CN104483436A - 七叶莲质量标准 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种改进的七叶莲质量标准，其特征在于：增加了密脉鹅掌柴和短序鹅掌柴性状、薄层鉴别及含量测定项，所述含量测定采用紫外分光光度法测定七叶莲中总黄酮的含量。通过增加薄层色谱鉴别及含量测定，使七叶莲质量标准在原有质量标准基础上得到提高，有效保证药材质量的可控性，进行保证了药材质量的稳定性，为后续药品的质量可控性、稳定性、有效性提供了有力的保证。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药材的质量标准，特别涉及中药材七叶莲质量标准。
背景技术
七叶莲，别名鸭脚木、汉桃叶、手树、七加皮、七叶蘑、七叶烂、七叶藤、七加皮、狗脚蹄、没骨消。
七叶莲收载于《贵州省中药材.民族药材质量标准》(2003年版)、《云南省中药材标准》、《湖南省中药材标准》等标准上，原《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)中其七叶莲无鉴别及含量测定项，只收载五加科鹅掌藤(Scheffleraarboricola Hayata)、现增加密脉鹅掌柴(Schefflera venulosa(Wight et Arn.)Harms)、短序鹅掌柴Schefflera bodinieri(Levl.)Rehd及同属植物的干燥茎或带叶茎枝。性温，味辛、微苦，具有祛风止痛、活血消肿的功效，用于风湿性关节炎、痛风关节炎、跌打损伤和各种疼痛的治疗均有较好的疗效。国内外研究表明，七叶莲的化学成分主要是齐墩果烷型的五环三萜及其苷类，另外还含有甾醇、长链烯烃、有机酸、挥发油等成分。药理学研究表明，七叶莲中起抗炎镇痛作用的活性成分为三萜皂苷类化合物，采用齐墩果酸作对照进行HPCL试验，结果齐墩果酸不稳定，含量较低，测定难道较大；参照王立业采用香草醛-冰醋酸-硫酸比色法，以齐墩果酸为指标性成分，在532nm处测定了七叶莲药材中总皂苷含量，但此方法的专属性较差；因此，现有七叶莲的质量标准不能很好的控制七叶莲的质量，进而会对后续生产的药品质量也带来不稳定的影响。
为解决上述问题，本发明在原来的质量标准基础上进行了质量标准提高，增加了薄层鉴别及含量测定，使七叶莲的质量可控。
发明内容
本发明提供一种七叶莲质量标准，目的是解决现有技术问题，在原有质量标准基础上进行改进，提供一种能更好控制七叶莲质量的质量标准，进而保证后续药品质量的可控性、稳定性、有效性。
本发明解决问题采用的技术方案是：
七叶莲质量标准，增加了密脉鹅掌柴和短序鹅掌柴性状鉴别、薄层鉴别及含量测定项，所述含量测定采用紫外分光光度法测定七叶莲中总黄酮的含量。
性状：
密脉鹅掌柴本品茎呈圆柱形，绿色，有黄色皮孔。叶柄圆柱形，小叶5～7；长10～18cm，无毛，小叶柄不等长有狭沟；托叶和叶柄基部合生成鞘状；叶片革质，椭圆形至长圆形，长11～16cm，宽4～6cm，先端钝，急尖或短渐尖，基部渐狭、钝形至近圆形，全缘两面均无毛；网脉明显；气微，味淡。
短序鹅掌柴本品根呈圆柱型，表面黄褐色，小枝有纵皱纹，无毛；节间短。叶柄圆柱形，叶有小叶6-9，稀11；小叶片膜质、薄纸质或坚纸质，长圆状椭圆形、披针状椭圆形、披针形以至线状披针形，边缘疏生细锯齿或波状钝齿，中脉仅下面隆起，侧脉5-16对。气微，味淡。
所述薄层鉴别，包括以下步骤；取本品粉末1g，加甲醇25mL，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取七叶莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水＝4∶4∶3的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。喷以1％三氯化铁和1％铁氰化钾的等量混合液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
所述含量测定，包括以下步骤；
(1)仪器与试药
紫外分光光度计；
无水芦丁对照品，七叶莲药材；
(2)实验方法
对照品溶液制备：精密称取无水芦丁对照品50mg，置50ml量瓶中，加60％乙醇35ml，微热使溶解，放冷，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得对照品；
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铅溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂作空白，在紫外分光光度计500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法：取供试品粉末0.5g，精密称定，置锥形瓶中，加60％乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，称定重量，用60％乙醇补足重量，过滤，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法操作，另精密吸取续滤液5ml，加水稀释至25ml，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中无水芦丁的量，计算，既得总黄酮的含量。
