007；27(6):578-584.Neuropathology of mildcognitive impairment.Saito Y,Murayama S.

非专利文献2：神经科杂志(2011)113卷6号、584-592

非专利文献3：The New England Journal of Medicine,June 9,2005,vol.352No.23,pp.2379-2388

非专利文献4：Br J Pharmacol.2011；72:634-646/Lancet Neurol 2010；9:959-968

非专利文献5：Stroke 2012；43:499-506

非专利文献6：Stroke 1989；20:668-673

非专利文献7：Biochem Biophys Res Commun.2011May 20；408(4):602-8.

非专利文献8：J pn J Radiol.2010；28:266-272

非专利文献9：Br J Pharmacol 2010Dec；161(8):1899-912

非专利文献10：Geriatr Gerontol Int 2013；13:90-97

非专利文献11：Am J Psychiatry 2009；17:4-5

非专利文献12：J Anat.2000；196(Pt 4):609-616.Late-onset neurodegen erativediseases-the role of protein insolubility.Johnson WG.

非专利文献13：老年痴呆症研究杂志、2011年第18卷、84-88页

非专利文献14：Acta Neuropathol.2009；117(1):1-14.Lymphatic drainage ofthe brain and the pathophysiology of neurological disease.Weller RO,DjuandaE,Yow HY,Carare RO

不可逆变性的神经细胞再生是极其困难的，因此渴望开发一种在认知功能正常的高龄者或有轻度认知障碍的患者中，促进聚积在大脑内的有害蛋白质排出，并保持及提高脑神经功能的新方法及治疗剂。特别是，预防从MCI向痴呆症转化的有效药及对MCI的治疗有用的方法或药剂可以说是目前尚未存在，需要早期开发MCI预防及治疗剂。

发明内容

本发明是鉴于上述问题点而作出，其目的在于，提供一种轻度认知障碍的预防和/或治疗剂，或间质流改善药，能够改善脑血管周围的间质流以经由双排出通路(ドレイナージパスウェイ)充分清除中枢神经系统内的有害蛋白质。特别是，其目的在于，提供一种脑血管周围淋巴排液通路(间质流)改善药，在MCI中为了保持及提高脑神经功能而促进中枢神经系统内的有害蛋白质充分排出。该药能够用作MCI预防和/或治疗剂。

另外，利用间质流排出有害蛋白质并不是经由蛋白质特异受体或抗原抗体反应的排出系统，而是对所有蛋白质通用的普通排出系统。这里，有害蛋白质是指失去原有功能或该功能下降的蛋白质，不仅对中枢神经细胞功能无益而且积极地带来损害的蛋白质，例如，Tau蛋白、突触核蛋白、朊病毒蛋白、淀粉样蛋白、泛素化蛋白等。

本发明的发明人在经过深入研究之后发现：通过改善脑血管周围的间质流，清除中枢神经系统内的有害蛋白质从而对MCI的预防及治疗有用的化合物是下面的通式(1)所示的化合物：

[化1]

[式中，A是碳原子数1～6个的直链亚烷基，R是碳原子数3～8个的环烷基，喹诺酮骨架的3位与4位之间的键是单键或双键]。并且，证明了该化合物能够预防及治疗以MCI为首的无有效疗法的由有害蛋白质聚积引起的疾病。发明人进一步深入研究，完成了本发明。

发明效果

根据本发明，能够改善脑血管周围淋巴排液通路(间质流)，以充分排出中枢神经系统内的有害蛋白质。因此，能够预防及治疗以MCI为首的无有效疗法的由有害蛋白质聚积引起的脑神经功能下降。通过本发明所得的医药在迎来老龄化的当今社会中，能够通过改善高龄者的生活、减轻看护负担、削减医疗费等而作出更多的社会贡献。

附图说明

图1是示意性说明在血管周围的间质液的双排出通路中，沉积的有害聚积蛋白质阻碍排出机构的状态图；

图2示意性说明血管周围的间质液的双排出通路内的流动得到改善，排出有害蛋白质的状态图；

图3是喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠的脑表面血管图像，其中(a)是AIR组，(b)是CO₂组；

图4是含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠的脑表面血管图像，(a)是AIR组，(b)是CO₂组；

图5是表示自饲养开始起15个月，在含西洛他唑饲料13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，CO₂送气后的脑血管直径相对增加的图；

图6是表示自饲养开始起12个月，在含西洛他唑饲料8个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，CO₂送气后的脑血管直径相对增加的图；

图7是表示将荧光标记Aβ_1-40注入纹状体后的状态图；

图8是表示在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠中，离注入部位2922μm的软脑膜血管的聚积部位的荧光标记Aβ_1-40的图；

图9是表示在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠中，离注入部位3422μm的软脑膜血管的聚积部位的荧光标记Aβ_1-40的图；

图10是表示在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠中，离注入部位3507μm的软脑膜血管的聚积部位的荧光标记Aβ_1-40的图；

图11是表示自饲养开始起15个月，在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，荧光标记Aβ_1-40从侧脑室的注入部位到软脑膜血管的聚积部位的平均移动距离的图；

图12是表示自饲养开始起15个月，在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，荧光标记Aβ_1-40从侧脑室的注入部位到软脑膜血管的聚积部位的最大移动距离的图；

图13是表示喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠的血管周围Aβ沉积的照片图，其中(a)是额叶，(b)是海马；

图14是表示含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠的血管周围Aβ沉积的照片图，其中(a)是额叶，(b)是海马；

图15是表示自饲养开始起12个月，在含西洛他唑饲料8个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，Aβ相对减少的图；

图16是表示自饲养开始起15个月，在含西洛他唑饲料13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，Aβ相对减少的图；

图17是表示在MCI患者组中，西洛他唑给药组及非给药组内的MMSE的变化率图；

图18是表示在MCI患者组中，西洛他唑给药组及非给药组的时间定向(MMSE第1项)的变化率图；

图19是表示在MCI患者组中，西洛他唑给药组及非给药组的延迟记忆(MMSE第5项)的变化率图；

图20是表示在MCI患者组中，西洛他唑给药组及非给药组的文本指示(MMSE第9项)的变化率图；

图21是表示在MCI患者组中，西洛他唑给药组及非给药组的视空间(MMSE第11项)的变化率图；

图22是在痴呆症患者组中，西洛他唑给药组及非给药组的MMSE的变化率图；

图23是表示在乙酰胆碱给药下，含西洛他唑饲料8个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠的脑血管直径相对增加的图；

图24是表示在在乙酰胆碱给药下，含西洛他唑饲料13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠的脑血管直径相对增加的图；

