CN104447481A - 苯甲酸硫脲类抗流感病毒化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类苯甲酸硫脲类抗流感病毒化合物(I)、它们的制备方法以及它们的医药用途，本发明化合物在体内外对流感病毒具有显著的抑制活性，其在治疗流感病毒感染性疾病方面具有良好的应用前景。通式(I)中R1、R2、R3、R4的定义见说明书。

Description

苯甲酸硫脲类抗流感病毒化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类苯甲酸硫脲类抗流感病毒化合物、它们的制备方法以及它们的医药用途。
背景技术
流行性感冒是由流感病毒引起的一种严重威胁人类生命和健康的急性呼吸道传染病，传染性强，分布面广，致死率高，是人类至今无法控制的世界性传染病。流感病毒变异性强，给防治带来极大困难。2013年3月底在上海和安徽两地首次爆发的人感染H7N9禽流感病毒病例引起社会广泛关注。
虽然抗流感病毒药物种类繁多，但是流感病毒的耐药性使得金刚烷胺类M2蛋白抑制剂类抗病毒药物逐渐淘汰。当前抗流感病毒药物的研究以神经氨酸酶抑制剂类为主，临床使用广泛的抗流感病毒药物主要有扎那米韦，奥司他韦以及帕拉米韦，这三类药物由于都含有多个手性中心，合成其光学异构体的步骤繁琐，成本高，使得这几类药物价格昂贵。
1999年Wayne J.BrouiLLette等在专利WO99/14191发现了苯甲酸类化合物BANA-206为一个活性较好的(对神经氨酸酶N9的IC50＝48nM)苯甲酸类神经氨酸酶抑制剂。2006年Sun等在Bioorg Med Chem报道了多取代酰基硫脲衍生物具有高效抗病毒活性，对细胞培养的流感病毒株具有高选择的抗病毒活性。近年来研究表明神经氨酸酶活性中心附近的“150空穴”可以与抑制剂结合，进而增大抗病毒活性。
发明内容
本发明公开了一系列苯甲酸硫脲类抗流感病毒化合物。本发明的苯甲酸硫脲类抗流感病毒化合物不含手性中心，合成步骤简便，具有广阔的应用前景。药理试验结果显示，本发明化合物在体内外对流感病毒具有高效的抑制效果。因此，本发明的通式Ⅰ化合物，可用于流感的治疗。
本发明的化合物通式Ⅰ如下：
其中R1代表：COOH或COO(CH2)n CH3，n＝0-6；
R3、R4代表：氢或羟甲基，且R3、R4不同时为氢；
R2代表C1-C6的烷基、苯基、苄基、萘基、苯乙烯基或含有1-2个选自O或N的杂环基，或被下列任一取代基取代的上述基团：C1-C6的烷基、羟基、硝基、甲氧基、乙氧基、卤素或氨基。
R1优选代表COOH、COOCH3或COOCH2CH3。
R2优选代表
最优选的化合物结构式为：
本发明的部分优选的化合物如下：
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-(3-苯甲酰硫脲基)苯甲酸乙酯(I-1)
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-[3-(3-甲基苯甲酰基)硫脲基]苯甲酸乙酯(I-2)
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-[3-(2-硝基苯甲酰基)硫脲基]苯甲酸乙酯(I-3)
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-(3-呋喃甲酰硫脲基)苯甲酸乙酯(I-4)
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-(3-烟酰基硫脲基)苯甲酸乙酯(I-5)
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-[3-(2-甲基-6-硝基苯甲酰基)硫脲基]苯甲酸乙酯(I-6)
本发明的化合物制备方法如下：
本发明中关键中间体(Ⅱ)3-氨基-4-[2,2-(二羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯的制备如下：
关键中间体(Ⅲ)3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯的制备如下：
