CN104450663A - 一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 - Google Patents
一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104450663A CN104450663A CN201410605836.4A CN201410605836A CN104450663A CN 104450663 A CN104450663 A CN 104450663A CN 201410605836 A CN201410605836 A CN 201410605836A CN 104450663 A CN104450663 A CN 104450663A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preparation
- cellobiase
- gel
- teos
- template
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，包括：溶胶形成步骤：在常温下以稀酸为催化剂将正硅酸乙酯(TEOS)水解至形成透明溶胶，并将溶胶中乙醇抽离至质量含量≤5％；凝胶形成步骤：在搅拌下向溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，放置生成凝胶。根据本发明另一方面公开了根据上述方法制备得到的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料。根据本发明方法制备得到的纳米介孔材料孔径约2～7nm，因此具有很高的比表面积；所述纳米介孔材料的生物活性高且能重复利用。
Description
技术领域
本发明涉及一种纳米介孔材料及其制备方法，尤其涉及一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法。
背景技术
受世界石油供应、价格、环保和全球气候变化等因素的影响，可再生洁净能源—生物燃料的发展受到了许多国家的重视，尤其是美国、巴西和中国。生物燃料以燃料乙醇为主，生物技术酶法是利用地球上数量最大的可再生性碳源物质纤维素获得燃料乙醇的重要步骤之一。然而纤维素的高聚合度使得其难降解，与淀粉相比纤维素的酶解速率要差2个数量级以上，使纤维素酶的成本过高，从而严重制约该技术的工业应用，为此国内外研究者采取许多措施解决此问题，如对纤维素酶进行固定，提高其稳定性，使其能重复使用。
越来越多的研究表明，可操作性与可重复性固定化纤维素酶能够极大降低纤维素酶解工艺成本，这使其成为国内外研究热点。载体被认为是决定固定化酶效果的关键因素之一。根据载体水溶性，可将其分为可溶性载体和不溶性载体两大类。天然纤维素都是不溶性载体，许多研究者最初认为只能设计可溶性载体固定化纤维素酶才具有活性。但随着近年来不溶性载体的快速发展，可溶性载体固定纤维素酶的优异性不再明显。将纤维素酶固定在可溶性载体上，其动力学性质没有变化，操作稳定性提高也不显著，反而由于存在不易回收的致命缺陷，在20世纪90年代后很快脱离研究者的视野。不溶性载体主要包括廉价淀粉接枝丙烯腈、丙烯酰胺两亲性高分子化合物形成多孔颗粒状载体和改性的壳聚糖等。不溶性载体固定化纤维素酶回收极其方便，酶稳定性提高也十分明显，但与底物，尤其是不溶性底物之间的传质阻力大，因此需要对不溶性载体进行改造使其具有大的比表面积。
其中，燃料乙醇主要包括粮食乙醇和纤维素乙醇。在世界粮食短缺的 大背景下，“不与人争粮，不与粮争地”，以秸秆、锯末、蔗渣、生活垃圾等物质生产可再生能源(如：纤维素乙醇)是世界各国未来能源发展的重要战略，因此纤维素乙醇产业得到了大力发展。我国每年纤维素乙醇产量400万吨，我国“十二五”国家战略性规划实现低成本纤维素酶突破。按照目前纤维素乙醇的生产规模，仅美国纤维素乙醇产业市场所需要的纤维素酶即可达到30万吨以上，我国纤维素酶的需求量也将近在10万吨左右。但在纤维素乙醇生产过程中存在纤维素酶不能回收并重复使用，生产成本高且无法大规模生产等问题。固定化纤维素酶主要用于生产纤维素乙醇。用固定化纤维素酶代替自由纤维素酶，可以重复使用从而降低纤维素乙醇的生产成本，可以大大促进可再生生物能源产业发展。