图25是表示在MMSE为22分以上且26分以下的MCI患者组中，多奈哌齐盐酸盐给药组与西洛他唑及多奈哌齐盐酸盐并用组的MMSE的变化率图；

图26是表示MMSE为22分以上且26分以下的MCI患者组中，多奈哌齐盐酸盐给药组与西洛他唑及多奈哌齐盐酸盐并用组的时间定向(MMSE第1项)的变化率图；

图27是表示MMSE为22分以上且26分以下的MCI患者组中，多奈哌齐盐酸盐给药组与西洛他唑及多奈哌齐盐酸盐并用组的地点定向(MMSE第2项)的变化率图；

图28是表示MMSE为22分以上且26分以下的MCI患者组中，多奈哌齐盐酸盐给药组与西洛他唑及多奈哌齐盐酸盐并用组的延迟记忆(MMSE第5项)的变化率图；

图29是表示MMSE为21分以下的MCI患者组中，多奈哌齐盐酸盐给药组与西洛他唑及多奈哌齐盐酸盐并用组的MMSE的变化率图；

图30是表示MMSE为21分以下的MCI患者组中，多奈哌齐盐酸盐给药组与西洛他唑及多奈哌齐盐酸盐并用组的时间定向(MMSE第1项)的变化率图；

图31是表示在MMSE为21分以下的MCI患者组中，多奈哌齐盐酸盐给药组与西洛他唑及多奈哌齐盐酸盐并用组的地点定向(MMSE第2项)的变化率图；

图32是表示MMSE为21分以下的MCI患者组中，多奈哌齐盐酸盐给药组与西洛他唑及多奈哌齐盐酸盐并用组的延迟记忆(MMSE第5项)的变化率图。

具体实施方式

下面参照附图对本发明的实施方式进行具体说明，但该实施方式用于便于理解本发明的原理，本发明的范围并不局限于下述实施方式，本领域技术人员适当置换下面的实施方式结构的其他实施方式也包含在本发明的范围内。

本发明提供一种间质流改善药，以及由有害蛋白质聚积导致脑神经功能下降所引起的疾病，特别是MCI的预防和/或治疗剂。

(1)间质流改善药

根据本发明，提供一种间质流改善药，能够改善脑血管周围的间质流。这里“间质流”也被称为细胞间隙流，是指神经细胞的代谢物在细胞间隙内流动，最终聚积在血管周围，然后通过排出系统即血管周围双排出通路(与脑内的血管网平行存在的脑间质流通路)向大脑外部排出的间质液的流动，特别是指间质流沿着位于血管中膜的平滑肌细胞的基底膜的通路流动。认为在没有淋巴管的大脑内，特别是本通路对于含有有害蛋白质的旧废弃物的排泄而言是很重要的。

另外，“间质流改善”是指利用任何一种方法改善由于聚积的有害蛋白质的聚积而停滞的间质流。特别是在本发明中，是指改善脑血管周围的间质流。

下面所描述的本发明的间质流改善药能够改善间质流以充分除去中枢神经系统特别是脑血管周围的有害蛋白质。

(1-1)化合物

本实施方式中的间质流改善药以由下述通式(1)所示的喹诺酮衍生物(下面记载为化合物(1))或其盐为有效成分。

[化2]

其中，通式(1)中，A是碳原子数为1～6个的直链亚烷基，R是碳原子数为3～8个的环烷基，喹诺酮骨架的3位与4位之间的键是单键或双键。

A具体为亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基或亚己基，优选为亚丁基。

R具体是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基，优选为环己基。

作为化合物(1)优选为A是亚丁基，R是环己基，喹诺酮骨架的3位与4位之间的键是单键的情况。在该情况下，本发明的间质流改善药以6-[4-(1-环己基-1H-戊四唑-5-基)丁氧基]-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮(西洛他唑)或其盐为有效成分。

根据本实施方式涉及的间质流改善药，能够改善流过脑血管壁(在细胞间隙内流动，最终流过血管壁而排泄)的间质流以充分清除中枢神经系统内的有害蛋白质。这里，中枢神经系统内的有害蛋白质的清除如后面所述一样，主要经由血管周围的间质液的双排出通路将有害蛋白质排出，该双排出通路是间质流沿着位于血管中膜的平滑肌细胞的基底膜流动的通路。

另外，本实施方式涉及的间质流改善药除了应用于人之外，还可以应用于例如猴、牛、马、猪、羊、狗、猫、大鼠、小鼠等除人之外的哺乳动物。

化合物(1)能够通过使医药上允许的酸发生作用来形成盐，作为可发生作用的酸，所得到的盐只要是药理上允许的盐，则不作特别限定，但作为这种酸，例如例示了硫酸、磷酸、盐酸、氢溴酸等无机酸、草酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸等有机酸。

(1-2)剂型

本实施方式涉及的间质流改善药例如能够是片剂、颗粒剂、细粒剂、胶囊剂等的那样的口服给药制剂、适合口服给药的各种液体制剂，或如注射剂、栓剂那样的非口服给药制剂。

在口服给药制剂的情况下，本实施方式涉及的间质流改善药例如能够将化合物(1)或其盐的微粉末、分散剂和/或溶解改良剂与制剂载体一起以片剂、颗粒剂、细粒剂、胶囊剂等形式制剂化来得到。通过配合分散剂和/或溶解改良剂能够提高化合物(1)或其盐的微粉末的分散性和/或溶解吸收性。

作为制剂载体，可以使用赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂及增塑剂等。作为赋形剂，例如能够使用例如白糖、氯化钠、甘露醇、乳糖、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素、低取代度羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯、硅酸盐等。作为粘合剂，例如能够使用水、乙醇、丙醇、葡萄糖溶液、淀粉溶液、凝胶溶液、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮等。作为崩解剂，例如能够使用羧甲基纤维素钙、干淀粉、碳酸氢钠、碳酸钙、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、硬脂酸单甘油酯、淀粉、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠等。作为润滑剂，例如能够使用纯化滑石、硬脂酸盐、硼酸粉、聚乙二醇、胶体状硅酸、硬化油等。作为增塑剂，例如能够使用甘油脂肪酸酯、邻苯二甲酸二辛酯、邻苯二甲酸二丁酯、三乙酸甘油酯、柠檬酸三乙酯、蓖麻油等。

作为分散剂和/或溶解改良剂，可以使用水溶性高分子及表面活性剂等。作为水溶性高分子，例如可以使用羟丙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚丙烯酸等。作为表面活性剂，例如可以使用月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁等烷基硫酸盐；十聚甘油单月桂酸酯、十聚甘油肉豆蔻酸酯等聚甘油脂肪酸酯；聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯等聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯；聚氧乙烯单硬脂酸酯等聚乙二醇脂肪酸酯；聚氧乙烯月桂基醚等聚氧乙烯烷基醚；聚氧乙烯氢化蓖麻油等聚氧乙烯蓖麻油及氢化蓖麻油；蔗糖硬脂酸酯、蔗糖棕榈酸酯等蔗糖脂肪酸酯等。

当根据上述例子制造口服制剂时，相对于化合物(1)或其盐的微粉末1重量份，优选配合分散剂和/或溶解改良剂0.001～100重量份、优选为配合0.01～10重量份。因为当分散剂和/或溶解改良剂的添加量少于0.001重量份时，吸收差，另一方面，当添加量多于100重量份时，可能会受到粘膜障碍性等毒性或药事法的限制。

在制备片剂中，通过常规方法使用上述制剂载体将化合物(1)或其盐的微粉末制成片剂。颗粒剂或细颗粒剂可通过在化合物(1)或其盐的微粉末中添加上述制剂载体，并通过流动层造粒、高速搅拌造粒、搅拌流动层造粒、离心流动造粒、挤出造粒等使其颗粒化来制备。胶囊剂与惰性医药填充剂或稀释剂一起混合制备，装填在硬凝胶胶囊或软胶囊内。

在本实施方式涉及的间质流改善药中使用的化合物(1)或其盐的微粉末的平均粒径通常为8μm以下，优选为4μm以下。具有这种平均粒径的微粉末例如能够使用锤式研磨机、喷射式研磨机、旋转球磨机、振动球磨机、振动研磨机、棒磨机、管磨机等形成。