本发明开展了该化合物运用于抗流感病毒的研究，本发明通过流感病毒细胞感染模型证明了化合物对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)和A/Beijing/32/92(H3N2)在体外具有明显的抑制活性，其EC50值分别可以达到9.6μM和19.2μM，同时在体内通过流感病毒动物感染模型证明了口服给药本发明化合物对A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠有显著的生存保护作用，可明显减轻流感病毒感染症状，延长生存时间。
本发明化合物的药学上可接受的盐具有与化合物同样的药效。所述的药学上可接受的盐优选本发明化合物与下列算加成的盐：盐酸、氢溴酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、苯磺酸、甲苯磺酸、硝酸、磷酸、硼酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、苯甲酸、抗坏血酸或水杨酸等。
本发明还提供了一种治疗流感病毒的药物组合物，其中含有治疗有效量的通式I化合物和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以是普通片剂或胶囊、缓释片剂或胶囊、控释片剂或胶囊、口服液、注射剂等制剂学上常规的制剂形式。
一般地，本发明的抗流感病毒化合物用于治疗时，人用剂量范围为l mg～1000mg/天。也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。
下面是本发明部分化合物药效学试验和结果：
一、化合物对流感病毒A/FM/1/47(H1N1)感染MDCK细胞的抑制活性
MDCK细胞按5×104/mL浓度接种96孔培养板，每孔100μL，置37℃、5％CO2培养24h形成细胞单层。弃上清后，用PBS清洗细胞2次，加入100TCID50流感病毒A/FM1/1/47(H1N1)感染细胞，37℃孵育2h，除去病毒液，PBS清洗后加入含有不同浓度(128、64、32、16μM)本发明化合物和先导化合物BANA-206的维持培养液，实验同时设正常细胞对照组、病毒模型组及阳性对照奥司他韦8μM。MDCK细胞于37℃，5％CO2培养箱中培养48h，逐日观察CPE，弃上清后，加入100μL 10％甲醛固定1h，0.1％(w/v)结晶紫染色15min，酶标仪570nm测定吸光度。实验共重复3次。
实验结果表明：本发明化合物在128μM和64μM浓度下均表现出较强的抗流感病毒活性，而先导化合物BANA-206在128μM浓度下没有明确的抑制作用，其中化合物I-2病毒抑制活性最强，在16μM浓度下仍具有55.5％的抑制率(表1)，故优选化合物I-2进行下一步抗流感病毒活性研究。
表1化合物对流感病毒A/FM/1/47(H1N1)的抑制活性
二、细胞毒性及其对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)和A/Beijing/32/92(H3N2)感染MDCK细胞病变抑制作用
MDCK细胞按5×104/mL浓度接种96孔培养板，每孔100μL，置37℃、5％CO2培养箱中培养24h形成细胞单层。将本发明化合物I-2用维持培养液配制成不同浓度，分别加入单层MDCK细胞中，使得孔中药物终浓度512、384、256、128、64、32μM。实验同时设正常细胞对照组。细胞置37℃、5％CO2培养箱中培养，观察细胞融合、坏死、脱落、漂浮、死亡等细胞病变。48h后每孔加入10μL MTT溶液(5mg/mL)，继续培养4h，弃去孔内上清液，每孔加入150μL二甲基亚砜，低速振荡10min后，酶标仪570nm测定吸光度，计算CC50。
表2化合物I-2对MDCK细胞的细胞毒性
根据化合物I-2在MDCK细胞上毒性试验结果(表2)，实验设置正常对照组、病毒模型组、阳性对照奥司他韦8μM和化合物I-2组(设6个不同浓度)。MDCK细胞按5×104/mL浓度接种96孔培养板，每孔100μL，置37℃、5％CO2培养24h形成细胞单层。弃上清后，用PBS清洗细胞2次，加入100TCID50流感病毒A/FM1/1/47(H1N1)或A/Beijing/32/92(H3N2)感染细胞，37℃孵育2h，除去病毒液，PBS清洗后加入含有不同浓度化合物I-2的维持培养液(2、4、8、16、32、64μM)。MDCK细胞于37℃，5％CO2培养箱中培养48h，逐日观察CPE，弃上清后，加入100μL 10％甲醛固定1h，0.1％(w/v)结晶紫染色15min，酶标仪570nm测定吸光度。实验共重复3次。