本发明的有益效果：
因七叶莲为五加科鹅掌柴属，与《中国药典》2010版收载汉桃叶片所用药材同科同属(为七叶莲的另一个种)，所以本发明参照《中国药典》2010版汉桃叶片含量测定方法，测定总黄酮，结果质量可控，同时增加薄层色谱鉴别，使七叶莲质量标准在原有质量标准基础上得到提高，有效保证药材质量的可控性，进行保证了药材质量的稳定性，为后续药品的质量可控性、稳定性、有效性提供了有力的保证。
附图说明
图1是七叶莲薄层色谱图-紫外定下显示的荧光斑点；
图2是七叶莲薄层色谱图-喷显示剂后的显色斑点；
图3是标准曲线。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明。
【鉴别】薄层色谱法进行鉴别。
取本品粉末1g，加甲醇25mL，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取七叶莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(4∶4∶3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。喷以1％三氯化铁和1％铁氰化钾的等量混合液(临用配制)。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。紫外光灯下薄层色谱图结果见图1，喷显色剂后薄层色谱图结果见图2，薄层板上从左至右的6个点样点依次为对照药材、供试品1、供试品2、供试品3、供试品4、供试品5。
因七叶莲为五加科鹅掌柴属，与《中国药典》2010版收载汉桃叶片所用药材同科同属(为七叶莲的另一个种)，所以本发明参照《中国药典》2010版汉桃叶片含量测定方法，测定七叶莲中总黄酮，结果质量可控。
【含量测定】紫外分光光度法(《中国药典》附录V A)测定总黄酮的含量。
1材料
1.1仪器与试药
紫外分光光度计UV 1801(上海美析仪器有限公司)；超纯水纯化系统(成都超纯水科技有限公司)；AL204电子天平(梅特勒-托利多)；HS10260D型超声波清洗器；水浴锅。
1.2所用试剂均为分析纯，水为超纯水；无水芦丁对照品(中国生物制品鉴定所，批号：110731-201004)；七叶莲药材(由贵州景诚制药有限公司药材库和质量部提供)
2实验方法
2.1系统适用性试验(参照：《中国药典》汉桃叶片总黄酮含量测定方法)
2.1.1对照品溶液制备
精密称取无水芦丁对照品50mg(49.86mg)，置50ml量瓶中，加60％乙醇35ml，微热使溶解，放冷，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得(每1ml中约含无水芦丁0.19976mg)。
2.1.2标准曲线的制备
精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铅溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂作空白，找紫外-可见分光光度发附录(V A)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2.1.3测定法
取供试品粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置锥形瓶中，加60％乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，称定重量，用60％乙醇补足重量，过滤，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法操作，另精密吸取续滤液5ml，加水稀释至25ml，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中无水芦丁的量，计算，既得。
表1 供试品处理优选方案超声与回流对比表
结论：1、从吸收值反应超声提取总黄酮，提取不完全；2、回流提取2小时、2.5小时和3小时总黄酮紫外吸收值无显著差异，故选择回流提取2小时。
测定法：取供试品粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置锥形瓶中，加60％乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，称定重量，用60％乙醇补足重量，过滤，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法操作，另精密吸取续滤液5ml，加水稀释至25ml，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中无水芦丁的量，计算，既得。本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计算不得低于1.50％。
2.3含量测定的方法学考察
2.3.1线性关系考察
