CN104277990B - 一株酿酒酵母及其在发酵生产燃料乙醇中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株酿酒酵母及其在发酵生产燃料乙醇中的应用，分类命名为酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae ) SC‑spt1509，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO：M 2014316。本发明菌株能有效利用廉价的玉米秸秆发酵产燃料乙醇，遗传稳定性好，糖醇转化率高。在5L发酵罐中，木糖直接利用率达到65%以上，比原始出发菌发酵产乙醇提高了46.66%，具有重大的社会意义和经济价值。
Description
技术领域
本发明涉及一株酿酒酵母及其在发酵生产燃料乙醇中的应用，属于微生物发酵技术领域。
背景技术
生物质能源是未来可持续能源系统的重要组成部分，据推测到2050年，采用新技术生产的各种生物质替代燃料将占全球总能耗的40%以上。开发利用生物质能源不仅有助于减轻温室效应和使生态良性循环，而且可替代部分石油、煤炭等化石燃料，成为解决能源与环境问题的重要途径之一。目前燃料乙醇主要是用玉米或薯干等做原料，通过生物发酵技术生产纯度在99.5%（v/v）以上的无水酒精。由于其含水量低，可与汽油混配做燃料故被视为燃料酒精。同传统的石化燃料不同，燃料酒精是一种可再生资源和环保产品，可以缓解石油资源紧缺的矛盾，节省巨额外汇支出，同时有利于城市大气质量的改善。推广使用燃料酒精也是为农产品寻求一个长期、稳定的市场。
乙醇属于一种分子结构简单的醇类，是以玉米、小麦、薯类或糖蜜等材料为原料，经发酵和蒸馏而制成的。由于微生物发酵能够专业得到乙醇且无污染，因此发酵法被广泛应用于乙醇的生产。工业上常用的酒精发酵菌株有Ｋ字酵母、南阳 1300 酵母、南阳 1308酵母、拉斯2号、拉斯12号、古巴Ⅰ和古巴Ⅱ等等，均属于酿酒酵母（S.cerevisiae），酒精产量均在10%-12%之间，发酵原料多为葡萄糖，发酵时间均在55-70小时之间。酒精生产中对酵母菌菌株的生理特性有一定的要求：（1）发酵力强而且迅速，有较强的酒化酶；（2）繁殖速度快，有较强的增殖能力；（3）耐酒精能力强，能在较高浓度的酒精发酵醪中发酵；（4）耐温性能好，能在较高温度下发酵；（5）抵抗杂菌能力强；（6）耐酸能力强；(7)生产性能稳定，变异性小，发酵时产生泡沫小。
传统的酵母菌育种技术主要有直接筛选、杂交育种和诱变育种等。高得率菌株的选育主要集中于从自然界或已知能产酒精的酵母菌种分离筛选，或者将这些菌种经过一些诱变处理、驯化后再从中筛选。工业育种中，经这些方法选育的菌种具有生产稳定性好、菌种适用性强等优点。目前，工厂中使用的菌株大多采用这种方法选育的。但这些方法的主要缺点是随机性大、间接、费时、耗人工。
自20世纪70年代能源危机以来，人们开始寻找新的可再生燃料来代替石油， 以乙醇作为石油的代用能源，其关键是降低乙醇的生产成本。玉米秸秆生产乙醇越来越受到重视，尤其对玉米主产国及主产地区来讲，玉米秸秆是一种丰富的资源。在我国，玉米秸秆除了少部分被利用外，大部分以堆积、荒烧等形式直接倾入环境，造成极大污染和浪费， 直接燃烧的热效率只有10%左右，如果将它们转化成气体或液体燃料(乙醇、氢气、柴油等) ，热效率可达30%以上。这样不但可以缓解人类所面临的资源危机、食物短缺、环境污染等一系列问题，也可以为人类持续发展提供保证。
发明内容
本发明的目的是提供一株酿酒酵母及在发酵生产燃料乙醇中的应用，该菌株主要以玉米秸秆为发酵原料生产燃料乙醇，有着成本低，原料易得的生产优势，以及充分利用资源的环境优势。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一株酿酒酵母，其分类命名为酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae ) SC-spt1509，已于2014年 7月 3日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，地址：中国 武汉 武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2014316。
所述的酿酒酵母在发酵生产燃料乙醇中的应用。包括如下步骤：
1)、平板培养：将酿酒酵母SC-spt1509接种至平板基本培养基上培养，培养温度为35~40℃，培养时间为2~3 d；
