CN104470498B - 含有低聚乳酸的药物组合物 - Google Patents

Abstract

一种组合物，其包含i)具有下式(I)的低聚乳酸，其中n为2至20、2至19、或2至18的整数，并且其中所述低聚乳酸的总重量的约10％至约20％w/w为n等于2的三聚物HL₃，其中所述低聚乳酸的数均分子量M_n为约200至约500，和ii)粘膜粘附剂。

Description

含有低聚乳酸的药物组合物

技术领域

本发明涉及包含乳酸低聚物的新型药物组合物。所述组合物适用于治疗或预防其中期望局部降低pH以达到在3.8与5之间的pH的疾病或病状。这样的疾病或病状包括细菌、病毒或真菌疾病。特别是，所述组合物适于治疗妇科疾病如妇科感染。所述组合物已被证明可用于治疗细菌性阴道病。所述组合物以延长方式释放活性成分乳酸，这使得能够实现每周一次或两次的施用频率以获得所期望的治疗效果。

背景技术

妇科感染或生殖道感染一般是指影响生殖道的三种不同类型的感染。内源性感染包括细菌性阴道病和念珠菌病，其由阴道中正常存在的生物体的过度生长引起。内源性感染是世界范围内最常见形式的妇科下生殖道感染(LGTI)，并且它们可以容易地进行治疗。然而，它们通常复发，这是一个重大的医学问题。医源性感染是第二组，其在传染性病原体(细菌或其它微生物)通过各种途径如月经调节、人工流产、安置宫内节育器(IUDinsertion)或在分娩期间被引入生殖道时发生。最后，性传播感染(STI)是由通过与受感染的伴侣进行性行为而传播的微生物如病毒、细菌或寄生微生物引起的。在STI中，存在数种严重的疾病，例如HIV、沙眼衣原体、尖锐湿疣、梅毒和奈瑟菌淋病(Neisseria gonorrhea)。STI可以侵害男性和女性两者，但也可能发生在妊娠和分娩期间的母婴传播。

细菌性阴道病(BV)是最常见的内源性感染并且也是女性生殖道的最常见的医学病状。BV与妊娠并发症增加相关，并且可能参与盆腔炎性疾病的发病机制和女性获得HIV的风险。关于其病因仍存在许多问题，这使反复感染的管控变得复杂。

BV是厌氧细菌的过度生长和正常乳酸杆菌菌群的缺乏，这导致正常阴道菌群失衡。在妊娠期间，BV与围产期结果差有关并且是早产的原因。BV的鉴定和治疗可降低这些后果的风险。已经测试了多种治疗选项以便管控或预防BV复发。

尚不知道BV的频繁发作是由于再次感染还是由于复发。BV与性行为的关联表明BV通过性传播并且附加的发作可能是由于再次感染。然而，证据不支持性传播和再次感染的理论，并且评价BV反复发作的风险因素的数个研究表明它是由于复发。出现早期复发的女性往往抱怨在治疗结束时有异常分泌物。此外，认为自己在治疗后治愈的无症状女性继续携带异常的阴道菌群。此外，异常性越严重，通常越早复发。

使用无害细菌取代病原生物体的细菌疗法的价值仍然是不确定的。

由于细菌性阴道病的反复发作和相关恶臭，一些女性被报道有缺乏性欲的性心理症状和与感染有关的焦虑。然而，男性伴侣的并行治疗并未降低BV复发率。但是，男性性伴侣使用避孕套可能有助于降低细菌性阴道病复发的风险。激素避孕的使用不会增加细菌性阴道病的发病率，而在原位带有子宫内避孕装置或系统的女性可能具有增加的BV风险。

阴道分泌物

阴道分泌物是一种常见的症状，其可能是生理性的或病理性的。虽然BV仍然是就诊于泌尿生殖医学诊所的女性中最常见的诊断之一，但外阴阴道念珠菌病是阴道分泌物的另一种常见的感染原因，约75％的女性在其生育年龄期间的某些时候受到其侵害。大约50％的细菌性阴道病病例是无症状的并且在社会上这种病状的真实患病率是约10-30％。定殖于阴道上皮的乳酸杆菌可具有防御感染的作用。正常的阴道菌群(乳酸杆菌)使阴道pH维持在3.8与4.4之间。在同一个女性中，阴道分泌物的质量和数量可随时间而改变。阴道分泌物存在广泛变化并且每个女性具有她自己的关于正常性和什么是可接受的或过量的感觉。

病原性阴道分泌物的主要问题是恶臭。这种气味具有难闻的鱼腥味特征，这是细菌性阴道病的特征并由胺、主要是三甲胺造成。其它临床表现可能是分泌物过多和不清新感。

本发明是在2008年10月9日公布的WO 2008/119518中公开的发明的进一步发展。在WO 2008/119518中，描述了乳酸低聚物及其治疗性和预防性用途。然而，其中所描述的制剂具有在初始临床研究期间所预想的问题如过早排出等，并且因此仍需要开发对使用者友好并且在施用部位上保持一段时间以允许每周仅一次或两次施用的组合物。

具体实施方式

从上文可以看出，需要开发适用于管控妇科感染、特别是细菌性阴道病并且能够实现相比于现今已知需要每天一次或每天多于一次施用的治疗方案而较不频繁施用的制剂。

为此目的，本发明人已经发现，乳酸低聚物是适合使用的，参考WO 2008/119518。一方面，低聚物一旦与水性介质接触就释放乳酸，而另一方面，低聚物充当乳酸储库，即并非所有的乳酸都被立即释放；乳酸的释放取决于所讨论的低聚物。

然而，取决于平均分子量和多分散性指数，乳酸低聚物具有不同的物理外观，并且因此，对于制造商来说，一些低聚物更易于加工成组合物。聚合度PDn也起到了作用。

同样重要的是选择一种乳酸低聚物，其在所期望的一段时间内提供所期望的效果并且同时提供适合于最终使用者使用的组合物中的低聚物。

本发明解决了这些问题并且已经进行了初步临床研究来研究低聚乳酸的组合物是否提供所期望的效果。

在WO 2008/119518中提及了多种组合物。然而，本发明人已经发现，为了达到能够实现每周施用一次的所期望的延长效果，低聚乳酸必须具有更宽的分子量分布，即大于WO2008/119518中所设想的多分散性指数。此外，聚合度PDn必须不高于4.1。本发明人还已发现，重要的是选择一种低聚乳酸，其物理外观在半固体与固体之间的某处并且在粘性与平滑之间的某处。为了将低聚乳酸加工成适于使用的组合物，这是重要的。据设想，为了获得所期望的治疗效果持续时间以及促进或使得能够实现药物组合物的制造的物理外观，数均分子量以及多分散性指数是重要的参数。

如本文所讨论，Amsel标准被用在BV诊断中并且还作为用于评价BV的某些治疗的效果的手段。Amsel标准是：

i)均质分泌物(稀薄、白色、黄色)，

ii)存在线索细胞，

iii)在向分泌物应用氢氧化钾时释放鱼腥味，

iv)pH高于4.5。

如果满足四个标准中的三个，则患者具有BV。

然而，本发明人已经发现，在治疗之后或治疗期间阴道中的pH(以及上文所提及的其它标准)在评价治疗是否成功时不是决定性的。最重要的参数似乎是pH出现一定的降低，而不是实际的pH值。因此，从本文所报道的临床研究可见，看起来似乎是如果观察到pH降低0.5单位以上并且仅一个以下的其它Amsel标准未得到满足，则治疗已经有效。

因此，为了评价BV治疗，应测试以下：

i)均质分泌物(稀薄、白色、黄色)，

ii)存在线索细胞，

iii)在向分泌物应用氢氧化钾时释放鱼腥味，

iv)ΔpH小于0.5(即不包括0.5)，其中ΔpH是治疗之前与治疗之后阴道中的pH差异。

如果满足四个标准中的三个，则治疗尚未针对BV有效。

本发明的目的是提供包含低聚乳酸的组合物，其为易于被最终使用者处理并插入阴道中的形式并且其中效果的持续时间很长以致施用一次或每月一次(对于预防复发来说)是足够的(但可存在可能需要施用超过一次和每周超过一次如每周两次的情形)。此外，目的在于提供易于制造并且以可再现方式满足关于质量变化、崩解、溶解、稳定性等的变化的一般适用要求的组合物。

本发明组合物中低聚乳酸的作用模式是逐渐释放乳酸，其继而确保了在施用部位上的弱酸性环境。原则上，这意味着，这样的组合物可用于治疗会受益于建立弱酸性环境的任何疾病或病状。实例是

i)妇科感染，

ii)由于细菌、病毒或真菌感染或其它医学原因所致的口腔粘膜病变，例如白斑病或“灼口综合征”，

iii)直肠疾病或病症，例如痔疮、肛裂、肛门搔痒症或直肠炎，

iv)皮肤疾病或病症，例如创伤、湿疹(exema)、特应性皮炎、银屑病、粉刺、红斑痤疮、荨麻疹、瘙痒、日光性皮炎、多汗症、脱发，以及细菌感染、病毒感染、真菌感染和体外寄生虫，

v)治疗或预防龋齿和/或牙周炎和/或口臭，或

vi)用于胃肠病学中，其中在酸病症如胃液缺乏中可观察到有益效果。

本发明的组合物尤其适用于预防和/或治疗妇科感染。所述妇科感染可能是细菌感染，例如细菌性阴道病、非特异性阴道炎、老年阴道炎、子宫颈炎和尿道炎。它还可能是真菌感染，例如念珠菌病(白色假丝酵母(candida albicans))、隐球菌病、放线菌病；或病毒感染，例如人免疫缺陷病毒(HIV)、单纯疱疹病毒(HSV)、人乳头状瘤病毒(HPV)。

乳酸的释放如下：

细菌性阴道病(BV)；其背景和流行病学

BV的特征在于恶臭的阴道分泌物，阴道pH超过4.5，胺测试呈阳性，和稀薄均质的白带，以及在显微镜下存在线索细胞并且偶尔有阴道烧灼或瘙痒。

阴道菌群从正常乳酸杆菌(LB)占优势改变到其中LB数量减少并且阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis)、人型支原体(Mycoplasma hominis)以及厌氧细菌如链球菌、普雷沃菌属菌种(Prevotella spp)和动弯杆菌属菌种(Mobiluncus spp)过度生长的菌群。

细菌性阴道病通常通过Amsel标准得到诊断，如果存在以下4个标准中的3个的话：1.阴道pH高于4.5；2.在阴道流体中存在线索(阴道上皮)细胞；3.稀薄的灰色或白色均质分泌物；4.或者KOH“whiff”测试呈阳性(向阴道流体中加入10％氢氧化钾后释放出鱼腥味)。

一些易感因素已经显示增加BV的风险，例如年龄较轻、黑色人种、灌洗、吸烟和IUD避孕。若干报道已将BV与性行为、性伴侣的近期改变以及多个伴侣关联起来。

细菌性阴道病的管控

当使用甲硝唑和克林霉素的口服或阴道制剂时，女性对治疗将具有最初80-90％的应答，但是在3个月内将有15-30％复发。当考虑在乳酸杆菌、过氧化氢产生、阴道pH和BV相关细菌的过度生长之间的关联时，仅调节这些中的一种可帮助一些患复发性BV的女性，但是其可能不足以解决所有病例。

尽管在乳酸杆菌、过氧化氢产生、阴道pH和BV相关细菌的过度生长之间存在公知的相互关系，但是BV的起始因素仍然是不确定的。

仅关注这种相互关系的一个方面的治疗可能有益于一些患复发性BV的女性，但是组合方法更占优势。因为细菌性阴道病还可能是无症状的，所以经常不能将复发与治疗失败区别开来。因此，复发性细菌性阴道病可通过使用对初始发作有效的治疗加以预防。

