CN104490950B - 一种分离纯化锁阳黄酮的方法 - Google Patents
一种分离纯化锁阳黄酮的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明的目的在于提供一种利用大孔吸附树脂混合模拟移动床分离纯化高纯度锁阳总黄酮的方法，该工艺所得锁阳黄酮的提取率大于70％，纯度均达到80％以上，而且大孔吸附树脂的再生性能好，可以再生重复使用，生产过程中使用绿色溶剂，成本低、效率高、环境友好；工艺路线简单，可为药物、保健品或食品等提供高纯度的锁阳黄酮，便于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于天然产物分离纯化技术领域，具体涉及一种锁阳黄酮的分离方法。
背景技术
锁阳为锁阳科(Cynomoraceae)植物锁阳(Cynomorium Songaricum Rupr.)的干燥肉质茎，又名“不老药”、“金不换”、“沙漠人参”等。植物锁阳主要分布于内蒙古、宁夏、新疆、甘肃、青海等西北地区。锁阳味甘、性温，具有补肾、助阳、益精、润肠之功效，中医常用于治疗肾阳不足、精血亏虚、腰膝萎软、阳痿滑精、肠燥便秘等症。现代药理学研究表明,锁阳具有提高机体免疫力、清除自由基、抑制人体免疫缺陷病毒(HIV)、抑制血小板聚集等多种药理活性。
锁阳中含有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌等多种生理活性及药理作用,且无毒无害,对治疗和预防肿瘤、心血管病等疾病的有显著的效果，对延缓人体的衰老有重要意义，因此锁阳黄酮成为近年来研究、开发和利用的热点。据文献调研，目前关于锁阳黄酮的研究主要集中于锁阳黄酮的提取方法，而对于锁阳黄酮分离纯化工艺的系统研究较少。目前采用的锁阳黄酮分离纯化工艺普遍存在提取率低、锁阳总黄酮的含量低、不易工业化等缺点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种锁阳黄酮的分离方法，能够高效的从锁阳中分离锁阳黄酮，从而弥补现有技术的不足。
申请人在研究中发现，锁阳中除了锁阳黄酮外，还有大量的淀粉、鞣质和蛋白质等。这些成分一方面影响在提取过程中锁阳黄酮的溶出，从而导致锁阳黄酮提取率的降低；另一方面，鞣质等水溶性杂质大量溶于提取液中，导致锁阳黄酮分离纯化困难，纯度降低。本发明首先利用混合酶将锁阳的细胞壁、淀粉和蛋白类化合物水解，使锁阳黄酮充分分散在提取溶剂体系内；然后利用石灰水增加黄酮类物质的溶解性，使一些鞣质和水溶性杂质生成钙盐沉淀；最后将混合大孔吸附树脂(MAR)模拟移动床应用于锁阳黄酮的分离。
本发明的方法，包括有如下的步骤：
1)将锁阳粉碎，将纤维素酶和α-淀粉酶的复合酶水溶液加入到粉碎的锁阳中进行提取；所述的复合酶水溶液的pH值为5.0，提取温度为55℃；
2)向步骤1)的提取液中加入生石灰，至提取液有的pH值为11，在90～95℃提取2h，然后调节pH为8～9，放置4h后弃去沉淀，对上清液减压浓缩后，用盐酸调节pH为5～7；
3)向步骤2)的pH为5～7的上清液中加入乙醇进行沉淀，静置24h后过滤，弃去沉淀，得到上清液；
4)将步骤3)的上清液减压浓缩，然后加入到混合MAR模拟移动床进行吸附，流速为5～10BV/h(柱体积，简称BV)，弃去吸附残液；吸附结束后，用10～40BV的水进行清洗，流速为5～10BV/h，弃去清洗液；
5)用10～40BV的洗脱液进行洗脱，流速为5～10BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥后得到锁阳黄酮产品。
上述步骤1)中纤维素酶用量为5～15U/g，α-淀粉酶用量为50～100U/g，以锁阳的量作为基准；
上述步骤4)中混合MAR模拟移动床中包含有2～4根MAR柱；每根MAR柱之间即可串联也可并联，其中至少有2根MAR柱串联，MAR柱径高比为1:4～1:12。所用MAR柱使用XDA-8、AB-8、D101、LSA-21中的一种或几种以不同比例混合的树脂；
为了获得更好的分离效果，上述步骤4)中的大孔吸附树脂为混合树脂，其中XDA-8：AB-8：LSA-21的质量比为5:1:1；
上述步骤4)中的洗脱液为70～80％的乙醇；
上述步骤5)的干燥方法为喷雾干燥、低温冷冻干燥、微波干燥、真空干燥、鼓风干燥中的一种或几种。
本发明的的方法所得的锁阳黄酮的提取率大于90％，纯度均达到90％以上，而且在生产过程中使用绿色溶剂，成本低、效率高、环境友好、工艺路线简单，可为药物、保健品或食品等提供高纯度的锁阳黄酮，便于锁阳类产品的工业化生产