实验结果表明流感病毒感染MDCK细胞后，导致MDCK细胞产生细胞病变并死亡，致使细胞数目明显减少。本发明化合物对流感病毒A/FM1/1/47(H1N1)和A/Beijing/32/92(H3N2)在MDCK细胞中的复制和增殖具有较强的抑制作用，且呈剂量依赖关系，见图1，表现出良好的CPE抑制作用，见图2，显著提高了细胞的存活率。发明化合物浓度为64μM时，对流感病毒A/FM1/1/47(H1N1)的抑制率达到82.9％，对流感病毒A/Beijing/32/92(H3N2)的抑制率为67.9％，其EC50值分别为9.6μM和19.2μM，其中对H1N1的抗病毒药效优于H3N2，且有效浓度远低于细胞毒性试验测得的该化合物CC50值(360μM)。
三、对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠的死亡保护率的影响
实验采用17-20g的ICR小鼠，随机分为4组，设为正常对照组、病毒模型组、阳性对照磷酸奥司他韦组100mg/kg/d、本发明化合物I-2组150mg/kg/d。适应性培养7天后开始实验。除正常对照组外，其他各组小鼠用乙醚轻度麻醉，鼻腔内接种相当于8LD50的含流感病毒的鸡胚尿囊液50μL/只，磷酸奥司他韦组和化合物I-2组于感染后2h灌胃给药，每日1次，每次0.2mL，连续给药5天。病毒模型组及正常对照组同法给予0.2mL的生理盐水。连续14天观察小鼠生存状况，记录死亡数和死亡时间。
实验结果表明口服给药本发明化合物对流感病毒感染导致的小鼠死亡有较好的保护作用，明显延长流感病毒感染小鼠的存活时间，见图3。给予化合物I-2150mg/kg/d对小鼠的死亡保护率为60％，与病毒模型组相比，该化合物在体内具有明显的抗流感病毒活性，可以显著降低小鼠的死亡率，提高小鼠的死亡保护率，延长存活时间。
四、对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠的体重保护作用
病毒感染小鼠后，由于引起小鼠病毒性肺炎，导致小鼠呼吸不畅、进食减少、体重减轻，所以体重保护是评价药物对病毒在体内增殖的抑制的一个重要的表观指标。实验结果见图4，图4表明，除正常组小鼠，其余小鼠于感染后第5天表现出体重的下降，并伴随耸毛、食差、消瘦、蜷缩怕冷、低反应性等疾病症状，之后小鼠体重持续降低，病毒模型组下降幅度最大。由于化合物I-2和磷酸奥司他韦抑制了病毒在小鼠肺部的增殖，相较于病毒组，给药组小鼠体重下降并不十分明显，在一定程度上表现出对小鼠体重的保护作用。同时，给药组疾病感染症状相对病毒组比较轻微，并且在10d后，体重持续增加，部分小鼠的感染症状减少并消失。表明口服给药I-2对小鼠体重有一定程度的保护作用，进一步证明了该化合物在体内的抗流感病毒活性。
附图说明
图1是化合物I-2对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)和A/Beijing/32/92(H3N2)感染MDCK细胞病变的抑制率
图2是化合物I-2对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)和A/Beijing/32/92(H3N2)的感染MDCK细胞的保护作用
图3是化合物I-2对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠的生存保护作用
图4是化合物I-2对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠的体重保护作用
具体实施方式
实施例1
关键中间体部分的合成
2-[4-(乙氧羰基)苯胺基]丙二酸二乙酯(C)的制备
500mL茄形瓶中加入30g(181.82mmol)对氨基苯甲酸乙酯(A)与20g(84.03mmol)溴代丙二酸二乙酯(B)，115℃反应24h后，用乙醚溶解过滤，滤液用10％盐酸洗涤3次，水洗3次，无水硫酸钠干燥。过滤静置析出晶体。抽滤并用少量乙醚洗涤，得23g无色晶体C，产率85.0％。m.p：68～72℃。
MS[M+H]+:324.1；
1H NMR(500MHz,CDCL3),δ:7.9(d,2H,J＝8.8Hz,ArH)；6.6(d,2H,J＝8.8Hz,ArH)；5.2(d,1H,J＝7.2Hz,CH)；4.8(d,1H,J＝7.2Hz,NH)；4.33～4.37(m,2H,CH2)；4.3(m,4H,2CH2)；1.35～1.38(t,3H,J＝7.2Hz,CH3)；1.11～1.14(t,6H,J＝7.2Hz,2CH3).