目前，固定化纤维素酶技术大多采用聚合物凝胶材料为载体，或者采用表面活性剂的凝胶化方法。采用聚合物凝胶材料为载体的固定化酶使用周期短、成本高、抗毒性差、活性低且重复使用次数少；采用表面活性剂凝胶化方法制备固定化酶的溶胶凝胶过程以及模板移除过程往往需要严苛的条件(如高温高压、强酸碱环境以及使用大量有机溶剂)，这些严苛的条件对生物活性物质(如：蛋白质和核酸)具有极大的破坏作用，从而极大的限制了传统表面活性剂法在生物领域的应用，且该方法制备得到的固定化酶的回收也存在问题。
发明内容
为此，本发明提出了一种可以解决上述问题的或至少能部分解决上述问题的一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法。
根据本发明的一方面，提供了一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，该方法包括：溶胶形成步骤：在常温下以稀酸为催化剂将TEOS水解至形成透明溶胶，并将溶胶中乙醇抽离至质量含量≤5％；凝胶形成步骤：在搅拌下向所述溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，放置生成凝胶。
可选地，根据本发明的制备方法，其中所述稀酸为0.1～0.3M的HCl溶液，所述HCl溶液与所述TEOS的质量比为5:32～13:32。
可选地，根据本发明的制备方法，其中所述模板为葡萄糖、麦芽糖、果糖、二苯甲酰基-L-酒石酸、环糊精、尿素、甘油、可溶性淀粉、柠檬 酸、抗坏血酸或寡肽。
可选地，根据本发明的制备方法，其中所述模板溶液与所述TEOS的质量比为2:32～6:32。
可选地，根据本发明的制备方法，其中所述纤维二糖酶缓冲液浓度为10～100mg/ml。
可选地，根据本发明的制备方法，其中所述纤维二糖酶缓冲液与所述TEOS的质量比为1:32～10:32。
可选地，根据本发明的制备方法，其中所述稀碱液为NaOH溶液、KOH溶液或NH3.H2O。
可选地，根据本发明的制备方法，其中所述NaOH溶液的浓度为0.4～0.8M。
可选地，根据本发明的制备方法，进一步包括：
去除模板干燥步骤:将所述凝胶研碎、加水洗涤除去模板抽滤得到凝胶，将抽滤得到的凝胶埋入硅胶中干燥3-7天。
根据本发明的另一方面，提供了一种根据上述制备方法得到的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料。
根据本发明方法制备得到的介孔材料固定化纤维二糖酶的产品活性可达自由纤维二糖酶活性的90％以上，可重复使用九次以上而保持活性不降低；利用介孔材料固定纤维二糖酶可以提高纤维二糖酶的储存稳定性和使用温度，延长其在恶劣环境下的存储周期。本发明方法采用非表面活性剂法，在室温、常压、接近中性且几乎是纯水相的环境中制造出介孔结构，实现溶胶凝胶造孔与原位包埋生物活性物质的同步化，工艺过程简单、条件温和、环境友好，适宜于工业化。
附图说明
通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。在附图中：
图1示出了根据本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法流程图；
图2示出了高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的形态；
图3示出了高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的重复使用次数与活性变化图；
图4示出了根据本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法原理图；
图5示出了根据本发明的溶胶形成机理图；
图6示出了根据本发明的溶胶形成交联网络凝胶化原理图。
具体实施方式
本发明提供了许多可应用的创造性概念，该创造性概念可大量的体现于具体的上下文中。在下述本发明的实施方式中描述的具体的实施例仅作为本发明的具体实现方式的示例性说明，而不构成对本发明范围的限制。
根据本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，原理如图4所示。
根据图4和图1示出的流程图可以看出，该方法首先进入溶胶形成步骤S1100：常温下以稀酸为催化剂在搅拌状态下将正硅酸乙酯(TEOS)水解至透明溶胶，并将溶胶中乙醇抽离至质量含量≤5％。
