CN104382928B - 罗勒多糖用作抗肿瘤化疗药增效剂在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
罗勒多糖用作抗肿瘤化疗药增效剂在制备抗肿瘤药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种纯中药制剂罗勒多糖的新用途，即罗勒多糖用作抗肿瘤化疗药增效剂在制备抗肿瘤药物中的应用，所述化疗药为顺铂、盐酸吡柔比星或氟尿嘧啶。本发明试验研究表明，罗勒多糖可以增加多种化疗药对于多个不同组织来源的肿瘤细胞具有抑制肿瘤增殖和活性的作用，包括肺癌、喉癌、胃癌等，且罗勒多糖体外细胞实验中工作浓度未见毒性，罗勒多糖对化疗药的增效作用呈剂量依赖性，具有临床应用前景。
Description
技术领域
本发明具体涉及罗勒多糖在制备抗肿瘤化疗药增效剂中的新用途，即罗勒多糖用作抗肿瘤化疗药增效剂在制备抗肿瘤药物中的应用，属于中药对肿瘤化疗药增效的技术领域。
背景技术
肿瘤是严重危害人类健康和生命的疾病。化疗是利用化学药物杀灭癌细胞的一种全身性治疗手段，广泛应用于肿瘤患者的临床治疗。但在杀灭癌细胞的同时也会不可避免地损伤人体正常细胞，从而出现多种不良反应，影响肿瘤患者的生存时间和生活质量。增强化疗药物的疗效，提高患者的生活质量，延长肿瘤患者的生存时间一直是抗肿瘤药物研究领域的热点。尽管有研究报道表明部分中药或中药提取物具有抗肿瘤作用，但目前中药提取物作为化疗药增效剂类的药物应用比较少见。罗勒多糖应用于抗肿瘤转移方面的作用已有文献报道，可用于多种肿瘤转移，然而，尚未有报道表明罗勒多糖具有增强多种化疗药治疗肿瘤疗效的作用。
发明内容
本发明提供了一种纯中药制剂罗勒多糖的新用途，即罗勒多糖用作抗肿瘤化疗药增效剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明试验研究表明，罗勒多糖可以增加多种化疗药对于多个不同组织来源的肿瘤细胞具有抑制肿瘤增殖和活性的作用，包括肺癌、喉癌、胃癌等。
罗勒多糖用作抗肿瘤化疗药增效剂在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述化疗药为顺铂、盐酸吡柔比星或氟尿嘧啶。
所述罗勒多糖与顺铂有效活性成分的重量比为50-100：1；
所述罗勒多糖与盐酸吡柔比星有效活性成分的重量比为2000-4000：1；
所述罗勒多糖与氟尿嘧啶有效活性成分的重量比为20-40：1。
本发明所使用的罗勒多糖是从植物罗勒(Ocimum basilicum L.)单味药中采用以下方法提取分离得到的：
将罗勒药材用粉碎机粉碎，将粉碎的罗勒粉用85％乙醇脱脂两次后真空脱水干燥，得到脱脂罗勒粉。在脱脂罗勒粉中加入适量的水煎煮两遍后，过滤收集煎煮液，将两次收集的煎煮液合并后，放入浓缩罐中进行浓缩，使其相对密度达到1.08～1.10，然后将浓缩液冷却至4℃，加入5倍液体量的95％乙醇静置沉淀48小时，收集沉淀物得到罗勒多糖粗品，再将罗勒多糖粗品加适量水溶解，过滤后浓缩，使其相对密度达到1.08～1.10，然后冷却至4℃，在浓缩液中加入5倍量95％乙醇静置沉淀48小时，收集沉淀物，真空干燥脱水即得到罗勒多糖成品。
本发明所使用的罗勒多糖可以是常规药剂学上的任一种剂型。
本发明的有益效果是：本发明首次发现罗勒多糖与顺铂、盐酸吡柔比星或氟尿嘧啶同时使用可以增加化疗药治疗肿瘤的效果。研究发现，罗勒多糖与化疗药联用对于多个不同组织来源的肿瘤细胞具有抑制肿瘤增殖和活性的作用，包括肺癌、喉癌、胃癌等，且罗勒多糖体外细胞实验中工作浓度未见毒性，罗勒多糖对化疗药的增效作用呈剂量依赖性，具有临床应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
实施例1
罗勒多糖对三种肿瘤细胞的作用