本实施方式涉及的间质流改善药也能够在含有化合物(1)或其盐的片剂、颗粒剂、细颗粒剂上涂布缓释性包衣基剂。作为缓释性包衣基剂，可以使用邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸共聚物、乙基纤维素等。由此，例如在消化管的下部，能够具备化合物(1)或其盐的溶出能力。

口服液制剂通过混合化合物(1)或其盐、甜味剂(例如蔗糖)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、着色剂、香料等来制备。

非口服给药用制剂中的注射用制剂例如以液剂、乳浊液或悬浊液的形式制备，与血液等渗。液体、乳浊液或悬浊液形式的制剂例如使用水性介质、乙醇、丙二醇、乙氧基化异硬脂醇、聚氧化异硬脂醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯来制备。作为水性介质，可列举水或含有水的介质。作为水可使用无菌水。作为含有水的介质，例如可列举生理盐水、PBS(磷酸缓冲盐水)或乳酸配合林格氏溶液等。

在注射用制剂中，化合物(1)或其盐的含量根据制剂的使用目的等而不同，并无特别限定，但例如为0.01～10mg/ml、优选为0.05～5mg/ml。

在注射用制剂中，能够适当地使用该技术领域中通常使用的添加剂。作为添加剂，例如可列举等渗剂、稳定剂、缓冲剂、防腐剂、螯合剂、抗氧化剂、或增溶剂等。作为等渗剂，例如可列举葡萄糖、山梨糖醇、甘露醇等糖类、氯化钠、甘油、丙二醇、聚乙二醇等。作为稳定剂，例如可列举亚硫酸钠等。作为缓冲剂，例如可列举硼酸缓冲剂、磷酸缓冲剂、柠檬酸缓冲剂、酒石酸缓冲剂、乙酸缓冲剂等。作为防腐剂，例如可列举对羟基苯甲酸酯、苄醇、氯甲酚、苯乙醇、苄索氯铵等。作为螯合剂，例如可列举乙二胺四乙酸钠、柠檬酸钠等。作为抗氧化剂，例如可列举亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸钠、硫代硫酸钠等。作为增溶剂，例如可列举葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、苯甲酸钠、乙二胺、水杨酸酰胺、烟酰胺、聚氧乙烯氢化蓖麻油衍生物等。

注射用制剂中也可以含有pH调节剂。pH调节剂既可以是酸类也可以是碱类。具体而言，作为酸类，例如可列举抗坏血酸、盐酸、葡萄糖酸、乙酸、乳酸、硼酸、磷酸、硫酸、酒石酸、柠檬酸等。作为碱类，例如可列举氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钠、氢氧化镁、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等。

本实施方式涉及的间质流改善药中的有效成分即化合物(1)或其盐自身的给药量能够根据患者的年龄、性别、体重、症状等适当设定。例如，对于成人(体重50kg)，通常每日10～400mg，优选100～200mg分1次或2次～数次来给药。

(1-3)并用剂

本实施方式涉及的间质流改善药也能够与NMDA受体拮抗剂即盐酸美金刚胺组合使用。另外，也能够与β分泌酶抑制剂、γ分泌酶抑制剂、脑啡肽酶(neprilysin)活性剂或Aβ蛋白质疫苗组合使用。

β分泌酶抑制剂没有特别限定，例如为OM99-2、GT-1017、P₁₀-P₄'staV等。γ分泌酶抑制剂没有特别限定，例如为(S,S)-2-氨基环戊烷羧酸(ACPC)、司马西特(semagacestat)等。脑啡肽酶活性剂例如可以是对生长抑素受体的合成促效剂等。Aβ蛋白质疫苗也能够为直接给药抗体的被动免疫疫苗或将Aβ肽与佐剂一起给药的主动免疫疫苗中的任一个。

例如报告了合成Aβ_1-42与佐剂QS21混合后的肌肉注射型疫苗对约6％的疫苗接种者产生亚急性脑膜炎副作用，但通过将抑制摄取量后的Aβ蛋白质疫苗与本实施方式涉及的间质流改善药组合使用，能够期待在某种程度上缓和副作用并改善Aβ相关疾病。另外，例如，当使用γ分泌酶抑制剂时，有可能在其他Notch1等切出之前被抑制，Notch1已知在成人中涉及免疫细胞的分化，若将其抑制则会引起免疫异常，通过将抑制给药量后的γ分泌酶抑制剂与本实施方式涉及的间质流改善药组合使用，从而能够在某种程度上缓和副作用并改善Aβ相关疾病。

(1-4)与间质流的改善有关的作用机制

cAMP反应序列结合蛋白(CREB)对空间认知或长期记忆等大脑的高级功能具有重要作用，通过进行磷酸化来活性化。并且，“Aβ有抑制该CREB磷酸化的作用，根据西洛他唑，能够增强CREB磷酸化”或者“西洛他唑通过调整参与CREB的凝聚的ApoE蛋白质的发现水平，降低大脑内部氧化应激水平也能够防止Aβ沉积，防止认知功能恶化”是西洛他唑抑制Aβ沉积的公知作用机制。

另一方面，本实施方式涉及的间质流改善药通过改善间质流，能够充分地排出中枢神经系统内的有害蛋白质。对于该间质流改善作用涉及的作用机制，下面以作为大脑内的代表性有害物质之一的Aβ为例进行说明。

所产生的Aβ随间质流从大脑中被除去的通路有多条，哪条通路以何种比例发生作用根据Aβ的存在形态或存在位置等而不同，主要列举(i)经由血脑屏障(blood brain barrier：BBB)的排出、(ii)经由血管周围的间质液的双排出通路的排出、(iii)利用Aβ分解酶即脑啡肽酶进行的分解或利用星形胶质细胞及小胶质细胞取入Aβ等。

如图1所示，Aβ等有害蛋白质沉积在位于血管壁的中膜平滑肌细胞层上，因而抑制了平滑肌细胞的功能，间质流的驱动力即血管搏动下降，抑制了有害蛋白质经由间质液排出。由此，有害蛋白质的清除下降，Aβ凝聚，由此形成淀粉样纤维等。然而，如图2所示，通过本实施方式涉及的间质流改善药来改善通过沿着血管中膜的平滑肌细胞的基底膜的通路的间质流，促进有害蛋白质经由间质液排出。因此，难以引起有害蛋白质的浓度上升，在Aβ中也不会凝聚，还不易形成淀粉样纤维。

即，本发明的本质在于通过例如西洛他唑等喹诺酮衍生物来改善通过沿着血管中膜的平滑肌细胞的基底膜的通路的间质流以促进大脑中的有害蛋白质经由间质液排出。利用间质流排出有害蛋白质是与蛋白质的种类或数量无关的普遍的排出系统，因此在本说明书中，Aβ只是改善间质流而排出大脑内有害蛋白质的一个例子。

另外，在唐氏综合症中，其原因是体细胞的21号染色体多出一条，总计共有3条(三体综合症)，APP在21号染色体上，而且生成Aβ的β分泌酶(BACE-2)基因也在21号染色体上，导致APP过剩复制，开始形成淀粉样蛋白斑块，根据本实施方式涉及的间质流改善药，由于改善间质流而促进产生的Aβ经由间质液排出，因此难以形成淀粉样纤维，由此也能够改善唐氏综合症组。

