CN104271725A - 单位剂量形式的过水解酶系统 - Google Patents

Abstract

本发明描述了涉及单位剂量形式的过水解酶系统的组合物和方法，以用于诸如衣物和盘碟清洗的清洁应用。在清洁应用中，用于递送过水解酶系统的单位剂量包装件，所述过水解酶系统包含过水解酶组分、酰基底物组分和过氧化物源组分，所述包装件包括：至少部分地由水溶性材料界定并且包含过水解酶系统的第一组分的第一隔室；至少部分地由水溶性材料界定并且包含过水解酶系统的第二组分和第三组分的第二隔室；其中，第一隔室的第一组分与第二隔室的第二和第三组分在储存期间被分离开以防止过酸的形成，并且在含水溶液中溶解时，第一隔室和第二隔室同时或相继溶解，以允许过水解酶系统的第一、第二和第三组分接触，从而生成过酸。

Description

单位剂量形式的过水解酶系统

优先权

本专利申请要求2012年4月30日提交的第61/640,614号美国临时专利申请的优先权，该临时专利申请在此以全文引用的方式并入。

技术领域

本发明的组合物和方法涉及单位剂量形式的过水解酶系统，其用于清洗应用，如衣物清洗和盘碟清洗。

背景技术

过水解酶是能够催化过水解反应的酶，所述反应导致由羧酸酯(酰基)底物和过氧化物源产生过酸。尽管很多水解酶能够具有本底水平的过水解活性，但只有少数活跃的过水解酶得到认定。这些酶优先于水解作用进行过水解，使它们很适合用于产生旨在清洗、漂白和消毒应用的过酸。

利用过水解酶系统在日用清洁用品中生成过酸的一大难点在于，需要以适于存储的稳定形式提供所述系统的各组分，即过水解酶、酰基底物及过氧源，同时还要便于消费者合并所述系统的各组分以引起过酸产生。

本发明的组合物和方法解决了储存及合并过水解酶系统各组分的问题，并进一步解决了将过水解酶系统与常规衣物及盘碟清洗洗涤剂合并的问题。

发明内容

在以下带编号的段落中陈述了本发明组合物和方法的各方面和实施例：

1.一方面，本发明提供了在清洁应用中递送过水解酶系统的单位剂量包装件，所述过水解酶系统包含过水解酶组分、酰基底物组分及过氧化物源组分，所述包装件包括：至少部分地由水溶性材料界定并且包含所述过水解酶系统的第一组分的第一隔室；至少部分地由水溶性材料界定并且包含所述过水解酶系统的第二组分和第三组分的第二隔室；其中第一隔室中的第一组分与第二隔室中的第二和第三组分在储存期间被分离以防止过酸的形成，并且其中在含水溶液中溶解时，第一隔室和第二隔室同时或相继溶解，以允许过水解酶系统的第一、第二及第三组分接触，从而生成过酸。

2.在第1段单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为过水解酶，第二组分为酰基底物，并且第三组分为过氧化物源。

3.在第1段单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为酰基底物，第二组分为过水解酶，并且第三组分为过氧化物源。

4.在第1段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为过氧化物源，第二组分为酰基底物，并且第三组分为过水解酶。

5.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一隔室中附加提供含水量很低、无水或非混合形式的衣物或盘碟清洗洗涤剂。

6.在第2段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为以液体或固体形式提供的过水解酶，第二组分为以无水液体形式提供的酰基底物，并且第三组分为以固体形式提供的过氧化物源。

7.在第3段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为以无水液体形式提供的酰基底物，第二组分为以固体或无水液体形式提供的过水解酶，并且第三组分为以固体形式提供的过氧化物源。

8.在第4段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为以固体形式提供的过氧化物源，第二组分为以无水液体形式提供的酰基底物，并且第三组分为以固体或无水液体形式提供的过水解酶。

9.在第5-8段所述单位剂量包装件的一些实施例中，衣物或盘碟清洗洗涤剂是以非混合形式提供的，所述非混合形式选自固体、凝胶、糊剂或蜡。

10.在第5-8段所述单位剂量包装件的一些实施例中，衣物或盘碟清洗洗涤剂作为含水量小于约10％的极低含水液体提供。

11.在第5-8段所述单位剂量包装件的一些实施例中，衣物或盘碟清洗洗涤剂是无水的。

12.在第1段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第二隔室中附加提供了极低含水、无水或非混合形式的衣物或盘碟清洗洗涤剂。

