CN104472852B - 一种钙强化的富含乳清蛋白多肽制品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种钙强化的富含乳清蛋白多肽制品及其制备方法。本发明所述的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品是按照下述方法制备的:将乳清粉配制成水溶液,经乳酸菌降解后,离心获得上清液,即得,其中,降解过程中添加了碳酸钙。本发明方法制得的乳清蛋白多肽制品不仅含有乳清蛋白源多肽,代谢产物乳酸、醋酸、柠檬酸等,还得到了Ca2+强化,可作为功能食品生产的原料。
Description
技术领域
本发明涉及一种钙强化的富含乳清蛋白多肽制品及其制备方法,该制品富含乳清蛋白源多肽、乳酸菌的代谢产物和Ga2+,具有抗氧化和抗肿瘤活性。属于保健食品加工技术领域。
背景技术
乳清粉是奶酪加工过程中产生的副产物,含有乳清蛋白、磷脂、乳糖、矿物质以及维生素等组成成分。根据加工工艺的不同,目前市售的乳清粉分为乳清分离蛋白粉(蛋白质含量在90%以上)、乳清浓缩蛋白粉(蛋白质含量在25-90%)、低乳糖乳清粉(蛋白质含量在18.0-24.0%)、甜乳清粉(蛋白质含量在11.0-14.5%)、脱盐乳清粉(蛋白质含量11.0-15.0%)等。其中乳清蛋白的主要组成成分为beta-乳球蛋白(BLG,58%)和alpha-乳白蛋白(ALA,13%)。近年来,乳清蛋白因其显著的生理功能和对人体的健康促进作用而成为良好的功能性食品的添加剂。同时,乳清蛋白是蕴藏着大量生物活性肽的重要资源,经过蛋白酶或微生物降解将生物活性肽释放出来,例如抗高血压、降血脂、抗微生物、抗氧化、阿片剂和免疫调节等活性。
目前研究乳清蛋白水解产生生物活性多肽的常用方法是酶法水解,涉及的蛋白酶主要有胰蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶和地衣形芽孢杆菌碱性蛋白酶、嗜热菌蛋白酶等、枯草杆菌蛋白酶等,使用单一组分酶或复合酶(Functional and Biological Properties ofPeptides Obtained by Enzymatic Hydrolysis of Whey Proteins,Gauthier S.F.andPouliot Y.,2003)。鉴于上述乳清蛋白及其多肽的生物活性,许多乳清蛋白降解制品被开发出来,例如中国发明专利CN 101736067A“一种乳清蛋白降血压肽及其制备方法与应用”和CN 101801209A“乳清蛋白水解物”,酶法降解普遍存在的问题是专一性差、副产物多、随着水解度的提高出现苦味和产物的转化率低等,导致目标产物难于分离纯化,限制了乳源生物活性肽的工业化生产的规模。利用微生物发酵乳蛋白产生生物活性肽的研究主要是集中在对牛乳中酪蛋白的水解及对所产生的多肽的功能性评价,例如在日本可尔必思株式会社的发酵乳制品中发现了具有抗高血压活性的酪蛋白源三肽isoleucine-proline-proline(Ile-Pro-Pro)和valine-proline-proline(Val-Pro-Pro),该产品是一种经瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)在鲜牛乳中发酵而制成的酸乳饮品(Nakamura et al.1995;Xu et al.2008)。利用微生物,特别是乳酸菌发酵乳清蛋白产生生物活性肽的研究报道极少。
此外,乳清蛋白水解产生多肽和氨基酸,导致反应体系的pH下降,影响了蛋白酶的水解活性。为了维持反应体系的pH值处于最适条件,通常在反应过程中流加一定浓度的氢氧化钠溶液或氨水等碱性溶液,目前常用的酶法水解产生多肽常采用此方法维持反应体系的pH值。但是这种方法会导致反应体系体积增加,特别在水解度超过30%时,该方法的经济成本高,不适用于多肽的生产。因此,需要提供一种更加有效地制备乳清蛋白多肽的方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的制备方法。该方法是以乳清粉为原料,利用乳酸菌降解乳清蛋白,获得乳清蛋白多肽制品。通过该方法制得的乳清蛋白多肽不仅含有乳清蛋白源多肽,代谢产物乳酸、醋酸、柠檬酸等,而且还得到了Ca2+强化。
为解决上述技术问题,本发明采用下述技术方案:
一种钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的制备方法,该方法包括将乳清粉配制成水溶液,经乳酸菌降解后,离心获得上清液,即得,其中,降解过程中添加了碳酸钙。
优选地,所述乳清粉、碳酸钙和水的重量体积比为0.1-100g:1-30g:1L。
在本发明方法中,利用乳酸菌降解乳清蛋白时,优选地,降解温度为37℃-45℃,降解时间为24-96h。优选地,降解时间为30-60h。乳酸菌的加入量为0.01-10OD600/mL。
进一步地,在本发明中,所述乳清粉为低乳糖乳清粉、甜乳清粉和脱盐乳清粉中的一种或多种。
所述碳酸钙优选为食品级的轻质碳酸钙。
所述乳酸菌为保加利亚乳杆菌(Lactobacillus delbrueckiisubsp.Bulgaricus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)和副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)中的一种或多种。
此外,根据产品使用方式的不同,本发明所述方法还包括在离心获得上清液后,对上清液进行浓缩、干燥,得到粉状钙强化的富含乳清蛋白多肽制品。
进一步地,在本发明中,所述浓缩是采用反渗透技术,通过压力泵在工作压力为0.5-3Mpa条件下,将上清液经反渗透(RO膜)浓缩至10倍。
所述干燥采用真空冷冻干燥或喷雾干燥。
本发明还要求保护通过上述方法获得的液体或粉状的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的应用。即将所述钙强化的富含乳清蛋白多肽制品添加到各种食品或直接作为保健品功能成分,用于抗氧化或抗肿瘤。
本发明的有益效果如下:
1.乳清粉中含有的乳清蛋白经乳酸菌降解,产生乳清蛋白多肽,具有体外抗氧化和抗肿瘤活性,可作为功能食品生产的原料。
2.乳酸菌降解过程中添加的碳酸钙既可以作为廉价的钙源,又可作为pH缓冲剂。本发明使用的碳酸钙主要为食品级轻质碳酸钙,沉降体积在2.5ml/g以上,表面积大,有利于恒定pH的控制。碳酸钙是不溶于水的化合物在本发明中经高温灭菌后,一次性直接添加到反应体系中,随着反应体系中酸性物质的产生而不断地溶解到反应体系中,避免了多次添加,可操作性强。此外,碳酸钙无需利用无机酸溶液(盐酸溶液)溶解提供Ca2+,降低成本,操作简单,不会产生因使用无机酸溶液造成环境的污染。同时碳酸钙作为pH缓冲剂,维持反应体系的pH在5.5以上。有利于乳酸菌良好的生长及其蛋白酶活性的维持。
3.反应体系中的钙离子可与乳清蛋白源多肽和氨基酸螯合,产生多肽螯合钙和氨基酸螯合钙,有利于钙离子的吸收,是良好的补钙产品。
4.所选择的乳酸菌均为卫生部批准的可用于食品的菌种,使用安全。
5.在本发明中,由于乳酸菌在乳清粉-碳酸钙溶液体系中生长代谢,乳清粉中的乳糖作为碳源,能够被充分利用,在水解液中50%以上的乳糖被降解。有助于乳糖不耐受者使用。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1实施例3中碳酸钙的添加量对钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中游离氨基和Ca2+的含量的影响。
图2实施例4中碳酸钙的添加量对钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中游离氨基和Ca2+的含量的影响。
图3钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的ABTS阳离子自由基清除活力。
图4钙强化的富含乳清蛋白多肽制品对结肠癌细胞LoVo增殖的影响(**,p<0.01)。
图1和图2的反应体系1,5%脱盐乳清粉;2,5%脱盐乳清粉和1%碳酸钙;3,5%脱盐乳清粉和2%碳酸钙;4,5%脱盐乳清粉和3%碳酸钙;5,3%碳酸钙。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明,下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解,下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的,不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1.液体钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的制备
