CN104488707A - 一种铁皮石斛的培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于提高铁皮石斛结实率的培养基及该培养基的制备方法。一种铁皮石斛的培养基，包括10%香蕉质量比+MS +3%蔗糖质量比+0.8%琼脂质量比+2.0mg/L NAA+IAA浓度为0.2～1.0mg／L+6-BA浓度为1.0～5.0mg／L；其中，改良MS 培养基中 KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量为MS 培养基中KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量的三倍，其余组分含量不变。用于提高铁皮石斛结实率的培养基及该培养基的制备方法，该培养基克服现有技术中铁皮石斛结实阶段营养不良导致结实率低、果夹小的问题，诱导铁皮石斛结实，提高铁皮石斛结实率。

Description

一种铁皮石斛的培养基
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于提高铁皮石斛结实率的培养基及该培养基的制备方法。
背景技术
铁皮石斛又称黑节草, 属兰科附生兰类，为多年生草本植物。铁皮石斛是石斛中的极品，因其表皮呈铁绿色而得名，是著名的观赏兼药用兰花；现有技术中，对铁皮石斛的培养阶段中，大多对外植体原球茎进行诱导培养、增殖、分化、生化培养，得到小苗，但是对后期的试管结实的研究比较少；铁皮石斛对生境条件要求苛刻，难结实，因此，对铁皮石斛结实的培养对提高植物结实机理研究具有非常重要的意义；而现有的铁皮石斛结实过程中，授粉后植株一般没有单独特殊的营养供应导致营养元素不充足，直接影响果实发育，造成果夹小，结实率低；并且，通常情况下，培养基的制备过程中一般采用热灌装的方式，即白糖和琼脂粉均是经加热煮沸后倒入灌装机中灌装，该方法制备出的培养基营养元素流失严重，灌装不均匀，不便于结实的培养。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于提高铁皮石斛结实率的培养基及该培养基的制备方法，该培养基克服现有技术中铁皮石斛结实阶段营养不良导致结实率低、果夹小的问题，诱导铁皮石斛结实，提高铁皮石斛结实率。
本发明是这样实现的，一种铁皮石斛的培养基，包括10%香蕉质量比+MS +3%蔗糖质量比+0.8%琼脂质量比+2.0mg/L NAA+IAA浓度为0.2～1.0mg／L+6-BA浓度为1.0～5.0mg／L；其中，改良MS 培养基中 KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量为MS 培养基中KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量的三倍，其余组分含量不变。
    根据上述发明所述的一种铁皮石斛的培养基的配置方法，其特征在于：包括：
A 量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；
B 准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；
C 按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；
D 将B和C的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA浓度为0.1mg/ml，混合均匀，加入IAA浓度为0.2～1.0mg／L和6-BA浓度为1.0～5.0mg／L；
E 加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；
F 冷却至50±5℃时，调pH至pH5.6～6.0，分装于培养瓶内，33.3ml/瓶，培养时保持温度25℃～28℃。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细的描述，但它们不是对本发明的进一步限制。
实施例1
该用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配方为：
包括10%香蕉质量比+MS +3%蔗糖质量比+0.8%琼脂质量比+2.0mg/L NAA+IAA浓度为0.2～1.0mg／L+6-BA浓度为1.0～5.0mg／L；其中，改良MS 培养基中 KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量为MS 培养基中KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量的三倍，其余组分含量不变。
其中，每升改良MS 培养基中含有的组分及各组分的重量如下：NH4NO3 165mg、KNO35700mg、CaCl2·2H2O 440mg、MgSO4·7H2O 370mg、KH2PO4 510mg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4·H2O 16.9mg、ZnSO4·7H2O 8.6mg、Na2MoO4·2H2O 0.25mg、CuSO4·5H2O 0.025mg 、CoCl2·6H2O 0.025mg、 FeSO4·7H2O 27.8mg、Na2-EDTA·2H2O 37.3mg、肌醇100 mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5 mg、盐酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg。
上述用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配制过程为：
A 量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；
B 准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；
C 按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；
D 将B和C的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA浓度为0.1mg/ml，混合均匀，加入IAA浓度为0.2mg／L和6-BA浓度为1.0mg／L；
E 加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；
F 冷却至50±5℃时，调pH至pH5.6～6.0，分装于培养瓶内，33.3ml/瓶，培养时保持温度25℃～28℃。
实施例2
该用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配方为：
包括10%香蕉质量比+MS +3%蔗糖质量比+0.8%琼脂质量比+2.0mg/L NAA+IAA浓度为0.2～1.0mg／L+6-BA浓度为1.0～5.0mg／L；其中，改良MS 培养基中 KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量为MS 培养基中KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量的三倍，其余组分含量不变。