酸化性质

阴道的低pH是由于乳酸杆菌代谢产生乳酸以及雌激素化的阴道上皮细胞将糖原转化成乳酸。在培养物中，乳酸杆菌将它们的生长培养基酸化到pH 3.2-4.8。在这个pH范围下，发展出平衡稳态，其中酸度变得具自身抑制性。厌氧菌在pH 4.5以下生长较差。体外研究表明BV相关细菌的浓度随着阴道pH的增加而增加。然而，已经发现，与过氧化氢相比，乳酸和低pH造成对这些细菌更具摧毁性的抑制效果。然而，当阴道pH升高时，例如在性交后和在月经期间，可发生细菌的过度生长。有趣地是，低pH似乎对于乳酸杆菌粘附到上皮细胞是重要的。通过将BV相关细菌接种到健康阴道内也可以诱发BV，正如Gardner和Dukes的最初工作所显示的(Gardner HL,Dukes CD.Haemophilus vaginalis vaginitis.Am J ObstetGynecol 1955；69:962-76)。

因此，BV发病的确切机制仍然是不确定的。BV与乳酸杆菌(LB)数量降低和过氧化氢产生较低有关。存在阴道pH升高以及BV相关生物体的过度生长。目前，还不知道在BV中是什么引起产生过氧化氢的乳酸杆菌菌株的减少。

换句话说，到目前为止一般已经认识到，预防或治疗BV的主要目标是保持阴道pH为4.5以下。这将防止病原细菌过度生长，直到正常的LB被重新建立并且能够维持pH。然而，如从本文实施例中可见，管控BV的一个重要因素是使pH相比于初始值降低，但结果也表明，达到4.5以下的pH并不是那么重要；最突出的效果是降低pH本身。在实施例中已经证实，pH相比于初始值降低0.5pH单位以上(例如1.0)是有效治疗的指示。因此，用于在一个疗程后评价特定BV治疗的修订标准可为：

i)均质分泌物(稀薄、白色、黄色)，

ii)存在线索细胞，

iii)在向分泌物应用氢氧化钾时释放鱼腥味，

iv)在治疗后3或4天测量时，阴道pH降低小于0.5pH单位，

其中应满足4个标准中的至少3个，如果患者仍患有BV，即指示治疗无效。

以不定期或预防为基础的间歇性pH降低疗法可被认为预防复发性BV。

包含低聚乳酸的组合物

本发明涉及包含低聚乳酸的组合物、用于制备这种组合物的方法以及这种组合物用于治疗或预防其中期望局部降低pH的病状的用途。pH应降低至在约3.5至约5的范围内的pH值。这样的病状如上文所述并且包括预防和/或治疗细菌性阴道病。

如上文所提及，本发明是WO 2008/119518中所报道的发现的进一步发展。尽管描述了许多低聚乳酸和含有所述低聚乳酸的组合物，但本发明人已经发现，仍需要选择具有最适于以下的特性的低聚乳酸：i)被加工成药物组合物，ii)具有所期望的效果，iii)具有所期望的作用持续时间，和iv)便于患者施用。此外，由于主要目的是开发一种在施用部位上保持所期望的一段时间的组合物，本发明人还面临着与如何获得最终组合物的合适粘膜粘附性相关的技术问题。

这些问题已通过提供包含以下的组合物得到解决：

i)具有下式的低聚乳酸：

其中n为2至20、2至19、或2至18的整数，并且其中所述低聚乳酸的总重量的约10％至约20％w/w为n等于2的三聚物HL₃，和

ii)粘膜粘附剂。

如从本文实施例中可见，并且相比于在WO 2008/119518中所设想的，本发明人已经发现，低聚乳酸必须具有某些特性以实现足以避免超过一次或两次施用的作用持续时间(除非复发是问题，如本文所讨论的)。因此，数均分子量应在约200至约500的范围内，聚合度PDn应为至多4.1并且分子量分布不应太窄，即特定低聚酸含有其中n在1至13的范围内的多种低聚物。多分散性指数应为1.45以上。

特别是，数均分子量应在约200至约240的范围内，重均分子量应在约290至约500的范围内，多分散性指数应在1.45至2.5的范围内。通常，聚合度应为2.5至3.8。

数均分子量还可在约255至约425的范围内，则重均分子量在约370至580的范围内，多分散性指数在1.45至2.5的范围内。通常，聚合度应为3至4.1。

此外，如上文所提及，取决于平均分子量和多分散性，低聚乳酸具有不同的物理外观。所述物理外观可为液体(低平均分子量)、半固体、固体形式(较高平均分子量)。一些低聚乳酸具有足以向组合物赋予必要的粘膜粘附性的粘附特性。然而，即使所选择的低聚乳酸具有一些粘膜粘附性，本发明人也已经发现，有必要将低聚乳酸与粘膜粘附剂进行组合以确保组合物在施用部位上保持所期望的一段时间。

低聚乳酸的数均分子量M_n是约200至约500。如从本文实施例中可见，使用具有约200至约350的数均分子量的低聚乳酸已获得合适的结果。

如上文所提及，为了确保相对快速起作用以及延长的效果，多分散性指数也是重要的。不受限于任何理论，据信，组合物中所包括的低聚乳酸中所含的低分子量低聚酸负责快速起作用以及短期-中期持续时间，而组合物中所包括的低聚乳酸中所含的“高”分子量低聚酸负责较长持续时间。

因此，本发明的组合物含有具有约1.45至约6的多分散性指数的低聚乳酸。如从本文实施例中可见，当低聚酸的聚合度(PDn)为约2.5至约4.1时，特别是当低聚酸具有3至3.6的聚合度时，已获得合适的结果。

如本文实施例中所示，本发明的组合物含有低聚乳酸，其包含：

10％至20％w/w的HL₂(即n＝1)

10％至20％w/w的HL₄(即n＝3)

10％至15％w/w的HL₅(即n＝4)

5％至15％w/w的HL₆(即n＝5)。

低聚乳酸还可包含各1％至5％w/w的HL₁₀和HL₁₁；HL₁₀、HL₁₁和HL₁₂；HL₁₀、HL₁₁、HL₁₂和HL₁₃；HL₁₀、HL₁₁、HL₁₂、HL₁₃和HL₁₄。

特别关注的是一种组合物，其中低聚乳酸是具有以下组成的OMLA 3、OMLA 6或OMLA 22：

7％至10％的HL₁，

12％至15％w/w的HL₂(即n＝1)

14％至16％w/w的HL₃(即n＝2)

11％至15％w/w的HL₄(即n＝3)

10％至14％w/w的HL₅(即n＝4)

8％至10％w/w的HL₆(即n＝5)，以及

重量百分比减少的HL₇-HL₁₈。

这种低聚乳酸也被详细描述在本文的图3(OMLA 3和OMLA 6)和图5(OMLA 22)中，其中给出数均分子量和聚合度(OMLA 3：Mn为258，PI为1.48并且PDn为3.33；OMLA 6：Mn为313，PI为1.50并且PDn为4.1；和OMLA 22：Mn为255并且PDn为3.29或Mn为265，PI为1.46并且PDn为3.43)。

如上文所提及，本发明的组合物中的一种重要试剂是粘膜粘附剂。粘膜粘附剂与低聚乳酸的粘膜粘附性的组合效果使得有可能获得这样一种组合物：其在施用至施用部位(例如阴道中)之后利用在施用部位上存在的相对少量的体液而变得具有粘膜粘附性并与粘膜粘附一段时间从而产生充分治疗。

粘膜粘附(或生物粘附)被定义为使合成和天然大分子由此粘附到体内各种粘膜表面上的过程。如果分子具有粘膜粘附性或者如果这样的粘膜粘附性材料被作为组分掺入到药物制剂或组合物中，则可以提高或延长局部药物作用或粘膜细胞对药物的吸收。此外，如果粘膜粘附性存在于分子中或者如果掺入粘膜粘附性组分，则可在延长的时间段内在应用部位增加药物释放和作用。同样重要的是，组合物在施用部位上停留所期望的时间长度。

粘膜粘附剂可能是选自以下的纤维素衍生物：羟丙基甲基纤维素(HPMC)、甲基纤维素、羟乙基纤维素(HEC)、羟丙基纤维素(HPC)、乙基羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、包括羧甲基纤维素钠的羧甲基纤维素、和微晶纤维素、以及其混合物。

具体的纤维素衍生物是：

羟丙基甲基纤维素(HPMC)：

Metolose-60-SH-15、Metolose-60-SH-50、Metolose-60-SH-10000、Metolose-65-SH-50、Metolose-65-SH-400、Metolose-65-SH-1500、Metolose-90-SH-400、Metolose-90-SH-4000、Metolose-90-SH-15000、Metolose-90-SH-100000、Pharmacoat 606，日本东京信越(Shin-Etsu,Tokyo,Japan)；然而，如下文所讨论，具有在10至20cP范围内的粘度的HPMC是优选的。

甲基纤维素(MC)：

Metolose SM-4(MC1)、Metolose SM-15(MC2)、Metolose SM-100(MC3)、MetoloseSM-400(MC4)、Metolose SM-1500(MC5)、Metolose SM-4000(MC6)，信越(Shin-Etsu)；所提及的前三种甲基纤维素是优选的。

羧甲基纤维素钠(CMC)：

低粘度CMC(CMC1)、中等粘度CMC(CMC2)、高粘度CMC(CMC3)，美国圣路易斯市西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich,St.Louis,USA)。

羟乙基纤维素(HEC)：

Natrosol 250HX，美国威尔明顿市赫克力士公司(Hercules,Wilmington,USA)。

粘膜粘附剂可为

淀粉衍生物，包括适度交联的淀粉；

丙烯酸聚合物；

卡波姆(carbomer)和其衍生物(聚卡波非(Polycarbophyl)、等)；

壳聚糖(聚(D-葡糖胺))；

天然聚合物，包括明胶、藻酸钠、果胶、硬葡聚糖、黄蓍胶、结冷胶、黄原胶或瓜尔胶；

甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物，和

其混合物以及其与一种或多种上文所提及的纤维素衍生物的混合物。

如从本文实施例中可见，当粘膜粘附剂是羟丙基甲基纤维素时，获得合适的结果。

羟丙基甲基纤维素(HPMC)也称为羟丙甲纤维素(USP)或羟丙甲基纤维素(hypromellosum)(欧洲药典)。化学名称是2-羟基丙基甲基醚纤维素(CAS 9004-65-3)。取决于取代模式，HPMC也分成不同类型：

此外，在许多不同的粘度类型中，单独的类型是可用的(参见例如药用赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients),第4版,PhP Press,2003)。因此，2910型可以以一定的量使用，使得粘度在3至15cP范围内(例如可从日本信越获得)，更具体地为以下粘度：3、4.5、6和15cP中的量使用。粘度是表观粘度。关于HPMC的粘度测量的更多细节被提供在药用赋形剂手册(Handbook of Pharmaceutical Excipients),第4版,PhP Press,2003中，即在20℃下测量2％w/v水溶液。

本文实施例中报道的一个有趣的结果是其中已使用具有15cP的粘度的2910型。本领域技术人员可以基于本文给出的实施例进行必要的调节以使用粘膜粘附剂(特别是HPMC)和低聚乳酸的其它组合，尤其是鉴于本文给出的结果。

因此，本发明的组合物可含有作为粘膜粘附剂的HPMC，其中羟丙基甲基纤维素的粘度是约10至约20cP。

组合物中粘膜粘附剂的浓度可在10％至65％w/w、20％至60％w/w、30％至50％w/w或35％至45％w/w的范围内。在一个特定有趣的实施例中，组合物中粘膜粘附剂的浓度是39-42％w/w(实施例9)。

当使用羟丙基甲基纤维素时，其通常在5％至65％w/w、20％至60％w/w、30％至50％w/w或35％至45％w/w的范围内。

如本文实施例中所示，在使用本发明的组合物的临床研究中已获得合适的pH降低效果。此外，组合物已留在施用部位上(其没有掉出或排出)。此外临床研究证实，使用本发明的组合物，仅在一次治疗、即仅一次施用后，可有效治疗罹患BV的女性。在一些情况下，施用可为每周一次或两次，通常仅一次。在预想到复发的那些情况下，推荐重复进行每月一次的治疗。