实验材料：罗勒多糖为采用本发明提供的提取分离方法得到的罗勒多糖成品；常规培养于含10％新生牛血清(NBS)的RPMI1640培养基中的人肺癌细胞株A549、人喉癌细胞株Hep-2和人胃癌细胞株SGC-7901。
实验方法：将罗勒多糖成品溶于适量去离子水中配制成10mg/ml浓度的溶液，灭菌后分装冻存于-20℃冰箱备用。人肺癌细胞株A549、人喉癌细胞株Hep-2和人胃癌细胞株SGC-7901常规培养于含10％新生牛血清(NBS)的RPMI1640培养基中，于37℃、5％CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养。用0.25％胰蛋白酶消化传代。取培养的对数生长期细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，收集细胞，细胞计数，用含10％NBS的RMPI 1640培养液调整细胞密度至4×104/ml，将细胞悬液加入96孔板内，每孔内加100μl。同时在3个孔中只加10％NBS的RMPI 1640培养液作为空白孔，用于调零。将铺有细胞的96孔板置于37℃、5％CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养过夜，待细胞贴壁后，加入待检药物罗勒多糖，并设阴性对照孔，继续培养48小时，然后在每孔中加入5mg/ml的MTT 10μl继续培养4小时后，吸弃培养液，每孔加150μl DMSO，振荡10分钟，至结晶完全溶解，用酶标仪检测A490光吸收值。按下列公式计算肿瘤细胞生长抑制率：肿瘤细胞生长抑制率＝(1-药物组OD值/对照组OD值)×100％。实验结果见表1.1。
表1.1单独应用罗勒多糖对几种肿瘤细胞株的抑瘤作用
上述实验结果表明，单独使用罗勒多糖时，其对人肺癌细胞株A549、人喉癌细胞株Hep-2和人胃癌细胞株SGC-7901均无明显的抑制肿瘤活性的作用，且随着罗勒多糖剂量的增加抑瘤效果也无明显变化。这说明罗勒多糖本身并不能抑制肿瘤细胞的活性，不能作为治疗肿瘤的化疗药物。
实施例2
罗勒多糖对顺铂增效作用的体外药效学研究
实验材料：罗勒多糖为采用本发明提供的提取分离方法得到的罗勒多糖成品；注射用顺铂(冻干型)购自齐鲁制药有限公司，规格：20mg；常规培养于含10％新生牛血清(NBS)的RPMI1640培养基中的人肺癌细胞株A549、人喉癌细胞株Hep-2和人胃癌细胞株SGC-7901。
实验方法：将罗勒多糖成品溶于适量去离子水中配制成10mg/ml浓度的溶液，灭菌后分装冻存于-20℃冰箱备用。注射用顺铂(冻干型)按药品说明书配置。人肺癌细胞株A549、人喉癌细胞株Hep-2和人胃癌细胞株SGC-7901常规培养于含10％新生牛血清(NBS)的RPMI1640培养基中，于37℃、5％CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养。用0.25％胰蛋白酶消化传代。取培养的对数生长期细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，收集细胞，细胞计数，用含10％NBS的RMPI 1640培养液调整细胞密度至4×104/ml，将细胞悬液加入96孔板内，每孔内加100μl。同时在3个孔中只加10％NBS的RMPI 1640培养液作为空白孔，用于调零。将铺有细胞的96孔板置于37℃、5％CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养过夜，待细胞贴壁后，加入待检药物(顺铂和罗勒多糖或顺铂)，并设阴性对照孔，继续培养48小时，然后在每孔中加入5mg/ml的MTT 10μl继续培养4小时后，吸弃培养液，每孔加150μl DMSO，振荡10分钟，至结晶完全溶解，用酶标仪检测A490光吸收值。按下列公式计算肿瘤细胞生长抑制率：肿瘤细胞生长抑制率＝(1-药物组OD值/对照组OD值)×100％。实验结果见表1.2。
表1.2罗勒多糖对顺铂体外抑瘤的增效作用
