CN104515834A - 一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒及检测方法，该检测试剂盒包括：分析纯、提取液、双蒸水、缓冲液、试剂板。采用该检测试剂盒对化妆品中氯霉素进行检测的方法为，先将样品进行均质，提取及离心，制得备用底层溶液，再将备用底层溶液加至样品待测管中，并滴加分析纯离心，最后取离心后的上层液加至别一试管中，旋转蒸干，并采用缓冲液洗去残留物，制得净化后的待测样品溶液；最后将净化后的待测样品溶液，滴于试剂板的加样孔中，进行检测，通过观察检测线与控制线颜色来判断待测样品氯霉素为阳性或阴性。该检测方法操作简单，检测结果准确，不需要特殊设备和仪器，尤其适用于化妆品监管部门对化妆品中氯霉素的随机大样本抽查。

Description

一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒及检测方法
技术领域
本发明属于化妆品检测领域，具体涉及一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒及检测方法。
背景技术
氯霉素是一种广谱抗生素，低浓度时可抑菌，高浓度时可杀菌。因其具有抗菌及消炎作用，对皮肤炎症具有一定疗效，所以被违法添加至多种化妆品中，如祛痘、除螨类化妆品。近年来，消费者因使用祛辣等功能化妆品后发生严重不良反应的事件屡有发生，为此，卫生部及化妆品有关监管部门开展了专项抽检工作，检测结果发现，13种化妆品违禁添加了抗菌素，不合格率高达26％。2005年专项抽查结果显示，54种祛痘、除螨类化妆品中也有部分添加抗菌素，不合格率达22.2％。
氯霉素长期微量吸收后可引起再生障碍性贫血及粒细胞缺乏等多种血液疾病，此外，还可引起菌群失调。即使外用，其含量也有严格限定。长期使用含有氯霉素的化妆品，由于皮肤粘膜血管丰富，也可大量吸收，易引起皮疹等过敏反应，严重者可至皮肤溃疡。
2002年卫生部颁部的《化妆品卫生规范》明确规定，禁止化妆品中违法添加氯霉素类等抗生素。虽然相关部门严格规定及加大了监督力度，但市售有关化妆品氯霉素等抗生素添加行为仍然不乐观。因此，加强监测仍然至关重要。目前，化妆品中氯霉素的检测方法主要为仪器法，该法特异性高，准确度高，但对操作环境及设备要求也高，不利于大样本抽查。为此，寻求一种检测迅速，检测成本低，而检测准确度及灵敏度高的方法是迫在眉睫的问题。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中存在的缺陷提供一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒及检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒，该检测试剂盒包括：分析纯、提取液、双蒸水、缓冲液、试剂板。
优选的，所述的分析纯为乙酸乙酯。
优选的，所述的提取液选自正已烷、乙醇或丙三醇中的一种或多种。
优选的，所述的正已烷、乙醇或丙三醇的体积浓度为70％-80％。
优选的，所述的缓冲液为0.02-0.05mol/L的PBS溶液。
所述的试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，所述的试剂板背衬上依次紧密粘贴有样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫。
所述的样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫各部分间均有1-2mm的重叠。
所述的硝酸纤维素膜从样品垫至吸水垫方向依次喷有检测线与质控线。
所述的检测线为氯霉素与BSA的偶联物，所述的质控线为羊抗鼠IgG。
采用如上所述的检测试剂盒检测化妆品中氯霉素的检测方法，包括以下步骤：
(1)取样品5-10g加至试管中，加入5-10ml双蒸水，均质3-5分钟，取3-5g均质后的样品加至离心管中，加入提取液，震荡混匀3-5min，以1800-2000r/min离心5-10min，静置1-3min，取底层溶液备用；
(2)将步骤(1)中制得的备用底层溶液5-10ml加至样品待测管中，滴加3-5ml分析纯，采用混匀器混匀5-10min，再以4000-5000r/min速度离心2-5min,静置；
(3)净化：从离心管中移取1ml上层液加至另一试管中，旋转蒸干，加入缓冲液1-3滴，洗去残留物，制得净化后的待测样品溶液；
(4)检测：吸取步骤(3)中制得的净化后的待测样品溶液，滴于试剂板的加样孔中，2-5min后观察检测线颜色变化，并与控制线颜色对比，判断待测样品氯霉素为阳性或阴性。
