CN104335901B - 柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，该方法包括以下步骤：⑴将所获得的柴达木枸杞不定苗进行单株分离后，转接到一级苗生长培养基中培养，10~14天后即得一级苗；⑵将一级苗剪切成段后转接到二级苗培养基中培养，10~14天后即得二级苗；⑶将生长至5~7cm的二级苗剪切成带有叶的茎段后转接到三级苗培养基培养，10~14天后即得三级苗；⑷将生长至5~7cm的三级苗切成段后接种到生根培养基中培养，10~14天后即得微扦插快繁苗。本发明在短期内可以获得大量脱毒、优质种苗，能够进行规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及植物生物技术领域，尤其涉及柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法。
背景技术
枸杞(LyciumbarbarumMill.)为茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium)多年生落叶灌木，果实称枸杞子，根皮称地骨皮，均可入药，嫩茎、叶可做蔬菜。柴达木盆地枸杞资源丰富，是枸杞的新兴产区，所产的柴达木枸杞是青海著名的道地地产药材的原植物之一，“柴杞”也是国内最优质的枸杞之一。
在生产上枸杞主要靠无性扦插繁育，占地面积大，繁殖效率低。长期的无性扦插繁殖使病毒在植株母体中积累，通过扦插会感染种苗，不利于优质种苗繁育。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够进行规模化生产的柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法。
为解决上述问题，本发明所述的柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，包括以下步骤：
⑴将所获得的柴达木枸杞不定苗进行单株分离后，按7~10株/瓶的接种量转接到一级苗生长培养基中，在温度为20~25℃且光照条件下进行培养，10~14天后即得一级苗；
⑵将所述一级苗剪切成带有1~3片叶的2~3cm茎段，按8~10段/瓶的接种量转接到二级苗培养基中，在温度为20~25℃且光照条件下进行培养，10~14天后即得二级苗；
⑶将生长至5~7cm的所述二级苗剪切成2~3cm、带有2~3片叶子的茎段，按8~10段/瓶的接种量转接到三级苗培养基中，在温度为20~25℃且光照条件下进行培养，10~14天后即得三级苗；
⑷将生长至5~7cm的所述三级苗切成2~3段，按10~15段/瓶的接种量接种到生根培养基中，在温度为20~25℃且光照条件下进行培养，10~14天后即得微扦插快繁苗。
所述步骤⑴中一级苗生长培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.005~2.0mg细胞分裂素、100~300mg水解酪蛋白、1~4mgVc、2~8mg柠檬酸钠、20.0~60.0g蔗糖、3~8g琼脂粉，且pH值为5.0~6.5的培养基。
所述步骤⑵中二级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.002~1.0mg细胞分裂素、100~300mg水解酪蛋白、1~4mgVc、2~8mg柠檬酸钠、20.0~60.0g蔗糖、3~8g琼脂粉，且pH值为5.0~6.5的培养基。
所述步骤⑶中三级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.001~0.5mg细胞分裂素、1~4mgVc、2~8mg柠檬酸钠、20.0~60.0g蔗糖、3~8g琼脂粉，且pH值为5.0~6.5的培养基。
所述步骤⑷中生根培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.001~1.0mg生长素、1~4mgVc、2~8mg柠檬酸钠、20.0~60.0g蔗糖、3~8g琼脂粉，且pH值为5.0~6.5的培养基；所述生长素为2,4-D、NAA、IAA中的一种。
所述步骤⑴、所述步骤⑵、所述步骤⑶中的光照条件均是指光照强度为3000~10000Lux，光照时间为12~16h/天。
所述步骤⑷中的光照条件是指光照强度为5000~10000Lux，光照时间为12~16h/天。
所述细胞分裂素为6-BA、KT、ZT中的一种。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明将离体条件下获得的柴达木枸杞优良品种的不定苗单株分离后，通过一级苗培养、二级苗培养、三级苗培养及诱根培养4阶段建立微扦插快繁体系，该体系下微扦插苗的生根率最高可以达到100%（参见图2）。
2、由于本发明中建立的4阶段微扦插技术，再生植株的增殖频率高，达到1：8~27/月（参见图1），单株理论年增殖率最低85亿株，因此在短期内可以获得大量脱毒、优质快繁苗，能够进行规模化生产。
3、由于本发明中仅通过将快繁苗剪段、微扦插实行增殖，因此，操作简单，易实施。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为本发明中枸杞再生植株生长至5~7cm时剪切为带有1~3片叶片的茎段，扦插于培养基照片。
图2为本发明中枸杞三级苗生长至5~7cm时剪切为带有1~3片叶片的茎段扦插于生根培养基，培养10~14天后基部生根照片。
具体实施方式
实施例1柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，包括以下步骤：
⑴将所获得的柴达木枸杞不定苗进行单株分离后，按7株/瓶的接种量转接到一级苗生长培养基中，在温度为20℃且在光照强度为3000Lux、光照时间为16h/天的光照条件下进行培养，10天后即得一级苗。
其中：一级苗生长培养基是指每升MS基本培养基中添加有2.0mg6-BA、100mg水解酪蛋白、1mgVc、2mg柠檬酸钠、20.0g蔗糖、8g琼脂粉，且pH值为5.0的培养基。
⑵将一级苗剪切成带有1~3片叶的2~3cm茎段，按8段/瓶的接种量转接到二级苗培养基中，在温度为20℃且在光照强度为3000Lux、光照时间为16h/天的光照条件下进行培养，10天后即得二级苗。
其中：二级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有1.0mg6-BA、100mg水解酪蛋白、1mgVc、2mg柠檬酸钠、20.0g蔗糖、8g琼脂粉，且pH值为5.0的培养基。
⑶将生长至5~7cm的二级苗剪切成2~3cm、带有2~3片叶子的茎段，按8段/瓶的接种量转接到三级苗培养基中，在温度为20℃且在光照强度为3000Lux、光照时间为16h/天的光照条件下进行培养，10天后即得三级苗。
其中：三级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.5mg6-BA、1mgVc、2mg柠檬酸钠、20.0g蔗糖、8g琼脂粉，且pH值为5.0的培养基。
⑷将生长至5~7cm的三级苗切成2~3段，按10段/瓶的接种量接种到生根培养基中，在温度为20℃且在光照强度为5000Lux、光照时间为16h/天的光照条件下进行培养，10天后即得微扦插快繁苗。
其中：生根培养基是指每升MS基本培养基中添加有1.0mg2,4-D、1mgVc、2mg柠檬酸钠、20.0g蔗糖、8g琼脂粉，且pH值为5.0的培养基。
实施例2柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，包括以下步骤：
⑴将所获得的柴达木枸杞不定苗进行单株分离后，按10株/瓶的接种量转接到一级苗生长培养基中，在温度为25℃且在光照强度为10000Lux、光照时间为12h/天的光照条件下进行培养，14天后即得一级苗。
其中：一级苗生长培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.005mgKT、300mg水解酪蛋白、4mgVc、8mg柠檬酸钠、40.0g蔗糖、4.5g琼脂粉，且pH值为6的培养基。
⑵将一级苗剪切成带有1~3片叶的2~3cm茎段，按10段/瓶的接种量转接到二级苗培养基中，在温度为25℃且在光照强度为10000Lux、光照时间为12h/天的光照条件下进行培养，14天后即得二级苗。
其中：二级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.002mgKT、300mg水解酪蛋白、4mgVc、8mg柠檬酸钠、40.0g蔗糖、4.5g琼脂粉，且pH值为6的培养基。
⑶将生长至5~7cm的二级苗剪切成2~3cm、带有2~3片叶子的茎段，按10段/瓶的接种量转接到三级苗培养基中，在温度为25℃且在光照强度为10000Lux、光照时间为12h/天的光照条件下进行培养，14天后即得三级苗。
其中：三级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.001mgKT、4mgVc、8mg柠檬酸钠、40.0g蔗糖、4.5g琼脂粉，且pH值为6的培养基。
⑷将生长至5~7cm的三级苗切成2~3段，按15段/瓶的接种量接种到生根培养基中，在温度为25℃且在光照强度为10000Lux、光照时间为12h/天的光照条件下进行培养，14天后即得微扦插快繁苗。
其中：生根培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.001mgNAA、4mgVc、8mg柠檬酸钠、40.0g蔗糖、4.5g琼脂粉，且pH值为6的培养基。
实施例3柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，包括以下步骤：
⑴将所获得的柴达木枸杞不定苗进行单株分离后，按8株/瓶的接种量转接到一级苗生长培养基中，在温度为23℃且在光照强度为6000Lux、光照时间为14h/天的光照条件下进行培养，12天后即得一级苗。
其中：一级苗生长培养基是指每升MS基本培养基中添加有1.0mgZT、200mg水解酪蛋白、2mgVc、5mg柠檬酸钠、60.0g蔗糖、3g琼脂粉，且pH值为6.5的培养基。
⑵将一级苗剪切成带有1~3片叶的2~3cm茎段，按9段/瓶的接种量转接到二级苗培养基中，在温度为23℃且在光照强度为6000Lux、光照时间为14h/天的光照条件下进行培养，12天后即得二级苗。
其中：二级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.5mgZT、200mg水解酪蛋白、2mgVc、5mg柠檬酸钠、60.0g蔗糖、3g琼脂粉，且pH值为6.5的培养基。
⑶将生长至5~7cm的二级苗剪切成2~3cm、带有2~3片叶子的茎段，按9段/瓶的接种量转接到三级苗培养基中，在温度为23℃且在光照强度为6000Lux、光照时间为14h/天的光照条件下进行培养，12天后即得三级苗。
其中：三级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.25mgZT、2mgVc、5mg柠檬酸钠、60.0g蔗糖、3g琼脂粉，且pH值为6.5的培养基。
⑷将生长至5~7cm的三级苗切成2~3段，按13段/瓶的接种量接种到生根培养基中，在温度为23℃且在光照强度为8000Lux、光照时间为14h/天的光照条件下进行培养，12天后即得微扦插快繁苗。
其中：生根培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.5mgIAA、2mgVc、5mg柠檬酸钠、60.0g蔗糖、3g琼脂粉，且pH值为6.5的培养基。
Claims (3)
1.柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，包括以下步骤：
⑴将所获得的柴达木枸杞不定苗进行单株分离后，按7~10株/瓶的接种量转接到一级苗生长培养基中，在温度为20~25℃且光照条件下进行培养，10~14天后即得一级苗；所述一级苗生长培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.005~2.0mg细胞分裂素、100~300mg水解酪蛋白、1~4mgVc、2~8mg柠檬酸钠、20.0~60.0g蔗糖、3~8g琼脂粉，且pH值为5.0~6.5的培养基；所述细胞分裂素为6-BA、KT、ZT中的一种；
⑵将所述一级苗剪切成带有1~3片叶的2~3cm茎段，按8~10段/瓶的接种量转接到二级苗培养基中，在温度为20~25℃且光照条件下进行培养，10~14天后即得二级苗；所述二级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.002~1.0mg细胞分裂素、100~300mg水解酪蛋白、1~4mgVc、2~8mg柠檬酸钠、20.0~60.0g蔗糖、3~8g琼脂粉，且pH值为5.0~6.5的培养基；所述细胞分裂素为6-BA、KT、ZT中的一种；
⑶将生长至5~7cm的所述二级苗剪切成2~3cm、带有2~3片叶子的茎段，按8~10段/瓶的接种量转接到三级苗培养基中，在温度为20~25℃且光照条件下进行培养，10~14天后即得三级苗；所述三级苗培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.001~0.5mg细胞分裂素、1~4mgVc、2~8mg柠檬酸钠、20.0~60.0g蔗糖、3~8g琼脂粉，且pH值为5.0~6.5的培养基；所述细胞分裂素为6-BA、KT、ZT中的一种；
⑷将生长至5~7cm的所述三级苗切成2~3段，按10~15段/瓶的接种量接种到生根培养基中，在温度为20~25℃且光照条件下进行培养，10~14天后即得微扦插快繁苗；所述生根培养基是指每升MS基本培养基中添加有0.001~1.0mg生长素、1~4mgVc、2~8mg柠檬酸钠、20.0~60.0g蔗糖、3~8g琼脂粉，且pH值为5.0~6.5的培养基；所述生长素为2,4-D、NAA、IAA中的一种。
2.如权利要求1所述的柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑴、所述步骤⑵、所述步骤⑶中的光照条件均是指光照强度为3000~10000Lux，光照时间为12~16h/天。
3.如权利要求1所述的柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤⑷中的光照条件是指光照强度为5000~10000Lux，光照时间为12~16h/天。
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