注：*与顺铂2.0μg/ml组比较，p＜0.01；△与顺铂2.0μg/ml组比较，p＜0.05。
上述实验结果表明，单独使用化疗药顺铂时，顺铂对三种癌细胞株有一定的抑制肿瘤生长的作用。而将顺铂和罗勒多糖同时使用时，其抑瘤效果明显增强且大于单独使用顺铂的抑瘤效果(p＜0.05或p＜0.01)。随着罗勒多糖用量增加，增效作用增强，呈现剂量依赖性。这说明罗勒多糖对顺铂起到一种增效剂的作用，明显抑制肿瘤活性，增加了顺铂的抑瘤效果。
实施例3
罗勒多糖对盐酸吡柔比星增效作用的体外药效学研究
实验材料：除用注射用盐酸吡柔比星代替注射用顺铂(冻干型)外，其他材料同实施例2，所用注射用盐酸吡柔比星购自深圳万乐药业有限公司，规格为10mg。
实验内容：除所加入的待检药物为盐酸吡柔比星和罗勒多糖或盐酸吡柔比星外，其他同实施例2。实验结果见表1.3。
表1.3罗勒多糖对盐酸吡柔比星体外抑瘤的增效作用
注：*与盐酸吡柔比星0.05μg/ml组比较，p＜0.01；△与盐酸吡柔比星0.05μg/ml组比较，p＜0.05。
上述实验结果表明，单独使用化疗药盐酸吡柔比星时，盐酸吡柔比星对三种癌细胞株有一定的抑制肿瘤生长的作用。而将盐酸吡柔比星和罗勒多糖同时使用时，其抑瘤效果明显增强且大于单独使用盐酸吡柔比星的抑瘤效果(p＜0.05或p＜0.01)。随着罗勒多糖用量增加，增效作用增强，呈现剂量依赖性。这说明罗勒多糖对盐酸吡柔比星起到一种增效剂的作用，明显抑制肿瘤活性，增加了盐酸吡柔比星的抑瘤效果。
实施例4
罗勒多糖对氟尿嘧啶增效作用的体外药效学研究
实验材料：除用氟尿嘧啶注射液代替注射用顺铂(冻干型)外，其他材料同实施例2，所用氟尿嘧啶注射液购自上海旭东海普药业有限公司，规格为250mg/10ml。
实验内容：除所加入的待检药物为氟尿嘧啶和罗勒多糖或氟尿嘧啶外，其他同实施例1。实验结果见表1.4。
表1.4罗勒多糖对氟尿嘧啶体外抑瘤的增效作用
注：*与氟尿嘧啶5μg/ml组比较，p＜0.01；△与氟尿嘧啶5μg/ml与组比较，p＜0.05。
上述实验结果表明，单独使用化疗药氟尿嘧啶时，氟尿嘧啶对三种癌细胞株有一定的抑制肿瘤生长的作用。而将氟尿嘧啶和罗勒多糖同时使用时，其抑瘤效果明显增强且大于单独使用化疗药的抑瘤效果(p＜0.05或p＜0.01)。随着罗勒多糖用量增加，增效作用增强，呈现剂量依赖性。这说明罗勒多糖对氟尿嘧啶起到一种增效剂的作用，明显抑制肿瘤活性，增加了氟尿嘧啶的抑瘤效果。
此外，罗勒多糖单独使用时，在体外细胞实验中工作浓度未见毒性。因而本发明发现了罗勒多糖的新用途，即作为化疗药的增效剂，提高了用于治疗人肺癌、喉癌和胃癌的化疗药的使用效果，具有临床应用前景。
Claims (1)
1.罗勒多糖用作抗肿瘤化疗药增效剂在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述化疗药为顺铂、盐酸吡柔比星或氟尿嘧啶；
所述罗勒多糖与顺铂有效活性成分的重量比为50-100：1；
所述罗勒多糖与盐酸吡柔比星有效活性成分的重量比为2000-4000：1；
所述罗勒多糖与氟尿嘧啶有效活性成分的重量比为20-40：1；
所述罗勒多糖是从植物罗勒单味药中采用以下方法提取分离得到的：
将罗勒药材用粉碎机粉碎，将粉碎的罗勒粉用85%乙醇脱脂两次后真空脱水干燥，得到脱脂罗勒粉，在脱脂罗勒粉中加入适量的水煎煮两遍后，过滤收集煎煮液，将两次收集的煎煮液合并后，放入浓缩罐中进行浓缩，使其相对密度达到1.08～1.10，然后将浓缩液冷却至4℃，加入5倍液体量的95%乙醇静置沉淀48小时，收集沉淀物得到罗勒多糖粗品，再将罗勒多糖粗品加适量水溶解，过滤后浓缩，使其相对密度达到1.08～1.10，然后冷却至4℃，在浓缩液中加入5倍量95%乙醇静置沉淀48小时，收集沉淀物，真空干燥脱水即得到罗勒多糖；
所述肿瘤为人肺癌、人喉癌、人胃癌。
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