CN104498380A - 葡萄球菌atcc25923增殖促进剂及其应用方法 - Google Patents

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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明公开了一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂及其应用方法，所述的金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂由乳糖、碳酸钙、甘油、酪氨酸、海带粉、鸡肉粉、鲍鱼粉组成。本发明应用于金黄色葡萄球菌ATCC25923的增殖传代培养，不但能特异性促进金黄色葡萄球菌ATCC25923生长速度和扩增数量呈几何级数增长，又能保持金黄色葡萄球菌ATCC25923旺盛活跃的分裂能力。在金黄色葡萄球菌ATCC25923培养领域有着良好的应用前景。

Description

葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂及其应用方法
技术领域
本发明涉及生物技术及工程领域，特别涉及一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂及其应用方法。
背景技术
金黄色葡萄球菌是人类常见的病原微生物，是食品检验中常见的防治对象，因此，金黄色葡萄球菌是生命科学研究中常用的检测菌种，可以用于速冻食品中，肉类食品中的病原菌含量测定，目标是能够用于筛选防治金黄色葡萄球菌的药物和保证食品的食用安全，保证人类在食用过程中防止其摄入，它因此成为一种生命科学研究中必备的检测对象和检测病原体。
目前在金黄色葡萄球菌的常规培养中，一般使用的是LB培养基，这种培养基也经过了几十年的验证，可以用于金黄色葡萄球菌的培养，但是总的来说，生长速度还是很慢，进入对数期的时间达到12小时以上，难以达到快速培养生长的目标，不利于快速检验检测的目的。
发明内容
本发明的目的是提供一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂及其应用方法，用于提高增殖效率。目前常用的培养金黄色葡萄球菌ATCC25923细菌培养基的使用缺点是增殖缓慢。
根据本发明的一个方面，提供一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂，其特征在于: 由乳糖、碳酸钙、甘油、酪氨酸、海带粉、鸡肉粉、鲍鱼粉组成。在加入金黄色葡萄球菌ATCC25923培养基后金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂中各成分作用浓度依次为乳糖浓度为1-2g/L、碳酸钙浓度为0.1-0.2g/L、甘油浓度为0.2-0.3g/L、酪氨酸浓度0.01-0.05g/L、海带粉浓度为0.02-0.05g/L、鸡肉粉浓度为0.01-0.03g/L、鲍鱼粉浓度为0.05-0.2g/L。
其中乳糖浓度为1.2g/L，碳酸钙浓度为0.1g/L，甘油浓度为0.2g/L，酪氨酸浓度为0.03g/L，海带粉浓度为0.04g/L，鸡肉粉浓度为0.02g/L，鲍鱼粉浓度为0.1g/L。
本发明提供对维持细菌快速生长的因子作用如下： 
乳糖
提供微生物生长的糖类组分，提供能量物质，提高生长速度。
碳酸钙
提供微生物生长的钙源物质，促进细菌快速成熟
甘油
提供脂肪，有利于微生物细菌膜的快速形成
酪氨酸
提供氨基酸，有助于微生物中核糖体的快速成熟，增加细菌分裂能力。
海带粉
提供钾离子，镁离子，矿物质，从而提高微生物细菌分裂能力。
鸡肉粉
提供氨基酸，提供铁离子，促进微生物蛋白质形成，提高生长速度
鲍鱼粉
提供氨基酸，提供蛋白质，提供维生素，有利于微生物细菌快速生长
根据本发明的一个方面，提供的一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂，包含对维持细菌快速生长因子，用于金黄色葡萄球菌ATCC25923的增殖培养。
附图说明
图1 是使用本发明中固体LB培养基培养金黄色葡萄球菌ATCC25923后10h时平板细菌数量。
图2是使用本发明中金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂的固体LB培养基培养金黄色葡萄球菌ATCC25923后10h时平板细菌数量。
图3 是添加本发明中金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂的液体LB培养基与未添加金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂的液体LB培养基培养金黄色葡萄球菌ATCC25923生长曲线图。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。实验所用器具仪器试剂皆可通过商业途径获得。
实施例1：金黄色葡萄球菌ATCC25923固体LB培养基配制
1称量。按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl 5g放入烧杯中。
2溶化。在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，将称好的琼脂20g放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足水 1000mL。
3调pH。在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。直至pH达7.6。
4灭菌。将上述培养基以1.05kg/cm2，121℃，20分钟高压灭菌锅（MLS-3751L-PC，日本三洋有限公司）高压蒸汽灭菌。
5倒平板。将灭菌的培养基冷却到50度左右，在无菌工作台（VS-1300-U，上海沪净有限公司）上倒平板，待凝固使用。
6无菌检查。将灭菌的培养基放在37度的温室中培养48小时，以检查灭菌是否彻底。
实施例2：金黄色葡萄球菌ATCC25923液体LB培养基配制:
1称量。按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl 5g放入烧杯中。
2溶化。在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，最后补足水 1000mL。
3调pH。在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。直至pH达7.6。
4灭菌。将上述培养基以1.05kg/cm2，121℃，20分钟高压灭菌锅（MLS-3751L-PC，日本三洋有限公司）高压蒸汽灭菌。
5无菌检查，将灭菌的培养基放在37度的温室中培养48小时，以检查灭菌是否彻底。