2)、斜面培养：将步骤1)平板培养的酿酒酵母SC-spt1509接种至斜面培养基培养，培养温度为35~40℃，培养时间1d；
3)、种子培养：将步骤2)中的酿酒酵母SC-spt1509的斜面培养物接种至种子培养基中培养，培养温度为35~40℃，250mL摇瓶装液量20~40mL，培养时间8~12h；
4)、发酵培养：将步骤3)中的种子培养液接种至发酵培养基中，接种量6-12%(v/v)，发酵温度35~40℃，发酵培养时间30~50 h。
所述步骤1)中平板基本培养基包含如下质量百分数的组分：碳源3%~6%、氮源4.0%~6.0%、无机盐0.02%~0.08%、琼脂1.0%~1.5%、其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖和木糖中的至少一种；所述氮源为胰蛋白胨、鱼粉蛋白胨、酵母膏中的至少一种；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的至少一种。
所述步骤2)中的斜面培养基包含如下质量百分数的组分：碳源3%~6%、氮源4.0%~6.0%、无机盐0.02%~0.08%、琼脂1.5%~2.0%、其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖和木糖中的至少一种；所述氮源为胰蛋白胨、鱼粉蛋白胨、酵母膏、尿素中的至少一种；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的至少一种。
所述步骤3)中的种子培养基包含如下质量百分数的组分：碳源4%~8%、氮源1%~4%、无机盐0.04%~0.1%，其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖和木糖两种的混合；所述氮源为硫酸铵、磷酸氢二铵、酵母膏和尿素中的至少一种；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、磷酸盐中的至少一种。
所述步骤4)中的发酵培养基包含如下质量百分数的组分：碳源15%~25%、氮源1%~4%、无机盐0.04%~0.1%，其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖、玉米秸秆水解液和玉米秸秆爆破液中的至少一种；所述氮源为鱼粉蛋白胨、玉米浆、酵母膏和尿素中的至少一种；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、磷酸盐中的至少一种。
所述的玉米秸秆水解液的制备方法为：
将玉米秸秆风干后磨碎，于60~80℃烘箱中烘一昼夜至水分含量恒定，与0.5%~1.8%（质量百分比）的稀硫酸按一定比例混合( 固液比为1:10)，121℃下蒸煮90~150min。蒸煮后过滤，获得水解液，调节水解液pH至中性，备用。
玉米秸秆爆破液的制备方法为：
将玉米秸秆风干后磨碎，水料质量比为25~35%（每100g秸秆添加25~35mL水预浸），搅拌均匀，进行蒸气爆破，蒸汽压力为2Mpa、保压时间2.5min。
本发明所述的酿酒酵母SC-spt1509的筛选方法是：酿酒酵母S23出发菌株经低能氮离子注入诱变后，利用含有木糖的氮基础平板、乙醇平板、筛选出能够耐高糖、高浓度燃料乙醇以及能高效利用木糖的酿酒酵母突变菌株，再通过发酵复筛，筛选出乙醇高产菌株作为下一轮诱变的出发菌株，重复上述步骤直至筛选到目标菌株酿酒酵母SC-spt1509。
本发明菌株的形态学及生理生化学特征如下：
菌落颜色：米白色。
需氧方式：兼性厌氧。
菌落大小：3~6mm。
适宜生长温度：30~40℃。
适宜生长pH：4.5~5.5。
菌落形态：圆形。
本发明所提供的酿酒酵母SC-spt1509诱变方法，具体步骤如下：
(a)、细胞悬浮液制备：将出发菌株酿酒酵母S23制成细胞悬液，调整细胞浓度为106个/毫升。
(b)、低能氮离子注入诱变：取0.1mL的步骤(a)中细胞悬液均匀涂布于无菌平皿上，以无菌风吹干，在10KeV、注入剂量为20×1013ions/cm2至100×1013ions/cm2下对其进行氮离子注入。离子注入完毕后，取出平皿，在无菌环境下用1mL无菌水洗脱，涂布到乙醇平板培养基上；在35~45℃下倒置培养2~3d。
(c)、含有木糖的氮基础平板初筛：将步骤(b)筛选到的能生长良好的菌株挑接至含有木糖的氮基础平板上，在35~45℃下倒置培养2~3d，筛选菌株。