具体实施方式
本发明方法对锁阳黄酮的提取率大于90％，提取纯化的锁阳黄酮纯度均达到90％以上，可用作提高免疫力、缓解体力疲劳、抗氧化、抗衰老、提高缺氧耐受力、祛痤疮、祛黄褐斑、改善皮肤水份类药物、保健食品原料或新食品原料。
下面对本发明所涉及的锁阳总黄酮的检测方法记录如下：
A.1方法提要
利用紫外-可见光谱法测定锁阳黄酮提取物中总黄酮的含量，采用Al(NO3)3-NaNO2-NaOH络合体系进行显色。锁阳黄酮提取物以Al(NO3)3-NaNO2-NaOH体系显色后于500nm处可测得总黄酮的吸光度。A.2仪器
A.2.1紫外-可见分光光度计
A.2.2分析天平(分度值0.0001g)
A.3试剂
A.3.1三氯化铝、亚硝酸钠、氢氧化钠：分析纯
A.3.2水：去离子水或二次蒸馏水
A.3.3乙醇：分析纯
A.3.4芦丁对照品
A.4芦丁对照品溶液的制备
取芦丁对照品约20mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，加60％乙醇适量，超声处理使之溶解，放置至室温，加60％乙醇至刻度，摇匀，即得芦丁对照品储备液。
A.5标准曲线的制作
分别精密量取芦丁对照品储备液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,5.5,6.0ml置于25mL容量瓶中，用30％乙醇补足至6ml，加5％NaNO21ml，静置6min，然后加入10％AlNO31ml，静置6min，最后加入4％NaOH 10ml，30％乙醇定容后静置15min，并在500nm下测定吸光度，以芦丁对照品溶液浓度(x，mg/mL)为横坐标，吸光度(y)为纵坐标绘制标准曲线,得线性回归方程y＝k1x+b1。
A.6供试品溶液的制备
取本品约100mg，精密称定，置25ml容量瓶中，加60％乙醇适量，超声处理使之溶解，放置至室温，加60％乙醇至25ml，摇匀，即得置于25ml供试品储备液。
A.7测定方法
精密量取2mL供试品储备液，置25ml容量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“用30％乙醇补足至6ml”起依法测定，吸光度记为A1。
A.8锁阳黄酮含量的计算
具体公式如下：
式中A1为Al(NO3)3-NaNO2-NaOH显色法测得的总黄酮吸光度值，控制在0.2～0.8范围内，如果吸光度超过此范围，则可通过稀释样品溶液来控制，n为样品溶液的稀释倍数。k1和b1分别为AlCl3显色法标准曲线的斜率和截距，W为样品中锁阳黄酮的质量分数(％)，m为样品的称样量(mg)。
下面结合具体实施例对本发明进行详细的描述
实施例1：
1)取100g锁阳，粉碎成黄豆粒大小的颗粒，以纤维素酶和α-淀粉酶的复合酶水溶液为提取溶剂，其中纤维素酶用量为5U/g(锁阳)，α-淀粉酶用量为50U/g(锁阳)，提取两次。第一次加所取锁阳量的10倍量的溶剂，第二次加所取锁阳量的8倍量的溶剂，酶解时间均为1h，酶解温度为55℃，PH值为5.0，合并提取液；
2)向上述提取液中加入生石灰，加热搅拌，调节PH值为11，95℃放置2h，然后用HCl调节PH值9，放置4h弃去沉淀，减压浓缩至相对密度为1.10(25℃)，然后加HCl调节PH值为6.0，得到锁阳黄酮粗提取物；
3)向上述溶液中加乙醇调成体积百分比70％醇浓度，静置24h，过滤弃去沉淀，得到上清液；
4)将上述上清液减压浓缩至0.5mg/mL，分别称取0.1kg XDA-8，0.02kg AB-8，0.02kg LSA-21型大孔吸附树脂在水溶液中均匀混合，湿法装入两根内径5cm、柱高40cm串联的不锈钢柱中，利用泵将锁阳提取液由下端泵入大孔树脂混合柱中进行反复吸附5次，流速为10BV/h，弃去吸附残液；吸附结束后，用20BV的水进行洗脱，流速为10BV/h，弃去水洗脱液；
5)用20BV的70％的乙醇洗脱，流速为10BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩、喷雾干燥后得到锁阳黄酮产品。