检测结果判断：
阳性：检测线与质控线相比，颜色深或一样深。
阴性：检测线与质控线相比，无显线或颜色浅。
无效：未出现质控C线，表果操作不当或检测过程无效。
本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：
1.本发明对待测样品先进行预处理，包括有机溶剂及乙酸乙酯提取，再经过净化、缓冲液洗脱残留物，可将样品中氯霉素最大程度的提取，从而保证检测结果的准确性与灵敏度。
2.本发明根据氯胶体金试纸原理，将样品经过预处理后采用试剂板检测，通过对质控线及检测测的颜色进行对比，来判断样品中是否含有氯霉素，整个检测过程仅需采用常规的化学提取、净化等操作，采用常规试剂即可完成，操作简便，检测成本低，费时短。
具体实施方式
本发明通过以下具体实施例更详细的说明本发明，可以使本专业技术人员更全面的了解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1.
一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒，该检测试剂盒包括：乙酸乙酯、体积浓度为70％的正已烷、双蒸水、0.02mol/L的PBS溶液、试剂板。
所述的试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，所述的试剂板背衬上依次紧密粘贴有样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫。
所述的样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫各部分间均有1mm的重叠。
所述的硝酸纤维素膜从样品垫至吸水垫方向依次喷有检测线与质控线。
所述的检测线为氯霉素与BSA的偶联物，所述的质控线为羊抗鼠IgG。
采用如上所述的检测试剂盒检测化妆品中氯霉素的检测方法，包括以下步骤：
(1)取样品5g加至试管中，加入5ml双蒸水，均质3分钟，取3g均质后的样品加至离心管中，加入提取液，震荡混匀3min，以1800r/min离心5min，静置1min，取底层溶液备用；
(2)将步骤(1)中制得的备用底层溶液5ml加至样品待测管中，滴加3ml分析纯，采用混匀器混匀5min，再以4000r/min速度离心2min,静置；
(3)净化：从离心管中移取1ml上层液加至另一试管中，旋转蒸干，加入缓冲液1滴，洗去残留物，制得净化后的待测样品溶液；
(4)检测：吸取步骤(3)中制得的净化后的待测样品溶液，滴于试剂板的加样孔中，2min后观察检测线颜色变化，并与控制线颜色对比，判断待测样品氯霉素为阳性或阴性。
结果显示，检测线颜色比质控线颜色浅，判断该样品中含有氯霉素。
实施例2.
一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒，该检测试剂盒包括：乙酸乙酯、体积浓度为80％的乙醇、双蒸水、0.05mol/L的PBS溶液、试剂板。
所述的试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，所述的试剂板背衬上依次紧密粘贴有样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫。
所述的样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫各部分间均有1-2mm的重叠。
所述的硝酸纤维素膜从样品垫至吸水垫方向依次喷有检测线与质控线。
所述的检测线为氯霉素与BSA的偶联物，所述的质控线为羊抗鼠IgG。
采用如上所述的检测试剂盒检测化妆品中氯霉素的检测方法，包括以下步骤：
(1)取样品10g加至试管中，加入10ml双蒸水，均质5分钟，取5g均质后的样品加至离心管中，加入提取液，震荡混匀5min，以2000r/min离心10min，静置3min，取底层溶液备用；
(2)将步骤(1)中制得的备用底层溶液10ml加至样品待测管中，滴加5ml分析纯，采用混匀器混匀10min，再以5000r/min速度离心5min,静置；
(3)净化：从离心管中移取1ml上层液加至另一试管中，旋转蒸干，加入缓冲液3滴，洗去残留物，制得净化后的待测样品溶液；
(4)检测：吸取步骤(3)中制得的净化后的待测样品溶液，滴于试剂板的加样孔中，5min后观察检测线颜色变化，并与控制线颜色对比，判断待测样品氯霉素为阳性或阴性。
结果显示，检测线颜色比质控线颜色浅，判断该样品中含有氯霉素。
实施例3.