(d)、发酵复筛：将步骤(c)筛选出的酿酒酵母菌接入斜面培养基，在35~45℃下培养2~3d，取斜面培养物接入种子培养基在35~40℃下扩培6-10h。取种子液接入发酵培养基，接种量6-12%(v/v)，250mL摇瓶装液量40-70mL，发酵温度35~40℃，发酵培养时间30~50 h后测定发酵液中乙醇含量，筛选出酒精含量最高的酿酒酵母作为下一轮诱变筛选的出发菌株，重复上述步骤直至筛选到目标菌株，即酿酒酵母SC-spt1509。
在上述筛选方法中：步骤(b)所采用的乙醇平板培养基包含如下质量百分数的组分：碳源3%~6%、氮源4.0%~6.0%、无机盐0.02%~0.08%、乙醇5%~10%、琼脂1.0%~1.5%，其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖；所述氮源为胰蛋白胨、鱼粉蛋白胨、酵母膏中的一种或几种的混合；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合。
步骤(c)所采用的含有木糖的氮基础平板培养基包含如下质量百分数的组分：碳源3%~6%、氮源4.0%~6.0%、无机盐0.02%~0.08%、琼脂1.0%~1.5%，其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为木糖；所述氮源为胰蛋白胨、鱼粉蛋白胨、酵母膏中的一种或几种的混合；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合。
步骤(d)所采用的斜面培养基包含如下质量百分数的组分：碳源3%~6%、氮源4.0%~6.0%、无机盐0.02%~0.08%、琼脂1.0%~1.5%，其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖和木糖中的一种；所述氮源为胰蛋白胨、鱼粉蛋白胨、酵母膏中的一种或几种的混合；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合。
在上述筛选方法中：步骤(d)所采用的种子培养基包含如下质量百分数的组分：碳源4%~8%、氮源1%~4%、无机盐0.04%~0.1%，其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖和木糖两种的混合；所述氮源为硫酸铵、磷酸氢二铵、酵母膏和尿素中的一种或几种的混合；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、磷酸盐中的一种或几种的混合。
在上述筛选方法中：步骤(d)所采用的发酵培养基包含如下质量百分数的组分：碳源15%~25%、氮源1%~4%、无机盐0.04%~0.1%，其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖、玉米秸秆水解液和玉米秸秆爆破液的一种或几种的混合；所述氮源为鱼粉蛋白胨、玉米浆、酵母膏和尿素中的一种或几种的混合；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、磷酸盐中的一种或几种的混合。
本发明的有益效果在于：
本发明采用低能氮离子注入诱变酿酒酵母S23出发菌株，利用乙醇平板、含有木糖的氮基础平板筛选出能够耐乙醇并且能够利用木糖的酿酒酵母菌株，再通过发酵复筛，筛选出高产菌株作为下一轮诱变的出发菌株，重复上述步骤直至筛选到目标菌株，即酿酒酵母SC-spt1509。该菌能有效利用廉价的玉米秸秆发酵产燃料乙醇，糖醇转化率高。用该菌株分别以玉米秸秆水解液和玉米秸秆爆破液为原料发酵产燃料乙醇，发现玉米秸秆爆破液相较于水解液，更容易被利用。在5L发酵罐中，木糖直接利用率达到65%以上，比原始出发菌发酵产乙醇提高了46.66%，具有重大的社会意义和经济价值。
本发明中的酿酒酵母以玉米秸秆为发酵原料，相较于目前以玉米、小麦、薯类粮食作物原料，有着成本低廉的经济优势。从保护环境和可持续发展的角度，利用玉米秸秆发酵生产乙醇，能更大限度的利用资源，符合低碳生产的要求。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
本实施例说明将酿酒酵母进行低能氮离子注入诱变筛选的方法。
进行第一步低能氮离子注入诱变筛选的具体步骤如下：
(a)、细胞悬浮液制备：将出发菌株酿酒酵母S23制成细胞悬液，调整细胞浓度为106个/毫升。
(b)、低能氮离子注入诱变：取0.1mL的步骤(a)中细胞悬液均匀涂布于无菌平皿上，以无菌风吹干，在10KeV、注入剂量为20×1013ions/cm2至100×1013ions/cm2下对其进行氮离子注入。离子注入完毕后，取出平皿，在无菌环境下用1mL无菌水洗脱，涂布到乙醇平板培养基上；在37℃下倒置培养2d。