另外，在脊椎动物的发育过程中，视网膜以间脑向侧方凸出的眼泡为起源，视网膜在胚胎学上可以说是大脑的一部分。由于年龄增加导致APP在视网膜神经节细胞中较多发现，与大脑同样在视网膜上也有可能确认到Aβ的产生及聚积。根据本实施方式涉及的间质流改善药，通过改善间质流来促进经由间质液排出Aβ，因此难以形成淀粉样纤维，由此也能够改善老年性黄斑变性症。

老年性黄斑变性没有新生血管参与，存在使视网膜色素上皮细胞或脉络膜毛细血管板萎缩的萎缩型和新生血管参与的渗出型，其中，由于造成高度视力障碍而成为问题的是渗出型。在渗出型中，由于活性氧等造成的损害导致视网膜细胞的一部分剥落，沿视网膜色素上皮的基底面作为有害蛋白质的玻璃膜疣堆积。由于玻璃膜疣堆积，导致从视网膜的里面容易产生新生血管，由于伴随增殖组织的新生血管导致黄斑出血或渗出，最终疤痕化而导致视力显著下降或带来中心暗点。在老年性黄斑变性患者的玻璃膜疣中Aβ高频存在，老年性黄斑变性与脑淀粉样血管病之间存在通用的病态发病机制。因此，根据本实施方式涉及的间质流改善药，改善间质流而促进所产生的Aβ经由间质液排放，因此能够改善老年性黄斑变性症。

而且，路易体病是所谓α突触核蛋白的病因蛋白质聚积在神经细胞中产生的疾病，但在该大脑内Aβ高比率聚积(称之为“普通型”路易体病)，其发病过程中Aβ与α突触核蛋白的两种病因蛋白质协同地促使发病(Examining themechanisms that linkβ-amyloid andα-synuclein pathologies.AlzheimersResTher.2012Apr 30；4(2):11)。因此，在路易体病中，活性化间质流促进有害蛋白质的排出，从而能够妨碍Aβ及α突触核蛋白的聚积，预防发病或抑制加重。

(1-5)用途

作为本实施方式涉及的间质流改善药的具体用途，没有特别限定，但如上述(1-4)中在作用机制上详细说明的一样，通过改善间质流促进有害蛋白质经由间质液排放，从而意图进行有预防或治疗效果的全部疾病的治疗及预防。作为这种疾病，例如可列举轻度认知障碍、脑淀粉样血管病、额颞叶型痴呆症、唐氏综合症、黄斑变性、路易体病、帕金森氏病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症等与中枢神经系统内的有害蛋白质聚积相关的疾病，本发明的间质流改善药能够用于预防和/或治疗这些疾病。

其中，化合物(1)、特别是含有西洛他唑的本发明的间质流改善药作为MCI的预防和/或治疗剂极其有用，与这一点有关的细节稍后描述在(2)中。

(2)MCI的预防和/或治疗药

(2-1)化合物

本实施方式涉及的MCI预防和/或治疗药以在上述“(1)间质流改善药”中说明的化合物(1)或其盐为有效成分。化合物的形式与上述(1-1)中说明的相同。本发明的MCI预防和/或治疗剂除了应用于人之外，例如也可以应用于猴、牛、马、猪、羊、狗、猫、大鼠、小鼠等除人以外的哺乳动物。

(2-2)轻度认知障碍(MCI)

本发明中的MCI如本说明书中的“背景技术”一栏里所描述的一样，更具体而言，不管聚积的有害蛋白质的种类或数量如何，通常是指符合上述的“痴呆症疾病治疗指南”中MCI判断基准的疾病，MCI患者是指呈现出那种症状的患者。

其中，本发明的MCI预防和/或治疗剂对简易精神状态检查表(Mini-Mental State Examination:MMSE)中22-26分的MCI患者特别起效。详细而言，只要是之前的符合“痴呆症疾病治疗指南”中的MCI判断基准的患者，就能够有效地使用后述的本发明的MCI预防和/或治疗剂，还对MMSE中22-26分的MCI患者呈现特别高的效果。

而且这种MCI患者中，本发明的MCI预防和/或治疗剂特别是对60岁以上的老人更优选为对75岁以上的老人，发挥更显著的效果。

其中，作为表示认知功能的数值在该领域中频繁地被采用简易精神状态检查表中评分的实质性评价尺度，如上所述，22-26分是有轻度认知障碍嫌疑的水平如上面所述，但除此之外，若超过20分则是保持独立的水平(不是痴呆症)，20分以下认为有痴呆症嫌疑的水平。另外，若低于14分则是需要监护人制度的水平，其间的14-20分是需要保护及辅助的水平。即，如果MMSE评分提高1-2分，则不能说是有那么显著的效果，如果其提高4分，则不需要保护及辅助，能够独立，因此能够说是显著改善。

轻度认知障碍(MCI)随着老龄化，其患者数量激增。因此，通过治疗MCI患者预防不可逆脑神经变性来防止向痴呆症转变是极为重要的。在发生不可逆神经变性的痴呆症患者中，治愈可能性极低，但MCI有治愈的可能性，也有稳定保持MCI症状的可能性，另外还有从MCI向多个不同症状转移的可能性。在MCI患者甚至认知功能正常的高龄者中，也已证明了α突触核蛋白或Aβ等有害蛋白质开始聚积在大脑内，关于除去有害蛋白质或防止聚积，认识到早期开始治疗的重要性，但如背景技术一栏里所记载的，当前还没有有效的治疗剂。从这种情况来看，MCI定位为区别于公知的各种痴呆症的疾病，另外由于在公知的痴呆症治疗及预防药中未确认治疗及预防效果，因此渴望一种能够预防或治疗MCI的制剂。

然而，使用本发明的MCI预防和/或治疗剂，能够治疗MCI或防止向各种痴呆症的转化，或者不仅是MCI患者，还能改善认知功能正常的高龄者的认知功能或保持认知功能。特别是如实施例中所示的，示出了通过持续内服本发明的MCI预防和/或治疗剂的有效成分即西洛他唑，MCI患者中的认知功能显著提高(图17等)。这是公知情况下不能预期得到的本发明的显著效果。因此，本发明的MCI预防和/或治疗剂有可能成为极其有用的新药。

在此，本说明书中针对认知功能的规定中，痴呆症的认知功能是指发生了医师判断为痴呆症的程度的认知功能障碍的认知功能，在痴呆症中如果有发生轻度认知障碍的病例，也有发生重度认知功能障碍的病例。另外，MCI中的认知功能是指发生了没有达到痴呆症程度的认知功能障碍的认知功能。因此，对于认知功能，如果从正常状态到功能障碍状态依次排列，则为认知功能正常、MCI、轻度痴呆症和重度痴呆症。在痴呆症的领域中，如上所述，作为表示认知功能的数值优选使用简易精神状态检查表的点数，如上所述，本发明的MCI预防和/或治疗药对MCI患者中在MMSE呈现出22-26分的认知功能的患者特别有效。而且，该MCI患者中，本发明的MCI预防和/或治疗药对60岁以上的高龄者更有效。具体而言，在公知的AD治疗药中，MMSE的评分只是提高了一点(治疗组与非治疗组的差值即使较高也只是1分左右)，另一方面，如在实施例(4)中具体后述的，本发明的MCI预防和/或治疗药呈现所谓提高MMSE评分4分程度的明显高的效果。特别是，本发明的MCI预防和/或治疗药在MMSE的项目中的第1项的时间定向、第5项的延迟记忆、第9项的基于文本的指示、第11项的视空间的要求高水平认知功能的各项、即需要容易受到神经变性疾病影响的认知区域的项目中呈现较大的改善效果。然而，本发明的MCI预防和/或治疗药如实施例(5)中具体后述的，对于痴呆症患者(特别是MMSE值小于21分的患者)，不能取得那样的改善效果。