本发明的组合物还可含有一种或多种药学上可接受的赋形剂。

药学上可接受的赋形剂可选自载体，稀释剂，粘合剂，崩解剂，流动改善剂，pH调节剂，稳定剂，粘度调节剂，防腐剂，胶凝剂或溶胀剂，表面活性剂，乳化剂，悬浮剂，用于塞剂(suppository)、阴道剂(vagitory)或阴道栓(pessary)的基质，用于乳膏、软膏、凝胶、洗液、香波、泡沫、喷雾剂等的基质。药学上可接受的赋形剂的具体选择取决于具体形式或制剂，例如剂型。本领域技术人员可在例如雷明顿药物科学(Remington's PharmaceuticalSciences)(Gennaro,Alfonso R.编,第18版,1990,xvi,Mack,ISBN:0-912734-04-3)中找到指导。

最终的制剂还可包含单独或组合的一种或若干种药学上可接受的盐，例如乳酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、赖氨酸盐、乙酸盐、环戊丙酸盐、戊酸盐、半琥珀酸盐、丁酸盐或氨丁三醇盐。每个剂量制剂中包括的低聚乳酸的量可在每剂量单位0.01mg至50g、但优选0.5mg至5g的范围内。如从本文实施例中可见，合适的剂量是约250mg至约1g，例如600mg。整个剂量通常被包含在组合物中。本发明的组合物可恢复阴道中的正常生理pH，但如上文所讨论，重要的特征是降低pH，并且组合物可有效恢复正常生理pH并不是必要的。pH降低将减少厌氧细菌数量，所述厌氧细菌通过产生三甲胺而引起特征性的使人不愉快的阴道病恶臭。

组合物包含至少5％w/w的低聚乳酸。如从本文实施例中可见，低聚乳酸的含量通常在20％至80％w/w、特别是20％至50％w/w的范围内。在一些实施例中，最终组合物中的浓度是30％至45％w/w。在一个特别有趣的实施例中，组合物中低聚乳酸的浓度是35-36％w/w(实施例9)。

本发明的组合物中低聚乳酸的含量对应于约200-2000mg的乳酸、特别是500至1000mg的乳酸。在一个特别有趣的实施例中，低聚乳酸的含量对应于700mg乳酸(实施例9)。

在一个实施方案中，一种或多种乳酸低聚物当在室温下暴露于水时在至少8小时、至少12小时、例如至少16小时、至少20小时、至少24小时、至少36小时、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天的时段内释放乳酸。

在其中组合物被预期用于妇科用途的那些情况下，组合物被设计用于阴道施用，包括阴道内或经阴道施用。

取决于用途，组合物可为固体、半固体或液体形式。

应根据具体的施用途径选择具体形式。因此，对于口服施用(施用到胃肠道)来说，半固体或固体组合物是优选的，例如固体剂型(例如片剂、胶囊、小药囊)、粉剂、颗粒剂、珠粒、丸剂等。对于局部施用或向口腔施用来说，凝胶、乳膏、软膏、洗液、粉剂、贴剂、牙膏、漱口剂等可为合适的。对于制备这些形式和选择合适的药学上可接受的赋形剂来说，本领域技术人员将在例如雷明顿药物科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)中找到指导。

在一个特定方面，组合物被设计成施用至阴道。在这些情况下，下列剂型是合适的：棉塞、阴道栓剂(vagitorium)、阴道气雾剂、阴道杯、阴道凝胶、阴道插入物、阴道贴剂、阴道环、阴道海绵、阴道塞剂、阴道乳膏、阴道乳液、阴道泡沫剂、阴道洗液、阴道软膏、阴道粉剂、阴道香波、阴道溶液、阴道喷雾剂、阴道悬浮液、阴道片剂、阴道棒、阴道圆盘、阴道装置、半透性包装以及其任何组合。如从本文实施例中可见，合适的组合物为阴道片剂的形式。

本发明的阴道片剂可包含缓冲剂或pH调节剂、填充剂、粘合剂、冻干助剂或通常用于制备片剂和/或涉及冻干步骤的工艺步骤的其它药学上可接受的赋形剂。

合适的缓冲剂或pH调节剂可为适用于将pH调节至约3至约5的药学上可接受的缓冲剂。

合适的试剂包括乳酸盐(例如乳酸钠)、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、磷酸盐、酒石酸、马来酸盐等。如从本文实施例中可见，乳酸盐优选作为缓冲剂或pH调节剂；以这种方式，该试剂与低聚乳酸的单体相同，这提供的优点在于缓冲对为乳酸/低聚乳酸/乳酸盐。

pH调节剂的缓冲提供低于约5、例如低于4的pH，以便获得酸性环境的更迅速恢复以优化治疗应答和乳酸杆菌的再生长。当施用组合物时，缓冲剂的pH降低效果取决于在应用部位处的pH值。

如从本文实施例中所示，乳糖是合适的赋形剂。乳糖是填充剂或冻干助剂，但本发明不限于乳糖的使用，因为本领域技术人员知道如何用其它赋形剂代替乳糖。合适的其它赋形剂是例如麦芽糖和海藻糖。乳糖或等效物质的浓度通常在5％至35％w/w的范围内。特别是，在本发明的组合物中，浓度在5％至20％w/w或5％至15％w/w的范围内。如从本文实施例9中可见，浓度为约9-10％w/w。其它二糖如例如蔗糖、乳果糖、纤维二糖等也可适用于本发明的上下文中。在本发明的组合物中，二糖通常有助于组合物的合适结构。

低聚乳酸可掺入到装置中作为受控释放药物递送系统。

组合物可包含糖原或其前体或衍生物，例如以充当乳酸杆菌的养料来源。

组合物可包含活微生物形式的益生菌例如嗜酸乳杆菌或类似物种，其当以足够量被施用时，赋予宿主以健康益处，导致乳酸杆菌占优势的阴道菌群的乳酸杆菌重建。

药学上可接受的赋形剂可为亲脂性或亲水性载体。亲脂性载体的实例是蜡、油类、肉豆蔻酸异丙酯、固体甘油三酯和可可脂。亲水性载体的实例是甘油、丙二醇、聚氧乙二醇。

病原体-抗粘附剂

组合物还可包含一种或多种病原体-抗粘附剂。在阴道环境中赋予有利的酸化性质的乳酸杆菌不粘附于阴道粘膜。然而，致病真菌粘附于粘膜并且致病细菌可接触粘膜并使正常健康阴道粘膜的保护性内衬降解。这可增加易感患者的阴道病复发风险。因此，制剂包括一种或若干种防止病原体的这种粘膜粘附的化合物，可有益于预防、防止和治疗细菌性阴道病。本发明可包括一种或若干种载体芯材料，其防止致病微生物(优先是厌氧细菌和真菌)的粘膜粘附。抗粘附剂可以是充当防止粘附的屏障的试剂或引起已经粘附的微生物脱粘附的试剂。引起脱粘附的抗粘附剂的实例可以是甘露糖、乳糖、木糖醇和其它糖醇。

病原体-抗粘附剂可选自甘露糖、乳糖、木糖醇和其它糖醇。如本文所提及，乳糖还可提供其他用途，但如果仅作为抗粘附剂存在，则浓度可在与其它病原体-抗粘附剂相同的范围内、即在最终组合物的0.01％至20％w/w的范围内。

抗微生物性质

整个月经周期的微生物学研究已经表明非LB物种的浓度在月经时更高。因此，在此时存在细菌过度生长的可能，因为阴道菌群不稳定。

向组合物中加入或包括抗细菌组分的想法是致病菌产生使阴道粘蛋白内衬降解的水解酶。病原体的这一效应危害了正常的保护性阴道粘膜内衬。

组合物还可包括一种或多种抗微生物剂，例如抗生素如克林霉素或甲硝唑，精油如茶树油，阳离子或元素如Hg、Cu、Pb或Ag，多烯抗真菌剂，咪唑，三唑，烯丙胺，棘白菌素，阿昔洛韦，金刚烷胺，醇类，季铵化合物，硼酸，葡糖酸氯己定，过氧化氢，脲过氧化氢，碘，汞溴红，二盐酸奥替尼定，酚(石碳酸)化合物，氯化钠，次氯酸钠，壬苯醇醚以及这些试剂的组合和/或混合物。氧化化合物如H₂O₂将为细菌性阴道病特征性的致病性厌氧细菌提供不利的环境。另外，一些氧化化合物如H₂O₂也可能增加了对病原体的抗细菌性质。自身产生H₂O₂的乳酸杆菌受例如H₂O₂的不利影响较少。

抗微生物剂可以以本领域技术人员认可的适当浓度使用。抗微生物剂的浓度可超过组合物的0.01重量％，例如在0.01至50重量％例如0.01至25重量％、0.05至25重量％、0.1至10重量％、0.5至5重量％的范围内。

本发明的组合物还可包含抗细菌剂，其选自克林霉素、四环素、阿莫西林、氨苄西林、红霉素、强力霉素、洛美沙星、诺氟沙星、阿弗山(afloxam)、环丙沙星、阿奇霉素、塞弗托星和氯喹那多。

本发明的组合物可包含一种或多种用于预防和/或治疗如本文所定义的妇科感染的抗细菌剂。

抗细菌剂可选自克林霉素、四环素、阿莫西林、氨苄西林、红霉素、强力霉素、洛美沙星、诺氟沙星、阿弗山、环丙沙星、阿奇霉素、塞弗托星。

抗细菌剂的量可在每剂5mg至1000mg的范围内。

抗细菌剂还可选自四环素、强力霉素、阿奇霉素或红霉素、或一种或多种广谱抗菌剂。

所述广谱抗菌剂可选自克林霉素、四环素、阿莫西林、氨苄西林、红霉素、强力霉素、洛美沙星、诺氟沙星、阿弗山、环丙沙星、阿奇霉素、塞弗托星，用于预防和/或治疗淋病或衣原体感染。在本发明的另一个实施方案中，广谱抗菌剂的量在每剂100mg至3000mg的范围内。

所述广谱抗菌剂还可选自四环素、阿莫西林、氨苄西林、洛美沙星、诺氟沙星、阿弗山、环丙沙星、阿奇霉素或塞弗托星，用于预防和/或治疗淋病。在本发明的另一个实施方案中，广谱抗菌剂的量在每剂400mg至3000mg的范围内，或者广谱抗菌剂可选自四环素、强力霉素和红霉素，用于治疗衣原体感染。在另一个实施方案中，广谱抗菌剂的量在每剂100mg至2000mg的范围内。在另一个实施方案中，制剂为棉塞的形式。

组合物还可包含选自四环素、强力霉素和红霉素的抗衣原体剂。

组合物还可包含抗真菌剂，其选自咪康唑、特康唑、异康唑、芬替康唑、氟康唑、制霉菌素、酮康唑、克霉唑、布康唑、益康唑、噻康唑、伊曲康唑、5-氟尿嘧啶和甲硝唑。在另一个实施方案中，每剂的抗真菌剂的量在0.1mg至2000mg的范围内，用于治疗念珠菌病。在另一个实施方案中，一种或多种抗真菌剂选自酮康唑、咪康唑和甲硝唑，并且任选地，该药剂被掺入到棉塞中。

组合物还可含有杀精子剂。

本发明的组合物还可含有根据特定施用途径和剂型选择的药学上可接受的赋形剂。本领域技术人员在相关药学教科书的指导下能够选择这样的赋形剂。

特定组合物

本发明的特定组合物为：

20％至80％w/w的低聚乳酸

2％至35％w/w的用于冻干的试剂(lyophilisation agent)/填充剂

20％至60％w/w的粘膜粘附剂。

20％至80％w/w的低聚乳酸

2％至20％w/w的用于冻干的试剂/填充剂

20％至60％w/w的粘膜粘附剂。

20％至70％w/w的低聚乳酸

5％至15％w/w的用于冻干的试剂/填充剂

20％至50％w/w的粘膜粘附剂。

30％至70％w/w的低聚乳酸

5％至15％w/w的用于冻干的试剂/填充剂

30％至50％w/w的粘膜粘附剂。

20％至60％w/w的低聚乳酸

5％至15％w/w的用于冻干的试剂/填充剂

20％至50％w/w的粘膜粘附剂。

30％至60％w/w的低聚乳酸

5％至15％w/w的用于冻干的试剂/填充剂

30％至50％w/w的粘膜粘附剂。

30％至50％w/w的低聚乳酸

7％至12％w/w的用于冻干的试剂/填充剂

35％至50％w/w的粘膜粘附剂。

30％至40％w/w的低聚乳酸

7％至12％w/w的用于冻干的试剂/填充剂

35％至45％w/w的粘膜粘附剂。

约35-36％w/w的低聚乳酸

约9-10％w/w的用于冻干的试剂/填充剂

约35-45％w/w的粘膜粘附剂。

低聚乳酸如本文所述。

用于冻干的试剂/填充剂可为乳糖。粘膜粘附剂可为HPMC、特别是HPMC 15cP。上文提及的组合物可含有一种或多种pH调节剂或缓冲剂。如果存在的话，则这种试剂的浓度通常为约2％至约20％w/w、约5％至约20％w/w或约10％至约15％w/w。