(c)、含有木糖的氮基础平板初筛：将步骤(b)筛选到的能生长良好的菌株挑接至含有木糖的氮基础平板上，在37℃下倒置培养2d，筛选菌株。
(d)、发酵复筛：将步骤(c)筛选出的酿酒酵母菌接入斜面培养基，在37℃下培养2d，取斜面培养物接入种子培养基在37℃下扩培8h。取种子液接入发酵培养基，接种量10%(v/v)，250mL摇瓶装液量60mL，发酵温度37℃，发酵培养时间50 h后测定发酵液中乙醇含量，筛选出酒精含量最高的酿酒酵母作为下一轮诱变筛选的出发菌株，重复上述步骤直至筛选到目标菌株，即酿酒酵母SC-spt1509。
在上述筛选方法中：步骤(b)所采用的乙醇平板培养基包含如下质量百分数的组分：葡萄糖4%、胰蛋白胨2.5%、酵母膏2.5%、硫酸镁0.01%、磷酸氢二钾0.02%、乙醇8%、琼脂1.5%，其余为水，pH 5.5；步骤(c)所采用的含有木糖的氮基础平板培养基包含如下质量百分数的组分：木糖4%、胰蛋白胨2.5%、酵母膏2.5%、硫酸镁0.01%、磷酸氢二甲0.02%、、琼脂1.5%，其余为水，pH 5.5。
在上述筛选方法中：步骤(d)所采用的斜面培养基包含如下质量百分数的组分：葡萄糖4%、胰蛋白胨2.5%、酵母膏2.5%、硫酸镁0.01%、磷酸氢二钾0.02%、琼脂1.5%，其余为水，pH 5.5。
在上述筛选方法中：步骤(d)所采用的种子培养基包含如下质量百分数的组分：葡萄糖2%、木糖4%、硫酸铵1%、酵母膏1%、硫酸镁0.02%、磷酸氢二钾0.03%，pH 5.0~6.0。
在上述筛选方法中：步骤(d)所采用的发酵培养基包含如下质量百分数的组分：葡萄糖10%、玉米秸秆水解液15%、玉米浆1%、尿素0.9%、酵母膏0.1%、硫酸镁0.02%、磷酸氢二钾0.03%，其余为水，pH 5.5。
发酵结束后检测各菌株产乙醇能力如表1所示：
表1
| 菌号 | 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)出发菌株S23 | 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509 |
| 乙醇含量(mL/L) | 60 | 120 |
经过筛选获得的突变株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509在发酵过程中乙醇产量明显高于出发菌株。
实施例2
本实施例说明酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509的遗传稳定性。传代发酵试验结果如表2所示：
表2酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509的遗传稳定性
| 传代次数 | 乙醇含量(mL/L) |
| 1 | 120 |
| 2 | 123 |
| 3 | 118 |
| 4 | 117 |
| 5 | 113 |
从遗传稳定性实验结果可知，经过5次连续传代，突变株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509发酵产乙醇产量较稳定，具有很好的传代稳定性，可作为进一步研究和开发的生产菌株。
实施例3
本实施例说明突变株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509发酵产乙醇。
本实施例所述的培养基配方（%为质量百分比）：
平板基本培养基：葡萄糖5%，胰蛋白胨2%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，琼脂1.5%，其余为水，pH5.5。
斜面培养基：葡萄糖5%，胰蛋白胨2%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，琼脂1.5%，其余为水，pH5.5。
种子培养基：葡萄糖3.0%，木糖2.0%，硫酸铵1%，酵母膏1.0%，磷酸氢二铵0.02%，七水合硫酸镁0.05%，其余为水，pH5.5。其中葡萄糖0.05MPa分消30min，其余营养盐成分0.1MPa分消40min。
发酵培养基：葡萄糖10%，玉米秸秆水解液15%，玉米浆1.5%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，其余为水，pH 5.5。其中玉米秸秆水解液是按如下方法制备的：