可是，脑淀粉样血管病作为其前阶段经由MCI，但告知了在图像上能看到伴随脑淀粉样血管病的轻微出血的MCI病例中，与不伴随微小出血相比，向痴呆症的转移增高2.6倍(Staekenborg SS,et al.Stroke 2009)，而且作为MCI的前阶段，路易体型痴呆症占有一定比例(Mild cognitive impairment a ssociated withunderlying Alzheimer,s disease versus Lewy body disease.Parkinsonism RelatDisord.2012Jan；18Suppl 1:S41-4)，因此MCI阶段内的早期治疗能够提前防止向由脑淀粉样血管病或路易体病导致的痴呆症的疾病转移。

(2-3)并用剂

本发明的MCI预防和/或治疗药也可以组合化合物(1)或其盐与乙酰胆碱酯酶抑制剂作为有效成分。

在上述的化合物(1)中，A是亚丁基，R是环己基，喹诺酮骨架的3位与4位之间的键是单键的情况特别优选，在该情况下，本发明的MCI改善药通过组合6-[4-(1-环己基-1H-戊四唑-5-基)丁氧基]-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮(西洛他唑)或其盐与乙酰胆碱酯酶抑制剂而形成。

作为乙酰胆碱酯酶抑制剂，没有特别限定，例如为多奈哌齐盐酸盐、利凡斯的明酒石酸盐、氢溴酸加兰他敏或盐酸美金刚胺，优选为多奈哌齐盐酸盐。

化合物(1)或其盐与乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合给药形态没有特别限定，例如如下所述。这里，将化合物(1)或其盐作为C，将乙酰胆碱酯酶抑制剂作为A。即，(i)将C与A同时制剂化所得的单一制剂的给药、(ii)将C与A分别制剂化所得的两种制剂在同一给药路径内同时给药、(iii)将C与A分别制剂化所得的两种制剂在同一给药通路内以时间差给药、(iv)将C与A分别制剂化所得的两种制剂在不同的给药通路内同时给药、(v)将C与A分别制剂化所得的两种制剂在不同的给药通路内以时间差给药。

(2-4)给药量及给药剂型

上述MCI预防和/或治疗剂的给药量能够以临床上使用的用量为基准适当选择。作为一个示例，西洛他唑或其盐的给药量对于成人能够以每日30～400mg分1次或2次～数次进行给药，多奈哌齐盐酸盐的给药量对于成人能够以每日1～10mg分1次或2次～数次进行给药。

本发明的MCI预防和/或治疗药如上述(1-2)中所记载的，与间质流改善药同样地能够为口服给药制剂、适合口服给药的各种液体制剂、或如注射剂、栓剂那样的非口服给药制剂。即，本发明的MCI预防和/或治疗药能够为与本发明的“间质流改善药”相同的剂型。

当与乙酰胆碱酯酶抑制剂组合使用时，化合物(1)或其盐与乙酰胆碱酯酶抑制剂的配比能够根据给药规定、症状、年龄、使用的乙酰胆碱酯酶抑制剂等适当选择。通常，以使用的乙酰胆碱酯酶抑制剂的一般用量为基准来确定。作为一个示例，西洛他唑或其盐与多奈哌齐盐酸盐的配比能够将西洛他唑或其盐：多奈哌齐盐酸盐设为50:1～20:1。

MCI患者中、70～80％在大约5年后转移为痴呆症，但根据本发明，能够恰当地改善MCI，因此通过早期治疗MCI而能够提前防止向痴呆症转移。

实施例

(1)利用西洛他唑提高血管搏动驱动力

在中枢神经系统的脑间质流中，由动脉的血管搏动产生的血管壁运动成为驱动力，进行有害蛋白质的排出(Mechanisms to expla in the reverse perivasculartransport of solutes out of the brain.J Theor Biol.2006Feb 21；238(4):962-74.)。血管搏动下的动脉扩张由于心脏搏动致使动脉内的血压上升而发生，但动脉的扩张功能下降，导致血管壁运动减弱，间质流也下降。在老龄老鼠或脑淀粉样血管病的存在下，脑动脉的血管弹性(柔软度)明显下降，血管壁运动减弱，因此有害蛋白质的排出功能下降(Perivascular drainage of solutes is impaired inthe a geing mouse brain and in the presence of cerebral amyloid angiopathy.ActaNeuropathol.2011Apr；121(4):431-43.)。脑动脉的血管弹性程度如果使用相对于血液中的二氧化碳浓度变化的反应性则能够评价。即，保持脑动脉的血管弹性、维持血管搏动驱动力的脑动脉对于血液中的二氧化碳浓度上升具有充分扩张血管直径的能力，保持经由间质流排出有害蛋白质的排出功能，另一方面，脑动脉的血管弹性下降并且伴随血管搏动的驱动力下降的脑动脉对于血液中的二氧化碳浓度上升，丧失充分扩张血管直径的能力，认为有害蛋白质的排出功能受到妨碍。因此，作为有害蛋白质聚积模型动物，使用表现出以脑淀粉样血管病为中心的病理变化的模型鼠(Tg-SwDI小鼠)(Davis等人，2004年)，研究了西洛他唑对脑动脉的血液中的二氧化碳浓度反应性的效果。

准备16只1.5个月龄的雄性Tg-SwDI小鼠，将其分类为含西洛他唑饲料给药组(n＝9)与喂给普通饲料组(n＝7)的两组，一直饲养到15个月龄。含西洛他唑饲料中的西洛他唑浓度为0.3wt％。另外，认为1.5个月龄的Tg-SwDI小鼠存在脑血管中的Aβ开始聚积的初期阶段、即脑淀粉样血管病的初期阶段，认为脑内神经细胞坏死并没有太大进展的阶段。

从饲养开始起15个月内，对于含西洛他唑给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠，在1.5％异氟烷的吸入麻醉下，固定Tg-SwDI小鼠，在含西洛他唑饲料给药组的送入5％二氧化碳的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的送入5％二氧化碳的Tg-SwDI小鼠中检查脑血管直径的相对增加率。脑血管直径的测定通过作成切除头盖骨5mm×5mm后的观察窗，从尾静脉注入FITC-葡聚糖(FITC-dextran)使血管可视化的方法来进行。

图3是喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠的脑表面血管图像，其中(a)是没有添加二氧化碳的空气的送气组(AIR组)，(b)是添加了二氧化碳作为最终浓度含5％二氧化碳的空气的送气组(二氧化碳组)。图4是含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠的脑表面血管图像，其中(a)是AIR组，(b)是二氧化碳组。在图3及图4中，比例尺为50μm。如图3及图4中箭头所示，明确示出了虽然在AIR送气时喂给普通饲料组(图3的a)及含西洛他唑饲料给药组(图4的a)中认为脑动脉直径无差异(各动脉直径为18.6±2.35μm及18.9±1.10μm(平均±标准误差，下面相同)、p>0.10)，但是在二氧化碳送气时含西洛他唑饲料给药组(图4的b)与喂给普通饲料组(图4的b)相比，由二氧化碳吸入引起的脑表面动脉血管的扩张良好。在有关统计学上的二氧化碳浓度反应性的研究中，也判明了由于西洛他唑的给药使得伴随二氧化碳送气的脑动脉血管扩张能力显著提高(图5)。