此外，上文提及的组合物可含有浓度为5％至20％w/w、特别是10-20％w/w如14-15％w/w的缓冲剂如乳酸钠。

更具体的实例见于本文实施例中。

乳酸低聚物

本发明还涉及特定乳酸低聚物，其据本发明人所知是新型化合物。

更具体地，本发明还提供：

具有下式的低聚乳酸：

其中n为2至20、2至19、或2至18的整数，并且其中所述低聚乳酸的总重量的约10％至约20％w/w为n等于2的三聚物HL₃。此外，数均分子量应在约200至约500的范围内，聚合度PDn应为至多4.1，并且分子量分布不应太窄，即特定低聚酸含有其中n在1至13的范围内的多种低聚物。多分散性指数应为1.45以上。

特别是，数均分子量应在约200至约240的范围内，重均分子量应在约290至约500的范围内，多分散性指数应在1.45至2.5的范围内，并且聚合度应为2.5至3.8。

数均分子量还可在约255至约425的范围内，则重均分子量在约370至580的范围内，多分散性指数在1.45至2.5的范围内，并且聚合度应为3至4.1。

下面给出具有能够满足任何上述规格的组成的特定低聚乳酸。

本发明的低聚乳酸包含：

10％至20％w/w的HL₂(即n＝1)

10％至20％w/w的HL₄(即n＝3)

10％至15％w/w的HL₅(即n＝4)

5％至15％w/w的HL₆(即n＝5)。

本发明的低聚乳酸还可包含各1％至5％w/w的HL₁₀和HL₁₁；HL₁₀、HL₁₁和HL₁₂；HL₁₀、HL₁₁、HL₁₂和HL₁₃；HL₁₀、HL₁₁、HL₁₂、HL₁₃和HL₁₄。

下列更具体的低聚乳酸具有如上文所提及的在约255至约425范围内的数均分子量，并满足与其相关所提及的条件：

低聚乳酸OMLA 3具有以下组成：

7％至10％的HL₁,

12％至15％w/w的HL₂(即n＝1)

14％至16％w/w的HL₃(即n＝2)

11％至16％w/w的HL₄(即n＝3)

10％至15％w/w的HL₅(即n＝4)

7％至10％w/w的HL₆(即n＝5)，和

重量百分比减少的HL₇-HL₁₈。

本发明的低聚乳酸具有下式：

其中

7％至10％的HL₁，例如约7.5％

12％至15％w/w的HL₂(即n＝1)，例如约14％

14％至16％w/w的HL₃(即n＝2)，例如约15.5％

11％至16％w/w的HL₄(即n＝3)，例如约14％

10％至15％w/w的HL₅(即n＝4)，例如约13％

7％至10％w/w的HL₆(即n＝5)，例如约9％，和

重量百分比减少的HL₇-HL₁₈。

本发明的低聚乳酸OMLA 6具有以下组成：

3％至10％的HL₁，

7％至15％w/w的HL₂(即n＝1)

10％至15％w/w的HL₃(即n＝2)

10％至15％w/w的HL₄(即n＝3)

9％至15％w/w的HL₅(即n＝4)

7％至12％w/w的HL₆(即n＝5)，和

重量百分比减少的HL₇-HL₁₈。

本发明的低聚乳酸具有下式：

其中

3％至10％的HL₁，例如5.5％，

7％至15％w/w的HL₂(即n＝1)，例如9.5％

10％至15％w/w的HL₃(即n＝2)，例如12％

10％至15％w/w的HL₄(即n＝3)，例如12％

9％至15％w/w的HL₅(即n＝4)，例如11％

7％至12％w/w的HL₆(即n＝5)，例如9％，和

重量百分比减少的HL₇-HL₁₈。

本发明的另一种低聚乳酸为OMLA 22，其具有以下组成：

5％至10％的HL₁，例如7％至9％

12％至15％w/w的HL₂(即n＝1)，例如13％至14％

10％至20％w/w的HL₃(即n＝2)，例如15％至16％

10％至17％w/w的HL₄(即n＝3)，例如约14％

9％至15％w/w的HL₅(即n＝4)，例如约12％

7％至12％w/w的HL₆(即n＝5)，例如约9％，和

重量百分比减少的HL₇-HL₁₈。

本发明的低聚乳酸具有下式：

其中

约5％至约8％w/w具有n＝0，

约9％至约14％w/w具有n＝1，

约12％至约16％w/w具有n＝2，

约12％至约14％w/w具有n＝3，

约11％至约13％w/w具有n＝4，

约8％至约10％w/w具有n＝5，

约6.5％至约8.5％w/w具有n＝6，

约5％至约7％w/w具有n＝7，

约4％至约6％w/w具有n＝8，

以及至多100％w/w的一种或多种低聚物，具有n＝9、n＝10、n＝11、n＝12、n＝13、n＝14、n＝15、n＝16和/或n＝17。

低聚乳酸的数均分子量M_n、重均分子量M_w、多分散性指数和聚合度如上文所述。

本发明的低聚乳酸也被详细描述于本文图3(OMLA 3和OMLA 6)和图5(OMLA 22)中，其中给出数均分子量和多分散性(OMLA 3：Mn为258并且PDn为3.33；OMLA 6：Mn为313并且PDn为4.1；OMLA22：Mn为255并且PDn为3.29或者Mn为265并且PDn为3.43)。

本发明的低聚乳酸包括本发明的乳酸化合物的低聚物的光学异构体的所有组合(例如，R和S对映异构体、D-和L-形式)，以及这些异构体的外消旋、非对映异构体、内消旋和其它混合物。

另外，乳酸低聚物可转化成其相应的酯、酰胺、硫酯或盐。乳酸低聚物的盐可为任何药学上可接受的盐，例如钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或铵盐，或氨丁三醇盐。另外，乳酸低聚物可以以与金属或大分子的复合物形式存在。

低聚乳酸在室温下具有至少1重量％例如0.1至50、1至50重量％、1至30重量％、或5至30重量％的水溶性。乳酸低聚物的水溶性取决于低聚物的长度。此外，在稀释的碱性溶液中溶解性可能增加。

制备本发明组合物的方法

本发明还提供一种制备如本文所定义的组合物的方法，所述方法包括

i)将水任选地与一种或多种药学上可接受的赋形剂一起加热至约80℃，

ii)以小份加入粘膜粘附剂并且在每次加入之间缓慢混合，

iii)将混合物冷却，

iv)加入低聚乳酸并伴随有间歇的均质化，

v)将来自iv)的材料填充至模子(form)中，

vi)将填充的模子冷冻，以及

vii)将从vi)获得的冷冻材料冻干。

在制造工艺中，冻干已被证明是合适的加工步骤。然而，所有组分在水中的混合物还可以进行冷冻干燥并且可将所得材料压制成片剂。

制造工艺被详细描述于本文实施例中。可使用其它制造工艺。

定义

术语“低聚乳酸”和“OMLA”是作为同义词使用并且意指具有式I并且如本文所定义的乳酸低聚物。

然而，关于乳酸低聚物的使用，据设想，低聚物的小的结构改变不影响它们释放乳酸的能力。因此，据设想，其中末端羧酸和/或羟基已被衍生化为例如酯、酰胺、硫酯(对于羧酸来说)或醚(对于羟基来说)的低聚物的衍生物适合于根据本发明使用。因此，具有下式II的乳酸低聚物的衍生物也可与本文所述的式(I)的乳酸低聚物组合使用或者作为本文所述的式(I)的乳酸低聚物的替代：

其中n如上文关于式(I)所定义的并且R为H、R¹R²N-、R¹O-或R¹S-，并且R¹、R²和R³相同或不同并选自H、C₁-C₆烷基(包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基)、或芳基(包括苄基)，和其药学上可接受的盐，并且

X为H或烷基(包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基)、或酰基、-OCR⁴，其中R⁴选自H、C₁-C₆烷基(包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基)、或芳基(包括苄基)，和其药学上可接受的盐，条件是当X为H时，R不为OH。

术语“抗微生物”意指破坏或抑制微生物如细菌(例如B族链球菌)、真菌、病毒或寄生虫生长的效应。术语“抗细菌”意指破坏或抑制细菌生长的效应。术语“抗真菌”意指破坏或抑制真菌生长的效应。术语“抗病毒”意指破坏或抑制病毒复制的能力并因此抑制其增殖、繁殖或生长的能力的效应。

术语“重均分子量”或“M_w”意在描述聚合物的分子量。重均分子量计算如下：M_w＝Σ_i(N_iM_i ²)/Σ_i(N_iM_i)，其中N_i是具有分子量M_i的分子的数目。直观地，如果重均分子量是w，并且挑选随机单体，则其所属于的聚合物将具有平均为w的重量。重均分子量可通过例如质谱术、NMR光谱术、光散射、小角中子散射(SANS)、X射线散射和沉降速度进行测定。

术语“数均分子量”或“M_n”意指聚合物分子量的确定。数均分子量是单独聚合物的共同的、平均的分子量平均数。其通过测量n个聚合物分子的分子量，将重量求和，并除以n来测定：M_n＝Σ_i(N_iM_i)/Σ_i(N_i)，其中N_i是具有分子量M_i的分子的数目。聚合物的数均分子量可通过例如质谱术、NMR光谱术、蒸气压渗透压测定法、端基滴定和依数性质进行测定。

术语“多分散性指数”意指聚合物样品中分子量分布的度量，其被确定为聚合物的重均分子量与数均分子量的比值。

术语“聚合度”PD_n是数均分子量除以单体单元的分子量。PD_n＝(M_n-18)/72。

术语“制剂”和“组合物”可互换使用并且是指包含一种或多种低聚乳酸以及粘膜粘附剂和任选地一种或多种药学上可接受的赋形剂或可为皮肤或粘膜接受用于局部使用的那些物质的组合物。本发明的组合物可以任何合适形式呈现，特别是用于施用至阴道，包括阴道施用。

术语“抗粘附剂”意指降低妇科致病性微生物生物体或病毒的粘附性的任何试剂，并且特别是引起这些生物体或病毒脱粘附的试剂。

术语“粘附性”意指提供或促进对表面如粘膜的粘附或“粘性”的效应。对于对粘膜的粘附来说，还可使用术语“粘膜粘附性”。

术语“用于阴道施用的组合物”意指被引入到阴道的药物，其中活性成分被释放和吸收并将作用于粘膜；可使用许多不同形式，包括作为同义词使用的阴道栓剂和“阴道栓”。

治疗方法

组合物和新型低聚乳酸可用于治疗本文所提及的疾病和病状。

因此，它们可用在预防和/或治疗妇科感染的方法中，所述方法包括向有需要的对象施用有效剂量的如本文所定义的低聚乳酸，任选地以如本文所定义的组合物形式。

本发明还提供一种用于管控、预防和/或治疗来自阴道分泌物的气味的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效剂量的如本文所定义的低聚乳酸，任选地以如本文所定义的组合物形式。

本发明还提供一种用于管控、预防和/或治疗来自阴道分泌物的气味的方法，所述方法包括向有需要的对象施用有效剂量的如本文所定义的低聚乳酸，任选地以如本文所定义的组合物形式，并且其中所述组合物包含卫生装置。