将玉米秸秆风干后磨碎，于75℃烘箱中烘一昼夜至水分含量恒定, 与1.0%的稀硫酸按一定比例混合( 固液比为1:10) ，121℃下蒸煮120min。蒸煮后过滤，获得水解液，调节水解液pH至中性，备用。
将筛选到得突变株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509接种至平板基本培养基上于37℃条件下倒置培养60h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度37℃，培养时间24h。将斜面培养物接种到种子培养基中，培养温度37℃，250mL摇瓶瓶装液量30mL，在100rpm摇床转速下培养时间10h；将种子液接种到发酵培养基中，接种量10%(v/v)，发酵温度37℃，250mL摇瓶装液量90mL，在100rpm摇床转速下发酵培养48h后检测发酵液中酒精含量达到了118mL/L，比同等培养条件下的原始出发菌株发酵提高了31.11%。
实施例4
本实施例说明突变株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509发酵产乙醇。
本实施例所述的培养基配方（%为质量百分比）：
平板基本培养基：葡萄糖5%，胰蛋白胨2%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，，琼脂1.5%，其余为水，pH5.5。
斜面培养基：葡萄糖5%，胰蛋白胨2%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，琼脂1.5%，其余为水，pH5.5。
种子培养基：葡萄糖3.0%，木糖2.0%，硫酸铵1%，酵母膏1.0%，磷酸氢二铵0.02%，七水合硫酸镁0.05%，其余为水，pH5.5。其中葡萄糖和木糖0.05MPa分消30min，其余营养盐成分0.1MPa分消40min。
发酵培养基：葡萄糖10%，玉米秸秆爆破液15%，玉米浆1.5%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，其余为水，pH 5.5。其中玉米秸秆爆破液是按如下方法制备的：
将玉米秸秆风干后磨碎，水料质量比为30%（每100g秸秆添加30mL水预浸），搅拌均匀，进行蒸气爆破，蒸汽压力为2Mpa、保压时间2.5min。
将筛选到得突变株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)SC-spt1509接种至平板基本培养基上于37℃条件下倒置培养60h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度37℃，培养时间24h。将斜面培养物接种到种子培养基中，培养温度37℃，250mL摇瓶瓶装液量30mL，在150rpm摇床转速下培养时间10h；将种子液接种到发酵培养基中，接种量10%(v/v)，发酵温度37℃，250mL摇瓶装液量90mL，在100rpm摇床转速下发酵培养48h后检测发酵液中酒精含量达到了125mL/L，比同等培养条件下的原始出发菌株发酵提高了38.88%。
实施例5
本实施例说明突变株酿酒酵母SC-spt1509在5L发酵罐中发酵产酒精。
平板基本培养基：葡萄糖5%，胰蛋白胨2%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，，琼脂1.5%，其余为水，pH5.5。
斜面培养基：葡萄糖5%，胰蛋白胨2%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，，琼脂1.5%，其余为水，pH5.5。
种子培养基：葡萄糖3.0%，木糖2.0%，硫酸铵1%，酵母膏1.0%，磷酸氢二铵0.02%，七水合硫酸镁0.05%，其余为水，pH5.5。其中葡萄糖0.05MPa分消30min，其余营养盐成分0.1MPa分消40min。
发酵培养基：葡萄糖10%，玉米秸秆爆破液15%，玉米浆1.5%，酵母膏2%，七水合硫酸镁0.05%，其余为水，pH 5.5。
将筛选到得突变株酿酒酵母SC-spt1509接种至平板基本培养基上于37℃条件下倒置培养60h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度37℃，培养时间24h。将斜面培养物接种到种子培养基中，培养温度37℃，250mL摇瓶瓶装液量30mL，在100rpm摇床转速下培养时间10h；将种子液接种到装有3L发酵培养基的5L发酵罐中，接种量10%(v/v)，发酵温度37℃，250mL摇瓶装液量90mL，发酵罐搅拌转速200rpm，48~60h无氧发酵培养后检测发酵液中酒精含量达到了132mL/L，比同等培养条件下的原始出发菌株发酵提高了46.66%。