一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒，该检测试剂盒包括：乙酸乙酯、体积浓度为75％的丙三醇、双蒸水、0.04mol/L的PBS溶液、试剂板。
优选的，所述的分析纯为乙酸乙酯。
所述的试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，所述的试剂板背衬上依次紧密粘贴有样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫。
所述的样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫各部分间均有1-2mm的重叠。
所述的硝酸纤维素膜从样品垫至吸水垫方向依次喷有检测线与质控线。
所述的检测线为氯霉素与BSA的偶联物，所述的质控线为羊抗鼠IgG。
采用如上所述的检测试剂盒检测化妆品中氯霉素的检测方法，包括以下步骤：
(1)取样品8g加至试管中，加入8ml双蒸水，均质4分钟，取4g均质后的样品加至离心管中，加入提取液，震荡混匀4min，以1900r/min离心8min，静置1-3min，取底层溶液备用；
(2)将步骤(1)中制得的备用底层溶液8ml加至样品待测管中，滴加4ml分析纯，采用混匀器混匀8min，再以4500r/min速度离心3min,静置；
(3)净化：从离心管中移取1ml上层液加至另一试管中，旋转蒸干，加入缓冲液2滴，洗去残留物，制得净化后的待测样品溶液；
(4)检测：吸取步骤(3)中制得的净化后的待测样品溶液，滴于试剂板的加样孔中，3min后观察检测线颜色变化，并与控制线颜色对比，判断待测样品氯霉素为阳性或阴性。
结果显示，检测线颜色比质控线颜色深，判断该样品中不含有氯霉素。
以上所述实施例只是本发明的较佳实例，并非来限制本发明实施范围，故凡依本发明申请专利范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括本发明专利申请范围内。

Claims (10)

1.一种化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒包括：分析纯、提取液、双蒸水、缓冲液、试剂板。
2.根据权利要求1所述的化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，所述的分析纯为乙酸乙酯。
3.根据权利要求1所述的化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，所述的提取液选自正已烷、乙醇或丙三醇中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，所述的正已烷、乙醇或丙三醇的体积浓度为70%-80%。
5.根据权利要求1所述的化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，所述的缓冲液为0.02-0.05mol/L的PBS溶液。
6.根据权利要求1所述的化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂板由上下两块塑料模板和背衬组成，所述的试剂板背衬上依次紧密粘贴有样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫。
7.根据权利要求1所述的化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，所述的样品垫、硝酸纤维膜及吸水垫各部分间均有1-2mm的重叠。
8.根据权利要求1所述的化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，所述的硝酸纤维素膜从样品垫至吸水垫方向依次喷有检测线与质控线。
9.根据权利要求1所述的化妆品中氯霉素的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测线为氯霉素与BSA的偶联物，所述的质控线为羊抗鼠IgG。
10.采用如权利要求1-9任一所述的检测试剂盒检测化妆品中氯霉素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取样品5-10g加至试管中，加入5-10ml双蒸水，均质3-5分钟，取3-5g均质后的样品加至离心管中，加入提取液，震荡混匀3-5min，以1800-2000r/min离心5-10min，静置1-3min，取底层溶液备用；
（2）将步骤（1）中制得的备用底层溶液5-10ml加至样品待测管中，滴加3-5ml分析纯，采用混匀器混匀5-10min，再以4000-5000r/min速度离心2-5min,静置；
（3）净化：从离心管中移取1ml上层液加至另一试管中，旋转蒸干，加入缓冲液1-3滴，洗去残留物，制得净化后的待测样品溶液；
（4）检测：吸取步骤（3）中制得的净化后的待测样品溶液，滴于试剂板的加样孔中，2-5min后观察检测线颜色变化，并与控制线颜色对比，判断待测样品氯霉素为阳性或阴性。
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