1.原料:按照脱盐乳清粉和纯净水的重量体积比为50g:1L投入发酵罐中,混匀,配制成水溶液。121℃灭菌15min。
2.菌体的制备:从干酪乳杆菌的冻存管中取出少量菌体,划线接种到MRS平板上,37℃厌氧培养48h,挑取单菌落接种到1mL无菌MRS液体培养基中,37℃,厌氧过夜培养。连续5%接种扩培2次。培养结束后,4000r/min离心15min,弃去上清液,利用与培养基等体积的无菌含有10mmol/LCaCl2的生理盐水洗涤菌体2次,经离心弃去上清液,利用无菌含有10mmol/LCaCl2的生理盐水悬浮菌体细胞,制备菌悬液。利用分光光度计在600nm处测定菌悬液的光密度(OD600)值,待用。
3.接种及加入无菌碳酸钙:将步骤2制备的菌悬液接种到步骤1配制的原料中,使反应体系中菌体的终浓度为1OD600/mL。无菌碳酸钙按重量体积比为20g:1L加入。
4.培养:采用在密闭容器中进行搅拌或振荡培养,降解温度为40℃,转数为180r/min。降解时间为48h。
5.结束培养后离心,4000r/min,离心15min,取上清液,即得。所述上清液澄清,略带黄色。
实施例2.粉状钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的制备
1.原料:实施例1制备的液体钙强化的富含乳清蛋白多肽制品。
2.浓缩:采用反渗透技术进行浓缩。通过压力泵在工作压力为0.5-3Mpa条件下,乳酸菌降解乳清蛋白的水解液经反渗透(RO膜)进行浓缩至原体积的20%。
3.干燥:步骤2制备的浓缩液经真空冷冻干燥或喷雾干燥获得淡黄色粉状物,即为钙强化的富含乳清蛋白多肽的乳酸菌发酵制品,呈淡黄色、有光泽的粉末。
实施例3.钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中Ca2+浓度的测定:
采用络合滴定法测定实施例1、2制备的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中的Ca2+浓度。
1.10mmol/LEDTA溶液的配制
精确称取乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解于300-400mL温水中,稀释至1升。
2.10mmol/L钙离子标准溶液的配制:
将碳酸钙放入称量瓶中,在110℃干燥2h,冷却后,精确称取0.25g碳酸钙于250mL烧杯中,加水润湿,盖上表面皿,从杯嘴边逐滴加入6mol/L盐酸数毫升,加热溶解,待冷却后转移至250mL容量瓶中,稀释至刻度,摇匀,计算其准确浓度。
3.10mmol/L EDTA溶液的标定
准确量取35mL钙离子标准溶液,利用步骤1配置的EDTA溶液为滴定液,铬黑T为指示剂,在pH 12左右滴定,溶液由紫红色变为蓝色即为滴定终点。
4.钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中Ca2+浓度的测定
精确称量实施例1的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品5mL,加入30mL35mL蒸馏水溶解制成溶液,以标定的EDTA溶液为滴定液,铬黑T为指示剂,在pH 12左右滴定,溶液由紫红色变为蓝色即为滴定终点。
精确称量实施例2的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品49.9882mg,加入35mL蒸馏水溶解制成溶液,以标定的EDTA溶液为滴定液,铬黑T为指示剂,在pH 12左右滴定,溶液由紫红色变为蓝色即为滴定终点。
5.实验结果:
实施例1和2制得的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中的Ca2+的含量分别为0.51%(w/v)和9.3%(w/w)。
实施例4.钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中游离氨基的测定
采用邻苯二甲醛(OPA)法测定实施例1、2制备的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中游离氨基的浓度。
1.OPA试剂的配制:
7.620g十水合四硼酸二钠和200mg十二烷基磺酸钠溶于150mL去离子水中。待试剂完全溶解后,160mg邻苯二甲醛溶于4mL乙醇中,通过去离子水漂洗将OPA溶液定量的转移到上述溶液中。利用去离子水漂洗将176mg二巯基乙醇加入到溶液中,最后利用去离子水将溶液定容至200mL。
2.丝氨酸标准样品的制备
准确称取标准丝氨酸11.35mg于100mL容量瓶中,加去离子水至刻度(标准溶液在5℃下储存3周)。
3.样品溶液的制备
准确称取样品适量于100mL容量瓶中(0.25-2.5毫摩尔氨基氮/升),加去离子水至刻度。
4.游离氨基的测定
向装有3mLOPA的试管中加入400μL样品,振荡混匀,精确反应2min后在340nm下以纯净水作参比测定吸光度值。空白和标准样品测定方法同上。实验中平行测定2次,取平均值进行计算。
在测定样品和空白之前测定两次标准样品的吸光度,在所有空白和样品测定之后再测定两次标样的吸光度,计算时取四次测定的平均值。
5.实验结果
实施例1和2的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中游离氨基的浓度分别为3.3mmol/L(以丝氨酸氨基的毫摩尔浓度计)和61.5mmol/kg(以丝氨酸氨基的毫摩尔浓度计)。
实施例5.液体钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的制备
1.原料:按照甜乳清粉和纯净水的重量体积比为0.5g:1L投入发酵罐中,混匀,配制成水溶液。121℃灭菌15min。
2.菌体的制备:从干酪乳杆菌的冻存管中取出少量菌体,划线接种到MRS平板上,37℃厌氧培养48h,挑取单菌落接种到1mL无菌MRS液体培养基中,37℃,厌氧过夜培养。连续5%接种扩培2次。培养结束后,4000r/min离心15min,弃去上清液,利用与培养基等体积的无菌含有10mmol/LCaCl2的生理盐水洗涤菌体2次,经离心弃去上清液,利用无菌含有10mmol/LCaCl2的生理盐水悬浮菌体细胞,制备菌悬液。利用分光光度计在600nm处测定菌悬液的光密度(OD600)值,待用。
3.接种及加入无菌碳酸钙:将步骤2制备的菌悬液接种到步骤1配制的原料中,使反应体系中菌体的终浓度为0.02OD600/mL。无菌碳酸钙按重量体积比为1g:1L加入。
4.培养:采用在密闭容器中进行搅拌或振荡培养,降解温度为37℃,转数为180r/min。降解时间为48h。
5.结束培养后离心,4000r/min,离心15min,取上清液,即得。所述上清液澄清,略带黄色,Ca2+的含量为0.025%(w/v),游离氨基的浓度为0.02mmol/L(以丝氨酸氨基的毫摩尔浓度计)。
实施例6.液体钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的制备
1.原料:按照低乳糖乳清粉和纯净水的重量体积比为100g:1L投入发酵罐中,混匀,配制成水溶液。121℃灭菌15min。
2.菌体的制备:从干酪乳杆菌的冻存管中取出少量菌体,划线接种到MRS平板上,37℃厌氧培养48h,挑取单菌落接种到1mL无菌MRS液体培养基中,37℃,厌氧过夜培养。连续5%接种扩培2次。培养结束后,4000r/min离心15min,弃去上清液,利用与培养基等体积的无菌含有10mmol/LCaCl2的生理盐水洗涤菌体2次,经离心弃去上清液,利用无菌含有10mmol/LCaCl2的生理盐水悬浮菌体细胞,制备菌悬液。利用分光光度计在600nm处测定菌悬液的光密度(OD600)值,待用。
3.接种及加入无菌碳酸钙:将步骤2制备的菌悬液接种到步骤1配制的原料中,使反应体系中菌体的终浓度为10OD600/mL。无菌碳酸钙按重量体积比为20g:1L加入。
4.培养:采用在密闭容器中进行搅拌或振荡培养,降解温度为45℃,转数为180r/min。降解时间为96h。
5.结束培养后离心,4000r/min,离心15min,取上清液,即得。所述上清液澄清,略带黄色,Ca2+的含量为0.74%游离氨基的浓度为6.1mmol/L(以丝氨酸氨基的毫摩尔浓度计)。
实施例7.碳酸钙的添加量对钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中游离氨基和Ga2+含量的影响
1.按照实例1、2的方法,碳酸钙的初始添加量分别为0,1%(w/v)、2%(w/v)、3%(w/v)(以反应体系的体积计),制备钙强化的富含乳清蛋白多肽制品。采用实例3、4中的方法分别测定其中游离氨基和Ca2+含量。