图6是表示出生后4个月到12个月内，喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠及含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠在8个月间由二氧化碳送气引起的脑血管直径的相对增加图。与前项的小鼠同样地判明了二氧化碳送气前喂给普通饲料组和含西洛他唑饲料给药组中，认为脑动脉直径无差异(各动脉直径为20.0±2.78μm及21.3±3.58μm、p>0.01)，由二氧化碳送气产生的脑动脉血管扩张能力(血管直径的相对增加率)由于西洛他唑饲料的给药而在统计学上显著提高。

这些结果表明，作为有害蛋白质的排出系统，重要的脑间质流的原动力即血管搏动驱动力由于西洛他唑的给药而提高。

(2)由西洛他唑产生的有害蛋白质的排出促进效果

为了验证由西洛他唑产生的间质流改善效果，使用脑淀粉样血管病模型验证由西洛他唑产生的有害蛋白质的排出促进效果。利用间质流排出有害蛋白质与经由特异性受体或抗原抗体反应的排出系统完全不同，是与蛋白质的种类或数量无关的普通排出系统，因此本实施例中的Aβ只是改善间质流而促进排出的脑内有害蛋白质的一个例子。

自饲养开始起15个月内，对于含西洛他唑饲料13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠(n＝4)及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠(n＝3)，在1.5％异氟烷的吸入麻醉下，在俯卧位固定Tg-SwDI小鼠，在对头皮正中切开后，使用32G的微量吸液管，如图7中箭头所示，将荧光标记Aβ_1-40以定位脑手术在30秒注入Tg-SwDI小鼠的线条体(前囱(bregma)前方0.98mm、侧方1.5mm)内。从脑表面到线条体的注入部位的深度为3.0mm，荧光标记Aβ_1-40从AnaSpec(SanJose,CA,USA)购买。

在注入荧光标记Aβ_1-4030分钟后取出大脑，使用0.01M磷酸缓冲液进行除血处理，使用低温恒温器将用干冰瞬间冻结的脑块切薄成20微米，在注入部位的前后方向以冠状截面作成连续切片制作标本，用荧光显微镜观察标本。

图8是表示在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠中，距离注入部位2922μm的软脑膜血管的聚积部位处的荧光标记Aβ_1-40的图，图9是表示在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠中，距离注入部位3422μm的软脑膜血管的聚积部位处的荧光标记Aβ_1-40的图，图10是表示在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠中，距离注入部位3507μm的软脑膜血管的聚积部位处的荧光标记Aβ_1-40的图，如图8～图10中箭头所示，示出了在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠中，从注入部位移动的Aβ位于软脑膜血管的血管周围腔体内，经由血管周围的间质液的双排出通路清除Aβ。

图11是表示自饲养开始起15个月内，在含西洛他唑饲料13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，从线条体的注入部位到软脑膜血管的聚积部位的荧光标记Aβ_1-40的平均移动距离的图。图12是表示自饲养开始起15个月内，在含西洛他唑饲料13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，从线条体的注入部位到软脑膜血管的聚积部位的荧光标记Aβ_1-40的最大移动距离的图。如图11及图12所示，含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠与喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠相比促进Aβ的清除，这些结果表明了由于西洛他唑给药促进了有害蛋白质排出。

(3)西洛他唑对有害蛋白质向脑血管周围淋巴排液通路沉积的抑制效果

为了验证由西洛他唑产生的间质流改善效果，使用脑淀粉样血管病模型验证西洛他唑对脑血管周围淋巴排液通路中的有害蛋白质沉积的抑制效果。利用间质流排出有害蛋白质与经由特异性受体或抗原抗体反应的排出系统完全不同，是与蛋白质的种类或数量无关的普通排出系统，因此本实施例中的Aβ只是通过西洛他唑改善间质流来抑制脑血管周围淋巴排液通路中的沉积的脑内有害蛋白质的一个例子。

自饲养开始起15个月内，使用4％的多聚甲醛将含西洛他唑13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠的大脑进行灌流固定，将取出的大脑进行1天的脱水处理后，制作固定的脑组织石蜡块，使用切片机将石蜡块切薄成6微米制作标本，通过对于Aβ的免疫组织化学法，用显微镜观察沉积在血管壁上的Aβ。图像解析软件使用了ImageJ(NIH)。在组织切片的额叶及海马区域内随机选择5个地方，在200倍视场内拍摄照片。测定出的数据使用t检验进行分析。

图13是喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠的血管周围Aβ沉积的照片图，其中(a)是额叶，(b)是海马。图14是含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠的血管周围Aβ沉积的照片图，其中(a)是额叶，(b)是海马。如图13及图14中箭头所示，在额叶及海马的任一个中，含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠与喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠相比，沉积在血管周围的Aβ都较少。

图15是表示自饲养开始起12个月内，在含西洛他唑饲料8个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，血管周围的Aβ相对减少图。图16是表示自饲养开始起15个月内，在含西洛他唑饲料13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，血管周围的Aβ相对减少图。如图15及图16所示，含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠与喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠相比进一步抑制了血管周围的Aβ沉积，这些结果表明了通过给药西洛他唑抑制了间质流的通路即脑血管周围的有害蛋白质沉积。

(4)对MMSE值为22分以上且26分以下的高龄者的临床治疗效果

随着年龄的增加Tau蛋白质、突触核蛋白质、淀粉样蛋白质或泛素化蛋白质等带来神经功能障碍的有害蛋白质在大脑内逐渐聚积。不管聚积的有害蛋白质种类是哪一种，在初期阶段都观察到轻度认知障碍，但此刻脑神经组织的不可逆神经细胞变性尚未发生，通过进行有害蛋白质的主要排出通路之一即间质流的活性化，从而有可能治疗轻度认知障碍。为了验证该假设，对MMSE值22分以上且26以下、被怀疑有轻度认知功能下降的患者持续内服西洛他唑来评价对认知功能的影响。

以1966年～2012年期间有西洛他唑给药记录的连续病历(共计3183例)为对象进行调查，使用符合下述条件的全部病例进行研究。另外，在本研究中，为了排除抗痴呆症药的影响，多奈哌齐等抗痴呆症药给药的患者全部从解析中排除。

<选择条件>

(i)实施两次以上的认知功能普通检查即简易精神状态检查表(MMSE)，其间隔为6个月以上(实施了三次以上的病例选择初次及末次的两次检查结果)。

(ii)初次MMSE值为22分以上且26分以下。

(iii)选择MMSE观察期间中至少一半期间以上给药西洛他唑的病例作为实施持续治疗的组(下面为治疗组)。

(iv)选择MMSE观察期间中西洛他唑给药2个月以下的病例作为没有实施持续治疗的组(下面为非治疗组)。

<解析项目>

(i)各组中的MMSE值变化率(计算方法：[末次MMSE值-初次MMSE值]/MMSE的观察期间[年])。

(ii)各组中的MMSE各检查项目的得分变化率(计算方法：[末次MMSE各检查项目的得分-初次MMSE各检查项目的得分]/MMSE的观察期间[年])。

另外，在两组之间的对比中，比率的差异通过卡方检验进行统计解析，其他使用t检验进行统计分析。

<结果>

3183病例中，MCI非治疗组9例、MCI治疗组31例符合选择条件。各组的背景因素为年龄(非治疗组81.3±2.2岁、治疗组76.6±1.2岁，P＝0.07)(平均±标准误差，下同)、初次时的MMSE值(非治疗组23.7±0.4、治疗组23.7±0.2、P＝0.87)、MMSE的观察期间(非治疗组773±144日、治疗组645±74日、P＝0.42)、男性比率(非治疗组56％、治疗组35％、P＝0.28)，在非治疗组与治疗组中，在患者背景因素中认为无显著差异。非治疗组是由于腹泻或头痛等副作用没有实施西洛他唑持续治疗的患者组，中枢神经系统的临床病态及背景因素在初次MMSE检查时，认为治疗组与非治疗组大致相等。