附图说明

图1-制造工艺的流程图和工艺控制。

图2-来自实施例5的给药方案。

图3-制剂中使用的批料(OMLA 3和6)的低聚物分布以及平均分子量M_n和聚合度PD_n。

图4-制剂中不可使用的批料(OMLA 4、5和7)的低聚物分布以及平均分子量M_n和聚合度PD_n。

图5-批料(OMLA 21和22)的低聚物分布以及平均分子量M_n和聚合度PD_n。

图6-在900ml水中在pH 3.5至5.5下从Laccure阴道片剂和Lactal阴道凝胶释放的总酸，其以乳酸量(mg)计。

图7-中位pH值(MV)，包括p值。

图8-pH值的高度统计学显著性降低。

图9-在每周一次(ow)和每周两次(bw)用Laccure阴道片剂治疗期间相比于第1次访视的阴道pH降低(平均值和95％置信区间)。

现将进一步描述本发明并通过参考下列实施例来说明，所述实施例已经过精心选择以涵盖本发明。因此，它们不应被解释为以任何方式限制本发明。

方法和分析程序

外观

通过目测来评价低聚乳酸阴道片剂的外观。

鉴定

根据欧洲药典2.3.1通过对乳酸盐的阳性反应来验证低聚乳酸阴道片剂的身份。

低聚乳酸的检定

通过在8.4的pH下用甲醇钾的甲醇溶液进行非水性滴定来执行游离酸的测定。

通过滴定进行总酸的测定。加入过量NaOH以水解低聚物并且用HCl滴定溶液。

游离酸与总酸之间的差异给出了关于被结合并因此不可用作酸的乳酸总量的信息。使用游离酸与总酸之间的差异以及乳酸盐单体的分子量和游离酸的量和乳酸的分子量来计算低聚乳酸(以无水计)的检定。

聚合度

通过将总酸含量除以游离酸含量来确定聚合度。(两者都根据上文描述通过滴定来测定)

质量均一性

根据欧洲药典2.9.5来测定质量均一性。

水含量

根据欧洲药典2.5.12方法A，使用氯仿作为溶剂，利用卡尔·费歇尔容量分析滴定法(volumetric Karl Fischer titration)来测定制剂中的水含量。

pH

将制剂溶解在25ml水中。根据欧洲药典2.2.3测定pH。

溶解

使用设定为100rpm的搅拌桨在37℃下在900ml 0.9％NaCl中进行溶解(欧洲药典2.9.3装置2)。制剂(片剂)配备有于纱网中的沉降片并与pH指示剂溴甲酚绿、甲基红和溴百里酚蓝一起置于溶解容器中。以固定的时间间隔加入0.5M NaOH以提高pH至5.0-5.5。跟踪溶解48小时并且以所加入的碱的总量除以水解一个片剂所需的理论量来进行评价。

微生物质量

根据现行版本的欧洲药典2.6.12进行总好氧微生物计数(TAMC)和总组合酵母/霉菌计数(TYMC)的测试，并且根据现行版本的欧洲药典2.6.13进行铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginose)、金黄色葡萄球菌(Staphylucoccus Auveus)和白色念珠菌(Candida albicans)的测试。

低聚乳酸的游离酸测定

该方法描述了借助于利用甲醇钾的非水性滴定对L-乳酸低聚物中的游离酸进行测定。

设备

滴定器 Metrohm 716DMS Titrino

电极 Solvotrode Metrohm 6.0229.100。组合的LL pH玻璃电极，参考电解液为LiCl的乙醇溶液

天平 具有优于0.001g的精度的合适天平

可使用等效设备。

评价

游离酸的计算

根据以下方程计算游离酸的量：

其中

FA＝游离酸检定(mol/g)

V＝为获得pH 8.4所需的甲醇钾体积(mL)

C＝甲醇钾浓度(mol/L)

m＝样品重量(mg)

低聚乳酸的总酸测定

所述方法描述了L-乳酸低聚物中的乳酸总量的测定。加入过量NaOH以使低聚物皂化，然后用HCl对溶液进行电位滴定。

设备

滴定器 Metrohm 716DMS Titrino

电极 Metrohm 6.0234.110组合LL Micro pH玻璃电极

天平 具有优于0.001g的精度的合适天平

加热板

可使用等效设备。

计算

总酸的计算(mol/g)

根据以下方程计算酸的总量(mol/g)：

其中

V_NaOH＝加入样品中的NaOH的总体积(mL)

C_NaOH＝NaOH浓度(mol/L)

V_EP1＝滴定中所用的HCl的总体积(mL)

C_HCl＝HCl浓度(mol/L)

m＝称重的样品量(mg)

总乳酸低聚物检定的计算，以无水计(％m/m)

根据以下方程计算以总乳酸低聚物(以无水计)表示的检定：

其中

Mw_乳酸盐＝乳酸盐分子量，即72.06(g/mol)

Mw_乳酸＝乳酸分子量，即90.08(g/mol)

TA＝根据7.1的总酸(mol/g)

FA＝游离酸(mol/g)

平均链长度的计算

根据以下方程计算平均链长度(或聚合度)：

其中

PD＝聚合度

FA＝根据方法M186的游离酸(mol/g)

TA＝上文测定的总酸(mol/g)

L-乳酸低聚物平均分子量的计算

根据以下方程计算L-乳酸低聚物平均分子量：

其中

Mw＝L-乳酸低聚物平均分子量(g/mol)

PD＝根据上文的聚合度

Mw_乳酸盐＝乳酸盐分子量，即72.06(g/mol)

即18.02(g/mol)

实施例

实施例1

含有低聚乳酸的组合物

制备具有以下组成的阴道片剂：

*对应于乳酸的量。低聚乳酸的实际量取决于低聚乳酸的聚合度

**用所使用的低聚乳酸的聚合度3.5计算的目标重量

低聚乳酸

将低聚乳酸用于医学装置中以降低施用后的pH。在与水接触后，低聚乳酸被缓慢水解成活性成分乳酸。基本上如WO 2008/119518中所述，但在有利于最终产物的较高多分散性的条件和纯化程序下，制备低聚乳酸。通过如本文所示的滴定测定的聚合度应为约3.0至约4.1。

(S)-乳酸钠

将(S)-乳酸钠用作缓冲剂，以防止制剂在施用后水合时酸性过大。作为50％水溶液，(S)-乳酸钠被加入到制剂中。(S)-乳酸钠溶液由Merck Chemicals供应。

单水合乳糖

将乳糖用作冻干助剂以促进冻干以及向制剂提供刚性和更好的质地。DMV-Fonterra是单水合乳糖的供应商。

羟丙甲纤维素

将羟丙甲纤维素用作增稠剂和粘膜粘附助剂。当片剂在施用后水合时，其与乳酸低聚物一起产生凝胶。所用羟丙甲纤维素的品质是由日本信越化学公司(Shin-EtsuChemical Co.,Japan)供应的Pharmacoat 615。羟丙甲纤维素是羟丙基甲基纤维素。

阴道片剂的制造

在下文描述用于制造高粘性液体凝胶制剂、将凝胶填充到合适的模具中并将材料冻干的合适工艺。实施例2中给出了更详细的描述。

所述制剂含有相对高的量的羟丙甲纤维素，其与相对高的量的低聚乳酸一起使得凝胶高浓缩并具粘性。为了能够溶解大量的羟丙甲纤维素，在羟丙甲纤维素不溶解的高温下将其加入含有乳糖和乳酸钠的水溶液中。在冷却后，羟丙甲纤维素开始溶胀并溶解，使得溶液越来越粘。加入低聚乳酸，继续冷却至室温，并伴随有间歇的均质化以得到均质产物。在真空条件下进行冷却工艺以避免将空气引入凝胶中。

将凝胶填充到预成形的塑料卵形外壳中并使用干冰冷冻。然后在冻干前除去塑料外壳以具有可用于在冷冻干燥过程期间升华的大面积。

当初次冷冻干燥(冻干)完成时，在至少24小时期间在室温下进行二次干燥以降低成品的水分含量，然后进行最终包装。

包装

将片剂置于由Oliver-Tolas Healthcare Packaging供应的外部尺寸为15×15cm的铝袋中，并且将袋热密封。

实施例2

制备低聚乳酸的片剂制剂的制造工艺

用于低聚乳酸阴道片剂的批料配方

成分	量(g)
		低聚乳酸，Purasorb OL	1400*
(S)-乳酸钠50％	320
		乳糖	1360
羟丙甲纤维素，Pharmacoat 615	960
		纯化水	补足至8000
目标	8000

*作为乳酸。基于原材料的聚合度计算低聚乳酸的实际量。

制造工艺的描述

图1中给出了制造工艺的流程图。

实施例3

含有低聚乳酸的阴道片剂的表征

溶解

对如实施例1和2中所述制备的片剂进行如本文所述的溶解测试。

通过如本文所述的滴定测量乳酸低聚物和乳酸的释放。因此，所溶解的百分比是所释放的低聚物与由所释放的低聚物形成的乳酸的总和。

结果如下：

在t＝0时开始测试

在t＝6小时时，释放出20％±10％

在t＝24小时时，释放出35％±10％，即累积释放约55％

在48小时时，释放出至少30％，即累积释放至少85％。

实施例4

含有低聚乳酸的组合物的稳定性

已起始对制剂的技术稳定性研究，以提供关于医学产品的支持性数据。稳定性研究是6个月研究，有可能延长研究至36个月。

稳定性研究的梗概可见于表1和表2中。

表1.于铝袋中的低聚乳酸阴道片剂的稳定性研究的测试储存条件和测试时间点。

圆括号之间的测试是任选的。

*在每个储存条件下的稳定性研究期间跟踪相同的3个小袋的重量变化。

表2.稳定性研究TS-1009-09中的测试参数和测试方法

结果

在稳定性研究中研究已用于临床试验中的低聚乳酸阴道片剂的稳定性。此处评价并报道了来自前24个月的数据。制剂在25℃/60％RH下长达24个月的测试时段期间以及在40℃/75％RH下长达6个月的测试时段期间是稳定的并且显示无降解。基于这些结果，当在不高于25℃的温度下储存时，建议产品的拟议保质期为36个月。

表3在25℃/60％RH下储存的材料的结果

表4.在40℃/75％RH下储存的材料的结果

在两个稳定性研究中，材料的溶解符合限度。

外观

在所测试的两种储存条件下，片剂的外观保持无变化。

检定

在两种储存条件下在初始测试与在3个月和6个月测试之间可见检定有小的降低。在25℃/60％RH下，对于稍后分析的两个时间点，检定结果再次提高。因此，合理地认为在中间时间点的较低结果反映分析方法的精度范围。所有值都完全在设定规格限度内。

聚合度-平均分子量

在所述时间段内任何储存条件下可检测到聚合物或平均分子量无降低。

水含量

所有值都充分低于设定限度，这暗示原始包装不透湿气。

pH

在测试期内注意到pH无变化。

实施例5

在健康女性中关于OMLA阴道片剂400mg和OMLA阴道栓500mg相比于Lactal和Vivag的可行性研究

研究的目的在于比较两种不同的含有乳酸低聚物的组合物与两种市售乳酸盐产品。

测试产品

使用如本文所述的冻干技术制备阴道片剂400mg。

组成为：

阴道栓500mg

在波兰格但斯克学术医学公司制药技术部(Department of PharmaceuticalTechnology,Academia Medical Gdansk)制备研究中使用的阴道栓。将OMLA 30与Macrogol6000混合并模制成3g塞剂形式。组成为：

模制阴道栓[mg]

低聚乳酸(OMLA 30)	500
		Macrogol 6000	2000

通过将外消旋乳酸(85％)在120℃下加热30小时来获得OMLA 30(隆德大学(LundUniversity))。

参考产品

Lactal阴道凝胶5mL(Kullgren Pharma AB,Sweden)是用于恢复阴道中的生理pH平衡的医学装置。其含有乳酸、糖原、丙二醇、甲基羟丙基纤维素、乳酸钠和水。