其中TEOS为正硅酸乙酯，在常温下以稀酸为催化剂，一般采用0.1～0.3M的HCl溶液，HCl溶液与TEOS的质量比为5:32～13:32。常温下在TEOS中边搅拌边加入稀盐酸，剧烈搅拌10～20min，得到透明的溶胶，将水解后得到的透明溶胶在0-10℃冷却(如放置在冰箱中进行)2～4h，用高真空系统抽离除去体系水解过程中产生的副产物乙醇，温度冷却至0-10℃为防止抽真空时由于体系中乙醇含量过高出现沸腾现象防止溶胶溅出，抽离一段时间后，为将体系中乙醇去除更彻底，将溶胶体系用水浴加热至37-50℃恒温后进一步抽取，至体系中乙醇质量含量≤5％，抽取一段时间后加热进行进一步抽离，使乙醇抽离更加彻底。将体系中的乙醇含量降低至≤5％，是由于在溶胶中存在大量乙醇会影响后续生成的高活性固定化纤维二糖酶的活性，而采用本方法后将体系中乙醇的含量控制在≤5％时即可不对高活性固定化纤维二糖酶的活性造成影响，因此本制备方法的制备条件相对更加宽松，容易实现。其中，溶胶形成机理如图5所示。
根据本发明的方法及上述原理图，该方法然后进行凝胶形成步骤：在搅拌下向形成的溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，在4-10℃放置48～72h生成凝胶。
在凝胶形成步骤的模板为葡萄糖、麦芽糖、果糖、二苯甲酰基-L-酒石酸、环糊精、尿素、甘油、可溶性淀粉、柠檬酸、抗坏血酸或寡肽。模板与TEOS的质量比为2:32～6:32，将模板制备成溶液加入体系中。纤维二糖酶缓冲液浓度为10～100mg/ml，纤维二糖酶缓冲液与TEOS的质量比为1:32～10:32。稀碱液为NaOH溶液、KOH溶液或NH3.H2O。其中NaOH溶液的浓度为0.4～0.8M。溶胶进一步发生缩聚和醇解并形成交联网络凝胶化原理如图6所示。
根据本发明的制备方法及图6，该方法进一步进入去除模板干燥步骤S1300：将所述凝胶研碎、加水洗涤除去模板抽滤得到凝胶，将抽滤得到的凝胶埋入硅胶中干燥3-7天，将干燥好的凝胶研磨过40目筛子装袋备用。
根据本发明制备得到的介孔材料固定化纤维二糖酶产品活性可达自由纤维二糖酶活性的90％以上，可重复使用九次以上而保持活性不降低；利用介孔材料固定纤维二糖酶可以提高纤维二糖酶的储存稳定性和使用温度，延长其在恶劣环境下的存储周期。本发明方法采用非表面活性剂法，在室温、常压、接近中性且几乎是纯水相的环境中制造出介孔结构，实现溶胶凝胶造孔与原位包埋生物活性物质的同步化，工艺过程简单、条件温和、环境友好，适宜于工业化。
根据本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，可以根据溶胶凝胶形成的条件、加入模板的量和种类、纤维二糖酶缓冲液的浓度和加入量等因素进行具体设计出不同的实施例，下面将以高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法为实施例对本发明的制备方法进行示例性说明。
实施例1-6中使用原料如下：
正硅酸乙酯(TEOS)，国药试剂集团，纯度＞99％
纤维二糖酶(Cellobiase)，阿拉丁试剂，250U/g
盐酸(0.1mol/L)，国药试剂集团
实施例1
根据图1示出的本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，首先进入溶胶形成步骤S1100：称取正硅酸乙酯(TEOS)32克，在搅拌下加入5克0.1M的稀HCl溶液，盐酸溶液与TEOS的质量比为5:32，剧烈搅拌10min后，在常温下以稀酸为催化剂将TEOS水解至形成透明溶胶，将水解后的透明溶胶在0℃冷却降温2h后用高真空系统抽离体系水解过程中产生的副产物乙醇，抽离一段时间后将溶胶水浴恒温至37℃进行抽离，直至溶胶中乙醇质量含量≤5％。
然后进入凝胶形成步骤S1200：在搅拌下向所述溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，在4℃下放置48h生成凝胶。模板溶液为2克葡萄糖溶于10克水中制成的溶液(葡萄糖与TEOS的质量比2:32)。加入10mg/ml纤维二糖酶缓冲液1克(纤维二糖酶缓冲液与TEOS的质量比为1:32)。稀碱液为浓度为0.4M的NaOH溶液。
最后进入去除模板干燥步骤S1300：将形成的凝胶研碎、加150ml水洗涤2次除去葡萄糖抽滤得到白色凝胶，将抽滤得到的凝胶用滤纸埋在干燥的硅胶中干燥3天，研磨过40目筛，装袋备用。
实施例2
根据图1示出的本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，首先进入溶胶形成步骤S1100：称取正硅酸乙酯(TEOS)32克，在搅拌下加入13克0.3M的稀HCl溶液，盐酸溶液与TEOS的质量比为13:32，剧烈搅拌20min后，在常温下以稀酸为催化剂将TEOS水解至形成透明溶胶，将水解后的透明溶胶在10℃冷却降温4h后用高真空系统抽离体系水解过程中产生的副产物乙醇，抽离一段时间后将溶胶水浴恒温至50℃进行抽离，直至溶胶中乙醇质量含量≤5％。