精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铅溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂作空白，找紫外-可见分光光度发附录(V A)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
表2 线性关系考察
其绘制的标准曲线如图3所示。
结论：线性回归方程：y＝21.365x+0.0153，相关系数r＝0.9997，无水芦丁在线性范围：7.9904-47.9424μg线性良好。
2.3.2精密度实验
精密吸取芦丁对照品溶液3ml，照拟定测定方法进行处理，连续进样5次，记录吸收值，求RSD值，实验结果见表3：
表3 精密度实验结果
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD |
| 吸收值 | 0.531 | 0.528 | 0.526 | 0.523 | 0.530 | 0.525 |
结论：吸收值平均值为0.527，RSD值为0.53％，表明该紫外分光光度计的精密度良好。
2.2.3重复性实验
分别精密称取同一批号(批号：20140326)药材5份，每份各0.5g，按照拟定测定方法进行处理制备样品溶液，按上述条件测定样品中总黄酮的含量，求RSD值，实验结果见表4：
表4 重复性实验结果
结论：供试品中总黄酮的平均含量为1.778％，RSD值为1.58％，表明此方法的测定总黄酮具有良好的重复性。
2.3.4稳定性实验
按拟定测定法准备供试品溶液1份，分别在0小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时进行测定，记录吸收值积，计算样品中总黄酮的含量，求RSD值，实验结果见表5：
表5 稳定性实验结果
结论平均含量为1.75％，RSD至为0.99％，表明供试品在12h内稳定性良好。
2.3.5加样回收率实验
精密称取已知含量(1.778％)样品6份，每份各0.25g，分别加入适量对照品溶液(1.104mg/mL-1)4mL，按拟定测定方法制备供试品溶液制备方法，按上述条件进行测定，计算总黄酮的含量和平均回收率，求RSD值，实验结果见表6：
表6 加样回收率实验结果
结论：平均回收率为99.85％，RSD值为2.35％，表明该提
取方法具有良好的回收率。
2.3.6 10批次样品测定
表7 十批样品检验表
结论：根据测定结果，10样品含量最高为3.101％，含量最低为1.156％，平均含量2.117％，本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C27H30O16)计算不得低于1.50％。
【性味】甘、微苦，平。
【功能与主治】祛风除湿，消食化积，解毒消肿，活血止痛。用于风湿痹痛，食积腹胀，小儿疳积，腹泻，痢疾，黄疸，烫火伤，湿疹，疮疡肿痛。
【用法与用量】30～60g。外用：适量。
【贮藏】置通风干燥处。
修订后七叶莲质量标准如下所示：
七叶莲
Qiyelian
RADIX ET CAULIS ET FOLIUM SCHEFFLERAE
本品为五加科植物鹅掌藤Schefflera arboricola Hayata、密脉鹅掌柴Schefflera venulosa(Wight et Arn.)Harms、短序鹅掌柴Schefflerabodinieri(Levl.)Rehd的根、藤茎或茎叶。全年均可采收，洗净，鲜用或晒干。
【性状】鹅掌藤本品根呈圆柱形，表面黄褐色，具纵皱纹，质坚硬，断面皮部窄，黄褐色，木部宽广，类白色。茎呈圆柱形，表面绿色，有细纵纹，光滑无毛。叶互生，掌状复叶；小叶通常7枚，总柄长7～9cm；托叶在叶柄基部与叶柄合生，显著；小叶片长卵圆形，长9～16cm，宽2.5～4cm，先端尾尖，基部圆形，全缘，草质，上面绿色，光泽，下面淡绿色，网脉明显；小叶柄长1～3cm，中间的最长。气微，味淡。
密脉鹅掌柴本品茎呈圆柱形，绿色，有黄色皮孔。叶柄圆柱形，小叶5～7；长10～18cm，无毛，小叶柄不等长有狭沟；托叶和叶柄基部合生成鞘状；叶片革质，椭圆形至长圆形，长11～16cm，宽4～6cm，先端钝，急尖或短渐尖，基部渐狭、钝形至近圆形，全缘两面均无毛；网脉明显；气微，味淡。
短序鹅掌柴本品根呈圆柱型，表面黄褐色，小枝有纵皱纹，无毛；节间短。叶柄圆柱形，叶有小叶6-9，稀11；小叶片膜质、薄纸质或坚纸质，长圆状椭圆形、披针状椭圆形、披针形以至线状披针形，边缘疏生细锯齿或波状钝齿，中脉仅下面隆起，侧脉5-16对。气微，味淡。
【鉴别】取本品粉末1g，加甲醇25mL，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取七叶莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以乙酸丁酯-甲酸-水(4∶4∶3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑；再喷以1％三氯化铁和1％铁氰化钾的等量混合液(临用配制)，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主条斑。