实施例3 ：制备一种含金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂的固体增殖培养基
1称量。按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，乳糖1.2g，碳酸钙0.1g，甘油0.2g，酪氨酸0.03g，海带粉（干海带粉碎机（CF-4B，广州市大祥电子机械设备有限公司）粉碎后过200目筛网筛下物）0.04g，鸡肉粉（鸡肉烘箱（WH-C-0，南京迪富机械设备厂）100度烘干48小时后得干鸡肉，干鸡肉粉碎机（CF-4B，广州市大祥电子机械设备有限公司）粉碎后过200目筛网筛下物）0.02g，鲍鱼粉（鲍鱼烘箱（WH-C-0，南京迪富机械设备厂）100度烘干48小时后得干鲍鱼，干鲍鱼粉碎机（CF-4B，广州市大祥电子机械设备有限公司）粉碎后过200目筛网筛下物）0.1g。放入烧杯中。
2溶化。在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，将称好的琼脂20g放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足水 1000mL。
3调pH。在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。直至pH达7.6。
4灭菌。将上述培养基以1.05kg/cm2，121℃，20分钟高压灭菌锅（MLS-3751L-PC，日本三洋有限公司）高压蒸汽灭菌。
5倒平板。将灭菌的培养基冷却到50度左右，在无菌工作台（VS-1300-U，上海沪净有限公司）上倒平板，待凝固使用。
6无菌检查。将灭菌的培养基放在37度的温室中培养48小时，以检查灭菌是否彻底。
实施例4 ：制备一种含金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂的液体增殖培养基
1称量。按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，乳糖1.2g，碳酸钙0.1g，甘油0.2g，酪氨酸0.03g，海带粉（干海带粉碎机（CF-4B，广州市大祥电子机械设备有限公司）粉碎后过200目筛网筛下物）0.04g，鸡肉粉（鸡肉烘箱（WH-C-0，南京迪富机械设备厂）100度烘干48小时后得干鸡肉，干鸡肉粉碎机（CF-4B，广州市大祥电子机械设备有限公司）粉碎后过200目筛网筛下物）0.02g，鲍鱼粉（鲍鱼烘箱（WH-C-0，南京迪富机械设备厂）100度烘干48小时后得干鲍鱼，干鲍鱼粉碎机（CF-4B，广州市大祥电子机械设备有限公司）粉碎后过200目筛网筛下物）0.1g。放入烧杯中。
2溶化。在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，最后补足水 1000mL。
3调pH。在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。直至pH达7.6。
4灭菌。将上述培养基以1.05kg/cm2，121℃，20分钟高压灭菌锅（MLS-3751L-PC，日本三洋有限公司）高压蒸汽灭菌。
5无菌检查。将灭菌的培养基放在37度的温室中培养48小时，以检查灭菌是否彻底。
实施例5：利用本发明的增殖剂培养细菌和测试
使用上述固体培养基培养金黄色葡萄球菌ATCC25923
将1×106 个的金黄色葡萄球菌ATCC25923在无菌工作台（VS-1300-U，上海沪净有限公司）上分别接种到例1，例3组盛有不同的培养基的直径100mm平板培养皿中划线培养，每组3 个培养皿，37度温室培养24小时，每隔2小时拍照观察细菌生长数量。
图1和图2是用例1和例3培养基培养金黄色葡萄球菌ATCC25923后10小时的细菌数量，由图1和图2对照可以看出，用例3培养基所获取的细菌数量比例1所获取的细菌数量多出将近1倍，所以，本发明细菌增殖剂有助于提高细菌的增殖数量。
实施例6 ：利用本发明的增殖剂培养细菌和测试
使用上述液体培养基培养金黄色葡萄球菌ATCC25923
将1×106 个的金黄色葡萄球菌ATCC25923分别接种到例2，例4盛有不同的培养基的三角锥形瓶中培养，每组3个锥形瓶，37度温室培养24小时，每隔2小时移液管取出10毫升用紫外分光光度计（UV-3600，日本岛津有限公司）600nm处检测培养细菌浓度，从而获取细菌生长曲线（图3）。
由图3曲线图可以看出，细菌在其生长对数期的出现时间具有明显的不同，用例4细菌增殖剂的LB培养基进入对数生长期的时间大约是在9小时左右，14小时就可以达到最大生长量，而利用例2LB培养基的细菌大约进入对数生长期的时间在12小时，18小时达到最大生长量。
由上可见，使用本专利发明的细菌增殖剂刺激金黄色葡萄球菌ATCC25923进行增殖速度快，以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干改变和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂及其应用方法，其特征在于: 由乳糖、碳酸钙、甘油、酪氨酸、海带粉、鸡肉粉、鲍鱼粉组成, 各成分的比例为使得在加入金黄色葡萄球菌ATCC25923培养基后金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂中各成分作用浓度依次为乳糖浓度为1-2g/L、碳酸钙浓度为0.1-0.2g/L、甘油浓度为0.2-0.3g/L、酪氨酸浓度0.01-0.05g/L、海带粉浓度为0.02-0.05g/L、鸡肉粉浓度为0.01-0.03g/L、鲍鱼粉浓度为0.05-0.2g/L。
2.根据权利要求1 所述的一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂及其应用方法，其特征在于：各成分的比例为使得在加入金黄色葡萄球菌ATCC25923培养基后金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂中各成分作用浓度依次为乳糖浓度为1.2g/L，碳酸钙浓度为0.1g/L，甘油浓度为0.2g/L，酪氨酸浓度为0.03g/L，海带粉浓度为0.04g/L，鸡肉粉浓度为0.02g/L，鲍鱼粉浓度为0.1g/L。
3. 根据权利要求1、2所述的一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂及其应用方法，其特征在于：将所述金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂各成分加入金黄色葡萄球菌ATCC25923的培养基中。
4. 根据权利要求3 所述的一种金黄色葡萄球菌ATCC25923增殖促进剂及其应用方法，其特征在于：所述的金黄色葡萄球菌ATCC25923的培养基为LB培养基。
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