2.实验结果
按照实例3、4的方法,考察碳酸钙的添加量对钙强化的富含乳清蛋白多肽制品中游离氨基和Ca2+的含量的影响。如图1、2所示。
实施例8钙强化的富含乳清蛋白多肽制品生物活性
1.按照实例1、2的方法,制备钙强化的富含乳清蛋白多肽制品。分别测定钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的体外抗氧化性和肿瘤细胞增殖的抑制活性。
1.1抗氧化活性
采用ABTS法和ORAC(the oxygen radical absorbance capacity)法分别测定钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的抗氧化活性。
1.1.1ABTS法
ABTS(2,2’-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐)法,即ABTS阳离子自由基的清除能力测定的方法。其原理是ABTS阳离子自由基在过硫酸盐的氧化作用下生成绿色的ABTS阳离子自由基,在抗氧化物存在时ABTS阳离子自由基的产生受到抑制,在734nm处测定ABTS阳离子自由基的吸光度即可测定并计算出待测样品的抗氧化能力。
1.1.1.1ABTS阳离子自由基工作液的配制
精确称量0.0384gABTS溶于50mmol/LTric-HCl(pH7.4)缓冲液中,定容至10mL。精确称量1.323g过硫酸钾溶于50mmol/LTric-HCl(pH7.4)缓冲液中,定容至10mL。上述2种溶液按1:1混合,避光12h后得ABTS阳离子自由基储液。使用前用50mmol/L tris-盐酸缓冲液(pH7.4)适当稀释,使A734值在0.8左右。
1.1.1.2操作步骤
精密称量钙强化的富含乳清蛋白多肽制品0.5001g,溶于50mmol/LTric-HCl(pH7.4)缓冲液中,定容至100mL,配制成5.0mg/mL的样品溶液,经稀释制备2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.63mg/mL、0.32mg/mL等不同浓度的样品溶液。样品测定时,40μL不同浓度样品溶液与160μLABTS阳离子自由基工作液混合,振荡混匀15S后,室温条件下避光反应6min,利用Safire2酶标仪(Tecan公司)在734nm处测定吸光度值。样品溶剂50mmol/LTric-HCl(pH7.4)缓冲液作为空白对照,Trolox作为阳性对照,计算公式:
其中Asample为样品溶液反应后在734nm处的吸光度,Ablank为空白对照溶液反应后在734nm处的吸光度。ABTS阳离子自由基清除能力以各样品溶液清除ABTS阳离子自由基50%时的浓度,即IC50表示。每个样品平行实验三次,结果表示为M±SD。
1.1.1.3实验结果
如图3所示,钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的ABTS阳离子自由基清除能力在0.32mg/mL~5mg/mL的浓度范围内,随着样品浓度的增加而增加,具有剂量依赖关系;采用SPSS软件进行单因素方差分析,与空白组比较,差异具有显著性,具有统计学意义。钙强化的富含乳清蛋白多肽制品IC50值为8.7mg/mL。
1.1.2ORAC法
ORAC(Oxygen Radical Absorption Capacity)是指氧自由基吸收能力,又称为抗氧化能力。ORAC法是根据自由基破坏荧光探针,使荧光强度产生变化的原理,荧光强度的变化大小反映自由基破坏的程度。在抗氧化剂存在时,它可以抑制由自由基引起的荧光变化。抑制程度反映了它对自由基的抗氧化能力。以维生素E水溶性类似物Trolox为标准品。相对ORAC值用TE当量(μmole TE/g或μmole TE/mL)表示,即每克或每毫升样品的抗氧化力代表多少微摩尔Trolox的抗氧化力。计算公式:
1.1.2.1工作液的配制
50nmol/L荧光素钠盐、200mmol/LAAPH、125μmol/L Trolox等溶液利用50mmol/LTric-HCl(pH7.4)配制。
1.1.2.2操作步骤