13.在第12段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为以液体或固体形式提供的过水解酶，第二组分为以无水形式提供的酰基底物，并且第三组分为以固体形式提供的过氧化物源。

14.在第12段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为以液体形式提供的酰基底物，第二组分为以固体或无水液体形式提供的过水解酶，并且第三组分为以固体形式提供的过氧化物源。

15.在第12段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一组分为以固体或液体形式提供的过氧化物源，第二组分为以无水液体形式提供的酰基底物，并且第三组分为以固体或无水液体形式提供的过水解酶。

16.在第12-15段所述单位剂量包装件的一些实施例中，衣物或盘碟清洗洗涤剂是以非混合形式提供的，所述非混合形式选自固体、凝胶、糊剂或蜡。

17.在第12-15段所述单位剂量包装件的一些实施例中，衣物或盘碟清洗洗涤剂作为含水量小于约10％的极低含水液体提供。

18.在第12-15段所述单位剂量包装件的一些实施例中，衣物或盘碟清洗洗涤剂是无水的。

19.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一隔室完全由水溶性材料界定。

20.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第二隔室完全由水溶性材料界定。

21.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一隔室为界定第二隔室的水溶性材料。

22.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第二隔室为至少部分地界定第一隔室的水溶性材料。

23.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第一隔室为施加于水溶性材料的膜，所述水溶性材料界定第二隔室。

24.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中，第二隔室为施加于水溶性材料的膜，所述水溶性材料界定第一隔室。

25.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中，还包括附加的隔室。

26.在第25段所述单位剂量包装件的一些实施例中，所述附加的隔室包含衣物洗涤剂组合物、盘碟清洗洗涤剂组合物、织物柔软剂或清洗剂。

27.在上述任一段所述单位剂量包装件的一些实施例中(如适合)，过氧化物源组分为氧化酶及氧化酶的底物，其中氧化酶对底物的活性作用生成过氧化物。

28.在第27段所述的任一单位剂量包装件的一些实施例中，所述氧化酶与所述氧化酶的底物存在于不同的隔室中。

29.另一方面，提供于了含有水溶性小袋和洗涤剂组合物的单位剂量包装件，所述小袋至少包括第一隔室和第二隔室，所述洗涤剂组合物包含：(a)约5重量％至约80重量％的表面活性剂；(b)约1重量％至约15重量％的无水溶剂；(c)小于10重量％的水；及(d)过水解酶系统，其包含：(i)过水解酶；(ii)酰基底物，及(iii)过氧化物源；其中，通过存在于所述小袋的不同隔室中，选自(i)、(ii)或(iii)中的至少一种组分与选自(i)、(ii)或(iii)中的至少一种其他组分分离。

30.在一些实施例中，第29段所述的单位剂量包装件包括至少第一隔室、第二隔室和第三隔室，其中通过存在于所述小袋的不同隔室中，选自(i)、(ii)或(iii)中的每一组分与每一其他组分分离。

31.在上述第29或第30段所述的单位剂量包装件的一些实施例中，所述洗涤剂组合物还包含选自螯合剂、聚合物、增白剂、香料及加工助剂的附加组分。

32.在上述第29-31段所述的单位剂量包装件的一些实施例中，所述洗涤剂组合物除了包含过水解酶，还包含一种或多种附加的酶。

33.在上述第29-32段所述的单位剂量包装件的一些实施例中，所述表面活性剂是阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂或它们的组合。

34.另一方面，提供了包括水溶性小袋和洗涤剂组合物的单位剂量包装件，所述小袋至少包括第一隔室和第二隔室，所述洗涤剂组合物包含：(a)无磷助洗剂；(b)螯合剂；(c)过水解酶系统，其含有过水解酶、酰基底物及过氧化物源；其中所述过水解酶系统的至少两种组分存在于所述小袋的不同隔室中。

35.在第34段所述的单位剂量包装件的一些实施例中，所述洗涤剂组合物还包含选自蛋白酶和α-淀粉酶的清洁酶。

36.在一些实施例中，第34或第35段所述的单位剂量包装件还包含漂洗助剂。

37.另一方面，提供利用上述任一段单位剂量包装件清洗衣物、盘碟、厕所、水槽、车道、装饰物及其他表面的方法。

在说明书中，本发明的组分和方法的这些和其他方面以及实施例将更加显而易见。

附图说明

图1示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括至少部分地被水溶性材料界定的单一隔室。

图2示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括单一隔室，其中过水解酶系统的组分被悬浮或分散在水溶性材料中。