其中，每升改良MS 培养基中含有的组分及各组分的重量如下：NH4NO3 165mg、KNO35700mg、CaCl2·2H2O 440mg、MgSO4·7H2O 370mg、KH2PO4 510mg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4·H2O 16.9mg、ZnSO4·7H2O 8.6mg、Na2MoO4·2H2O 0.25mg、CuSO4·5H2O 0.025mg 、CoCl2·6H2O 0.025mg、 FeSO4·7H2O 27.8mg、Na2-EDTA·2H2O 37.3mg、肌醇100 mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5 mg、盐酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg。
上述用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配制过程为：
A 量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；
B 准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；
C 按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；
D 将B和C的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA浓度为0.1mg/ml，混合均匀，加入IAA浓度为1.0mg／L和6-BA浓度为5.0mg／L；
E 加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；
F 冷却至50±5℃时，调pH至pH5.6～6.0，分装于培养瓶内，33.3ml/瓶，培养时保持温度25℃～28℃。
   实施例3
该用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配方为：
包括10%香蕉质量比+MS +3%蔗糖质量比+0.8%琼脂质量比+2.0mg/L NAA+IAA浓度为0.2～1.0mg／L+6-BA浓度为1.0～5.0mg／L；其中，改良MS 培养基中 KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量为MS 培养基中KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量的三倍，其余组分含量不变。
其中，每升改良MS 培养基中含有的组分及各组分的重量如下：NH4NO3 165mg、KNO35700mg、CaCl2·2H2O 440mg、MgSO4·7H2O 370mg、KH2PO4 510mg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4·H2O 16.9mg、ZnSO4·7H2O 8.6mg、Na2MoO4·2H2O 0.25mg、CuSO4·5H2O 0.025mg 、CoCl2·6H2O 0.025mg、 FeSO4·7H2O 27.8mg、Na2-EDTA·2H2O 37.3mg、肌醇100 mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5 mg、盐酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg。
上述用于提高铁皮石斛结实率的培养基的配制过程为：
A 量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；
B 准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；
C 按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；
D 将B和C的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA浓度为0.1mg/m，混合均匀，加入IAA浓度为0.6mg／L和6-BA浓度为3.0mg／L；
E 加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；
F 冷却至50±5℃时，调pH至pH5.6～6.0，分装于培养瓶内，33.3ml/瓶，培养时保持温度25℃～28℃。
试验例
将授粉后的铁皮石斛植株转接到本发明实施例1 制备的用于提高铁皮石斛结实率的培养基中，采用28 瓦日光色灯管作为光源，光照强度为3000lx，在温度为23℃，湿度为50%，光照时间13 小时/ 天的条件下，培养100 天；其中，表1 为将授粉后的植株转接到本发明培养基中进行结实培养与转接到生根培养基中进行培养后的植株状态的对照：
  授粉后子房膨大时间 授粉结实率 果夹大小
实施例 1 制得的培养基 4~8 天 90% 果夹直径为 0.8-1cm 果夹长度为 1.0~2.0cm
生根培养基 5~10 天 73% 果夹直径为 0.65~0.93cm 果夹长度为 1.0~1.78cm
    虽然结合具体实施例对本发明的具体实施方式进行了详细地描述，但并非是对本专利保护范围的限定。在权利要求书所限定的范围内，本领域的技术人员不经创造性劳动即可做出的各种修改或调整仍受本专利的保护。

Claims (2)

1.一种铁皮石斛的培养基，其特征在于：包括10%香蕉质量比+MS +3%蔗糖质量比+0.8%琼脂质量比+2.0mg/L NAA+0.2～1.0mg／L  IAA+1.0～5.0mg／L  6-BA；其中，改良MS 培养基中 KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量为MS 培养基中KNO3、KH2PO4 和H3BO3 用量的三倍，其余组分含量不变。
2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛的培养基的配置方法，其特征在于：包括：
A 量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；
B 准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；
C 按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；
D 将B和C的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA，NAA的浓度为0.1mg/ml，混合均匀，加入IAA，IAA的浓度0.2～1.0mg／L和6-BA，6-BA的浓度为1.0～5.0mg／L；
E 加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；
F 冷却至50±5℃时，调pH至pH5.6～6.0，分装于培养瓶内，33.3ml/瓶，培养时保持温度25℃～28℃。
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