1-[4-(乙氧羰基)苯基]-5,5-二甲酸二乙酯-2-吡咯烷酮(D)的制备
250mL茄形瓶中加入5.60g(17.34mmol)化合物C，50mL无水乙醇，搅拌溶解。量取16mL无水乙醇，切取0.48g(20.81mmol)钠加入其中，制备乙醇钠，将乙醇钠滴加入反应液，反应液变黄。滴加3.69mL(34.68mmol)丙烯酸乙酯溶于10mL无水乙醇的溶液，20℃反应20h后滴加冰乙酸中和旋干。乙酸乙酯、水萃取，无水Na2SO4固体干燥，过滤，柱层析分离得5.58g油状产物，产率85.5％。
MS[M+H]+:378.10；
1H NMR(500MHz,CDCL3),δ:8.01～8.03(d,2H,J＝9Hz,ArH),7.38～7.40(d,2H,J＝9Hz,ArH),4.33～4.37(m,2H,CH2),4.14～4.19(m,4H,2CH2),2.70～2.73(t,2H,J＝7.5Hz,CH2),2.61～2.64(t,2H,J＝7.5Hz,CH2),1.35～1.38(t,3H,J＝7.2Hz,CH3),1.11～1.14(t,6H,J＝7.2Hz,2CH3).
1-[4-(乙氧羰基)-2-硝基苯基]-5,5-二甲酸二乙酯-2-吡咯烷酮(E)的制备
100mL三颈瓶中加入4.66g(12.36mmol)化合物D，23.3mL冰乙酸，34.95mL乙酸酐，搅拌溶解。冰盐浴至-10℃，量取5.83mL(142.76mmol)发烟硝酸，缓慢加入反应液中，反应24h，停止反应。将反应液倒入冰水中，加入Na2CO3固体并搅拌至没有气体生成。再用饱和Na2CO3溶液洗涤3次，再加入无水Na2SO4固体干燥，静置，过滤，旋干得黄色油状液体3.86g，产率74.1％。
MS[M+H]+:424.14.
4-[2,2-(二羟甲基)-5-吡咯烷酮基]-3-硝基苯甲酸乙酯(F)
100mL单颈瓶中加入2.4g(5.69mmol)化合物E。量取24mL无水乙醇、24mL无水THF倒入瓶中，搅拌，冰盐浴至-10℃，分批加入1g(26.40mmol)NaBH4后撤去冰盐浴，室温反应，TLC监测反应完成后，滴加10％HCL中和，旋干溶剂，用乙酸乙酯/水萃取3次，20mL水洗涤2次，加入Na2SO4固体干燥，静置，过滤，柱层析分离得油状物1.06g，产率55.2％。
MS[M+H]+:339.1.
3-氨基-4-[2,2-(二羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯(Ⅱ)的制备
250mL茄形瓶中加入0.6g(1.78mmol)化合物F。80mL乙醇溶解，油浴50℃。将2.16g(12.46mmol)低亚硫酸钠溶于13mL水中，滴加入上述溶液中，滴加完毕后油浴升温至75℃，TLC监测反应完成后，冷却至室温，过滤，滤液旋除溶剂，用乙酸乙酯/水萃取，水层反复萃取，收集有机层，无水硫酸钠干燥，静置，过滤，旋除溶剂得黄色油状物0.28g，产率51.1％。
MS[M+H]+:309.2.