本发明的方法在第2)步讲锁阳黄酮的提取物干燥后，按照锁阳黄酮的检测方法对其进行检测，最终测得提取物中总黄酮的含量为9.35％，锁阳总黄酮提取物干燥后的重量为51.96g，按此计算，所得锁阳总黄酮的量为4.86g。。而按照传统的提取方法对锁阳黄酮进行提取(取100g锁阳，粉碎成黄豆粒大小的颗粒，以水为提取溶剂提取三次，第一次加1L，提取2h，第二次和第三次加0.8L，提取2h，合并提取液，减压浓缩至相对密度为1.10(25℃)，得到锁阳黄酮的提取物。将锁阳黄酮干燥后，按照锁阳总黄酮的检测方法对其进行检测，最终测得提取物中总黄酮的含量为8.72％，锁阳总黄酮提取物干燥后的重量为35.22g，按此计算，所得锁阳总黄酮的量为3.07g。结果表明本发明使用纤维素酶和α-淀粉酶来处理锁阳后，获得的提取物中黄酮的量是传统的提取方法所得黄酮量的1.58倍，因此本发明对锁阳黄酮有较高的提取率。
从步骤2制备的锁阳黄酮粗提取物选用步骤3-5处理后，测得最终锁阳总黄酮产品中黄酮含量为98.7％，锁阳总黄酮提取物干燥后的重量为4.79g，相比步骤2中锁阳黄酮的转移率为97.3％，因此，利用本发明的分离方法总黄酮的纯度可以提高到十倍以上，锁阳黄酮的损失只有2.7％。
实施例2：
1)取12kg锁阳，粉碎成黄豆粒大小的颗粒，以纤维素酶和α-淀粉酶的复合酶水溶液为提取溶剂，纤维素酶用量为7U/g(锁阳)，α-淀粉酶用量为60U/g(锁阳)，提取两次,合并提取液。第一次加所取锁阳量的10倍量的溶剂，第二次加所取锁阳量的8倍量的溶剂，酶解时间均为1h，酶解温度为55℃，PH值为5.0；
2)向提取液中加入生石灰，加热搅拌，调节PH值为11，93℃放置2h，然后用HCl调节PH值8.5，放置4h，弃去沉淀，减压浓缩至相对密度为1.15(25℃)，然后加HCl调节PH值为6.0；
3)向上述溶液中加乙醇调成体积百分比70％醇浓度，静置24h，过滤弃去沉淀，得到上清液；
4)将上述上清液减压浓缩至0.5mg/mL，称取10kg XDA-8，2kg AB-8，2kg LSA-21型大孔吸附树脂在水溶液中均匀混合，湿法装入四根内径30cm、柱高300cm的不锈钢柱中，两组柱子分别串联后与其它一组柱子并联，利用泵将锁阳提取液由下端泵入大孔树脂混合柱中进行反复吸附5次，流速为5BV/h，弃去吸附残液；吸附结束后，用40BV的水进行洗脱，流速为5BV/h，弃去水洗脱液；
5)用20BV的70％的乙醇洗脱，流速为10BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩、喷雾干燥后得到锁阳黄酮产品。
按照锁阳总黄酮的检测方法对其进行检测，测得总黄酮含量为96.2％，总黄酮的转移率为95.3％。
实施例3:
1)取30kg锁阳，粉碎成黄豆粒大小的颗粒，以纤维素酶和α-淀粉酶的复合酶水溶液为提取溶剂，纤维素酶用量为10U/g(锁阳)，α-淀粉酶用量为90U/g(锁阳)，提取两次,合并提取液。第一次加所取锁阳量的10倍量的溶剂，第二次加所取锁阳量的8倍量的溶剂，酶解时间均为1h，酶解温度为55℃，PH值为5.0；
2)向提取液中加入生石灰，加热搅拌，调节PH值为11，95℃放置2h，然后用HCl调节PH值9，放置4h，弃去沉淀，减压浓缩至相对密度为1.2(25℃)，然后加HCl调节PH值为7.0；
3)向上述溶液中加乙醇调成体积百分比70％醇浓度，静置24h，过滤弃去沉淀,得到上清液；
4)将上清液减压浓缩至0.5mg/mL(该浓度按原药材计)。称取25kg XDA-8，5kg AB-8，5kg LSA-21型大孔吸附树脂在水溶液中均匀混合，湿法装入两根内径30cm、柱高360cm的串联不锈钢柱中，利用泵将锁阳提取液由上端泵入大孔树脂混合柱中进行反复吸附5次，流速为10BV/h，弃去吸附残液；吸附结束后，用20BV的水进行洗脱，流速为10BV/h，弃去水洗脱液；
5)用20BV的75％的乙醇洗脱，流速为10BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩、微波干燥后得到锁阳黄酮产品。
按照锁阳总黄酮的检测方法对其进行检测，测得总黄酮含量为97.4％，总黄酮的转移率为94.6％。
实施例4：
1)取100g锁阳，粉碎成黄豆粒大小的颗粒，以纤维素酶和α-淀粉酶的复合酶水溶液为提取溶剂，纤维素酶用量为5U/g(锁阳)，α-淀粉酶用量为50U/g(锁阳)，提取两次，合并提取液。第一次加所取锁阳量的10倍量的溶剂，第二次加所取锁阳量的8倍量的溶剂，酶解时间均为1h，酶解温度为55℃，PH值为5.0；
2)向提取液中加入生石灰，加热搅拌，调节PH值为11，95℃放置2h，然后用HCl调节PH值9，放置4h，弃去沉淀，减压浓缩至相对密度为1.10(25℃)，然后加HCl调节PH值为6.0；
3)向上述溶液中加乙醇调成体积百分比70％醇浓度，静置24h，过滤弃去沉淀，得到上清液；