然后进入凝胶形成步骤S1200：在搅拌下向所述溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，在10℃下放置72h生成凝胶。模板溶液为6克果糖溶于10克水中制成的溶液(果糖与TEOS的质量比6:32)。加入100mg/ml纤维二糖酶缓冲液10克(纤维二糖酶缓冲液与TEOS的质量比为10:32)。稀碱液为浓度为0.8M的NaOH溶液。
最后进入去除模板干燥步骤S1300：将形成的凝胶研碎、加150ml水洗涤2次除去葡萄糖抽滤得到白色凝胶，将抽滤得到的凝胶用滤纸埋在干燥的硅胶中干燥7天，研磨后过40目筛，装袋备用。
实施例3
根据图1示出的本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，首先进入溶胶形成步骤S1100：称取正硅酸乙酯(TEOS)32克，在搅拌下加入9克0.2M的稀HCl溶液，盐酸溶液与TEOS的质量比为9:32，剧烈搅拌15min后，在常温下以稀酸为催化剂将TEOS水解至形成透明溶胶，将水解后的透明溶胶在5℃冷却降温3h后用高真空系统抽离体系水解过程中产生的副产物乙醇，抽离一段时间后将溶胶水浴恒温至45℃进行抽离，直至溶胶中乙醇质量含量≤5％。
然后进入凝胶形成步骤S1200：在搅拌下向所述溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，在8℃下放置60h生成凝胶。模板溶液为4克麦芽糖溶于10克水中制成的溶液(麦芽糖与TEOS的质量比4:32)。加入60mg/ml纤维二糖酶缓冲液5克(纤维二糖酶缓冲液与TEOS的质量比为5:32)。稀碱液为浓度为0.6M的NaOH溶液。
最后进入去除模板干燥步骤S1300：将形成的凝胶研碎、加150ml水洗涤2次除去葡萄糖抽滤得到白色凝胶，将抽滤得到的凝胶用滤纸埋在干燥的硅胶中干燥4天，研磨过40目筛，装袋备用。
实施例4
根据图1示出的本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，首先进入溶胶形成步骤S1100：称取正硅酸乙酯(TEOS)32克，在搅拌下加入7克0.3M的稀HCl溶液，盐酸溶液与TEOS的质量比为7:32，剧烈搅拌16min后，在常温下以稀酸为催化剂将TEOS水解至形成透明溶胶，将水解后的透明溶胶在7℃冷却降温3.5h后用高真空系统抽离体系水解过程中产生的副产物乙醇，抽离一段时间后将溶胶水浴恒温至48℃进行抽离，直至溶胶中乙醇质量含量≤5％。
然后进入凝胶形成步骤S1200：在搅拌下向所述溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，在8℃下放置68h 生成凝胶。模板溶液为3克二苯甲酰基-L-酒石酸溶于10克水中制成的溶液(二苯甲酰基-L-酒石酸与TEOS的质量比3:32)。加入50mg/ml纤维二糖酶缓冲液6克(纤维二糖酶缓冲液与TEOS的质量比为6:32)。稀碱液为浓度为0.7M的NaOH溶液。
最后进入去除模板干燥步骤S1300：将形成的凝胶研碎、加150ml水洗涤2次除去葡萄糖抽滤得到白色凝胶，将抽滤得到的凝胶用滤纸埋在干燥的硅胶中干燥4天，研磨过40目筛，装袋备用。
实施例5
根据图1示出的本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，首先进入溶胶形成步骤S1100：称取正硅酸乙酯(TEOS)32克，在搅拌下加入12克0.2M的稀HCl溶液，盐酸溶液与TEOS的质量比为12:32，剧烈搅拌13min后，在常温下以稀酸为催化剂将TEOS水解至形成透明溶胶，将水解后的透明溶胶在6℃冷却降温3h后用高真空系统抽离体系水解过程中产生的副产物乙醇，抽离一段时间后将溶胶水浴恒温至42℃进行抽离，直至溶胶中乙醇质量含量≤5％。
然后进入凝胶形成步骤S1200：在搅拌下向所述溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，在7℃下放置55h生成凝胶。模板溶液为3克葡萄糖溶于10克水中制成的溶液(葡萄糖与TEOS的质量比3:32)。加入70mg/ml纤维二糖酶缓冲液8克(纤维二糖酶缓冲液与TEOS的质量比为8:32)。稀碱液为浓度为0.6M的NaOH溶液。
