CN104323029A - 一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂，按照质量份包括以下组分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脱脂米糠15份-45份。本发明还公开一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，该调节剂能促进石斑鱼肠道发育，修复肠黏膜损伤，激活肠黏膜免疫和系统免疫功能，调节肠道菌群平衡，维护肠黏膜的健康，降低肠炎发病率。另外，可提高肠道消化酶的活性，提高石斑鱼生长性能和饲料利用效率。
Description
技术领域
本发明属于水产饲料添加剂技术领域，具体涉及一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂，本发明还涉及一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法。
背景技术
肠道不仅是水产动物营养物质消化和吸收的主要场所，也是体内重要的免疫器官、代谢器官和内分泌器官。肠道健康与水产动物的健康和生产性能息息相关，肠道机能一旦紊乱，动物消化吸收出现障碍，营养素的供给不足，动物的生产性能下降。另外，肠道机能受损后，弧菌等病原菌容易入侵，引起细菌性肠炎等肠道疾病爆发。大量研究表明，肠道菌群平衡对于维持肠道健康具有重要作用。正常情况下，占主导优势的有益微生物菌群能使肠道处于健康状态，保证宿主对营养素的正常消化和吸收。此外，有益微生物菌群定植于肠内壁黏膜，排斥潜在病原菌的定植，调节肠黏膜免疫功能，控制病原微生物的群体数量，保护宿主动物免受疾病的困扰。但是，当出现饵料变更、养殖密度过大等应激状态时，海水鱼肠道菌群结构容易受到冲击而失调，菌群与宿主之间的稳态关系被破坏，宿主对疾病的易感性增强，生产性能下降。近年来，由于鱼粉供应不足以及价格不断飙升，利用价格相对低廉的豆粕等植物蛋白原料替代鱼粉是大势所趋。但是，豆粕抗营养因子会引起海水鱼肠道菌群结构的变化、肠道黏膜损伤和肠炎的出现，肠道的正常消化吸收功能受到影响，鱼类生产性能和饲料利用率下降。可见，肠道健康是鱼类保持健康和发挥正常生产性能的必要条件。因此，配合饲料中加入一些功能性添加剂改善肠道健康，提高鱼类对抗营养因子和环境应激的抵抗力，对于保证动物健康和生产性能具有重要的意义和实际应用价值。
近年来，市场上基于改善动物肠道健康的各种饲料添加剂产品种类繁多，如益生菌、寡糖、酸化剂、丁酸类、谷氨酰胺、中草药等。其中，国内外科学家对益生菌和寡糖进行了大量的研究，证实了益生菌和寡糖单独或者联用(合生素)能调节鱼类肠道菌群，提高动物肠黏膜和系统免疫功能，进而提高生产性能和饲料利用率。目前市场上已经有一些针对水产动物的益生菌和合生素产品，但这些产品所用的益生菌多来自恒温动物或环境，难以在鱼类肠道定植或定植时间很短，导致其应用效果不稳定。因此，分离自海水养殖鱼类肠道自身的原籍有益微生物通常具有更好的应用效果。另外，多数益生菌菌株要求在活性条件下才能发挥益生作用，然而水产饲料加工过程中制粒或膨化温度很高，容易导致益生菌失活，益生效果难以发挥。因此，迫切需要筛选一些灭活条件下也能发挥益生效果的菌株。
丁酸类的杰出代表，三丁酸甘油酯在胃液中不分解，在胰脂肪酶的作用下缓慢释放成丁酸和甘油，丁酸可作为肠上皮细胞代谢的能源物质，还可以起到酸化、调节胃肠道微生态平衡等作用。谷氨酰胺能促进肠道细胞的修复及维持正常的肠黏膜免疫功能，而且能不断为动物肠黏膜细胞更新提供能量来源和代谢前体，从而能减少外界不利因素造成动物生产性能下降。近年来研究和实践证明，三丁酸甘油酯与谷氨酰胺二肽具有很好的协同作用，为肠上皮细胞提供能量的同时，修复小肠绒毛，有利于肠道健康及营养物质的充分吸收。可见，若能将益生菌、寡糖、三丁酸甘油酯、谷氨酰胺二肽配伍优化，发挥其协同作用，势必能很好地改善水产动物肠道健康，减少肠道疾病的发生，提高动物生产性能和饲料利用率。但是，目前国内外肠道健康调节产品多采用单一品种添加剂，使用效果不稳定，尚未见商品化的基于海水鱼原籍有益菌的复合型肠道健康调节剂，亟待开展相关产品的研究和开发。
发明内容
本发明的目的是提供一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂，本发明利用白炭黑和脱脂米糠实现四种单一添加剂的高效配伍，发挥其协同效果，效果明显优于单一添加剂。
本发明的另一目的是提供复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法。
本发明所采用的第一技术方案是，一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂，按照质量份包括以下组分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脱脂米糠15份-45份。
本发明所采用的第二技术方案是，一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、制备益生菌粉，将短小芽孢杆菌SE5经一级和二级摇瓶培养后，接种到发酵罐，进行液体发酵；发酵后离心收集菌体，在菌体中加入玉米淀粉作为载体，经振动流化床干燥、粉碎、过滤、真空包装，获得可常温保存的益生菌粉；
步骤2、称量，按照质量份称取组分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脱脂米糠15份-45份；
步骤3、将步骤2中称量好的白炭黑作为载体吸附三丁酸甘油酯；再与上述称量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脱脂米糠载体进行混合，最后该复合物与益生菌粉混合均匀，即得复合型石斑鱼用肠道健康调节剂产品。
本发明的特点还在于，
一级培养具体为：用接种环挑取两菌环斜面保存的短小芽孢杆菌SE5菌体接种到6-10个装有50mL培养基1的250mL三角瓶中进行培养，其中培养基1的组成为：牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化钠4-6g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；摇床转速180-240rpm；培养时间为18-24h；得到300-500mL的一级种子培养液。
二级培养具体为：按照2-4％的比例将一级种子培养液接种到20-30个装有400mL培养基2的2000mL三角瓶中，其中，培养基2的组成为：牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化钠4-6g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；摇床转速180-240rpm；培养时间为18-24h；得到8-12L的二级种子培养液。
液体发酵具体为：按照1％-5％的比例将二级种子培养液接种到培养基3中，其中培养基3的组分为玉米粉12-18g，豆粕粉8-12g，玉米浆4-8g，硫酸铵5-8g，七水硫酸镁0.8-1.2g，三水合磷酸氢二钾2-4g，硫酸锰0.04-0.06g，自来水1000mL；在500L发酵罐进行液体发酵，发酵条件为：发酵温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；搅拌转速200-300rpm；装液系数0.5；发酵时间为20-28h。
步骤1中离心条件为：转速为4000-5000rpm；离心时间为10min-20min。
菌体与玉米淀粉的质量比为1:2-1:4。
振动流化床干燥条件为进风温度60℃-100℃；出风温度40℃-60℃。
过滤条件为80目筛。
本发明的有益效果是：本石斑鱼用复合肠道健康调节剂解决了以下问题：第一，存在的饲料加工过程导致益生菌失活进而影响其使用效果问题(目前市场上的益生菌需要在活性状态下才能发挥作用，然而水产饲料加工过程中制粒或膨化温度很高，易导致益生菌失活。本专利的短小芽孢杆菌SE5能在热灭活状态下发挥益生作用)；第二，多种添加剂的高效配伍；该添加剂能促进石斑鱼肠道发育，修复肠黏膜损伤，激活肠黏膜免疫和系统免疫功能，抑制石斑鱼肠道致病菌如成团泛菌(Pantoea agglomerans)和黑海弧菌(Vibrio ponticus)的生长，调节肠道菌群平衡，提高肠道消化酶活性，提高石斑鱼生长性能和饲料利用效率。
附图说明
图1是本发明肠道健康调节剂对石斑鱼肠道菌群的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明提供一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂，按照质量份包括以下组分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脱脂米糠15份-45份。
其中，益生菌为分离自石斑鱼肠道的原籍有益菌——短小芽孢杆菌SE5，活性和灭活SE5能够激活肠黏膜免疫功能和全身免疫功能，调节斜带石斑鱼肠道菌群平衡，促进肠道发育和消化酶分泌，提高动物生长速度和饲料利用效率。该菌种经中华人民共和国农业部《饲料添加剂品种目录(2013)》批准作为水产动物饲料添加剂使用。本专利益生菌粉中短小芽孢杆菌SE5总数达到2.0×1010CFU/g；所述的果寡糖能选择性促进石斑鱼肠道有益菌增殖，与短小芽孢杆菌SE5具有协同作用(短小芽孢杆菌SE5能控制肠道致病菌的增殖)，高效维持肠道菌群平衡；所述的三丁酸甘油酯和谷氨酰胺二肽具有很好的协同作用，为肠上皮细胞提供能量的同时，修复肠黏膜损伤，有利于肠道健康及营养物质的吸收，与益生菌和果寡糖具有互补作用；所述的白炭黑、脱脂米糠为饲料添加剂载体，可实现益生菌粉、果寡糖、三丁酸甘油酯和谷氨酰胺二肽的高效配伍，生产一种高效复合型石斑鱼用肠道健康调节剂，如图1所示，该添加剂能促进石斑鱼肠道发育，修复肠黏膜损伤，激活肠黏膜免疫和系统免疫功能，抑制石斑鱼肠道致病菌如成团泛菌(Pantoea agglomerans)和黑海弧菌(Vibrioponticus)的生长。
饵料中添加1.0×106CFU/g-1.0×108CFU/g短小芽孢杆菌SE5能够很好发挥益生作用。本发明益生菌粉中SE5含量为2.0×1010CFU/g以上，因此，肠道健康调节剂产品中益生菌粉比例为5份-10份，则SE5含量为1.0×109CFU/g-2.0×109CFU/g，按照0.1％-0.2％添加到配合饲料中，则饲料中SE5的含量为1.0×106CFU/g-4.0×106CFU/g。益生菌粉比例过大会增加成本，过低则难以发挥产品的效果。果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份，均为其发挥作用的合适比例，过高则增加产品成本，过低则效果欠佳。
本发明还提供一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、益生菌发酵，用接种环挑取两菌环斜面保存的短小芽孢杆菌SE5菌体接种到6-10个装有50mL培养基1的250mL三角瓶中进行培养，其中培养基1的组成为：牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化钠4-6g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；摇床转速180-240rpm；培养时间为18-24h；得到300-500mL的一级种子培养液；按照2-4％的比例将一级种子培养液接种到20-30个装有400mL培养基2的2000mL三角瓶中，其中，培养基2的组分为牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化钠4-6g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；搅拌转速180-240rpm；培养时间为18-24h；得到8-12L的二级种子培养液；之后，按照1％-5％的比例将二级种子培养液接种到培养基3中，其中培养基3的组分为玉米粉12-18g，豆粕粉8-12g，玉米浆4-8g，硫酸铵5-8g，七水硫酸镁0.8-1.2g，三水合磷酸氢二钾2-4g，硫酸锰0.04-0.06g，自来水1000mL。在500L发酵罐进行液体发酵，其中，发酵条件为：发酵温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；搅拌转速200-300rpm；装液系数0.5；发酵时间为20-28h；发酵后4000-5000rpm离心10min-20min收集菌体，在菌体中加入菌体质量2-4倍玉米淀粉作为载体，经振动流化床干燥(进风温度60-100℃；出风温度40-60℃)、粉碎、80目过筛、真空包装，获得可常温保存的益生菌粉；
步骤2、称量，按照质量份称取组分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脱脂米糠15份-45份；
步骤3、利用上述步骤1中称量的白炭黑作为载体吸附三丁酸甘油酯；再与上述称量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脱脂米糠载体进行混合，最后该复合物与益生菌粉混合均匀，即得复合型石斑鱼用肠道健康调节剂产品。
本方法的关键步骤为：(1)益生菌粉生产工艺的优化。肠道原籍有益短小芽孢杆菌SE5菌粉是肠道健康调节剂的核心成分。通过优化其大规模液体发酵培养参数，确定高产的培养基和发酵培养条件。经发酵培养、菌体收集、加入载体、干燥、粉碎、过筛、真空包装，获得益生菌菌粉。(2)四种单一添加剂的高效配伍。本发明利用白炭黑和脱脂米糠实现四种添加剂的高效配伍，发挥其协同效果，效果优于单一品种添加剂。
在制备方法中，益生菌粉中短小芽孢杆菌SE5含量不低于2.0×1010CFU/g；肠道健康调节剂产品中SE5含量为1.0×109CFU/g-2.0×109CFU/g。该产品按照0.1％-0.2％添加到配合饲料中，则饲料中SE5的含量为1.0×106CFU/g-4.0×106CFU/g，可保证其益生作用的发挥。肠道健康调节剂产品中SE5含量过高会增加成本，过低则难以发挥益生菌的作用。
实施例1
一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：益生菌发酵，用接种环挑取两菌环斜面保存的短小芽孢杆菌SE5菌体接种到10个装有50mL培养基1的250mL三角瓶中进行培养，其中培养基1的组成为：牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28℃；初始pH值7.0；摇床转速210rpm；培养时间为24h；得到500mL的一级种子培养液；按照3％的比例将一级种子培养液接种到25个装有400mL培养基2的2000mL三角瓶中，其中，培养基2为牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28℃；初始pH值7.0；搅拌转速210rpm；发酵时间为24h；得到10L的二级种子培养液；之后，按照3％的比例将二级种子培养液接种到培养基3中，其中培养基3的组分为玉米粉15g，豆粕粉10g，玉米浆6g，硫酸铵6g，七水硫酸镁1.0g，三水合磷酸氢二钾3g，硫酸锰0.05g，自来水1000mL。在500L发酵罐进行液体发酵，其中，发酵条件为：发酵温度28℃；初始pH值7.0；搅拌转速250rpm；装液系数0.5；发酵时间为24h；发酵后4500rpm离心15min收集菌体，在菌体中加入菌体质量3倍玉米淀粉作为载体，经振动流化床干燥(进风温度80℃；出风温度50℃)、粉碎、80目过筛、真空包装，获得可常温保存的益生菌粉；按照质量份称取组分：益生菌粉8份、果寡糖22份、三丁酸甘油酯7份、谷氨酰胺二肽18份，白炭黑15份、脱脂米糠30份。利用上述称量的白炭黑作为载体吸附三丁酸甘油酯；再与上述称量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脱脂米糠载体进行混合，最后该复合物与益生菌粉混合均匀，即得复合型石斑鱼用肠道健康调节剂产品。
下面结合实验结果来说明本实施例1的有益效果：
表1肠道健康调节剂对斜带石斑鱼生长性能和饲料系数的影响
| 对照组 | 0.1％调节剂 | 0.2％调节剂 | |
| 增重率(％) | 264.53±42.78 | 336.45±22.31* | 329.81±10.74* |
| 特定生长率 | 2.32±0.24 | 2.62±0.02* | 2.61±0.05* |
| 饵料系数 | 1.36±0.16 | 1.16±0.04* | 1.15±0.08* |
*表示与对照组相比差异显著。下同。
表2肠道健康调节剂对斜带石斑鱼肠道消化酶活力的影响
| 对照组 | 0.1％调节剂 | 0.2％调节剂 | |
| 蛋白酶(U/mg protein) | 267.43±4.47 | 528.11±16.55* | 980.93±63.56* |
| 脂肪酶(U/mg protein) | 16.50±0.86 | 20.78±0.81* | 22.82±0.46* |
| 淀粉酶(U/mg protein) | 0.96±0.22 | 1.35±0.05* | 1.78±0.10* |
表3肠道健康调节剂对斜带石斑鱼血清免疫指标的影响
| 对照组 | 0.1％调节剂 | 0.2％调节剂 | |
| SOD(U/mL) | 215.09±2.55 | 285.87±22.62* | 281.79±0.85* |
| 溶菌酶(U/mL) | 46.37±1.59 | 58.43±1.66* | 73.47±5.02* |
| 补体C3(mg/mL) | 0.40±0.03 | 0.57±0.04* | 0.60±0.07* |
| IgM(mg/mL) | 0.34±0.01 | 0.60±0.05* | 0.72±0.06* |
表4肠道健康调节剂对斜带石斑鱼肠道免疫基因表达的影响
| 对照组 | 0.1％调节剂 | 0.2％调节剂 | |
| TLR2 | 0.86±0.01 | 2.43±0.29* | 2.99±0.28* |
| IL-1β | 2.48±0.37 | 6.07±1.10* | 6.65±0.44* |
| IL-8 | 1.28±0.23 | 3.63±0.24* | 3.63±0.28* |
| epinecidin-1 | 1.19±0.13 | 4.97±0.29* | 4.64±0.78* |
| IgM | 1.15±0.14 | 5.26±0.71* | 4.32±0.67* |
从表1-表4可以看出，采用本肠道健康调节剂能显著提高斜带石斑鱼的增重率和特定生长率，显著降低饵料系数，显著提高肠道消化酶活力和血清SOD活性、溶菌酶活性、补体C3和IgM水平；提高肠道TLR2、IL-1β、IL-8、epinecidin-1和IgM等免疫基因的表达。
实施例2
一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：益生菌发酵，用接种环挑取两菌环斜面保存的短小芽孢杆菌SE5菌体接种到6个装有50mL培养基1的250mL三角瓶中进行培养，其中培养基1的组成为：牛肉膏4g，蛋白胨12g，葡萄糖18g，氯化钠6g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28℃；初始pH值7.2；摇床转速180rpm；培养时间为24h；得到350mL的一级种子培养液；按照4％的比例将一级种子培养液接种到20个装有400mL培养基2的2000mL三角瓶中，其中，培养基2为牛肉膏4g，蛋白胨12g，葡萄糖18g，氯化钠6g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28℃；初始pH值7.2；摇床转速180rpm；培养时间为24h；得到8-12L的二级种子培养液；之后，按照1％的比例将二级种子培养液接种到培养基3中，其中培养基3的组分为玉米粉12g，豆粕粉12g，玉米浆4g，硫酸铵8g，七水硫酸镁0.8g，三水合磷酸氢二钾4g，硫酸锰0.04g，自来水1000mL。在500L发酵罐进行液体发酵，其中，发酵条件为：发酵温度28℃；初始pH值7.2；搅拌转速200rpm；装液系数0.5；发酵时间为28h；发酵后4000rpm离心20min收集菌体，在菌体中加入菌体质量2倍玉米淀粉作为载体，经振动流化床干燥(进风温度60℃；出风温度40℃)、粉碎、80目过筛、真空包装，获得可常温保存的益生菌粉；按照质量份称取组分：益生菌粉5份、果寡糖25份、三丁酸甘油酯5份、谷氨酰胺二肽20份、白炭黑10份、脱脂米糠35份；利用上述称量的白炭黑作为载体吸附三丁酸甘油酯；再与上述称量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脱脂米糠载体进行混合，最后该复合物与益生菌粉混合均匀，即得复合型石斑鱼用肠道健康调节剂产品。
实施例3
一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：益生菌发酵，用接种环挑取两菌环斜面保存的短小芽孢杆菌SE5菌体接种到6-10个装有50mL培养基1的250mL三角瓶中进行培养，其中培养基1的组成为：牛肉膏6g，蛋白胨8g，葡萄糖25g，氯化钠4g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度30℃；初始pH值7.2；摇床转速240rpm；培养时间为18h；得到500mL的一级种子培养液；按照2％的比例将一级种子培养液接种到30个装有400mL培养基2的2000mL三角瓶中，其中，培养基2为牛肉膏6g，蛋白胨8g，葡萄糖25g，氯化钠4g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度30℃；初始pH值7.2；摇床转速240rpm；培养时间为18h；得到8-12L的二级种子培养液；之后，按照5％的比例将二级种子培养液接种到培养基3中，其中培养基3的组分为玉米粉18g，豆粕粉8g，玉米浆8g，硫酸铵5g，七水硫酸镁1.2g，三水合磷酸氢二钾2g，硫酸锰0.06g，自来水1000mL。在500L发酵罐进行液体发酵，其中，发酵条件为：发酵温度30℃；初始pH值6.8；搅拌转速300rpm；装液系数0.5；发酵时间为20h；发酵后5000rpm离心10min收集菌体，在菌体中加入菌体质量4倍玉米淀粉作为载体，经振动流化床干燥(进风温度100℃；出风温度40℃)、粉碎、80目过筛、真空包装，获得可常温保存的益生菌粉；按照质量份称取组分：益生菌粉10份、果寡糖25份、三丁酸甘油酯10份、谷氨酰胺二肽20份、白炭黑20份、脱脂米糠15份；利用上述称量的白炭黑作为载体吸附三丁酸甘油酯；再与上述称量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脱脂米糠载体进行混合，最后该复合物与益生菌粉混合均匀，即得复合型石斑鱼用肠道健康调节剂产品。
实施例4
一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：益生菌发酵，用接种环挑取两菌环斜面保存的短小芽孢杆菌SE5菌体接种到6-10个装有50mL培养基1的250mL三角瓶中进行培养，其中培养基1的组成为：牛肉膏4.5g，蛋白胨9g，葡萄糖24g，氯化钠5.5g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度29℃；初始pH值7.1；摇床转速220rpm；培养时间为22h；得到450mL的一级种子培养液；按照3.5％的比例将一级种子培养液接种到28个装有400mL培养基2的2000mL三角瓶中，其中，培养基2为牛肉膏4.5g，蛋白胨9g，葡萄糖24g，氯化钠5.5g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度29℃；初始pH值7.1；摇床转速220rpm；培养时间为22h；得到11.2L的二级种子培养液；之后，按照4％的比例将二级种子培养液接种到培养基3中，其中培养基3的组分为玉米粉16g，豆粕粉11g，玉米浆6g，硫酸铵6g，七水硫酸镁0.9g，三水合磷酸氢二钾3.5g，硫酸锰0.05g，自来水1000mL。在500L发酵罐进行液体发酵，其中，发酵条件为：发酵温度29℃；初始pH值6.9；搅拌转速280rpm；装液系数0.5；发酵时间为25h；发酵后4800rpm离心18min收集菌体，在菌体中加入菌体质量3倍玉米淀粉作为载体，经振动流化床干燥(进风温度90℃；出风温度55℃)、粉碎、80目过筛、真空包装，获得可常温保存的益生菌粉；按照质量份称取组分：益生菌粉5份、果寡糖20份、三丁酸甘油酯5份、谷氨酰胺二肽15份、白炭黑10份、脱脂米糠45份、利用上述称量的白炭黑作为载体吸附三丁酸甘油酯；再与上述称量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脱脂米糠载体进行混合，最后该复合物与益生菌粉混合均匀，即得复合型石斑鱼用肠道健康调节剂产品。
Claims (10)
1.一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂，其特征在于，按照质量份包括以下组分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脱脂米糠15份-45份。
2.一种复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：
步骤1、制备益生菌粉，将短小芽孢杆菌SE5经一级和二级摇瓶培养后，接种到发酵罐，进行液体发酵；发酵后离心收集菌体，在菌体中加入玉米淀粉作为载体，经振动流化床干燥、粉碎、过滤、真空包装，获得常温保存的益生菌粉；
步骤2、称量，按照质量份称取组分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脱脂米糠15份-45份；
步骤3、将步骤2中称量好的白炭黑作为载体吸附三丁酸甘油酯；再与上述称量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脱脂米糠载体进行混合，最后该复合物与益生菌粉混合均匀，即得复合型石斑鱼用肠道健康调节剂产品。
3.根据权利要求2所述的复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，所述一级培养具体为：用接种环挑取两菌环斜面保存的短小芽孢杆菌SE5菌体接种到6-10个装有50mL培养基1的250mL三角瓶中进行培养，其中培养基1的组成为：牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化钠4-6g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；摇床转速180-240rpm；培养时间为18-24h；得到300-500mL的一级种子培养液。
4.根据权利要求3所述的复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，所述二级培养具体为：按照2-4％的比例将一级种子培养液接种到20-30个装有400mL培养基2的2000mL三角瓶中，其中，培养基2为牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化钠4-6g，蒸馏水1000mL；培养条件为：培养温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；搅拌转速180-240rpm；发酵时间为18-24h；得到8-12L的二级种子培养液。
5.根据权利要求4所述的复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，所述液体发酵具体为：按照1％-5％的比例将二级种子培养液接种到培养基3中，其中培养基3的组分为玉米粉12-18g，豆粕粉8-12g，玉米浆4-8g，硫酸铵5-8g，七水硫酸镁0.8-1.2g，三水合磷酸氢二钾2-4g，硫酸锰0.04-0.06g，蒸馏水1000mL；在500L发酵罐进行液体发酵，发酵条件为：发酵温度28-30℃；初始pH值6.8-7.2；搅拌转速200-300rpm；装液系数0.5；发酵时间为20-28h。
6.根据权利要求2所述的复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1中离心条件为：转速为4000-5000rpm；离心时间为10min-20min。
7.根据权利要求2所述的复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，所述菌体与玉米淀粉的质量比为1:2-1:4。
8.根据权利要求2所述的复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，所述振动流化床干燥条件为进风温度60℃-100℃；出风温度40℃-60℃。
9.根据权利要求2所述的复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，所述过滤条件为80目筛。
10.根据权利要求2所述的复合型石斑鱼用肠道健康调节剂的制备方法，其特征在于，所述益生菌粉中短小芽孢杆菌SE5含量不低于2.0×1010CFU/g，肠道健康调节剂中短小芽孢杆菌SE5含量不低于1.0×109CFU/g。
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