1-[4-(乙氧羰基)苯基]-5-甲酸乙酯-2-吡咯烷酮(G)的制备
250mL茄形瓶中加入5.60g(17.34mmol)化合物C，50mL无水乙醇，搅拌溶解。量取16mL无水乙醇，切取0.48g(20.81mmol)钠加入其中，制备乙醇钠，将乙醇钠滴加入反应液，反应液变黄。滴加3.69mL(34.68mmol)丙烯酸乙酯溶于10mL无水乙醇的溶液，加热回流反应20h后滴加冰乙酸中和旋干。乙酸乙酯/水萃取，无水硫酸钠固体干燥，过滤，柱层析(PE：EA＝10：1)分离得3.99g油状产物G，产率75.5％。
MS[M+H]+:306.1；
1H NMR(500MHz,CDCL3)；δ:8.01～8.04(m,2H,ArH)；7.26～7.61(m,2H,ArH)；4.75～4.78(m,1H,CH)；4.33～4.37(m,2H,CH2)；4.16～4.21(m,2H,CH2)；2.73～2.77(m,1H,1/2CH2)；2.56～2.62(m,1H,1/2CH2)；2.46～2.54(m,1H,1/2CH2)；2.17～2.23(m,1H,1/2CH2)；1.36～1.39(t,3H,J＝7.2Hz,CH3)；1.19～1.21(t,3H,J＝7Hz,CH3).
1-[4-(乙氧羰基)-2-硝基苯基]-5-甲酸乙酯-2-吡咯烷酮(H)
250mL茄形瓶中加入4.66g(15.28mmol)化合物G，23.3mL冰乙酸，34.95mL乙酸酐，搅拌溶解。冰盐浴至-10℃，量取5.825mL(142.76mmol)发烟硝酸，缓慢加入反应液中，反应24h，停止反应。将反应液倒入冰水中，加入Na2CO3固体并搅拌至没有气体生成。再用饱和Na2CO3溶液洗涤3次，再加入无水Na2SO4固体干燥，静置，过滤，旋干得黄色油状液体2.4g，产率45.0％。
MS[M+H]+:351.1；
1H NMR(500MHz,CDCL3)；δ:8.64～8.65(s,1H,ArH)；8.26～8.28(d,1H,J＝10.5Hz,ArH)；7.55～7.60(d,1H,J＝10Hz,ArH)；4.67～4.69(m,1H,CH)；4.39～4.44(m,2H,CH2)；4.16～4.22(m,2H,CH2)；2.60～2.79(m,2H,CH2)；2.50～2.57(m,1H,1/2CH2)；2.30～2.35(m,1H,1/2CH2)；1.36～1.41(t,3H,J＝7.2Hz,CH3)；1.18～1.23(t,3H,J＝7Hz,CH3).
4-[2-(羟甲基)-5-吡咯烷酮基]-3-硝基苯甲酸乙酯(I)
100mL单颈瓶中加入2.4g(6.86mmol)化合物H。量取24mL无水乙醇、24mL无水THF倒入瓶中，搅拌，冰盐浴至-10℃，分批加入0.5g(13.20mmol)NaBH4后撤去冰盐浴，室温反应，TLC监测反应完成后，滴加10％HCL中和，旋干溶剂，用乙酸乙酯/水萃取3次，20mL水洗涤2次，加入Na2SO4固体干燥，静置，过滤，制沙，柱层析(PE︰EA＝10︰1)分离得油状物1.06g，产率50.2％。
MS[M+H]+:309.1；
1H NMR(500MHz，CDCL3)，δ:7.57～7.59(d,2H,J＝7Hz,ArH)；7.12～7.13(d,H,J＝8.5Hz,ArH)；4.32～4.36(m,2H,CH2)；4.08～4.12(m,H,CH)；4.16～4.21(m,2H,CH2)；3.78(s,1H,OH)；3.34～3.47(m,2H,CH2)；2.68～2.75(m,1H,1/2CH2)；2.55～2.62(m,1H,1/2CH2)；2.30～2.38(m,1H,1/2CH2)；2.23～2.27(m,1H,1/2CH2)；1.35～1.37(t,3H,J＝7Hz,CH3).