最后进入去除模板干燥步骤S1300：将形成的凝胶研碎、加150ml水洗涤2次除去葡萄糖抽滤得到白色凝胶，将抽滤得到的凝胶用滤纸埋在干燥的硅胶中干燥4天，研磨过40目筛，装袋备用。
实施例6
根据图1示出的本发明的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，首先进入溶胶形成步骤S1100：称取正硅酸乙酯(TEOS)32克，在搅拌下加入12.5克0.1M的稀HCl溶液，盐酸溶液与TEOS的质量比为12.5:32，剧烈搅拌15min后，在常温下以稀酸为催化剂将TEOS水解至形成透明溶胶，将水解后的透明溶胶在4℃冷却降温2h后用高真空 系统抽离体系水解过程中产生的副产物乙醇，抽离一段时间后将溶胶水浴恒温至37℃进行抽离，直至溶胶中乙醇质量含量≤5％。
然后进入凝胶形成步骤S1200：在搅拌下向所述溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，在4℃下放置48h生成凝胶。模板溶液为2克果糖溶于10克水中制成的溶液(果糖与TEOS的质量比2:32)。加入10mg/ml纤维二糖酶缓冲液1克(纤维二糖酶缓冲液与TEOS的质量比为1:32)。稀碱液为浓度为0.4M的NaOH溶液。
最后进入去除模板干燥步骤S1300：将形成的凝胶研碎、加150ml水搅拌洗涤2次除去葡萄糖抽滤得到白色凝胶，将抽滤得到的凝胶用滤纸埋在干燥的硅胶中干燥3天(72h)，研磨过40目筛，装袋备用。
根据实施例1-6制备得到的高活性固定化纤维二糖酶的纳米介孔材料，固定化纤维二糖酶产品活性可达自由纤维二糖酶活性的90％以上；所述材料可重复使用十次以上而保持活性不降低；利用介孔材料固定纤维二糖酶可以提高纤维二糖酶的储存稳定性和使用温度，延长其在恶劣环境下的存储周期。本发明方法采用非表面活性剂法，在室温、常压、接近中性且几乎是纯水相的环境中制造出介孔结构，实现溶胶凝胶造孔与原位包埋生物活性物质的同步化，工艺过程简单、条件温和、环境友好，适宜于工业化。
对根据本发明的制备方法得到的高活性固定化纤维二糖酶的纳米介孔材料进行了系列性能表征。
(一)活性测定
活力测定方法：纤维二糖酶活力(cellobiase activity,CBA)按照IUPAC推荐的标准方法测定，以国际单位IU表示。取1.0mL纤维二糖底物(15mmol/L、pH＝4.8)于试管中，加入1mL适当稀释的酶液，在50℃下恒温反应30min。用葡萄糖氧化酶法测定生成的葡萄糖，并扣除空白试验测定值。一个纤维二糖酶活力国际单位(CBIU)等于标准酶促反应条件下每分钟生成2.0umol葡萄糖的酶量。则有：
准确称取实施例6中制备得到的干燥研磨过筛的高活性固定化纤维 二糖酶纳米介孔材料粉末1.000g，按照上述测试方法进行活性测定，测定过程中要及时振荡酶解体系。测得实施例6中高活性固定化纤维二糖酶纳米的活性为240IU/g，同批次自由纤维二糖酶活性为260IU/g。
(二)孔径测定
图2示出的为利用实施例6制备得到的介孔纳米材料的电镜照片，其中介孔纳米材料的孔径在2～7nm之间，增大了介孔纳米材料的比表面积，从而减小了在制备纤维素乙醇时载体与底物之间的传质阻力。
(三)高活性固定化纤维二糖酶的重复使用实验
根据图3示出的示意图，可以看出根据本发明制备得到的固定化纤维二糖可以使用9次以上仍能保持较高的活性。
(四)将体系残留不同含量乙醇制备得到的高活性固定化纤维二糖酶的活性进行了对比测定。
活性测定方法参照(一)中活性测定的方法，测定结果如下：
由此可见，将体系中残留乙醇含量控制在≤5％，即可实现高活性固定化纤维二糖酶的制备，并使其保持较高的活性(90％以上)。
应该注意的是，上述实施例对本发明进行说明而不是对本发明进行限制，并且本领域技术人员在不脱离所附权利要求范围的情况下可设计出替换实施例。在权利要求中，不应将位于括号之间的任何参考符号构造成对权利要求的限制。单词“包含”不排除存在未列在权利要求中的元件或步骤。
Claims (10)
1.一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料的制备方法，该方法包括：
溶胶形成步骤S1100：在常温下以稀酸为催化剂将TEOS水解至形成透明溶胶，并将溶胶中的乙醇抽离至质量含量≤5％；