关于MMSE值的变化率，非治疗组-3.8±1.3(/年)、治疗组0.4±0.7(/年)，表明了通过持续内服西洛他唑，MCI患者中的认知功能显著提高(图17，P＝0.007)。

而且，在MMSE值变化率的各项目解析中认为两组之间无显著差异的项目为第1项的时间定向(非治疗组-0.87±0.30、治疗组-0.13±0.16、P＝0.03、图18)、第5项的延迟记忆(非治疗组-0.66±0.24、治疗组0.16±0.13、P＝0.004、图19)、第9项的基于文本的指示(非治疗组-0.33±0.10、非治疗组0.01±0.06、P＝0.008、图20)、第11项的视空间(非治疗组-0.38±0.15、治疗组0.03±0.08、P＝0.02、图21)的四个项目。已知道第11项的视空间障碍容易向路易体痴呆症转移，但在老年期的MCI患者中，虽然存在程度差异，但大多病例暗示了β淀粉样蛋白质或α突触核蛋白等有害蛋白质的脑内聚积的参与，本实施例的结果表明，西洛他唑所产生的间质流改善的治疗效果对包含路易体型痴呆症的前阶段的MCI广泛有效。另外，上述图中的*在统计学上为p<0.05，表示存在显著差异。

(5)对痴呆症患者无临床治疗效果

尽管存在表明西洛他唑对痴呆症患者可能有治疗效果的病例报告(西洛他唑对具有血管性危险因素的痴呆症的效果至诚会第二医院神经内科2011年脑中风学会总会海报展示)，但这些是没有设定对比对象组的报告，科学实用性极低，完全没有参考价值。在痴呆症患者中，认为相当多以上进行了不可逆神经变性，若从间质流改善药的作用机制来考虑，则在痴呆症患者中有可能间质流改善药不存在充分的治疗效果。因此为了评价痴呆症患者持续内服西洛他唑对认知功能产生的影响，以1996年～2012年期间有西洛他唑给药记录的连续病例(共计3183例)为对象进行调查，使用符合下述条件的全部病例进行研究。另外，在本研究中，为了排除抗痴呆症药的影响，多奈哌齐等抗痴呆症药给药的患者都从解析中排除。

<选择条件>

(i)实施两次以上的认知功能普通检查即简易精神状态检查表(MMSE)，其间隔为6个月以上(实施3次以上的病例选择初次及末次的两次检查结果)。

(ii)初次MMSE值为21分以下。

(iii)选择MMSE观察期间中至少一半期间以上给药西洛他唑的病例作为实施了持续治疗的组(下面为治疗组)。

<解析项目>

(i)各组的MMSE值变化率(计算方法：[末次MMSE值-初次MMSE值]/MMSE的观察期间[年])。另外，在两组之间的对比中，比率的差异通过卡方检验进行统计解析，其他使用t检验进行统计分析。

<结果>

3183病例中，痴呆症的西洛他唑非治疗组9例、治疗组19例符合选择条件。各组的背景因素为年龄(非治疗组80.7±3.2岁、治疗组78.5±2.2岁、P＝0.57)(平均±标准误差，下同)、初次时的MMSE值(非治疗组16.3±2.0、治疗组15.0±1.3、P＝0.58)、MMSE的观察期间(非治疗组821±125日、治疗组565±86日、P＝0.10)、男性比率(非治疗组67％、治疗组63％、P＝0.86)，在非治疗组与治疗组中，在患者背景因素中认为无显著差异。非治疗组是由于腹泻或头痛等副作用没有实施西洛他唑持续治疗的患者组，中枢神经系统的临床病态及背景因素在初次MMSE检查时，认为与治疗组大致相等。

关于MMSE值的变化率，在非治疗组-1.2±1.1(/年)、治疗组0.5±0.7(/年)时，P值为0.21(图22)。在现有的报告中报告了由于西洛他唑给药而有可能对具有血管性危险因素的痴呆症有治疗效果的病例(西洛他唑对具有血管性危险因素的痴呆症的效果至诚会第二医院神经内科2011年脑中风学会总会海报展示)，但在本研究中判明了西洛他唑非给药组与西洛他唑给药组同样也存在MMSE改善的病例，结果，认为对于痴呆症的统计学上无显著的治疗效果。当综合考虑到上述实施例(4)的见解，我们发现，间质流改善药即西洛他唑的治疗目标不是已发生痴呆症的痴呆症患者，而是MMSE为22分以上且26分以下的呈现出轻度认知障碍功能下降的高龄者组。

(6)乙酰胆碱给药下西洛他唑的血管搏动力提高

在中枢神经系统内的脑间质流中，由动脉的血管搏动产生的血管壁运动成为驱动力，进行有害蛋白质的排出。血管搏动下的动脉扩张由于心脏搏动导致动脉内的血压上升而发生，但动脉的扩张功能下降，导致血管壁运动减弱，间质流也下降。在老龄小鼠或脑淀粉样血管病的存在下，由于脑动脉的血管弹性(柔软度)显著下降，血管壁运动减弱，因此有害蛋白质的排出功能下降。在本研究中研究了乙酰胆碱给药下的西洛他唑给药对血管弹性性能的影响。

众所周知，乙酰胆碱具有提高血管弹性性能的生理作用，在将该乙酰胆碱给药到大脑表面的情况下，将含西洛他唑饲料给药模型小鼠与喂给普通饲料模型小鼠的血管弹性性能进行对比。

与上述的(1)由西洛他唑产生的血管弹性性能同样，使用了示出以脑淀粉样血管病为中心的病理变化的模型小鼠(Tg-SwDI小鼠)(Davis等人，2004)。准备16只4个月龄的雄性Tg-SwDI小鼠，并将其分类为含西洛他唑饲料给药组(n＝9)与喂给普通饲料组(n＝7)的两组，一直饲养到12个月龄。含西洛他唑饲料内的西洛他唑浓度为0.3wt％。对于16只中的每只Tg-SwDI小鼠，在作成切除头盖骨直径2mm后的观察窗后除去硬膜，进行林格氏液灌流，然后以100μL/分的速度灌流乙酰胆碱(100μM)。在使用FITC-葡聚糖使脑血管可视化之后，对给药前与给药开始3分钟后的血管直径变化率进行解析。

自饲养开始起12个月内，对于含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠，在1.5％异氟烷的吸入麻醉下，固定Tg-SwDI，在含西洛他唑饲料给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中检查脑血管直径的相对增加。脑血管直径的测定通过作成切除头盖骨5mm×5mm后的观察窗，从静脉注入FITC-葡聚糖使血管可视化的方法来进行。

图23是表示自饲养开始起12个月内，在含西洛他唑饲料8个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，脑血管直径的相对增加图。

