CN104286853A - 梨皮提取物及提取方法及在制备降血糖保健食品的用途 - Google Patents
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种梨皮提取物及提取方法及在制备降血糖保健食品的用途，提取方法包括如下步骤：将梨皮进行冷冻干燥或真空干燥；按质量比为1∶10-100的比例将干燥后梨皮与体积浓度为50％-80％的甲醇水溶液或乙醇水溶液混合，超声提取0.5-2小时，提取2-3次，合并提取液，浓缩，40-60℃干燥使甲醇或乙醇完全挥干得浸膏。体内试验证明梨皮提取物对糖尿病小鼠血糖有明显的降低作用，对糖耐量的调节及餐后血糖的延迟也具有较明显作用。对糖尿病小鼠氧化应激的改善(SOD活力的提高和MDA含量的降低)均具有明显作用。体外实验证明梨皮提取物对α-糖苷酶具有明显的抑制作用，说明梨皮提取物可对餐后血糖的延迟产生作用。
Description
技术领域
本发明属于保健食品领域，具体地涉及一种梨皮提取物及提取方法及在制备降血糖保健食品的用途。
背景技术
梨为蔷蔽科(Rosaceae)、苹果亚科(Maloideae)、梨属(Pyrus)落叶乔木，梨是富含酚酸和黄酮类物质的一种水果。梨皮通常作为废弃物，其价值常被忽视，因此，系统地鉴定梨皮中化学成分，有利于对梨皮的资源利用与开发。梨皮中含有丰富的黄酮、有机酚酸类化合物，具有抗菌、消炎、抗肿瘤、防治冠心病与中风等心脑血管疾病的药理活性，但未见对其降血糖作用的报道。
糖尿病是一种以慢性高血糖和糖脂代谢、蛋白质代谢紊乱为主要特点的内分泌疾病，其发病原因主要为胰岛素分泌相对不足和胰岛素抵抗。目前糖尿病已成为继心脑血管疾病和癌症之后的第三大疾病，并且糖尿病的发病率在10年里已增加到10％，严重危害人类健康。医学界还没有能完全治愈这种病症的特效药，而目前，糖尿病治疗多采用口服西药降糖药和注射胰岛素的方式，副作用大，长期使用对患者肝肾造成严重损伤。因此，从食品中研究开发新型抗糖尿病成分和辅助降血糖保健产品具有重要的意义和广阔的前景。
糖尿病氧化应激在糖尿病发生和发展过程中的作用十分复杂。ROS除直接损伤胰岛β细胞外，还可作为信号分子激活一些应激敏感通路，调节相关因子的表达，引起β细胞凋亡或坏死，抑制胰岛素分泌，诱发胰岛素抵抗，最终引发或加重糖尿病。如何根据抗氧化酶的特点开发出具有抗氧化活性的天然植物组分，直接有效的去除超氧自由基可能是下一步的研究重点，目前我们发现梨皮提取物可明显提高糖尿病大鼠肝脏组织SOD活性，降低血糖，且其降糖作用与降低大鼠胰腺组织氧化应激水平有密切关系。
α-葡萄糖苷酶抑制剂是治疗糖尿病的一个重要途径，通过抑制小肠α-葡萄糖苷酶的活性，延缓多糖的降解，减少葡萄糖的吸收，抑制餐后血糖的升高。α-葡萄糖苷酶抑制剂的降糖研究始于20世纪70年代，其筛选和研制始于德国和日本。人们最初从放线菌属和链霉菌属中提取出一系列的α-葡萄糖苷酶抑制物。其作为一类新型口服降糖药，适用于任何类型的糖尿病。目前己被批准用于临床糖尿病治疗的阿尔法-葡萄糖苷酶抑制剂主要有：阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖(voglibose)、米格列醇(miglitol)。而梨皮提取物对糖苷酶的抑制性作用未见报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种有降血糖作用的梨皮提取物。
本发明的第二个目的是提供一种梨皮提取物的提取方法。
本发明的第三个目的是提供一种梨皮提取物在制备降血糖保健食品的用途。
本发明的技术方案概述如下：
梨皮提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)将梨皮进行冷冻干燥或真空干燥；
(2)按质量比为1：10-100的比例将干燥后梨皮与体积浓度为50％-80％的甲醇水溶液或乙醇水溶液混合，超声提取0.5-2小时，提取2-3次，合并提取液，浓缩，40-60℃干燥使甲醇或乙醇完全挥干得浸膏。
梨优选为白梨系统、沙梨系统、秋子梨系统或西洋梨系统的品种或杂交梨品种。
白梨系统的品种优选为雪花梨、库尔勒香梨或鸭梨。
沙梨系统的品种优选为新水梨或黄花梨。
秋子梨系统的品种优选为秋子梨、鸭广梨或南国梨。
西洋梨系统的品种优选为贵妃梨或茄梨。
杂交梨品种优选为苹果梨或早酥梨。
上述方法提取的梨皮提取物。
上述梨皮提取物在制备降血糖保健食品的用途。
本发明的优点：
体内试验证明梨皮提取物对糖尿病小鼠血糖有明显的降低作用，对糖耐量的调节及餐后血糖的延迟也具有较明显作用。对糖尿病小鼠氧化应激的改善(SOD活力的提高和MDA含量的降低)均具有明显作用。体外实验证明梨皮提取物对α-糖苷酶具有明显的抑制作用，说明梨皮提取物可对餐后血糖的延迟产生作用。
附图说明