凝胶形成步骤S1200：在搅拌下向所述溶胶中依次加入模板溶液和纤维二糖酶缓冲液，用稀碱液将体系调至中性，放置生成凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述稀酸为0.1～0.3M的HCl溶液，所述HCl溶液与所述TEOS的质量比为5:32～13:32。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述模板为葡萄糖、麦芽糖、果糖、二苯甲酰基-L-酒石酸、环糊精、尿素、甘油、可溶性淀粉、柠檬酸、抗坏血酸或寡肽。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述模板与所述TEOS的质量比为2:32～6:32。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述纤维二糖酶缓冲液浓度为10～100mg/ml。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中所述纤维二糖酶缓冲液与所述TEOS的质量比为1:32～10:32。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述稀碱液为NaOH溶液、KOH溶液或NH3.H2O。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其中所述NaOH溶液的浓度为0.4～0.8M。
9.根据权利要求1所述的制备方法，该方法进一步包括：
去除模板干燥步骤S1300：将所述凝胶研碎、加水洗涤除去模板抽滤得到凝胶，将抽滤得到的凝胶埋入硅胶中干燥3-7天。
10.一种根据权利要求1-9任一所述制备方法得到的高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410605836.4A CN104450663A (zh) | 2014-11-02 | 2014-11-02 | 一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410605836.4A CN104450663A (zh) | 2014-11-02 | 2014-11-02 | 一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104450663A true CN104450663A (zh) | 2015-03-25 |
Family
ID=52897416
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410605836.4A Pending CN104450663A (zh) | 2014-11-02 | 2014-11-02 | 一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104450663A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104498472A (zh) * | 2014-11-06 | 2015-04-08 | 清华大学 | 一种磁性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103397014A (zh) * | 2013-08-09 | 2013-11-20 | 北京维康双元生物医药科技有限公司 | 一种纳米固定化纤维素酶的制备方法 |
| CN103642788A (zh) * | 2013-12-11 | 2014-03-19 | 江苏科技大学 | 一种纤维素酶固定化载体的制备方法 |
| CN103691372A (zh) * | 2013-12-23 | 2014-04-02 | 廖文强 | 一种介孔材料的制备方法 |
-
2014
- 2014-11-02 CN CN201410605836.4A patent/CN104450663A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103397014A (zh) * | 2013-08-09 | 2013-11-20 | 北京维康双元生物医药科技有限公司 | 一种纳米固定化纤维素酶的制备方法 |
| CN103642788A (zh) * | 2013-12-11 | 2014-03-19 | 江苏科技大学 | 一种纤维素酶固定化载体的制备方法 |