4)将上述上清液减压浓缩至0.5mg/mL(该浓度按原药材计)。按照最佳混合树脂的比例分别称取0.14kg AB-8型大孔吸附树脂在水溶液中均匀混合，湿法装入内径10cm、柱高80cm的不锈钢柱中，利用泵将锁阳提取液由下端泵入大孔树脂混合柱中进行反复吸附5次，流速为10BV/h，弃去吸附残液；吸附结束后，用20BV的水进行洗脱，流速为10BV/h，弃去水洗脱液；
5)用20BV的80％的乙醇洗脱，流速为10BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩、喷雾干燥后得到锁阳黄酮产品。
本实施例中的大孔吸附树脂的型号为单一的AB-8型，而且是用一根树脂柱进行分离的，按照锁阳黄酮的检测方法对其进行检测，测得黄酮含量为75.3％，总黄酮的转移率为64.3％，锁阳黄酮含量和转移率均小于实施例1。一方面是由于锁阳黄酮是几类黄酮的混合物，由于各类黄酮的功能团不同，因此需要含有不同官能团类型和比例的混合树脂对其进行分离。此外，采用串联树脂对样品进行吸附，在样品吸附的过程中，一根树脂柱的上样过程是从顶部到底部，一根树脂的上样过程是从底部到顶部，属于逆流吸附，更有利于对锁阳黄酮的选择性吸附。
本发明中所得的锁阳黄酮还可以作为原料制成其它口服制剂，包括：片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂等多种剂型。
Claims (4)
1.一种分离纯化锁阳黄酮的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步骤：
1）将锁阳粉碎，将纤维素酶和α-淀粉酶的复合酶水溶液加入到粉碎的锁阳中进行提取；所述的复合酶水溶液的pH值为5.0，提取温度为55℃；
2）向步骤1）的提取液中加入生石灰，至提取液的pH值为11，在90~95℃提取2h，然后调节pH为8~9，放置4 h后弃去沉淀，对上清液减压浓缩后，用盐酸调节pH为5~7；
3）向步骤2）的pH为5~7的上清液中加入乙醇进行沉淀，静置24 h后过滤，弃去沉淀，得到上清液；
4）将步骤3）的上清液减压浓缩，然后加入到混合MAR模拟移动床进行吸附，流速为5～10 BV/h，弃去吸附残液；吸附结束后，用10～40 BV的水进行清洗，流速为5～10 BV/h，弃去清洗液；
所述的混合MAR模拟移动床中包含有2~4根MAR柱；其中至少有2根MAR柱串联；
所述的MAR柱使用混合树脂，其中XDA-8：AB-8：LSA-21的质量比为5:1:1；
5）用10～40 BV的70~80%的乙醇进行洗脱，流速为5～10 BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥后得到锁阳黄酮产品 。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1）中纤维素酶用量为5~15U/g，α-淀粉酶用量为50~100 U/g，以锁阳的质量作为基准。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的MAR柱径高比为1:4~1:12。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤5）的干燥方法为喷雾干燥、低温冷冻干燥、微波干燥、真空干燥、鼓风干燥中的一种或几种。
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102258549A (zh) * | 2011-08-30 | 2011-11-30 | 河南中医学院 | 一种锁阳提取物在制备治疗女性更年期综合症药物的新用途 |
| CN104069141A (zh) * | 2014-07-24 | 2014-10-01 | 河南中医学院 | 一种锁阳提取物在制备抗抑郁药物中的应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 大孔吸附树脂分离纯化锁阳总黄酮效果初探;张庭瑞等;《草业科学》;20110815;第28卷(第8期);1427-1429 * |
| 药用植物黄酮类化合物的提取方法;吴聪华等;《武汉工程大学学报》;20110930;第33卷(第9期);34-38 * |
| 锁阳中黄酮的提取工艺研究;孟敏等;《时珍国医国药》;20091231;第20卷(第9期);2258-2260 * |
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