图1各组小鼠血清SOD活力(超氧化物歧化酶)。
图2各组小鼠血清MDA(丙二醛)含量。
图3-a为鸭广梨皮提取物、鸭广梨肉提取物糖耐量。
图3-b其他梨皮提取物糖耐量。
图4各组小鼠血糖曲线下面积。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。各实施例的梨皮厚度约3mm薄片。
实施例1
梨皮提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)将鸭广梨的梨皮在冷冻干燥机中在-50℃冷冻干燥15小时；
(2)按质量比为1：50的比例将干燥后梨皮与体积浓度为60％的甲醇水溶液混合，超声(功率50HZ，220V)提取1小时，提取3次，合并提取液，浓缩，50℃干燥使甲醇完全挥干得浸膏。
梨肉提取物的提取方法同本实施例梨皮提取物的提取方法。
将秋子梨或南国梨替代本实施例的鸭广梨，其它步骤同本实施例，获得相应的梨皮提取物。
实施例2
梨皮提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)将雪花梨的梨皮在真空干燥箱中，45℃，进行真空干燥；
(2)按质量比为1：50的比例将干燥后梨皮与体积浓度为50％的甲醇水溶液混合，超声提取0.5小时，提取3次，合并提取液，浓缩，60℃干燥使甲醇完全挥干得浸膏。
将库尔勒香梨或鸭梨替代本实施例的雪花梨，其它步骤同本实施例，获得相应的梨皮提取物。
实施例3
梨皮提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)将黄花梨的梨皮在冷冻干燥机中在-40℃冷冻干燥15小时；
(2)按质量比为1：100的比例将干燥后梨皮与体积浓度为80％的乙醇水溶液混合，超声提取1.5小时，提取2次，合并提取液，浓缩，50℃干燥使乙醇完全挥干得浸膏。
将新水梨替代本实施例的黄花梨，其它步骤同本实施例，获得相应的梨皮提取物。
实施例4
梨皮提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)将贵妃梨的梨皮在真空干燥箱中，35℃，进行真空干燥；
(2)按质量比为1：10的比例将干燥后梨皮与体积浓度为70％的甲醇水溶液混合，超声提取2小时，提取2次，合并提取液，浓缩，40℃干燥使甲醇完全挥干得浸膏。
将茄梨替代本实施例的贵妃梨，其它步骤同本实施例，获得相应的梨皮提取物。
实施例5
梨皮提取物的提取方法，包括如下步骤：
(1)将早酥梨的梨皮在冷冻干燥机中在-40℃冷冻干燥15小时；
(2)按质量比为1：40的比例将干燥后梨皮与体积浓度为60％的乙醇水溶液混合，超声提取0.5小时，提取3次，合并提取液，浓缩，50℃干燥使乙醇完全挥干得浸膏。
将苹果梨替代本实施例的早酥梨，其它步骤同本实施例，获得相应的梨皮提取物。
实施例6
实验
1.糖尿病小鼠造模
昆明雄性小鼠18-22g，室温22±3℃，相对湿度50％±20％，每日光照12小时，摄食，饮水自由，随机抽取10只昆明小鼠给予普通饲料喂养称空白组，剩余小鼠给予高脂饲料喂养3周后，高脂饮食小鼠给予STZ(链脲佐菌素)100mg/kg(溶解于PH4.4柠檬酸缓冲液)腹腔注射，空白组小鼠给予同体积柠檬酸缓冲液(pH4.4)腹腔注射，继续用同样的饲料喂养。STZ注射1周后鼠尾静脉取血，用血糖仪测定血糖。随机选取造模成功糖尿病小鼠80只(血糖水平在10.0-20.0mmol/L)，根据实验要求随机编为8组，分为模型组，6个梨皮提取物给药组，1个梨肉提取物给药组，梨皮提取物给药组每天用相当于500mg梨皮干燥物提取物每千克小鼠体重灌胃一次。梨肉提取物给药组每天用相当于500mg梨肉干燥物提取物每千克小鼠体重灌胃一次，连续灌胃给药三周。
2.血糖监测
用血糖仪对血糖进行监测。结果见表1
表1血糖测定结果
*p<0.05,**P<0.01与模型组比具有显著性差异
3.空腹血糖及糖耐量
将分组后的小鼠每7天测定血糖一次，在测定血糖前，各组动物禁食4小时。记录血糖值。
在第21天对小鼠进行糖耐量测定：
给葡萄糖前先测空腹血糖(即给葡萄糖前(0小时)血糖值)，然后，梨皮提取物给药组给予梨皮提取物水溶液(梨皮提取物给药组用相当于500mg梨皮干燥物提取物每千克小鼠的量用适量水溶解)，梨肉提取物给药组给予梨肉提取物水溶液(梨肉提取物给药组用相当于500mg梨肉干燥物提取物每千克小鼠的量用适量水溶解)模型组给予同体积水，空白组不做处理，20分钟后各组灌胃给予葡萄糖2.5g/kgBW，测定给葡萄糖后各组1、2、3小时的血糖值，观察模型组、梨皮提取物给药组、梨肉提取物给药组空腹血糖及给葡萄糖后1、2、3小时血糖曲线下面积的变化。
AUC＝(0时血糖+1时血糖)*1/2+(1时血糖+2时血糖)*1/2+(2时血糖+3时血糖)*1/2，见图3图4.
