CN104502289A - 一种检测虾青素含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测虾青素含量的测定方法,本发明采用无水乙醇作为空白试剂,该溶剂在售价便宜,使用方便,无毒害作用,使用的分光光度计可在生产车间直接检测,操作工上手容易,可用于工业化生产现场检测。本发明工艺简单,便于操作。
Description
技术领域
本发明涉及植物色素的生产工艺,尤其是一种检测精制虾青素含量的测定方法。
背景技术
目前,提取天然虾青素的方法多采用物理粉碎、溶剂浸提、减压蒸馏等手段进行提取和精制。现有的提取方法需要消耗大量贵重的有机溶剂,产品含量低、溶剂残留高且不易去除、能耗高,提取成本高等弊端。超临界流体CO2萃取技术可用于天然虾青素的提取和精制,具有污染小,无溶剂残留的优点。
现有的虾青素含量测定方法:一是采用湖北荆州市天然虾青素有限责任公司企业质量标准制定的方法。具体操作如下:精确称取红球藻粉0.5mg,置于带有刻度的10ml离心管中,向离心管中加入约2ml含有少量醋酸(1d/ml)的DMSO,摇匀,70℃保温5min,保温过程中要不断摇动离心管;3500r/min离心3min,将上清液移入10ml容量瓶中。剩余在离心管底部的藻渣无色或仅有很浅的颜色;将几次收集的上清液用DMSO精确定容至10ml,取1ml放入另一个10ml的容量瓶中,用DMSO精确定容至10ml,此溶液待测;将待测溶液放入1cm光径比色杯中,在492nm波长下测定吸光值A;用下式计算所测溶液中虾青素的浓度:
式中:
C1——被测溶液中虾青素的浓度(mg/ml)
A492——492nm波长被测溶液吸光值
A1% 1cm——小光系数(2220)
式中:
C1——被测溶液中虾青素的浓度(mg/ml)
C2——虾青素的含量(%)
二是参照Cyanotech公司,称取约25mg干燥雨生红球藻藻粉,放入10ml离心管中,加入3g石英砂,在离心管中加入5mlDMSO,45~50℃水浴放置15min,期间振荡几次。3800~4200r/min离心3min使不溶物沉淀,将上清转入25ml容量瓶中,向离心管中加入5ml正己烷,涡旋振荡30s,离心分离沉淀,将上清液转入25ml容量瓶中,正己烷重复抽提沉淀至上清基本无色(吸光值小于0.05)。正己烷定容,适当稀释,与474nm下正己烷为空白,测吸光值(于0.25~0.75间)。按下式计算:
式中2100为1%(m/v)的虾青素正己烷标准溶液于474nm下的吸光系数。
真空浓缩后所得产物中虾青素的含量测定方法为:称取约25mg虾青素提取物于100ml容量瓶中,正己烷溶解定容,适当稀释,于474nm下以正己烷为空白,测吸光值(于0.25~0.75间)。按下式计算:
式中2100为1%(m/v)的虾青素正己烷标准溶液于474nm下的吸光系数。
所述提取率是指雨生红球藻中虾青素提取率,用如下公式计算:
三是采用高效液相色谱法,该方法要求有虾青素标样。
虾青素含量测定方法一、二使用的检测仪器简单,操作复杂;测定方法三使用的仪器要求高,操作简单。
发明内容
本发明的目的是:提供一种检测虾青素含量的测定方法,它使用方便,无毒害作用,成本低廉,且操作方便,能用于工业化生产现场检测,以克服现有技术的不足。
本发明是这样实现的:检测虾青素含量的测定方法,取经过超临界流体二氧化碳萃取过虾青素的萃出物样品,经均质后将样品进行用无水乙醇稀释定容,获得待测溶液;2)将待测溶液放入光径比色杯中,在438nm波长下测定吸光值A,以无水乙醇为空白试剂;3)按式(1)计算虾青素含量:
式中:S表示虾青素含量;x表示稀释倍数;A表示吸光度;m表示取样质量,2200表示质量百分比为1%的虾青素乙醇标准溶液于438nm下的吸光系数;1000为稀释倍数。
由于采用了上述的技术方案,本发明采用无水乙醇作为空白试剂,该溶剂在售价便宜,使用方便,无毒害作用,使用的分光光度计可在生产车间直接检测,操作工上手容易,可用于工业化生产现场检测。本发明工艺简单,便于操作。本发明材料来源广泛,溶剂可以反复利用,且制备获得的产品无异味,使用效果好。
具体实施方式
本发明的实施例1:检测虾青素含量的测定方法,先取0.05g雨生红球藻初提物,于100ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度线,此溶液待测;2)将待测溶液放入1cm光径比色杯中,在438nm波长下测定吸光值A,无水乙醇为空白试剂;3)按下式计算虾青素含量:
式中:S表示虾青素含量;x表示稀释倍数;A表示吸光度;m表示取样质量,2200表示质量百分比为1%的虾青素乙醇标准溶液于438nm下的吸光系数;1000为稀释倍数。
经过计算得知,雨生红球藻初提物中虾青素含量的含量为7.54%。
称取一定量的上述雨生红球藻初提物放入萃取釜的物料桶中,将二氧化碳气体注入萃取釜,保持萃取釜内温度和压力在二氧化碳气体的超临界状态与物料接触,使初提物中的杂油成分溶解于超临界流体之中,从萃取釜的萃取出口收集含有少量虾青素的萃出液,萃取时间为2.5h,每隔30min收集一次流体,用上述分光光度法检测萃出液中虾青素含量,结果如下:
由试验结果得知,在此超临界萃取条件下,萃取150min后停止试验可将雨生红球藻初提物中虾青素含量由7.54%提至13.34%,虾青素收率99.18%。证明,萃出液中虾青素的含量是随萃取时间延长萃出量是减少的,这符合浓缩的变化规律,且在计算收率上有用。
Claims (1)
1.一种检测虾青素含量的测定方法,其特征在于:取经过超临界流体二氧化碳萃取过虾青素的萃出物样品,经均质后将样品进行用无水乙醇稀释定容,获得待测溶液;2)将待测溶液放入光径比色杯中,在438nm波长下测定吸光值A,以无水乙醇为空白试剂;3)按式(1)计算虾青素含量:
式中:S表示虾青素含量;x表示稀释倍数;A表示吸光度;m表示取样质量,2200表示质量百分比为1%的虾青素乙醇标准溶液于438nm下的吸光系数;1000为稀释倍数。
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