Vivag VG(阴道胶囊剂，Ferrosan AB)是当阴道细菌菌群不平衡时在传统上使用的天然药物。其含有冷冻干燥的嗜酸乳杆菌以及乳糖和硬脂酸镁。

在研究中使用的Lactal和Vivag两者都是商业制剂。

研究设计

研究设计示于图2中。

以所述次序对一名对象测试OMLA阴道栓500mg、OMLA阴道片剂400mg、Lactal和Vivag。在施用阴道栓和阴道片剂4天后以及在施用Lactal和Vivag 1天后对对象测量pH并观察耐受性/可接受性。在施用后，在观察期内每天的测量时间为0、4小时、8小时和12小时。每次测试之间存在至少一周。

测量

对象使用pH试条(pH-Fix 3.6-6.1，Macherey-Nagel)来评估阴道粘膜中的pH。对象报告一般耐受性/可接受性和所感受到的不适的类型。

结果

阴道片剂和阴道栓两者都在持续约3天的时间内降低了阴道pH。阴道片剂的pH降低效果更突出。阴道片剂未显示出任何主观不适，并且一般耐受性/可接受性被评定为“非常好”。阴道栓在施用后前2天内排出，并且一般耐受性/可接受性被评定为“轻度不适”和“良好但并非最佳”。

Lactal在持续8小时内降低了阴道pH。在施用后第一天内报道了轻度烧灼和分泌物。一般耐受性/可接受性被评定为“良好”。

Vivag对阴道pH不具有任何影响并且没有显示出不适。

实施例6

对于具有2种不同的低聚物分布的OMLA阴道片剂600mg的可行性研究

乳酸低聚物有可能通过经由水解形成乳酸以及通过低聚物的羧酸酯端基的直接作用来降低阴道pH。这将有益于非生理学高阴道pH的情形。乳酸低聚物和合适的粘膜粘附性聚合物的制剂可具有持续数天降低阴道pH的可能性。

在一个健康女性的先前可行性研究中，含有400mg乳酸低聚物的阴道片剂显示出有前途的pH降低性质。为了研究是否能提高效果的持续时间，制造例如2种含有不同分布的600mg乳酸低聚物的新制剂并且在本发明的可行性研究中由4名健康女性进行测试。

活性成分

活性成分(OMLA)是在瑞典隆德大学(Lund University,Sweden)制造的。通过加热由普拉克公司(Purac)供应的L(+)-乳酸(LA)(PURAC PF90，产品代码20706，批号0609002001)来实现乳酸的低聚。这个品质含有90％LA和10％水。

通过下列程序制备OMLA 6和OMLA 3：将50ml LA加入50ml圆底烧瓶中并在油浴中在不同温度下加热不同的时间段。将烧瓶降低至热油浴中。加热溶液的时间为约10分钟。在该程序期间使烧瓶保持向大气开放，所述程序在通风橱中进行，使所形成的水蒸气逸出。在反应完成后，将烧瓶从油浴中取出，用塞子封闭并使其冷却至室温。冷却时间为约20分钟。OMLA 3在120℃下保持18小时并且OMLA 6在120℃下保持24小时。

由荷兰普拉克公司进行低聚物分布的分析。使用液相色谱法分离乳酸、丙交酯和乳酸低聚物并用UV检测进行定量。用梯度系统进行低聚物的实际分离，其中在运行期间有机溶剂的浓度增加。在已知羰基键和酯键吸收的波长下测量低聚物的UV反应。使用外部标准方法进行定量。制剂中可以使用的批料的结果示于图3中并且不可使用的批料的结果示于图4中。数均分子量M_n是单独大分子的分子量的算术平均值。聚合度DP_n是聚合物链中的重复单元的平均数目。

在研究中使用的测试产品制备如下：

将乳糖和HPMC(Metolose 60SH 4000cP)溶解在水中，形成粘性溶液。加入OMLA 6或OMLA 3，并且使用小尺寸高剪切混合器在大约半分钟内将它们全部混合。使用注射器将所得凝胶应用在模具(15mm直径和>15mm高度)中。将模具置于常压下-40℃的冻干器(Christ Alpha 2-4)中2小时以进行冷冻。然后将冻干器排空至1毫巴的压力并且逐步手动升高温度(-25、-10、0、10℃)直到在约42小时后达到20℃，然后使压力进一步降至0.1毫巴。将温度升高至30℃保持2小时，工艺完成。

组成为：

**Metolose 60SH 4000cP-高粘度(信越化工(Shin-Etsu Chemicals))。

片剂是白色、圆柱形和海绵状。

对象

四名年龄为51-62岁(平均56.5岁)的健康女性参与研究。

研究设计

对四名对象首先测试OMLA 3，然后测试OMLA 6阴道片剂600mg。对对象测量pH并观察耐受性/可接受性持续7天。在施用后，在观察期内每天的测量时间为0、4小时、8小时和12小时。施用之间存在至少一周。

pH测量

对象使用pH试条(pH-Fix 3.6-6.1，由Macherey-Nagel制造)自行评估阴道粘膜中的pH。

耐受性/可接受性

对象报告一般耐受性/可接受性以及关于所感受到的不适的类型的评论。

结果

pH测量

OMLA 3

所有四名对象在第一天期间均具有降低的阴道pH。

两名对象分别显示约6天和3天的pH降低效果的持续时间。

OMLA 6

所有四名对象在第一天期间均具有降低的阴道pH。

两名对象显示7天以上的pH降低效果的持续时间。

两名对象报告在游泳和慢跑期间片剂掉出。

实施例7

关于具有高含量的纤维素聚合物I的OMLA阴道片剂600mg的可行性研究

在一名健康女性的先前可行性研究中，含有400mg乳酸低聚物的阴道片剂显示出有前途的pH降低性质。在后续可行性研究中(报道于实施例7中)，由4名健康女性测试两种含有不同分布的600mg乳酸低聚物的新制剂。所述制剂显示出与第一项研究相比延长的持续时间，但表现为较小粘膜粘附性并具有掉出的趋势。因此制造具有较高含量的纤维素聚合物以增加粘膜粘附性的新制剂并在本发明可行性研究中进行测试。这个报告涉及其中纤维素聚合物是Metolose 60SH 15cP的研究的第一部分。

活性成分

三批活性成分(OMLA)是由荷兰霍林赫姆市普拉克生物材料公司(Puracbiomaterials,Gorinchem,the Netherlands)制造的。它们被储存在-15℃下7个月。这些批料被标记为OMLA 21和OMLA 22。将OMLA22用于本研究中，因为它最接近于先前关于聚合度的研究中所使用的OMLA。图5示出这些低聚乳酸的分子量分布以及相关数据。

由普拉克公司(Purac)进行低聚物分布的分析。使用液相色谱法分离乳酸和乳酸低聚物并用UV检测进行定量。用梯度系统进行低聚物的实际分离，其中在运行期间有机溶剂的浓度增加。在已知羰基键和酯键吸收的波长下测量低聚物的UV反应。使用外部标准方法进行定量。

分析结果示于图5中。初始分析和在-15℃下7个月后的分析具有非常好的一致性。

数均分子量M_n是单独大分子的分子量的算术平均值。聚合度DP_n是聚合物链中的重复单元的平均数目。

制剂

使用下列程序制备在本研究中使用的测试产品：

将乳糖和HPMC(Metolose 60SH 15cP)溶解在水中，形成粘性溶液。加入OMLA 22，并且使用小尺寸高剪切混合器在大约半分钟内将它们全部混合。使用注射器将所得凝胶应用在模具(具有圆形顶端的16mm直径管并且高度<20mm)中。将模具置于常压下-40℃的冻干器(Christ Alpha 2-4)中2小时以进行冷冻。然后将冻干器排空至1毫巴的压力并且逐步手动升高温度(-25、-10、0、10℃)直到在约42小时后达到20℃，然后使压力进一步降至0.1毫巴。将温度升高至30℃保持2小时，工艺完成。

测试产品的组成为：

**Metolose 60SH 15cP-低粘度(信越化工)-对应于羟丙甲纤维素615。

对象

四名年龄为52-63岁(平均57.5岁)的健康女性参与研究。

研究设计

对四名对象测试OMLA阴道片剂600mg。对对象测量pH并观察耐受性/可接受性持续7天。在施用前一天的四个时间点测量pH以获得基线pH。

pH测量

对象使用pH试条(pH-Fix 3.6-6.1，由Macherey-Nagel制造)自行评估阴道粘膜中的pH。

耐受性/可接受性

对象报告一般耐受性/可接受性以及关于所感受到的不适的类型的评论。

结果

pH测量

在4名对象中的3名中，pH降低效果的持续时间长于一周。在第四名对象中，在第一天内存在pH降低效果。

耐受性/可接受性

一名对象在第一天内2小时后感受到一点烧灼，并且两名对象在前2-3天内具有分泌物并感到污浊。耐受性/可接受性大部分评定为“非常好”。

研究显示，具有等级15cP的HPMC非常适合于获得所期望的结果。

实施例8

关于具有高含量的纤维素聚合物II的OMLA阴道片剂600mg的可行性研究

根据上文在实施例7中给出的细节进行研究。但测试另一种制剂，即：

**Pharmacoat 606-低粘度(信越化工)。

对象

四名年龄为52-63岁(平均57.5岁)的女性参与研究。

结果

pH测量

在4名对象中的2名中，pH降低效果的持续时间为约4-5天。在另外两名对象中，其为约1.5天。

实施例9

Laccure阴道片剂与Lactal阴道凝胶之间的体外比较

乳酸杆菌在正常阴道生态系统中占主导地位。小于4.5的低阴道pH是由这个菌群所产生的乳酸维持的并保护免受其他物种感染。这个生态系统的紊乱可导致其它细菌例如加德纳菌(Gardnerella)过度生长，之后是pH升高到超过4.5，通常在5与6之间。这种病状被称为细菌性阴道病或BV，并且其特征是强烈难闻的鱼腥味，往往组合有过多的阴道分泌物和升高的阴道pH。

患有BV的女性在其访视妇科医生时所接受的当前疗法以抗生素为主。然而，大多数女性尝试在没有专家帮助的情况下来管控她们的问题，并且她们通常使用pH调节产品来恢复低于4.5的生理低pH。Lactal阴道凝胶是广泛使用的非处方产品，它是基于在羟丙甲纤维素中的乳酸。每天施用Lactal，持续7天。

Laccure AB已开发了一种新产品，Laccure阴道片剂。在这种产品中，包括缩合成乳酸低聚物的乳酸以及乳酸钠、羟丙甲纤维素和乳糖，并且它被冷冻干燥成固体卵形阴道片剂。当与阴道粘液中的水接触时，从片剂中缓慢释放出乳酸低聚物、乳酸钠和羟丙甲纤维素，形成连接至阴道粘膜的被缓冲至pH 3.5的粘膜粘附性凝胶。Laccure阴道片剂被设计成具有至少3-4天、最佳7天的给药时间间隔。

本研究对本发明的阴道片剂与Lactal阴道凝胶在乳酸含量、在水中溶解后的pH和总酸释放方面进行了比较。

阴道片剂

这项研究中使用的批料被制造为确定批料，然后制造批料以用于临床研究。它还用于稳定性研究。下表中给出了组成。

表5.Laccure阴道片剂的组成

*对应于700mg乳酸

Lactal阴道凝胶

Lactal阴道凝胶(批号10-029)购自瑞典马尔默(Sweden)的当地药店。Lactal的剂量单位是具有5mL凝胶的管，所述凝胶含有乳酸和羟丙甲纤维素并用乳酸钠缓冲至约pH 3.5。

方法

这项研究中使用的测试方法与用于阴道片剂释放的产品规范方法相同(表2)。

表6.测试和方法

结果

下表中示出了除了总酸溶解之外的测试结果。一个剂量单位的阴道片剂的重量是一个剂量单位的Lactal阴道凝胶的约三分之一，但阴道片剂中乳酸的总含量是Lactal中的约6倍。在溶解在水中24小时后的pH大致相同。阴道片剂中乳酸的聚合度是3.5，而Lactal含有非常少的乳酸低聚物。

表7.测试结果

图6示出在75小时内从阴道片剂中溶解的总酸，并且计算在相同时段期间从lactal阴道凝胶的释放。从Laccure阴道片剂释放的酸化剂为在6小时后约150mg乳酸当量，在24小时后约250mg，以及在72小时后约310mg。这与每天一次给予的三个剂量的Lactal的累积释放相似。

