CN104353111B - 一种用于腹壁缺损的生物修复材料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医学工程技术领域，公开了一种用于腹壁缺损的生物修复材料及其制备方法，该方法包含以下步骤：(1)对已死亡动物的腹直肌肌肉组织做前期处理；(2)脱细胞处理制备骨骼肌脱细胞基质生物薄片；(3)将骨骼肌脱细胞基质生物薄片溶于胃蛋白酶中进行消化；(4)将消化得到的骨骼肌脱细胞基质微粒与聚已内酯混合后进行静电纺丝，得到聚已内酯/骨骼肌脱细胞基质共混静电纺丝纤维膜，即为本发明的生物修复材料。本发明将来源于腹壁组织的骨骼肌脱细胞基质与聚己内酯通过静电纺丝技术结合，制备材料均可降解且降解产物对人体无害，制得的生物修复材料能很好地模拟细胞外基质的组成成分和结构，具有良好的生物相容性和生物力学性能。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学工程技术领域，特别涉及一种用于腹壁缺损的生物修复材料及其制备方法。
背景技术
腹壁缺损是当今临床外科的一种常见疾病，腹壁疝、腹壁严重战创伤、腹壁肿瘤扩大切除等均可造成腹壁缺损的形成。其中，腹股沟疝和切口疝是最常见的腹壁缺损，欧美国家腹股沟疝的发病率为1-5‰，我国上海地区的腹股沟疝发病率为3.6‰，60岁以上老年人的发病率则高达11.8‰，我国每年要进行的成人腹股沟疝手术病例达到300-400万例。腹部切口疝的复发率约为腹部手术的2-20％，当缺损过大或者伴有感染时发生率甚至高达50％。经典的治疗方式采用直接缝合修补，病人术后疝复发率可达30-50％,甚至更高，Lichtenstein经过多年的实践于1986提出无张力疝修补术(tension-freehernioplasty)概念治疗腹壁疝，这种修补术是以人工生物材料作为补片，用以加强腹股沟管的后壁。此理念克服了传统手术对正常解剖的影响，并且缝合无张力，使腹壁疝术后复发率大大减少。无张力疝修补术的概念的引入从此使腹壁缺损的治疗进入材料修补的纪元。目前临床上使用的修复材料主要包括合成和生物补片两大类。合成材料分为可降解和不可降解两大类，其中合成不可降解材料能提供并维持足够的力学强度而被广泛使用，但作为植入体内的终身异物，可能引起肠瘘、肠梗阻、感染等并发症，且不能用于已感染或伴污染的创面，因而使用受到一定限制；合成可降解材料(PGA、PLGA、PCL等)亲水性能差，细胞粘附能力弱，因而不能刺激机体引起足够的纤维组织再生,单独使用不能满足腹壁缺损的治疗需求。生物补片来源于牛、猪、马、人等哺乳动物的富含胶原的组织，例如小肠粘膜下层、皮肤、膀胱和心包等。经过脱细胞技术处理后，生物补片保留有一定的细胞外基质三维立体结构。其中的胶原、糖蛋白、弹性纤维、粘多糖和生长因子等成分可促进宿主细胞在其三维结构上生长并分泌细胞外基质，形成自身组织并完成在缺损部位的修复重建。然而，脱细胞基质生物补片同样存在一些问题：1.生物补片机械强度差，植入人体内降解速度过快，而宿主新生自体组织没有充分的完成重塑，导致缺损处腹壁薄弱和疝复发。2.生物补片材料表面致密，宿主细胞较难迁移至材料内部，只是在材料表面附着，导致其修复效果大打折扣。因此研究开发一种机械性能佳，生物相容性好，早期可以促进自体组织长入，不容易引起免疫排斥反应的可降解腹壁缺损修复材料是临床医师的追求。
静电纺丝(electrostaticspinning)又称“电纺”，是一种使带电荷的聚合物溶液或熔体在静电场中喷射来制备聚合物超细纤维的加工方法，能够快速简单的制备直径在纳米级到微米级的纤维。由于纳米级纤维直径与天然细胞外基质(ECM)中蛋白质纤维的物理结构相似，同时纳米纤维结构具有很高的比表面积和孔隙率，所以其可模拟ECM的结构和功能，有利于细胞的粘附、增殖和组织再生。近年来，静电纺丝技术已应用到多种组织修复领域，如皮肤、神经、血管、骨和软骨等。
随着材料学的进展和电纺工艺的改进，许多天然材料(如明胶、壳聚糖等)和合成材料(如聚氨酯、聚己内酯等)都已成功用于电纺技术。其中，合成材料聚己内酯由于其良好的生物力学性质和可降解性能在某些领域展现出良好的应用前景。但其亲水性和生物相容性略差，细胞很难迁移至材料内部。我们希望将脱细胞技术、电纺技术和聚己内酯合成材料结合，为临床腹壁缺损修复提供新的思路。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于腹壁缺损的生物修复材料，该生物修复材料为一种聚已内酯和骨骼肌脱细胞基质共混静电纺丝纤维膜，其能模拟正常的细胞外基质的纳米结构，是一种具有良好生物相容性和生物力学性能的腹壁缺损修复材料。
本发明的另一目的在于提供上述用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明的实施方式提供了一种用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，包含以下步骤：
(1)前期处理：取已死亡动物的腹直肌肌肉组织，冲洗除去表面的血凝块，在无菌条件下剔除表面的脂肪组织和筋膜组织，再次冲洗；
(2)脱细胞处理：将上述前期处理后的腹直肌肌肉组织进行反复冻融，然后漂洗，浸入到质量浓度为1～10％的烷基糖苷溶液中，常温下振荡12～24小时；将烷基糖苷废液倒掉，冲洗；再加入含DNA酶和RNA酶的MgCl2溶液中，在37℃下振荡24～36小时，将组织取出，冲洗后进行冻干处理，制得骨骼肌脱细胞基质生物薄片；
(3)消化：将上述骨骼肌脱细胞基质生物薄片研磨成粉末后溶于胃蛋白酶溶液中，并使骨骼肌脱细胞基质的浓度为5～10mg/ml；然后在常温下振荡至肉眼看不到粉末，加入中和液使pH值调整为7.4，再进行冻干处理，得到骨骼肌脱细胞基质微粒；
(4)静电纺丝：将上述骨骼肌脱细胞基质微粒与聚已内酯混合，并溶于六氟异丙醇中配置成共混液，所述骨骼肌脱细胞基质微粒与聚已内酯的质量之和为共混液质量的10％，且所述聚己内酯的质量为所述骨骼肌脱细胞基质微粒质量的25％～75％；将共混液置于静电纺丝装置中进行纺丝，制得聚已内酯/骨骼肌脱细胞基质共混静电纺丝纤维膜，烘干后即为用于腹壁缺损的生物修复材料。
本发明的实施方式将来源于腹壁组织的骨骼肌脱细胞基质与聚己内酯通过静电纺丝技术组合在一起，制得一种新型的腹壁缺损修复材料，使其同时具有良好的生物相容性和生物力学性能。
本发明的实施方式所提供的生物修复材料的制备方法，相对于现有技术的区别之处首先在于对骨骼肌脱细胞基质的选择和制备过程。具体来说：首先，在修复材料的选择上，不同组织器官的细胞外基质的结构和成分具有一定的差异，同源性脱细胞基质作为修复材料修复相应组织效果较好，而腹壁成分主要由肌肉组织组成，所以采用骨骼肌脱细胞基质作为复合支架的生物性材料来源用于修复腹壁缺损，具有先天的优势。其次，在制备骨骼肌脱细胞基质的步骤中：一方面，在保证脱细胞效果的基础上，为了减少制备方法对支架内部结构和活性的影响，采用了烷基糖苷进行脱细胞处理。烷基糖苷是由可再生资源天然脂肪醇和葡萄糖合成的，是一种性能较全面的新型非离子表面活性剂，无毒，且易于生物降解，对人体无害，性能温和，对细胞外基质的超微结构和活性蛋白几乎没有损伤；同时烷基糖苷还具有高表面活性、良好的生态安全性和相溶性。另一方面，为了进一步加强烷基糖苷脱细胞效果，本发明的实施方式还结合了冻融方法和核酸酶溶液共同处理腹壁骨骼肌，整个脱细胞基质的制备步骤简单、有效、成本低，在彻底除去存在于组织表面和内部的细胞的基础上，更好地保留骨骼肌脱细胞基质的生物活性，为利用该脱细胞基质结合聚己内酯和静电纺丝技术进一步制备出优良的复合生物修复材料提供了基础。
此外，本发明的实施方式所提供的生物修复材料的制备方法，相对于现有技术的区别之处还在于将制备得到的骨骼肌脱细胞基质进一步与聚己内酯材料和静电纺丝技术的结合。聚己内酯材料具有良好的生物学性质和可降解性能，将其与骨骼肌脱细胞基质结合，获得一种很好的生物修复补片的基材；而静电纺丝技术所制备得到的复合纳米纤维结构又能进一步地弥补聚己内酯材料在其水性和生物相容性方面的不足，从而制备得到本发明的实施方式所提供的能模拟正常的细胞外基质的纳米结构、具有良好生物相容性和生物力学性能的腹壁缺损修复材料。而且，本发明的实施方式所涉及的静电纺丝技术，步骤简单有效，制备材料均为可降解材料且降解产物对人体无害，适用于大规模工业生产。
优选地，本发明的实施方式所提供的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，步骤(1)中取已死亡动物的腹直肌肌肉组织时，供体动物为牛或猪，取材时间为动物死亡后30分钟内。组织和器官的细胞外基质提供了细胞发挥功能和维持表型的微环境，这种微环境的结构和成分在不同组织器官具有一定的差异，因此同源性脱细胞基质材料修复相应组织的效果较好。肌肉脱细胞基质来源的成分对于促进成肌细胞增殖和分化具有重要的影响，因此本发明的实施方式采用死亡动物的腹直肌肌肉组织作为制备生物修复材料的来源，可使最终制备得到的材料更好地适应于对腹壁肌肉缺失的生物修复。
优选地，本发明的实施方式所提供的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，步骤(1)中的两次冲洗操作所采用的冲洗液为含有链霉素和青霉素的去离子水或PBS缓冲液；所述青霉素在所述冲洗液中的浓度为100μg/ml、所述链霉素在所述冲洗液中的浓度为100μg/ml。采用含有链霉素和青霉素双抗的去离子水或PBS缓冲液作为冲洗液，对动物的腹直肌肌肉组织材料进行冲洗，可达到抑制细菌和真菌生长的作用。
优选地，本发明的实施方式所提供的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，步骤(2)中所述的反复冻融的方法为：将所述腹直肌肌肉组织置于-80℃冰箱3～6小时，然后取出放在37℃水浴箱中30～60分钟。上述对腹直肌组织进行反复冻融的作用为：冻融方法可以有效地使组织和器官中的细胞裂解，单次冻融可以减少免疫排斥反应，反复冻融多用于脱细胞处理。冻融处理最大的优点是对组织的机械性能影响不大，因为其不会减少细胞外基质胶原纤维的含量。
优选地，本发明的实施方式所提供的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，步骤(2)中所述的含DNA酶和RNA酶的MgCl2溶液，由DNA酶和RNA酶溶于0.05mol/L的MgCl2溶液中配置而成，其中，DNA酶的浓度为100～200μg/ml，RNA酶的浓度为100～200μg/ml。在烷基糖苷处理后，采用含有核酸酶和脱氧核酸酶的MgCl2溶液继续对腹直肌进行处理，裂解核酸的序列，可以清除细胞内残留的核酸物质。
优选地，本发明的实施方式所提供的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，步骤(3)中所述的胃蛋白酶溶液由胃蛋白酶溶于0.01mol/L的HCl中配制而成，所述胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的浓度为1mg/ml。消化步骤的作用是：单纯的物理研磨方法后的骨骼肌脱细胞基质粉末很难溶于六氟异丙醇溶液，结合胃蛋白酶消化法可以更好地使其溶于六氟异丙醇溶液中。
优选地，本发明的实施方式所提供的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，步骤(3)中所述的中和液为0.01mol/L的NaOH溶液。使用中和液调整经胃蛋白酶消化后的骨骼肌脱细胞基质微粒的pH值，可消除胃蛋白酶对骨骼肌脱细胞基质微粒的进一步降解。
优选地，本发明的实施方式所提供的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，步骤(4)中所述聚已内酯的分子量为14000。
优选地，本发明的实施方式所提供的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，步骤(4)中进行静电纺丝时，纺丝温度为20～25℃，相对湿度为45～55％。
本发明的实施方式也提供根据上述方法制备得到的用于腹壁缺损的生物修复材料。该生物修复材料为骨骼肌脱细胞基质/聚己内酯复合纳米纤维支架能够更好的模拟细胞外基质的组成成分和结构，有利于诱导细胞粘附和增殖，为细胞生长和组织再生提供较好的生理微环境，根据复合纳米纤维支架中聚己内酯含量的不同，复合支架的力学性能可以有一定的调整，可同时适应其他不同组织的修复。
附图说明
图1是实施例2中对骨骼肌脱细胞基质(实施例1第(1)、(2)步骤制备得到)的脱细胞程度测定结果图：
其中，图1A为骨骼肌脱细胞基质HE染色结果图、图1B为骨骼肌脱细胞基质DAPI染色结果图；
图2是实施例2中对生物修复材料(实施例1制备得到)进行超微结构和力学性能测定的结果图：
其中，图2A为生物修复材料的扫描电镜超微结构示意图、图2B为将大鼠成纤维细胞种植在生物修复材料上3天后的扫描电镜超微结构示意图、图2C为生物修复材料的力学性能示意图；
图3是实施例2中大鼠成纤维细胞在生物修复材料(实施例1制备得到)上的增殖活性结果图；
图4是实施例3的体内试验验证生物修复材料(实施例1制备得到)在腹壁缺损中的应用的结果图：
其中，图4A为术后2周修复组织区域马森染色结果图、图4B为术后2周修复组织区域免疫组化CD31染色结果图、图4C为术后3个月修复组织区域马森染色结果图、图4D为术后3个月修复组织区域免疫组化CD31染色结果图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的各实施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施方式中，为了使读者更好地理解本申请而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本申请各权利要求所要求保护的技术方案。
实施例1制备试验例
(1)前期处理：供体猪取自当地屠宰场，25～30周龄，体重30～40kg，雌雄不限。麻醉药安乐死后，选择自剑突直到下腹的正中切口，游离皮下组织和浅筋膜暴露腹直肌组织，沿腹直肌表面剥离腹直肌前鞘，沿腹外斜肌腱膜完整取出腹直肌，使用0～8℃的去离子水或者pH值为7.4左右的缓冲盐溶液(PBS)反复冲洗以除去表面的血凝块，无菌条件下剔除表面脂肪组织，筋膜组织后，剪成2×2cm2大小片状，继续用去离子水或者pH值为7.4左右的缓冲盐溶液(PBS)进行冲洗。
(2)脱细胞处理：本部分将冻融法，烷基糖苷和核酸酶溶液相结合进行脱细胞处理，步骤如下，将上述腹直肌组织置于-80℃冰箱4h，然后取出放在37℃水浴箱中30min，如此反复冻融3次。无菌去离子水漂洗30min后，将其浸入到1％烷基糖苷溶液中，常温下置于摇床中以100rpm/min的速度振荡12h。将烷基糖苷废液倒掉，去离子水冲洗30min，PBS溶液冲洗2次，每次30min。然后加入150U/mlDnase和100μg/mlRnase的0.05MMgCl2溶液中，以100rpm/min的速度在37℃摇床中振荡24h。最后将组织取出，PBS冲洗2次，每次30min，去离子水冲洗2次，每次30min。将脱细胞后的腹直肌组织置于-50℃真空冷冻干燥机行冻干处理18h，无菌环境下保存于-80℃冰箱备用。
(3)消化：将冻干后的骨骼肌脱细胞基质生物薄片研磨成粉，溶于1mg/ml的胃蛋白酶中，并配成骨骼肌脱细胞基质终浓度为10mg/ml的混合液，然后常温下摇床振荡24～36小时，直至肉眼看不到骨骼肌脱细胞基质粉末，混合液呈云雾状后，把中和液加入到混合液中，将混合液的pH值调整为7.4左右，最后再冻干处理为微粒留待下一步使用。
(4)静电纺丝：将聚已内酯和骨骼肌脱细胞基质微粒混合溶于六氟异丙醇溶液中，配置成共混液，聚已内酯和骨骼肌脱细胞基质微粒的质量之和为共混液质量的10％，其中聚已内酯(购买自Sigma公司，产品编号为440752，分子量为14000)和骨骼肌脱细胞基质质量比为1：1，共混液置于静电纺丝装置的注射器中，将电压设定为7kV，推进速度为2.0ml/h，接收距离为6cm，纺丝温度为25℃，相对湿度为55％。进行静电纺丝，形成聚已内酯/骨骼肌脱细胞基质共混静电纺丝网，静纺时间为2小时，将静纺纳米膜从接收平台上小心剥离后，放置于50℃烘箱中烘干，得到聚已内酯/骨骼肌脱细胞基质共混静电纺丝纤维膜，即为本发明的用于腹壁缺损的生物修复材料。
实施例2体外试验
(1)脱细胞程度测定：
骨骼肌脱细胞基质材料经石蜡包埋切片行苏木素-伊红染色(HE染色)(附图1A所示)和4,6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色(DAPI染色)(附图1B所示)，均证实材料内部无明显细胞核残留，蛋白胶原纤维呈不规则状排列。
(2)纤维结构和力学性能测定：
对实施例1制备得到的骨骼肌脱细胞基质/聚己内酯共混静电纺丝纤维膜进行扫描电镜(SEM)检测，显示该材料的纤维结构呈条索状无序排列，纤维直径在几百纳米与几微米之间(附图2A所示)。
将大鼠成纤维细胞种植在实施例1制备得到的骨骼肌脱细胞基质/聚己内酯共混静电纺丝纤维膜上，3天后进行扫描电镜(SEM)检测，结果显示示支架生物相容性较好，大鼠成纤维细胞在支架上黏附并增殖(附图2B所示，*表示大鼠成纤维细胞)。
附图2C显示了实施例1制备得到的骨骼肌脱细胞基质/聚己内酯共混静电纺丝纤维膜的力学性能(经Instron拉伸测量机测得)。
(3)细胞增殖能力检测：
将大鼠成纤维细胞种植在实施例1制备得到的骨骼肌脱细胞基质/聚己内酯共混静电纺丝纤维膜上，1天、3天、5天和7天分别行CCK-8细胞增殖实验，结果显示培养皿对照组和复合支架实验组随着培养天数的延长，细胞数量均明显增殖，同一时间点下(除了第5天)，培养皿对照组细胞数量和实施例1制备得到的骨骼肌脱细胞基质/聚己内酯共混静电纺丝纤维膜实验组数量无统计学差异(附图3所示)。
实施例3体内试验验证复合纳米纤维膜在腹壁缺损中的应用
为检验实施例1所制备的聚已内酯/骨骼肌脱细胞基质纤维纳米膜的具体效果，我们将其用于修补大鼠全层腹壁缺损模型，详细步骤如下：将SD雌性大鼠(12只)给予10％水合氯醛腹腔注射麻醉(0.4ml/100g)，常规腹部备皮，消毒铺巾。取腹部正中纵行切口，长约5cm，切开皮肤皮下组织，沿切口向两侧钝性分离皮下组织，将腹直肌连同其下腹横肌、腹横筋膜和腹膜一并切除，制备大小约为2×2cm2的大鼠腹壁全层缺损模型，以实施例1所制备的纤维纳米膜支架修补，采用4-0丝线间断缝合，皮肤和皮下组织用3-0丝线间断缝合。术后大鼠分笼饲养。术后定期查看伤口情况，观察有无切口感染，皮肤切口裂开，腹壁疝复发等情况，分别于术后2周和12周取材处死动物，每个时间点分别为6只。取材时，切口状态，皮下血肿和积液情况应记录下来。
修复效果评估包括：(1)大体观察：所有大鼠术后活动及进食均正常。伤口一期愈合,有2只大鼠于术后1周左右时间出现血清肿,无菌注射器穿刺抽出后无后续并发症出现。所有大鼠直到处死前均没有任何临床征兆表明存在修复部位的感染、疝形成、瘘形成及其它严重不良反应发生。(2)组织学检测(新生胶原，血管)：术后2周时，马森染色(附图4A所示)示支架所在的区域的外围部分被炎性细胞浸润，免疫组化CD31染色(附图4B所示)示支架周围新生毛细血管较多，整个区域新生胶原含量较少，且排列紊乱，不规整。术后3月时，马森染色(附图4C所示)示脱细胞基质支架区域主要由成熟的成纤维细胞和其分泌的大量胶原构成，胶原有一定的极性排列，毛细血管数量稳定，分布较均匀(附图4D所示)。
本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。
Claims (10)
1.一种用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
(1)前期处理：取已死亡动物的腹直肌肌肉组织，冲洗除去表面的血凝块，在无菌条件下剔除表面的脂肪组织和筋膜组织，再次冲洗；
(2)脱细胞处理：将上述前期处理后的腹直肌肌肉组织进行反复冻融，然后漂洗，浸入到质量浓度为1～10％的烷基糖苷溶液中，常温下振荡12～24小时；将烷基糖苷废液倒掉，冲洗；再加入含DNA酶和RNA酶的MgCl2溶液中，在37℃下振荡24～36小时，将组织取出，冲洗后进行冻干处理，制得骨骼肌脱细胞基质生物薄片；
(3)消化：将上述骨骼肌脱细胞基质生物薄片研磨成粉末后溶于胃蛋白酶溶液中，并使骨骼肌脱细胞基质的浓度为5～10mg/ml；然后在常温下振荡至肉眼观察到溶液呈均匀云雾状时，加入中和液使pH值调整为7.4，再进行冻干处理，得到骨骼肌脱细胞基质微粒；
(4)静电纺丝：将上述骨骼肌脱细胞基质微粒与聚已内酯混合，并溶于六氟异丙醇中配置成共混液，所述骨骼肌脱细胞基质微粒与聚已内酯的质量之和为共混液质量的10％，且所述聚己内酯的质量为所述骨骼肌脱细胞基质微粒质量的25％～75％；将共混液置于静电纺丝装置中进行纺丝，制得聚已内酯/骨骼肌脱细胞基质共混静电纺丝纤维膜，烘干后即为用于腹壁缺损的生物修复材料。
2.根据权利要求1所述的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中取已死亡动物的腹直肌肌肉组织时，供体动物为牛或猪，取材时间为动物死亡后30分钟内。
3.根据权利要求1所述的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的两次冲洗操作所采用的冲洗液为含有链霉素和青霉素的去离子水或PBS缓冲液；所述青霉素在所述冲洗液中的浓度为100μg/ml、所述链霉素在所述冲洗液中的浓度为100μg/ml。
4.根据权利要求1所述的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的反复冻融的方法为：将所述腹直肌肌肉组织置于-80℃冰箱3～6小时，然后取出放在37℃水浴箱中30～60分钟；反复冻融的次数为3次。
5.根据权利要求1所述的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的含DNA酶和RNA酶的MgCl2溶液，由DNA酶和RNA酶溶于0.05mol/L的MgCl2溶液中配置而成；其中，DNA酶的浓度为100～200μg/ml，RNA酶的浓度为100～200μg/ml。
6.根据权利要求1所述的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的胃蛋白酶溶液由胃蛋白酶溶于0.01mol/L的HCl中配制而成，所述胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的浓度为1mg/ml。
7.根据权利要求1所述的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的中和液为0.01mol/L的NaOH溶液。
8.根据权利要求1所述的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述聚已内酯的分子量为14000。
9.根据权利要求1所述的用于腹壁缺损的生物修复材料的制备方法，其特征在于，步骤(4)中进行静电纺丝时，纺丝温度为20～25℃，相对湿度为45～55％。
10.一种用于腹壁缺损的生物修复材料，所述生物修复材料根据权利要求1至9中的任一项所述的方法制备得到。
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