图3示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括两个隔室，其中在第一隔室中提供了过水解酶，在第二隔室中提供了酰基底物及过氧化物源。

图4示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括两个隔室，其中在第一隔室中提供了酰基底物，在第二隔室中提供了过水解酶及过氧化物源。

图5示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括两个隔室，其中在第一隔室中提供了过氧化物源，在第二隔室中提供了酰基底物及过水解酶。

图6示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括两个隔室，其中一个隔室含有水溶性材料中悬浮或分散的过水解酶系统的组分，而另一隔室至少部分地被水溶性材料界定。

图7A示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括两个隔室，其中一个隔室至少部分地被水溶性材料界定，而第二隔室为水溶性材料，其中过水解酶系统的组分被悬浮。

图7B示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括两个隔室，其中一个隔室至少部分地被水溶性材料界定，而第二隔室为施加于水溶性材料的膜。

图8示出了单位剂量包装件的一个实施例，其中，在分开的隔室中提供了过水解酶、酰基底物及过氧化物源。

图9示出了单位剂量包装件的一个实施例，其中，过水解酶系统的组分被提供在三个分开的隔室的每一个中，其中至少一个由水溶性材料形成并且过水解酶系统的组分被悬浮于其中。

图10示出了单位剂量包装件的一个实施例，其中，过水解酶系统的组分被提供在三个分开的隔室的每一个中，其中至少一个隔室是用于限定另一隔室的水溶性材料，并且过水解酶系统的组分被悬浮或分散在水溶性材料中。

图11示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括四个隔室，其中两个至少部分地被水溶性材料界定，并且两个为界定前述隔室的水溶性材料。

图12示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件包括网状或打孔外壳。

图13A-13C示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件具有包括壳体的外壳，所述壳体带有具有多个开口的网状或打孔的面。所述单位剂量包装件的侧视图见图13A和图13B，前视图见图13C。

图14示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件提供有网状或打孔的外壳并附接到延伸的柄部。

图15示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件提供有网状或打孔的外壳并附接到线、绳、链或其他细长的柔性结构。

图16示出了单位剂量包装件的一个实施例，所述单位剂量包装件被封闭在类似于常规泳池氯分配器的壳体内。

具体实施方式

综述

本文所描述的是单位剂量包装件，其被设计以提供用于清洁应用如衣物和盘碟清洗的过水解酶系统。所描述的单位剂量包装件利用水溶性材料来至少部分地限定一个或多个隔室，所述隔室能够储存过水解酶、酰基底物及过氧化物源，并能够防止这些组分在包装件与水接触之前反应。本发明的组合物和方法的这些和其他特点及优势将详细描述。

定义

在详细描述本发明组合物和方法之前，为清楚起见，定义了以下术语。未定义的术语应当被赋予相关领域中使用的它们的通常含义。

如本文所用，“单位剂量”或“单剂量”包装是指一种产品形式，其中用于单一批次处理(如洗涤单一负荷的衣物或盘碟，或者进行单次清洁操作)的酶促漂白系统(即过水解酶、酰基底物及过氧化物源)的所有组分以方便的单一包装件形式提供，其不需要最终用户/消费者从一个或多个较大容器中测量、分配或混合组分。(除了酶促漂白系统的组分，本发明单位剂量包装件还包含洗涤剂组合物、光泽剂、织物柔软剂或其他在洗涤或清洁应用中提供益处的组分。在单个容器(如一箱单位剂量包装件)中，可提供大量的单位剂量包装件，并且不丧失单位剂量形式的目的。

如本文所用，“过水解酶”是指能够催化过水解反应的酶，所述反应在过氧源(如过氧化氢)的存在下导致由羧酸酯(酰基)底物产生过酸。(虽然许多酶执行这一反应的水平较低，但过水解酶却表现出高的过水解：水解比率，通常大于1。

如本文所用，术语“过水解(perhydrolyzation)”、“过水解(perhydrolyze)”或“过水解(perhydrolysis)”是指其中由羧酸酯(酰基)底物和过氧化氢生成过酸的反应。