精密称量钙强化的富含乳清蛋白多肽制品0.20283g,配制成2.0283mg/mL的样品溶液。样品测定时,在96孔酶标板每个微孔中加入20μL样品溶液与80μL荧光素钠溶液,置于振荡器中混匀10s,37℃下预热5min后,加入100μLAAPH(200mmol/L)立即反应,反应温度为37℃,激发波长为485nm,发射波长为538nm,采用动力学方式,每隔6min测定1次各孔的荧光强度,连续测定120min。反应设置未添加AAPH的荧光自然衰退对照(-AAPH)和未添加抗氧化的单纯由AAPH作用的荧光衰退作为对照(+AAPH),以Trolox为阳性对照,每个样品重复3次,采用近似积分法计算荧光衰退曲线下面积(AUC)。实验结果以抗氧化物质的相对ORAC值表示。
1.1.2.3实验结果
结果如图4所示,
钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的氧自由基吸收能力(相对ORAC值)为56.1±2.7μmole TE/g。
1.2体外抑制肿瘤细胞增殖的活性
采用MTT法测定钙强化的富含乳清蛋白多肽制品的体外抗肿瘤活性。
首先利用含10%灭活胎牛血清的高糖DMEM培养基中培养人结肠癌细胞LoVo,在5%CO2培养箱中37℃培养,取对数生长期的LoVo细胞以每孔6.0×103个细胞密度接种于96孔板中,放入CO2培养箱中培养24h,加入用高糖DMEM培养基配制的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品,终浓度分别为3、6、12、24、48mg/mL,同时以100μg/mL的5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)作为阳性对照组,继续培养48h。经MTT染色,测定570nm的吸光度(A570)值,计算细胞生长抑制率(%)=(1-实验组A570值/空白对照组A570值)×100%。如图4所示,钙强化的富含乳清蛋白多肽制品对人结肠癌细胞LoVo具有抑制作用,呈剂量依赖性;与空白组比较,差异具有显著性,具有统计学意义。IC50值为32.5mg/mL。
显然,本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例,而并非是对本发明的实施方式的限定,对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动,这里无法对所有的实施方式予以穷举,凡是属于本发明的技术方案所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (4)
1.一种钙强化的富含乳清蛋白多肽制品,其特征在于,该制品的制备方法包括将脱盐乳清粉配制成水溶液,经干酪乳杆菌在40℃降解48h后,离心获得上清液,即得,其中,降解过程中添加了食品级轻质碳酸钙,所述脱盐乳清粉、食品级轻质碳酸钙和水的重量体积比为50g:20g:1L,所述干酪乳杆菌的加入量为1 OD600/mL。
2.根据权利要求1所述的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品,其特征在于,所述制备方法还包括在离心获得上清液后,对上清液进行浓缩、干燥,得到粉状钙强化的富含乳清蛋白多肽制品。
3.根据权利要求2所述的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品,其特征在于,所述浓缩采用反渗透技术。
4.根据权利要求2所述的钙强化的富含乳清蛋白多肽制品,其特征在于,所述干燥采用真空冷冻干燥或喷雾干燥。
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包怡红、李锐达.发酵法制备乳清抗氧化活性肽的研究.《中国食品学报》.2010,第10卷(第3期),第22页左栏第5段,第24页左栏第4段,第21页右栏第3段. * |
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WO2021052925A1 (en) * | 2019-09-16 | 2021-03-25 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Whey-based nutritional compositions fortified with calcium |
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