4.小鼠血清样品制备
给药3周后，用小鼠摘眼球法取血，之后将小鼠脱颈处死，为了避免进食量不同对检测结果的影响，小鼠禁食不禁水12小时后取血，取小鼠血浆，置于用EDTA(抗凝剂)包被的试管中，2-8℃保存，离心10min取上清液备用。
5.胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇测定、SOD活力，MDA含量测定
均按试剂盒说明标准进行，结果见图1，图2和表2。
表2胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇测定结果
*p<0.05,**P<0.01与模型组比具有显著性差异
6.α-糖苷酶抑制性测定
6.1试剂的配制
(1)20mmol/LpH＝6.9磷酸缓冲液(PBS)：A液：取NaH2PO4.2H2O3.12g溶于蒸馏水，定溶至1000ml。B液：取Na2HPO4.12H2O7.17g溶于蒸馏水，定溶1000ml。A液与B液以体积比为55：45的比例混合，得到的是20mM的磷酸钠缓冲液。
(2)30mmol/LpNPG：取9.0375mg pNPG(4-硝基-α-D-吡喃葡萄糖苷)溶解于pH＝6.9磷酸缓冲液中，加缓冲液定容到10mL。
(3)α-糖苷酶配制，取0.9mgα-糖苷酶溶于1mLpH＝6.9的PBS溶液中。
6.2测定方法
取不同浓度的受试样品50μL，加入α-糖苷酶溶液(20U/mL)10μL，在37℃条件下孵育30min，加入PNPG(30mM)10μL，400μLPH6.8磷酸缓冲液，37℃继续加热75min，加入0.1MNaCO3溶液400μL停止反应，在405nm下测定吸光值。
抑制率(％)＝(A空白-As受试样品)/A空白*100
结果见表3、
表3.α-糖苷酶抑制性IC50值(α-糖苷酶抑制率达到50％所需的梨样品浓度)
实验证明，秋子梨、京白梨、花盖梨、水红宵、八里香、尖把梨、小香水、满园香、兰州软儿梨等秋子梨系统梨品种的梨皮提取物也具有降血糖的作用。
库尔勒香梨、鸭梨、蜜梨、金花梨、青龙甜、金川雪梨、马蹄黄、白枝母秧、秋白梨等白梨系统梨品种的梨皮提取物也具有降血糖的作用。
新水、菊水、博多青、新高、长十郎、长寿、今村秋、市原旱生、歪把梨等沙梨系统的梨品种的梨皮提取物也具有降血糖的作用。
日面红、伏茄梨、巴梨等西洋梨系统梨品种的梨皮提取物也具有降血糖的作用。
苹果梨、锦丰、锦香、五九香、苹果梨×锦香、八月红、苹果梨×金花等杂交梨品种的梨皮提取物也具有降血糖的作用。
Claims (9)
1.梨皮提取物的提取方法，其特征是包括如下步骤：
(1)将梨皮进行冷冻干燥或真空干燥；
(2)按质量比为1：10-100的比例将干燥后梨皮与体积浓度为50％-80％的甲醇水溶液或乙醇水溶液混合，超声提取0.5-2小时，提取2-3次，合并提取液，浓缩，40-60℃干燥使甲醇或乙醇完全挥干得浸膏。
2.根据权利要求1所述的梨皮提取物的提取方法，其特征是所述梨为白梨系统、沙梨系统、秋子梨系统或西洋梨系统的品种或杂交梨品种。
3.根据权利要求2所述的梨皮提取物的提取方法，其特征是所述白梨系统的品种为雪花梨、库尔勒香梨或鸭梨。
4.根据权利要求2所述的梨皮提取物的提取方法，其特征是所述沙梨系统的品种为新水梨或黄花梨。
5.根据权利要求2所述的梨皮提取物的提取方法，其特征是所述秋子梨系统的品种为秋子梨、鸭广梨或南国梨。
6.根据权利要求2所述的梨皮提取物的提取方法，其特征是所述西洋梨系统的品种为贵妃梨或茄梨。
7.根据权利要求2所述的梨皮提取物的提取方法，其特征是所述杂交梨品种为苹果梨或早酥梨。
8.权利要求1-7之一的方法提取的梨皮提取物。
9.权利要求8的梨皮提取物在制备降血糖保健食品的用途。
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