3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯(Ⅲ)
250mL茄形瓶中加入2.01g(6.52mmol)化合物F。80mL乙醇溶解，油浴50℃。将7.94g(45.64mmol)低亚硫酸钠溶于28mL水中，滴加入上述溶液中，滴加完毕后油浴升温至75℃，TLC监测反应完成后，冷却至室温，过滤，滤液旋除溶剂，用乙酸乙酯/水萃取，水层反复萃取，收集有机层，无水硫酸钠干燥，静置，过滤，旋除溶剂得黄色泡沫状物0.7g,产率38.9％。
实施例2
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-(3-苯甲酰硫脲基)苯甲酸乙酯(I-1)的制备
将硫氰酸铵0.069g(0.91mmol)和无水丙酮2mL加入25mL三颈瓶中，5min内滴入苯甲酰氯0.083mL(0.72mmol)，回流20min，再缓慢滴加3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯(Ⅲ)0.17g(0.611mmol)溶于2mL丙酮。继续回流12h，TLC监测。反应结束后加压蒸去溶酶，残留物用柱层析(CH2CL︰CH3OH＝50︰1)分离得到白色固0.19g，产率73.9％。mp：167～174℃。
MS[M+H]+:442.2；
1H NMR(500MHz,CDCL3)；δ:12.08(s,1H,NH)；9.18(s,1H,NH)；8.37(s,1H,ArH)；8.07～8.09(d,1H,J＝8.5Hz,ArH)；7.92～7.94(d,2H,J＝7.5Hz,ArH)；7.63～7.66(m,1H,ArH)；7.52～7.55(m,2H,ArH)；7.32～7.34(m,1H,ArH)；4.38～4.43(m,2H,CH2)；4.33～4.38(m,1H,CH)；3.74～3.77(d,1H,J＝7Hz,CH)；3.47～3.50(d,1H,J＝2.5Hz,CH)；2.66～2.69(m,1H,1/2CH2)；2.59～2.63(m,1H,1/2CH2)；2.24～2.31(m,2H,CH2)；1.37～1.41(t,3H,J＝7.2Hz,CH3)；
IR(cm-1):3477,1708,1681,1591,1556,1531,1402,1329,1259,1151,1093,698.
实施例3
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-[3-(3-甲基苯甲酰基)硫脲基]苯甲酸乙酯(I-2)的制备
将硫氰酸铵0.069g(0.91mmol)和无水丙酮2mL加入25mL三颈瓶中，5min内滴入间甲基苯甲酰氯0.083mL(0.72mmol)，回流20min，再缓慢滴加3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯(Ⅲ)0.16g(0.576mmol)溶于2mL丙酮中，继续反应12h，TLC监测，反应结束后加压蒸去溶酶，残留物用柱层析(CH2CL︰CH3OH＝50︰1)分离得到白色固体0.16g，收率61.1％。
mp：150～154℃。
MS[M+H]+:456.1；
1H NMR(500MHz,CDCL3)；δ:12.10(s,1H,NH)；9.16(s,1H,NH)；8.37(s,1H,ArH)；8.07～8.09(d,1H,J＝8.5Hz,ArH)；7.70～7.75(m,2H,ArH)；7.40～7.46(m,2H,ArH)；7.32～7.34(m,1H,ArH)；4.38～4.43(m,2H,CH2)；4.33～4.38(m,1H,CH)；3.74～3.77(d,1H,J＝7Hz,CH)；3.47～3.50(d,1H,J＝2.5Hz,CH)；2.66～2.71(m,1H,1/2CH2)；2.56～2.63(m,1H,1/2CH2)；2.44(s,3H,CH3)；2.24～2.31(m,2H,CH2)；1.58(s,1H,OH)；1.38～1.41(t,3H,J＝7.2Hz,CH3)；
IR(cm-1):3466,1705,1681,1614,1556,1537,1384,1296,1153,1084,727,615.