| CN103691372A (zh) * | 2013-12-23 | 2014-04-02 | 廖文强 | 一种介孔材料的制备方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104498472A (zh) * | 2014-11-06 | 2015-04-08 | 清华大学 | 一种磁性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104498472A (zh) | 一种磁性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 | |
| Andriani et al. | Immobilization of cellulase from newly isolated strain Bacillus subtilis TD6 using calcium alginate as a support material | |
| Zhang et al. | Immobilization of cellulase on a silica gel substrate modified using a 3-APTES self-assembled monolayer | |
| CN101560511B (zh) | 一种以大孔阴离子树脂固定化果糖基转移酶的方法 | |
| CN110237725B (zh) | 有机胺改性氧化石墨烯/聚合物复合膜及其制备和应用 | |
| CN102557578B (zh) | 一种碳纳米纤维气凝胶复合材料的制备方法 | |
| CN105524909B (zh) | 用于酶固定化的磁性壳聚糖微球、其制备方法及应用 | |
| CN103571818B (zh) | 一种桔青霉的固定化方法 | |
| CN103319731A (zh) | 一种再生丝素蛋白溶液及其制备方法 | |
| CN107287956B (zh) | 一种酶预处理结合机械研磨制备纳米纤维素的方法 | |
| CN104801246A (zh) | 一种核壳结构菌丝纳米复合球的制备方法 | |
| CN102994489B (zh) | 生物素-亲和素系统固定化糖化酶及其制备方法 | |
| Estevinho et al. | Development of enzymatically-active bacterial cellulose membranes through stable immobilization of an engineered β-galactosidase | |
| CN107893062A (zh) | 一种纤维素酶固定化及水解纤维素的方法 | |
| Cui et al. | Magnetic mesoporous enzyme–silica composites with high activity and enhanced stability | |
| CN104450663A (zh) | 一种高活性固定化纤维二糖酶纳米介孔材料及其制备方法 | |
| CN103397014B (zh) | 一种纳米固定化纤维素酶的制备方法 | |
| CN103691372B (zh) | 一种介孔固定化纤维素酶的制备方法 | |
| Cabrera-Padilla et al. | Immobilization of Candida rugosa lipase onto an eco-friendly support in the presence of ionic liquid | |
| CN102899308B (zh) | 一种纤维素酶热稳定添加剂 | |
| Su et al. | Cellulase immobilization properties and their catalytic effect on cellulose hydrolysis in ionic liquid | |
| CN105154426B (zh) | 一种木聚糖酶的固定化方法 | |
| CN102899309B (zh) | 一种纳米介质材料的制备方法 | |
| CN104711305A (zh) | 一种酶水解细菌纤维素制备纤维素纳米晶的方法 | |
| Chang et al. | Enhanced enzymatic hydrolysis of cellulose in microgels |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20150325 |