如本文所用，“有效量的过水解酶”是指在清洁、漂白或消毒应用(包括但不限于衣物洗涤或盘碟洗涤)中产生所期望效果所必需的过水解酶的量。

如本文所用，术语“过酸”是指衍生自羧酸酯(酰基)底物的分子，所述底物已与过氧化氢反应从而形成具有通式RC(＝O)OOH的高反应性产物。这种过酸产物能够将其一个氧原子转移到另一分子，如表面上的污垢或污渍。正是因为该转移氧原子的能力使得过酸例如过氧乙酸能用作清洗剂、漂白剂及消毒剂。

如本文所用，“羧酸酯底物”或“酰基底物”是指包含羧酸酯键的过水解酶底物。包含脂族和/或芳族羧酸和醇的酯可用作使用过水解酶的底物。

如本文所用，术语“过氧化氢源”、“过氧化物源”或“过氧源”是指能够生成过氧化氢的分子。过氧化氢源包括过氧化氢本身，以及自发地、酶促地或化学催化地生成过氧化氢作为反应产物的分子。此类分子包括，如过硼酸盐和过碳酸盐。

如本文所用，短语“过水解与水解比率”及“过水解：水解”是指酶促产生的过酸与酶促产生的酸(如以摩尔为单位)之间的比率，所述酸为在限定条件下和限定时间内，通过过水解酶由酰基底物产生的。WO05/056782A、WO 08/063400A、US2008145353及US2007167344中描述的试验可用来确定酶产生的过酸及酸的量。

如本文所用，术语“酰基”是指具有通式RCO-的有机基团，其通过移除-OH基团衍生自有机酸。酰基的名称结尾通常具有后缀“酰氧基(oyl)”，如，甲酰氧基氯(CH₃CO-Cl)，其为由甲酸(CH₃CO-OH)形成的酰氯。

如本文所用，术语“酰化”是指其中分子的一个取代基被酰基基团所取代的化学转化、或将酰基基团引入分子内的过程。

如本文所用，术语“转移酶”是指催化官能团从一个底物转移至另一个底物的酶。例如，酰基转移酶可将酰基基团从酰基底物转移至过氧化氢底物，以形成过酸。

如本文所用，术语“生成过氧化氢的氧化酶”是指催化涉及分子氧(O₂)作为电子受体的氧化/还原反应的酶。在此类反应中，氧被还原为水(H₂O)或过氧化氢(H₂O₂)。本文中适用的氧化酶是作用于其底物生成过氧化氢(与水相对)的氧化酶。本文中适用的生成过氧化氢的氧化酶和其底物的例子为葡萄糖氧化酶和葡萄糖。可用于生成过氧化氢的其他氧化酶包括醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、氨基酸氧化酶等。在一些实施例中，生成过氧化氢的氧化酶为碳水化合物氧化酶。

如本文所用，术语“纺织物”是指纤维、纱线、织物、衣服和非织物。所述术语涵盖由天然、合成(如，人造的)材料以及多种天然和合成材料的共混物制成的纺织物。纺织物可为未加工或加工过的纤维、纱线、机织或针织织物、非织物和衣服，并且可使用多种材料制备，其中一些在本文中提及。

如本文所用，“纤维素的”纤维、纱线或织物至少部分地由纤维素制成。例子包括棉和非棉纤维素纤维、纱线或织物。纤维素纤维可任选地包含非纤维素纤维。

如本文所用，术语“织物”是指纤维和/或纱线制造的组合件，其具有与其厚度相关的相当大的表面积，以及用于赋予所述组合件有用的机械强度的足够的内聚力。

如本文所用，“水溶性”或“水分散性”材料是一种与水接触后在几分钟内基本溶解的材料。特别是，如果在5分钟内或更短时间内，例如，4分钟或更短时间，3分钟或更短时间，2分钟或更短时间，1分钟或更短时间，30秒或更短时间，或者甚至15秒或更短时间内，1克材料的90％或更多溶解或分散于1升25℃的水中，所述材料就被认定是水溶性的或水分散性的。