实施例4
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-[3-(2-硝基苯甲酰基)硫脲基]苯甲酸乙酯(I-3)的制备
将硫氰酸铵0.069g(0.91mmol)和无水丙酮2mL加入25mL三颈瓶中，5min内滴入2-硝基苯甲酰氯0.083mL(0.72mmol)，回流20min，再缓慢滴加3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯(Ⅲ)0.17g(0.612mmol)溶于2mL丙酮中，继续反应12h，TLC监测，反应结束后加压蒸去溶酶，残留物用柱层析(CH2CL︰CH3OH＝50︰1)分离得到白色固体0.17g，收率55.6％。
mp：160～164℃；
MS[M+H]+:487.1；
1H NMR(500MHz,CDCL3)；δ:11.75(s,1H,NH)；9.21(s,1H,NH)；8.40(s,1H,ArH)；8.20～8.21(d,1H,J＝8Hz,ArH)；8.07～8.09(m,H,ArH)；7.77～7.80(m,2H,ArH)；7.69～7.72(m,1H,ArH)；7.62～7.64(d,1H,J＝7Hz,ArH)；7.34～7.36(d,1H,J＝8.5Hz,ArH)；4.38～4.43(m,2H,CH2)；4.33～4.38(m,1H,CH)；3.69～3.73(d,1H,J＝7Hz,1/2CH2)；3.47～3.54(d,1H,J＝2.5Hz,1/2CH2)；2.76～2.83(m,1H,1/2CH2)；2.55～2.61(m,1H,1/2CH2)；2.417(s,1H,OH)；2.23～2.35(m,2H,CH2)；1.39～1.42(t,3H,J＝7Hz,CH3)；
IR(cm-1):3414,1635,1616,1552,1535,1383,1255,1159,1114,1084,993,621,468.
实施例5
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-(3-呋喃甲酰硫脲基)苯甲酸乙酯(I-4)的制备
将硫氰酸铵0.069g(0.91mmol)和无水丙酮2mL加入25mL三颈瓶中，5min内滴入呋喃甲酰氯0.083mL(0.72mmol)，回流20min，再缓慢滴加3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯(Ⅲ)0.17g(0.612mmol)溶于2mL丙酮中，继续反应12h，TLC监测，反应结束后加压蒸去溶酶，残留物用柱层析(CH2CL︰CH3OH＝50︰1)分离得到白色固体0.16g，收率60.7％。
mp：158～160℃。
MS[M+H]+:432.1；
1H NMR(500MHz,CDCL3)；δ:11.85(s,1H,NH)；9.29(s,1H,NH)；8.32(s,1H,ArH)；8.06～8.08(dd,1H,J＝2Hz,J＝2Hz,ArH)；7.60～7.61(m,1H,ArH)；7.43～7.44(m,1H,ArH)；7.31～7.33(d,1H,J＝8.5Hz,ArH)；6.62～6.64(m,1H,ArH)；4.38～4.43(m,2H,CH2)；4.33～4.38(m,1H,CH)；3.73～3.76(dd,1H,J＝2.5Hz,J＝2.5Hz,1/2CH2)；3.46～3.49(dd,1H,J＝2.5Hz,J＝3Hz,1/2CH2)；2.65～2.72(m,1H,1/2CH2)；2.54～2.61(m,1H,1/2CH2)；2.23～2.30(m,2H,CH2)；1.58(s,1H,OH)；1.38～1.41(t,3H,J＝7.25Hz,CH3)；
IR(cm-1):3412,1714,1672,1585,1537,1649,1384,1282,1219,1153,1018,742,586.