【含量测定】对照品溶液的制备精密称取无水芦丁对照品50mg，置50ml量瓶中，加60％乙醇35ml，微热使溶解，放冷，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得(每1ml中约含无水芦丁0.2mg)。标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铅溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂作空白，找紫外-可见分光光度发附录(V A)，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取供试品粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置锥形瓶中，加60％乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，称定重量，用60％乙醇补足重量，过滤，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法操作，另精密吸取续滤液5ml，加水稀释至25ml，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中无水芦丁的量，计算，既得。
本品按照干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C27H30016)计算不得少于1.50％
【性味】微苦，温。
【功能主治】祛风除湿，活血止痛。用于风湿痹痛，胃痛，跌扑骨折，外伤出血。
【用法用量】10～15g。外用：适量，煎水洗，或鲜品捣烂敷。
【注意】孕妇慎用。
【贮藏】置干燥处。
Claims (4)
1.七叶莲质量标准，其特征在于：增加了密脉鹅掌柴和短序鹅掌柴性状、薄层鉴别及含量测定项，所述含量测定采用紫外分光光度法测定七叶莲中总黄酮的含量。
2.如权利要求1中所述的七叶莲质量标准，其特征在于：性状；
密脉鹅掌柴本品茎呈圆柱形，绿色，有黄色皮孔。叶柄圆柱形，小叶5～7；长10～18cm，无毛，小叶柄不等长有狭沟；托叶和叶柄基部合生成鞘状；叶片革质，椭圆形至长圆形，长11～16cm，宽4～6cm，先端钝，急尖或短渐尖，基部渐狭、钝形至近圆形，全缘两面均无毛；网脉明显；气微，味淡；
短序鹅掌柴本品根呈圆柱型，表面黄褐色，小枝有纵皱纹，无毛；节间短。叶柄圆柱形，叶有小叶6-9，稀11；小叶片膜质、薄纸质或坚纸质，长圆状椭圆形、披针状椭圆形、披针形以至线状披针形，边缘疏生细锯齿或波状钝齿，中脉仅下面隆起，侧脉5-16对。气微，味淡。
3.如权利要求1中所述的七叶莲质量标准，其特征在于：所述薄层鉴别，包括以下步骤；取本品粉末1g，加甲醇25mL，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取七叶莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水＝4∶4∶3的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。喷以1％三氯化铁和1％铁氰化钾的等量混合液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
4.如权利要求1中所述的七叶莲质量标准，其特征在于：所述含量测定，包括以下步骤；
(1)仪器与试药
紫外分光光度计；
无水芦丁对照品，七叶莲药材；
(2)实验方法
对照品溶液制备：精密称取无水芦丁对照品50mg，置50ml量瓶中，加60％乙醇35ml，微热使溶解，放冷，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得对照品；
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25量瓶中，加水至6ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10％硝酸铅溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂作空白，在紫外分光光度计500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
测定法：取供试品粉末0.5g，精密称定，置锥形瓶中，加60％乙醇100ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，称定重量，用60％乙醇补足重量，过滤，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法操作，另精密吸取续滤液5ml，加水稀释至25ml，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中无水芦丁的量，计算，既得；本品按照干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁计算不得少于1.50％。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150401 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |