CN104293717A - 一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明为微生物领域，特别涉及一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基，所述培养基的组分包括20.8g/L肉浸液肉汤、5.0g/L酵母浸粉钠、8g/L牛胆汁物、1.0g/L柠檬酸钠、0.5g/L柠檬酸铁铵、0.27g/L叠氮化钠、1.0g/L七叶苷、15.0g/L琼脂，pH值为6.9-7.3。所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、蛋白胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。本发明培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；菌生长迅速，变异率低；便于观察，分析。

Description

一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基及其应用
技术领域
本发明为微生物领域，特别涉及一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基及其应用。
背景技术
微生物培养(microculture)是生物培养的中的一种。所培养的微生物主要有病毒、细菌、放线菌、真菌等。微生物培养需要用到培养基，根据微生物的不同种类和生活习性来配制特定的培养基。微生物培养成功的关键在于无菌操作，如果培养器具和培养基不能彻底灭菌、培养的过程中有杂菌污染是很容易失败的。
肠球菌(Enterococcus)属肠球菌属，是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌，但近年研究已证实了肠球菌的致病力。在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌，肠球菌亦可引起院外感染。肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。
溶血性链球菌，需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适pH为7.4-7.6。在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，不同菌株溶血不一。
粪肠球菌，根据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰氏(Lancefield)血清学分类，可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌(S.faecalis)、屎链球菌(S.faecium)和坚忍链球菌(S.durans),后者有牛链球菌(S.bovis)和马肠链球菌(S.equinus)。
其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃pH 9.6或含6.5％NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌(E.faecalis)和屎肠球菌(E.faecium)。
培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基)，较长时间的贮存，必须放在3～6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。
培养基根据化学分类为天然培养基、组合培养基和半组合培养基；根据物理分类为液体培养基、固定培养基和脱水培养基；根据微生物分类为选择性培养基、鉴别培养基。
发明内容
本发明克服现有技术中的不足，提供一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基及其应用。
本发明运用生物化学，微生物学及无机、有机、分析化学和荧光技术的原理，对不同的碳源、氮源、无机盐类、维生素、生长促进剂等诸类营养组分的组合进行筛选，对培养基的pH值、离子强度、氧化-还原电势、表面张力、气体环境等物化因子进行了比较，研究出了本发明的培养基。
本发明所采用的技术方案为：
一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基，所述培养基的组分包括20.8g/L肉浸液肉汤、5.0g/L酵母浸粉钠、8g/L牛胆汁物、1.0g/L柠檬酸钠、0.5g/L柠檬酸铁铵、0.27g/L叠氮化钠、1.0g/L七叶苷、15.0g/L琼脂，pH值为6.9-7.3。
在以上方案的基础上，所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、蛋白胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。
本发明还公开了所述的Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基的应用，用于粪链球菌的选择性分离和计数。
蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；细菌水解七叶苷与柠檬酸铁铵中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；柠檬酸钠、牛胆汁物和叠氮化钠为选择性抑菌剂，抑制非链球菌的细菌；琼脂是培养基的凝固剂。
称取本品56.8g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，加热煮沸1分钟，分装于16mm×150mm试管，121℃高压灭菌15分钟制成斜面长4-5cm，底部长2-3cm。
本发明的有益效果：
1、培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；
2、菌生长迅速，变异率低；
3、便于观察，分析。
具体实施方式
实施例1：
一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基，所述培养基的组分包括20.8g/L肉浸液肉汤、5.0g/L酵母浸粉钠、8g/L牛胆汁物、1.0g/L柠檬酸钠、0.5g/L柠檬酸铁铵、0.27g/L叠氮化钠、1.0g/L七叶苷、15.0g/L琼脂，pH值为6.9-7.3。
所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、蛋白胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。
称取本品56.8g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，加热煮沸1分钟，分装于16mm×150mm试管，121℃高压灭菌15分钟制成斜面长4-5cm，底部长2-3cm。
质控菌株接种后，于35±0.5℃培养24h，
菌名 生长状况 培养特征
粪链球菌 良好 棕黑色，具有棕色晕轮
金黄色葡萄球菌 被抑制 ——
大肠埃希氏菌 被抑制 ——
上述具体实施方式中的实施例是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下所做的任何变化和修改，都应属本发明所限定的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基，其特征在于所述培养基的组分包括20.8g/L肉浸液肉汤、5.0g/L酵母浸粉钠、8g/L牛胆汁物、1.0g/L柠檬酸钠、0.5g/L柠檬酸铁铵、0.27g/L叠氮化钠、1.0g/L七叶苷、15.0g/L琼脂，pH值为6.9-7.3。
2.根据权利要求1所述的Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基，其特征在于所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、蛋白胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。
3.一种根据权利要求1所述的Pfizer肠球菌选择性琼脂培养基的应用，其特征在于用于粪链球菌的选择性分离和计数。
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