实施例6
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-(3-烟酰基硫脲基)苯甲酸乙酯(I-5)的制备
将硫氰酸铵0.069g(0.91mmol)和无水丙酮2mL加入25mL三颈瓶中，5min内滴入烟酰氯0.083mL(0.72mmol)，回流20min，再缓慢滴加3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯(Ⅲ)0.17g(0.612mmol)溶于2mL丙酮中，继续反应12h，TLC监测，反应结束后加压蒸去溶酶，残留物用柱层析(CH2CL︰CH3OH＝50︰1)分离得到白色固体0.18g，收率66.5％。
mp：166～168℃。
MS[M+H]+:443.1；
1H NMR(500MHz,CDCL3)；δ:11.96(s,1H,NH)；9.32(s,1H,NH)；9.32(s,1H,ArH)；9.16(s,1H,ArH)；8.85～8.86(m,1H,ArH)；8.36(s,1H,ArH)；8.25～8.26(dd,1H,J＝2Hz,J＝2Hz,ArH)；8.07～8.09(dd,1H,J＝1.5Hz,J＝2Hz,ArH)；7.48～7.50(m,1H,ArH)；7.33～7.34(d,1H,J＝8.5Hz,ArH)；4.38～4.43(m,2H,CH2)；4.33～4.38(m,1H,CH)；3.74～3.77(dd,1H,J＝2.5Hz,J＝2.5Hz,1/2CH2)；3.48～3.51(dd,1H,J＝3Hz,J＝3Hz,1/2CH2)；2.57～2.73(m,2H,CH2)；2.24～2.32(m,2H,CH2)；1.70(s,1H,OH)；1.38～1.41(t,3H,J＝7.25Hz,CH3)；IR(cm-1):3414,1714,1668,1539,1350,1215,1085,765,702,619.
实施例7
4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]-3-[3-(2-甲基-6-硝基苯甲酰基)硫脲基]苯甲酸乙酯(I-6)的制备
将硫氰酸铵0.069g(0.91mmol)和无水丙酮2mL加入25mL三颈瓶中，5min内滴入2-甲基6-硝基苯甲酰氯0.083mL(0.72mmol)，回流20min，再缓慢滴加3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯(Ⅲ)0.17g(0.612mmol)溶于2mL丙酮中，继续反应12h，TLC监测，反应结束后加压蒸去溶酶，残留物用柱层析(CH2CL︰CH3OH＝50︰1)分离得到白色固体0.22g，收率71.9％。
mp：160～163℃。
MS[M+H]+:501.1；
1H NMR(500MHz,CDCL3)；δ:11.84(s,1H,NH)；9.11(s,1H,NH)；8.41(m,2H,ArH)；8.26～8.28(dd,1H,J＝2Hz,J＝2Hz,ArH)；8.07～8.09(dd,1H,J＝2Hz,J＝2Hz,ArH)；7.46～7.50(d,1H,J＝9.5Hz,ArH)；7.32～7.34(m,1H,ArH)；4.38～4.43(m,2H,CH2)；4.33～4.38(m,1H,CH)；3.73～3.76(dd,1H,J＝2.5Hz,J＝2.5Hz,1/2CH2)；3.49～3.52(dd,1H,J＝2.5Hz,J＝3Hz,1/2CH2)；2.58～2.73(m,2H,CH2)；2.65(s,3H,CH3)；2.26～2.34(m,2H,CH2)；1.68(s,1H,OH)；1.39～1.42(t,3H,J＝7Hz,CH3)；
IR(cm-1):3379,1724,1658,1612,1581,1523,1408,1356,1244,1151,1045,765,731.

Claims (7)

1.通式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中R1代表：COOH或COO(CH2)n CH3，n＝0-6；
R3、R4代表：氢或羟甲基，且R3、R4不同时为氢；
R2代表C1-C6的烷基、苯基、苄基、萘基、苯乙烯基或含有1-2个选自O或N的杂环基，或被下列任一取代基取代的上述基团：C1-C6的烷基、羟基、硝基、甲氧基、乙氧基、卤素或氨基。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1代表COOH、COOCH3或COOCH2CH3。
3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2代表
4.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，结构式为：
5.权利要求1的化合物的制备方法，包括：
6.一种药物组合物，其中含有权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
7.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗流感病毒感染性疾病的药物的用途。
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