发酵液中酒精含量的检测采用如下方法：
采用气象色谱法测定酒精含量，仪器为GC112A；检测器为FID；使用的是毛细管柱AC-20。参数包括：N280mL/min；空气140mL/min；氢气：40mL/min；尾吹：60mL/min检测条件为：进样口温度为190℃；检测器温度为230℃ 进样量2μL。
Claims (7)
1.一株酿酒酵母，其分类命名为酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae ) SC-spt1509，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO: M 2014316。
2.权利要求1所述的酿酒酵母在发酵生产燃料乙醇中的应用。
3.根据权利要求2所述的酿酒酵母在发酵生产燃料乙醇中的应用，其特征在于包括如下步骤：
1)、平板培养：将酿酒酵母SC-spt1509接种至平板基本培养基上培养，培养温度为35~40℃，培养时间为2~3 d；
2)、斜面培养：将步骤1)平板培养的酿酒酵母SC-spt1509接种至斜面培养基培养，培养温度为35~40℃，培养时间1d；
3)、种子培养：将步骤2)中的酿酒酵母SC-spt1509的斜面培养物接种至种子培养基中培养，培养温度为35~40℃，培养时间8~12h；
4)、发酵培养：将步骤3)中的种子培养液接种至发酵培养基中，接种量6-12%(v/v)，发酵温度35~40℃，发酵培养时间30~50 h。
4.根据权利要求3所述的酿酒酵母在发酵生产燃料乙醇中的应用，其特征在于：所述步骤1)中平板基本培养基包含如下质量百分数的组分：碳源3%~6%、氮源4.0%~6.0%、无机盐0.02%~0.08%、琼脂1.0%~1.5%、其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖和木糖中的至少一种；所述氮源为胰蛋白胨、鱼粉蛋白胨、酵母膏中的至少一种；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的至少一种。
5.根据权利要求3所述的酿酒酵母在发酵生产燃料乙醇中的应用，其特征在于：所述步骤2)中的斜面培养基包含如下质量百分数的组分：碳源3%~6%、氮源4.0%~6.0%、无机盐0.02%~0.08%、琼脂1.5%~2.0%、其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖和木糖中的至少一种；所述氮源为胰蛋白胨、鱼粉蛋白胨、酵母膏、尿素中的至少一种；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的至少一种。
6.根据权利要求3所述的酿酒酵母在发酵生产燃料乙醇中的应用，其特征在于：所述步骤3)中的种子培养基包含如下质量百分数的组分：碳源4%~8%、氮源1%~4%、无机盐0.04%~0.1%、其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖和木糖两种的混合；所述氮源为硫酸铵、磷酸氢二铵、酵母膏和尿素中的至少一种；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、磷酸盐中的至少一种。
7.根据权利要求3所述的酿酒酵母在发酵生产燃料乙醇中的应用，其特征在于：所述步骤4)中的发酵培养基包含如下质量百分数的组分：碳源15%~25%、氮源1%~4%、无机盐0.04%~0.1%，其余为水，pH 5.0~6.0；其中所述碳源为葡萄糖、玉米秸秆水解液和玉米秸秆爆破液中的至少一种；所述氮源为鱼粉蛋白胨、玉米浆、酵母膏和尿素中的至少一种；所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐、磷酸盐中的至少一种。
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| CN103820346B (zh) * | 2014-03-12 | 2016-01-13 | 南京工业大学 | 一株酿酒酵母及其在发酵产乙醇中的应用 |
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2014
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