然后，准备16只1.5个月龄的雄性Tg-SwDI小鼠，并将其分类为含含西洛他唑饲料给药组(n＝9)与喂给普通饲料组(n＝7)的两组，一直饲养到15个月龄，除此以外与上述同样地对血管弹性性能进行试验。图24是表示自饲养开始起15个月内，在含西洛他唑饲料13.5个月给药组的Tg-SwDI小鼠及喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠中，脑血管直径的相对增加图。

如图23及图24所示，在将乙酰胆碱给药到大脑表面的情况下，含西洛他唑饲料组的Tg-SwDI小鼠与喂给普通饲料组的Tg-SwDI小鼠相比血管被扩张。与乙酰胆碱单独给药的情况相比，将西洛他唑与乙酰胆碱组合给药的情况暗示了显著提高了血管弹性性能。

(7)对于内服多奈哌齐盐酸的MMSE值为22分以上且26分以下的高龄者的临床治疗效果

从医疗记录中拾取内服多奈哌齐盐酸盐、在MMSE检查执行日期之间具有至少1年以上的观察期间的初次MMSE为26分以下的患者。其中，将有至少在观察期间内连续6个月组合给药西洛他唑的记录的患者作为多奈哌齐盐酸盐及西洛他唑并用组(69例)，将没有西洛他唑内服历史的患者作为多奈哌齐盐酸盐单独组(87例)。西洛他唑以50～200mg/日早晚内服，多奈哌齐盐酸盐以5mg/日每日服用1次。其中，作为MCI的患者组，抽出MMSE为22分以上且26分以下的患者，多奈哌齐盐酸盐单独组(下面为单独组)为36例(男性16名、女性20名；平均年龄78.4岁)，多奈哌齐盐酸盐及西洛他唑并用组(下面为并用组)为34例(男性15名、女性19名；平均年龄77.2岁)。并用组中的西洛他唑的平均给药量为121mg/日。对于观察期间内的初次MMSE，单独组为24.0±1.3分(平均±标准误差)，并用组为24.2±1.5分，在两组之间认为无差异(p＝0.43)。对于观察期间，单独组为30.4±2.1个月，并用组为28.6±2.0个月，认为无差异(p＝0.52)。将这些单独组36例与并用组34例作为解析对象，研究观察期间内的MMSE变化率(各患者的MMSE点数的增减值/MMSE的观察期间[年])。MMSE的测定在观察期间内至少进行两次，其中选择初次及末次的两次检查结果进行统计处理。对于MMSE变化率，单独组为-2.23±0.69，并用组为-0.45±0.28，认为在两组之间有显著差异(p＝0.022)(图25)。本结果示出了在多奈哌齐盐酸盐内服下的MCI患者中，通过追加内服西洛他唑抑制了约80％的MMSE的年降低率。而且，通过MMSE的不同下级项目解析在两组间有显著差异的项目的变化率(各项目的增减值/MMSE的观察期间[年])为第1项的时间定向(单独组-0.85和并用组-0.16；p＝0.003)(图26)、第2项的地点定向(单独组-0.31和并用组+0.09；p＝0.017)(图27)，第5项的延迟记忆(单独组-0.28和并用组+0.05；p＝0.045)(图28)的3项。在初次执行MMSE时，与第1项(单独组3.9±0.2和并用组4.1±0.2；p＝0.74)、第2项(单独组4.4±0.1和并用组4.3±0.17；p＝0.1)、第5项(单独组2.1±0.2和并用组1.9±0.2；p＝0.28)一起，在两组之间认为无显著差异，表明了西洛他唑防止定向或延迟记忆的恶化。由上述可见，如前项(7)所示的模型动物的结果类推的，临床上示出了西洛他唑与多奈哌齐盐酸盐的组合给药在MCI中是有效的。

(8)对内服多奈哌齐盐酸盐的痴呆症患者无临床治疗效果

尽管存在表明内服多奈哌齐盐酸盐的痴呆症患者中的西洛他唑的治疗效果的可能性的病例报告(日本特表2010-527993号公报大冢制药株式会社)，但这些没有设定对比对象组的报告，科学实用性极低，完全没有参考价值。

作为内服多奈哌齐盐酸盐的痴呆症患者组抽出MMSE为21分以下的患者，多奈哌齐盐酸盐单独组(单独组)51例(男性17名、女性34名；平均年龄78.2岁)，多奈哌齐盐酸盐及西洛他唑并用组(并用组)35例(男性14名，女性21名；平均年龄79.3岁)。并用组中的西洛他唑的平均给药量为139mg/日。对于观察期间内的初次MMSE，单独组为16.5±0.68分(平均±标准误差)，并用组为15.9±0.72分，在两组之间认为无差异(p＝0.51)。观察期间，单独组为30.2±1.7个月，并用组为25.8±1.7个月，认为无显著差异(p＝0.08)。将这些单独组51例与并用组35例作为解析对象，研究观察期间内的MMSE变化率(各患者的MMSE点数的增减值/MMSE的观察期间[年])。MMSE的测定在观察期间内至少进行两次，其中选择初次及末次的两次检查结果进行统计处理。对于MMSE变化率，单独组为-0.90±0.37，并用组为-0.69±0.47，在两组之间认为无显著差异(p＝0.72)(图29)。对于MMSE的下级项目，也包括第1项的时间定向(单独组-0.16和并用组-0.13；p＝0.89)(图30)、第2项的地点定向(单独组-0.13和并用组﹢0.09；p＝0.86)(图31)、第5项的延迟记忆(单独组-015和并用组-0.02；p＝0.37)(图32)，在哪一项中都认为无显著差异。如上所述，没有表现出西洛他唑对痴呆症的有效性。综合考虑到上述实施例的“对内服多奈哌齐盐酸盐的MCI患者的临床治疗效果”的见解，我们发现，在多奈哌齐盐酸盐并用组中作为间质流改善药的西洛他唑的治疗目标不是已发生痴呆症的痴呆症患者，而是MMSE为22分以上且26分以下的呈现出轻度认知障碍功能下降的高龄者组。

工业实用性

对于以MCI为首的伴随脑内有害蛋白质聚积的疾病治疗是有益的。

Claims

1.一种轻度认知障碍的预防和/或治疗剂，以通式(1)表示的喹诺酮衍生物或其盐为有效成分，

[式中，A是碳原子数1～6个的直链亚烷基，R是碳原子数3～8个的环烷基，喹诺酮骨架的3位与4位之间的键是单键或双键]。

2.根据权利要求1所述的轻度认知障碍的预防和/或治疗剂，其中，通式(1)表示的喹诺酮衍生物为6-[4-(1-环己基-1H-戊四唑-5-基)丁氧基]-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮。

3.根据权利要求2所述的轻度认知障碍的预防和/或治疗剂，其中，对MMSE中为22分以上且26分以下的患者组进行给药。

4.根据权利要求2或3所述的轻度认知障碍的预防和/或治疗剂，其中，作为有效成分具有4μm以下平均粒径的6-[4-(1-环己基-1H-戊四唑-5-基)丁氧基]-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮粉末配合有表面活性剂。

5.一种间质流改善药，以通式(1)表示的喹诺酮衍生物或其盐为有效成分，

6.根据权利要求5所述的间质流改善药，其中，通式(1)表示的喹诺酮衍生物为6-[4-(1-环己基-1H-戊四唑-5-基)丁氧基]-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮。

7.根据权利要求5或6所述的间质流改善药，其中，作为有效成分具有4μm以下平均粒径的6-[4-(1-环己基-1H-戊四唑-5-基)丁氧基]-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮粉末配合有表面活性剂。