结论

Lactal阴道片剂中的乳酸总含量是Lactal阴道凝胶中的约6倍，这赞成Laccure阴道片剂每周给药一次。当溶解在水中时，阴道片剂达到与Lactal阴道凝胶大致相同的pH。

在前72小时内从Laccure阴道片剂体外释放的酸化剂的量与从每天一次给予的三个剂量的Lactal的累积释放相似。

实施例10

含有乳酸低聚物的阴道片剂在患有细菌性阴道病的患者中的pH调节效果和安全性。具有平行组的开放对照研究。研究A

研究目的

主要目的

为了评估Laccure阴道片剂在患有细菌性阴道病(BV)的对象中的安全性。

次要目的

为了评估Laccure阴道片剂在患有细菌性阴道病(BV)的对象中的耐受性(可接受性/使用者友好性)和功效。

主要终点

自发报道的不良事件以及在最终访视时在外阴阴道检查后报道的不良事件。

次要终点：

●在一周和两周时阴道pH正常化(4.5以下)

●通过对象的日记了解片剂的可接受性/使用者友好性

●还使用Amsel标准确定了片剂的功效。

这通过在一周和两周时针对每个下列标准测量患者的比例来评估：

1.稀薄、白色、黄色、均质分泌物

2.显微镜下存在线索细胞

3.在加入碱即10％氢氧化钾(KOH)溶液时释放出鱼腥味

此外，第四个Amsel标准是阴道流体的pH>4.5，但其在上文未提及，因为pH在上文的次要终点中已得到解决。

线索细胞是阴道的上皮细胞，其通过被细菌覆盖而得到与众不同的点状外观。线索细胞是细菌性阴道病、特别是由阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis)(一组革兰氏可变细菌)造成的细菌性阴道病的医学征兆。这种细菌感染产生难闻的具有鱼腥味的稀薄阴道分泌物。此外阴道pH通常增加至超过5.5。正常阴道pH在4.5左右变化。

如果4个Amsel标准中的3个得到满足，则将证实患有BV的患者的比例。

研究设计

研究设计是适应性的并含有两个部分，部分A和部分B。部分A

在部分A中存在两个不同的对象组；

-第1组(10名患者)：患有不断发展中的BV的对象，用Laccure阴道片剂对其每周治疗一次，共两周。

-第2组(10名患者)：患有不断发展中的BV的对象，用Laccure阴道片剂对其每周治疗两次，共两周。

将患有不断发展中的BV的对象随机分配到第1组或第2组。使用Amsel标准来诊断BV。

如果下列标准中的至少三个得到满足，则患者被诊断为患有不断发展中的BV。

1.稀薄、白色、黄色、均质分泌物

2.显微镜下存在线索细胞

3.在加入碱即10％氢氧化钾(KOH)溶液时释放出鱼腥味

4.pH高于4.5

纳入标准

●年龄为至少18岁的女性

●使用Amsel标准证实细菌性阴道病(在研究筛选时确定)的当前诊断

●愿意在整个研究中避免使用除宫内节育器之外的所有其它阴道产品的对象

●在整个研究时期内必须避免性交或者使用避孕套

●具有生育能力的女性在进入研究后必须具有阴性尿妊娠检验结果

●对象愿意回答主要与产品可接受性有关、但一些与性行为有关的问题

●对象能够提供书面知情同意书并同意按时随访。

结果

对象

每周一次组中的两名患者未完成研究，一名是由于不良事件，一名是由于在研究期间来月经。每周两次组中的一名患者由于不良事件而未完成研究。几乎所有的患者都参加了每次访视；在第10天，在每周一次组中有3名患者未参加，而在每周两次组中有2名患者未参加。

表8.满足研究的对象数目

基线特征和人口统计学

每周一次组中的平均年龄是33岁，每周两次组中的平均年龄是29岁。除了两名患者(黑人，拉丁裔)之外的所有患者都是白种人。所有患者在第1次访视时均患有根据Amsel标准证实的BV。

在第1天获得以下结果：

表9.单独的Amsel标准-稀薄、白色、黄色、均质分泌物，第1天

表10.单独的Amsel标准-显微镜下存在线索细胞，第1天

表11.单独的Amsel标准，阴道流体的pH>4.5，第1天，根据CRF

表12.单独的Amsel标准-在加入碱即10％氢氧化钾(KOH)溶液时释放出鱼腥味，第1天

表13.在第1天满足Amsel标准

主要终点-pH

阴道中部(MV)的pH值

用pH电极测量pH。在许多出版物中，用lacmus纸测量pH，这是一种灵敏度较低的方法。

在每周一次组中从第1次访视到第2次访视时仅5名患者达到低于4.5的pH，在每周两次组中从第1次访视到第2次访视时有4名患者达到低于4.5的pH。对于pH低于4.7的分类来说，相应的数字分别是6和4。与第1次访视相比，所有患者在研究期间均有时具有较低的pH值。

对于每周一次组，在第1次访视时的平均pH水平为5.6，而对于每周两次组为5.3。对于每周一次组，在第1次访视与第2次访视之间的变化为-0.99，而对于每周两次组为-0.66。除第4次访视之外，pH水平的这种降低是所有比较中最高的，但在第4次访视时，在每周一次组中有3名患者具有缺失的数值，而在每周两次组中有2名具有缺失的数值。

第1天与第3天或第4天的pH值(MV)比较

下图显示在第1天和第4天的中位pH值(MV)。可选地，如果第4天并非选项，则分别在第3天测量pH。所述图中还包括了来自于Wilcoxon符号秩检验的p值。在两个治疗组中，以及当将两个治疗组组合时，第1天与第3天或第4天之间的差异具有统计学显著性(p<0.05)。这指示当使用Laccure阴道片剂时对pH值(MV)存在初始影响。当绘制平均值时，得到类似模式。

图7中给出了pH值的降低。

次要功效终点

细菌性阴道病

证实BV的Amsel标准

每周一次组中的全部患者在第3次访视时均不具有BV，并且有8名患者在第5次访视时不具有BV。在每周两次组中，在第3次访视和第5次访视时分别有9名患者不具有BV。

表14Amsel标准-BV，在第1周和第2周证实

表15分别在第1周和第2周不具有BV的患者，包括精确95％CI

访视	治疗	不具有BV的数目	％	精确95％置信区间
					第3次访视，第8天	每周一次	10	100.0	(69.2-100.0)
	每周两次	9	90.0	(55.5-99.7)
					第5次访视，第15天	每周一次	8	80.0	(44.4-97.5)
	每周两次	9	100.0	(66.4-100.0)

Amsel标准-稀薄、白色、黄色、均质分泌物

每周一次组中的全部患者在第3次访视时不具有“稀薄、白色、黄色、均质分泌物”，但在第5次访视时有3名患者呈现所述标准。在每周两次组中，在第3次访视和第5次访视时分别有8名患者不具有“稀薄、白色、黄色、均质分泌物”。

表16单独的Amsel标准-稀薄、白色、黄色、均质分泌物，通过访视

Amsel标准-显微镜下存在线索细胞

每周一次组中的全部患者在第3次访视时不具有线索细胞，但在第5次访视时有2名患者存在线索细胞。在每周两次组中，在第3次访视时有7名患者不具有线索细胞，而在第5次访视时有8名患者不具有“线索细胞”。

表17单独的Amsel标准-显微镜下存在线索细胞，通过访视

Amsel标准-在加入碱时释放出鱼腥味

每周一次组中有9名患者在第3次访视和第5次访视时不具有鱼腥味。在每周两次组中，在第3次访视时有8名患者不具有鱼腥味，而在第5次访视时有9名患者不具有鱼腥味。

表18单独的Amsel标准-在加入碱时释放出鱼腥味，通过访视

Amsel标准-阴道流体的pH>4.5

在每周一次组中在第3次访视时仅三名患者具有4.5以下的pH，而在第5次访视时仅一名患者具有4.5以下的pH。在每周两次组中，在第3次访视时仅三名患者具有4.5以下的pH，在第5次访视时相应的数字为4名患者。

表19单独的Amsel标准-阴道流体的pH>4.5，根据CRF，通过访视

总体评估

来自研究人员的总体评估是两组中的7名患者通过使用治疗得到重大改善。

表20医师总体评估

pH差异

图7示出在每周一次(ow)和每周两次(bw)用Laccure阴道片剂治疗期间相比于第1次访视的阴道pH降低(平均值和95％置信区间)。从所述图上可见，所有患者从第2次访视起平均具有0.5的pH降低。从整体角度来看，看起来好像pH降低是比pH值本身有价值得多的度量。因此，如果pH降低0.5pH单位以上并且满足其它Amsel标准中的仅一个标准，则看起来好像治疗是有效的(如果四个Amsel标准中仅满足两个以下的标准，则治疗当然也是有效的)。通常，pH降低不应低于3.5的pH值。

主要有效性结论

研究的数据质量，当考虑缺失数据和完成患者数目良好时，21名患者中仅3名未根据方案完成研究。

在每周一次组中在10名患者中有三名患者以及在每周两次组中在9名患者中有4名患者在第5次访视(两周)时具有低于4.5的pH值。另外，所有患者相比于第1次访视(第1天)得到较低pH值，但并非总是低于pH 4.5。

在两个治疗组中，以及当将两个治疗组组合时，从第1次访视到第2次访视(第3-4天)的平均pH值存在统计学显著性降低(p<0.05)。

这些结果显示，当使用Laccure阴道片剂时，平均pH随时间降低。第1天与第3/4天之间的这种差异具有统计学显著性(MV pH，在阴道中部测量)。

根据Amsel标准的总体BV分类显示11名患者中的8名(每周一次)和10名患者中的9名(每周两次)在研究结束时不具有BV。除pH水平之外的单独的Amsel标准显示在2周时段内的治疗(每周一次和每周两次两者)在几乎所有患者中降低所有BV标准。

患者在日记中关于治疗的感受明确显示，与特定问题完全或部分一致，即，在与治疗无关的第15天，我感受到治疗具使用者友好性；我认为阴道片剂的持续时间已足够长；治疗通常感觉良好；我没有感受到阴道片剂麻烦；我认为治疗已减少了我的问题；在上市时我会考虑使用这种治疗。

医师总体评估显示在大部分情况下患者通过使用Laccure阴道片剂而具有重大改善，这与每周片剂数(一片或两片)无关。

总体结论

根据ICH GCP充分进行研究，其中较高数目的患者完成研究而无缺失数据。

pH水平在研究期间降低，这在从第1次访视到第2次访视时尤其显著。然而，大部分患者不存在低于4.5的降低。

通过使用独立于治疗组的Amsel标准可确定对BV的作用并且在两组中已经一周后几乎所有患者中的BV都消失了。

使用这种治疗的患者总体评估与医师对于治疗结果的观点一样好。一旦上市，全部患者考虑使用这种治疗。

用Laccure阴道片剂进行的治疗被视为在这个患者群体中充分耐受。

临床研究部分A的结果也用于确定临床研究的部分B的起始和设计。

实施例11

Laccure阴道片剂在患有细菌性阴道病的患者中的pH调节效果和安全性。具有平行组和适应性设计的开放对照研究。研究B

研究目的

主要目的：

为了研究Laccure阴道片剂在患有细菌性阴道病(BV)的对象中的功效。

次要目的：

为了研究Laccure阴道片剂在患有细菌性阴道病(BV)的对象中的安全性、耐受性、pH水平和患者满意度。

方法

研究是具有3个平行治疗组的开放设计。将患者随机分配到下列治疗中的任一种：

用Laccure阴道片剂治疗，每周一次，持续1周(OW)。

用Laccure阴道片剂治疗，每周两次，持续1周(BW)。

不具有BV治疗的对照组(C)。

患者根据下面的时间表就诊：

第1次访视 第2次访视 第3次访视

第1天 第4天^*) 第8天

^*)可在-1天进行访视。

在每周一次组中患者在第1天晚上自行施用装置，而在每周两次组中在第1天和第4天的晚上自行施用装置。在第3次访视时随机分组的患者，在每周一次组中在第8天晚上自行施用装置，而在每周两次组中在第8天和第11天的晚上自行施用装置。

对象数目

使用完全分析集(Full Analysis Set)(FAS)和符合方案集(Per Protocol)(PP)来呈现数据。FAS由接受至少1剂研究装置的所有随机分组患者组成(这个群体也被认为是安全性群体)。PP由接受至少1剂研究装置并且不具有重大协议违规(即不满足纳入/排除标准、缺失第3次访视、使用抗生素、来月经/出血、使用错误数目的阴道片剂和晚于第13天进行第3次访视)的所有随机分组患者组成。关于对照组，FAS由所有患者组成并且PP由不具有重大协议违规的所有患者组成。

诊断和纳入标准

年龄≥18岁的女性具有经证实的对当前细菌性阴道病的诊断，即存在下列4个Amsel标准中的至少3个：稀薄的白色至黄色均质分泌物、显微镜下存在线索细胞、当加入碱时有鱼腥味，以及pH>4.5。

测试产品、批号、剂量和施用模式

每周一次或每周两次在晚上施用Laccure阴道片剂，GMP批号83601-1010-06和83601-1010-10，持续1周。在每次施用时，根据研究人员的说明将1个阴道片剂深深插入阴道中。

治疗持续时间

治疗期为1周。

参考治疗

不存在参考治疗。对照组由未被治疗的患者组成。

评价标准

主要终点：

-为了比较每周一次治疗组与未被治疗的对照组之间在一周时根据Amsel标准无BV的频率

-自发报道的不良事件和在最终访视时在外阴阴道检查后报道的不良事件

次要终点：

-其它研究组之间在一周后根据Amsel标准无BV的频率

-阴道pH随时间的变化

-患者满意度(根据最后访视时的调查问卷的使用者友好性)

-以在一周时具有每个单独的Amsel标准的患者比例评估的片剂功效

-具有稀薄白色至黄色均质分泌物的患者的比例

-显微镜下存在线索细胞

-当加入碱时有鱼腥味

-pH>4.5

-安全性变量。

统计学方法

当呈现第1次访视(第1天)到第3次访视(第8天)的数据时，使用FAS群体和PP群体分析全部功效变量。

主要分析比较每周一次治疗组与未被治疗的对照组之间根据Amsel标准在第3次访视(第8天)时不具有BV的对象的比例。使用卡方检验在不存在连续性校正的情况下比较两个组之间的应答率。

根据Amsel标准在第3次访视(第8天)时不具有BV的次要分析是比较每周两次治疗组与未被治疗的对照组以及比较汇总治疗组与未被治疗的对照组。以与主要分析相同的方式进行这些分析。

按不同治疗组(即每周一次组、每周两次组、和对照组以及汇总治疗组之一)，使用不具有BV的对象的比例的频率表以及95％置信区间呈现在第3次访视(第8天)时不具有BV的对象的比例。表格中包括来自卡方检验的p值。

使用以下两种检验分析每个治疗组(即每周一次组、每周两次组、汇总治疗组和对照组)内的pH值在第1次访视(第1天)与第2次访视(第4天)/第3次访视(第8天)之间的差异：

1.单样品t检验，和

2.Wilcoxon符号秩检验。

对象的调查问卷

使用卡方检验在不存在连续性校正的情况下比较每周一次组与每周两次组之间对应于不同对象满意度问题的对象比例。

单独的Amsel标准：

使用卡方检验在不存在连续性校正的情况下分析根据Amsel标准的全部次要终点。

结果

细菌性阴道病

按分析集和治疗组将在第3次访视时不具有BV的患者数目呈现于表21中。当分别将每周一次组和每周两次组的应答率与对照组的应答率相比时，都存在高度统计学显著性差异(p<0.0001，对于所有比较)。当将汇总治疗组与对照组相比时，也是如此(p<0.0001)。对于FAS和PP两者来说，结果类似。在每周一次治疗组与每周两次治疗组的应答率之间未能观察到统计学显著性差异(FAS：p＝0.3644；PP：p＝0.3013)。

表21.根据Amsel标准具有细菌性阴道病(BV)的患者

*在数据库锁定后，发现对照组中的一名患者已被随机分配到已在第2次访视(第4天)时用Laccure阴道片剂治疗。这名患者因此不应被包括在PP分析集中，并且在这个组中经校正的不具有BV的患者％应为7.4％。

单独的Amsel标准；异常分泌物、线索细胞和鱼腥味

表22-24显示在基线(第1次访视)时和在一周(第3次访视)时具有异常(稀薄、白色至黄色)阴道分泌物、线索细胞或鱼腥味的患者的数目和比例。pH>4.5。

具有稀薄、白色至黄色阴道分泌物的患者的数目和比例呈现于表22中。对于FAS和PP分析集两者来说，当将每周一次组、每周两次组和汇总治疗组与对照组相比时，在一周后的应答率存在统计学显著性差异(p<0.0001)。当将每周一次与每周两次相比时，发现不存在统计学显著性差异。

表22.具有稀薄的白色至黄色的均质分泌物的患者的数目和比例(Amsel标准)

在显微镜下具有线索细胞的患者的数目和比例呈现于表23中。对于FAS和PP分析集两者来说，当将每周一次组、每周两次组和汇总治疗组与对照组相比时，在一周后的应答率存在统计学显著性差异(p<0.0001)。当将每周一次与每周两次相比时，发现不存在统计学显著性差异。

表23.在显微镜下具有线索细胞的患者的数目和比例(Amsel标准)

具有释放鱼腥味的阴道分泌物的患者的数目和比例呈现于表24中。对于FAS和PP分析集两者来说，当将每周一次组、每周两次组和汇总治疗组与对照组相比时，在一周后的应答率存在统计学显著性差异(p<0.05)。当将每周一次与每周两次相比时，发现不存在统计学显著性差异。

表24.具有在加入碱时释放鱼腥味的阴道分泌物的患者的数目和比例(Amsel标准)

pH变化

参见图8。

在FAS和PP分析集两者中，在每周一次治疗组中以及在每周两次治疗组中从基线(第1次访视)到第4天(第2次访视)和到第8天(第3次访视)的pH平均值和中位pH存在统计学显著性降低。使用一个Laccure阴道片剂从基线到第4天的中位降低为0.9pH单位(p<0.0001)，而在对照组中pH降低为0.2pH单位(p<0.05)。每周一次或每周两次使用Laccure阴道片剂(汇总治疗)从基线到第8天的中位降低为0.5pH单位(p<0.0001)，而在对照组中pH降低为0.2pH单位(ns)。使用Wilcoxon符号秩检验计算P值(参见图9)。

具有阴道pH>4.5的患者的数目和比例呈现于表25中。对于FAS和PP分析集两者来说，当将每周一次组、每周两次组和汇总治疗组与对照组相比时，在一周后的应答率存在统计学显著性差异(p<0.05)。当将每周一次与每周两次相比时，发现不存在统计学显著性差异。

表25.具有阴道pH>4.5的患者的数目和比例(Amsel标准)

可接受性/使用者友好性

每周一次或每周两次用Laccure阴道片剂治疗一周的患者在最后访视日完成包含9个问题的调查问卷。表22中给出了FAS分析集的应答率和置信区间。PP分析的应答率相似并且因此不在这个报告中呈现。

超过85％的患者完全同意治疗对使用者友好。

超过85％的患者完全同意阴道片剂易于插入。

超过90％的患者完全同意或部分同意阴道片剂的使用并不麻烦。

超过90％的患者完全同意或部分同意不用太频繁给药是舒服的。

超过90％的患者完全同意或部分同意治疗已经有效并且气味问题减少。

安全性

不存在严重的不良事件(SAE)。

临床研究的结论

根据ICH GCP指南充分进行研究，其中大量的患者完成研究而无缺失数据。主要功效终点是比较每周一次治疗组与未被治疗的对照组之间根据Amsel标准在第3次访视(第8天)时不具有BV的对象的比例，其在使用FAS和PP分析集两者时都具统计学显著性且有利于每周一次的治疗。当使用FAS和PP分析集时，每周两次治疗组与未被治疗的对照组之间、以及汇总治疗组与未被治疗的对照组之间的比较结果也具统计学显著性。在每周一次治疗与每周两次治疗的应答率之间未观察到统计学显著性差异。

研究A与研究B之间的应答率在数值上的比较明确显示每周一次或每周两次治疗对象的效果几乎一致。

在所有三个组中，从基线到第2次访视的pH值(MV)存在平均降低。对于所有的组来说，降低都具统计学显著性。从基线到第3次访视的pH值也存在降低，但这种降低对于对照组来说不具统计学显著性，仅对两个治疗组来说具统计学显著性。相比于对照组，两个治疗组的pH降低基本上更大。

总之，在功效和使用者友好性方面，对象对使用这种治疗的感受非常好。

在这个患者群体中，用Laccure阴道片剂进行治疗被认为是充分耐受的。

Claims (20)

1.一种组合物，其包含：

i)具有下式的低聚乳酸：

其中n为2至20的整数，并且其中所述低聚乳酸的总重量的10％至20％w/w为n等于2的三聚物HL₃，其中所述低聚乳酸的数均分子量M_n为200至500，其中聚合度PDn为2至3.8，和

ii)粘膜粘附剂，其是粘度为10至20cP的羟丙基甲基纤维素。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述低聚乳酸的数均分子量M_n为200至400。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述低聚乳酸的M_n为230至340。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述低聚乳酸的多分散性指数为1.45以上。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述低聚乳酸的多分散性指数为1.45至6。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述低聚乳酸的数均分子量在200至240的范围内，重均分子量在290至500的范围内，多分散性指数在1.45至2.5的范围内。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述低聚乳酸具有2.5至3.8的聚合度。

8.根据权利要求1、4-5中任一项所述的组合物，其中所述低聚乳酸的数均分子量在255至425的范围内，重均分子量在370至580的范围内，多分散性指数在1.45至2.5的范围内。

9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述低聚乳酸包含：

10％至20％w/w的HL₂(即n＝1)

10％至20％w/w的HL₄(即n＝3)

10％至15％w/w的HL₅(即n＝4)

5％至15％w/w的HL₆(即n＝5)。

10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述低聚乳酸包含各1％至5％w/w的HL₁₀、HL₁₁、HL₁₂、HL₁₃和HL₁₄。

11.根据权利要求1、2、4-5、9-10中任一项所述的组合物，其中所述低聚乳酸具有225至275的数均分子量。

12.根据权利要求1所述的组合物，其被设计用于阴道施用。

13.根据权利要求1所述的组合物，其为固体或半固体组合物的形式。

14.根据权利要求1所述的组合物，其为阴道插入物的形式。

15.根据权利要求1所述的组合物，其为以下形式：棉塞、阴道栓剂、阴道气雾剂、阴道杯、阴道凝胶、阴道贴剂、阴道环、阴道海绵、阴道塞剂、阴道乳膏、阴道乳液、阴道泡沫剂、阴道洗液、阴道软膏、阴道粉剂、阴道香波、阴道溶液、阴道喷雾剂、阴道悬浮液、阴道片剂、阴道棒、阴道圆盘、半透性包装以及其任何组合。

16.根据权利要求1所述的组合物，其为阴道栓的形式。

17.根据权利要求1所述的组合物，其为阴道片剂的形式。

18.根据权利要求1所述的组合物，其还包含缓冲剂。

19.根据权利要求1所述的组合物，其还包含用于冻干的试剂。

20.一种用于制备如权利要求1-19中任一项所定义的组合物的方法，所述方法包括：

i)将水任选地与一种或多种药学上可接受的赋形剂一起装入容器中并混合，直至所述药学上可接受的赋形剂溶解，

ii)将来自i)的溶液加热至80℃，

iii)以小份加入粘膜粘附剂并且在每次加入之间缓慢混合，

iv)将混合物冷却至55℃，

v)将低聚乳酸加入所述容器中并伴随有间歇的均质化，

vi)将来自v)的材料填充至模子中，

vii)将填充的模子在-25℃下冷冻，以及

viii)将从vii)获得的冷冻材料冻干。