如本文所用，“含水介质”或“含水溶液”是指其中的溶剂主要是水(如溶剂为至少50％水、至少60％水、至少70％水、至少80％水，或甚至至少90％水)的溶液和/或悬浮液。含水介质可包含任意数量的溶解或悬浮的组分，包括但不限于表面活性剂、盐、缓冲剂、稳定剂、络合剂、螯合剂、助洗剂、金属离子、附加的酶和底物等。典型的含水介质为衣物和盘碟清洗的洗涤液。材料如纺织品、织物、盘碟、厨具及其他材料也可存在于含水介质中或与含水介质接触。

如本文所用，与液体衣物洗涤剂组合物有关的术语“低含水”，指的是洗涤剂组合物含有约70％或更少的水，如约10％至约50％的水(体积/体积)。低含水洗涤剂组合物的例子为浓缩的重垢型液体(HDL)衣物洗涤剂，如Small&Mighty三重浓缩液体衣物洗涤剂(Sun Products公司)、ARM&2倍浓缩液体衣物洗涤剂(Church&Dwight)、浓缩液体衣物洗涤剂(汉高公司(Henkel))、2倍超浓缩液体衣物洗涤剂(宝洁公司(Procter&Gamble))等。

如本文所用，与液体衣物洗涤剂组合物有关的术语“极低含水”指的是洗涤剂组合物含有约10％或更少的水，如约2％至约10％的水(体积/体积)。极低含水洗涤剂组合物的例子见于：UltraPacks(汉高)、Quantum(利洁时公司(Reckitt Benckise))、CLOROX^TM2 Packs(高乐氏公司((Clorox))、OxiClean Max Force Power Paks(Church&Dwight公司)及Stain Release、ActionPacs和Pods^TM(宝洁公司)。优选的极低含水洗涤剂组合物不溶解本文描述的用于单位剂量包装件的水溶性材料。

如本文所用，“无水介质”(如无水洗涤剂组合物)是指其所含的溶剂基本上不含水(即溶剂为小于10％水、小于5％水、小于3％水、小于2％水，或者甚至小于1％水)的溶液和/或悬浮液。在这种情况下，术语“基本上不含水”是指受试液体中的含水量不足以基本上溶解水溶性包装。基本上不含水通常是指约2％的水或更少(体积/体积)。

如本文所用，在组分以其规定的形式(如无水、极低含水、固体等)“提供”的情况下，这种形式是指组分存在于单位剂量包装件中的最终形式，而不是将其添加至另一组分随后又被添加至单位剂量包装件的形式。

如本文所用，短语“不足以基本上溶解水溶性包装”是指在室温条件下(即25℃)、六个月时间内，受试液体溶解不超过5％的水溶性材料。

如本文所用，与水溶性包装的内容物有关的术语“界定”是指规定的内容物，无论是液体、固体或它们的组合，在物理上被包含在隔室内，所述隔室的至少部分地由水溶性材料限定。在一些情况下，内容物完全被水溶性材料界定，这意味着整个隔室都由水溶性材料限定，和由水溶性材料制成的小袋的情况相同。在一些情况下，内容物仅部分地被水溶性材料界定，这意味着只有隔室的一部分由水溶性材料限定，其余的由不溶于水的材料限定，和被由水溶性材料制成的盖覆盖着的杯子或盘碟的情况相同。

如本文所用，术语“悬浮”和“分散”是指一种组分在另一个中的分布，如固体形式的酰基底物在水溶性材料中的分布。

如本文所用，“非混合”组分是指在同一隔室内，不溶解过水解酶系统的一个或多个上述的固体形式组分的组分。非混合组分的例子有固体或凝胶、糊剂或蜡体衣物洗涤或盘碟洗涤制剂，其可作为固体形式的过水解酶、酯底物和/或过氧化物源存在于同一隔室内。非混合组分也可以不同的相(即有机和含水)来提供。

如本文所用，“冷”水是指温度在冻结至25℃的水。

如本文所用，“温”水是指温度在约26℃至约37℃的水。

如本文所用，“热”水是指温度在约37℃至沸腾的水。

如本文所用，“低”pH值是指pH值小于约7。

如本文所用，“高”pH值是指pH值大于约7。

如本文所用，术语“接触”是指使得物理接触，例如通过将单位剂量包装件放入含水溶液中。

如本文所用，“包装”是指能够以易于操作和运输的形式提供过水解酶、过水解酶的底物和/或过氧化氢源的容器。

如本文所用，化学组分的“固体”形式是指它的粉末、晶体、颗粒、聚集体、糊剂或蜡体形式。

如本文所用，化学组分的“液体”形式是指它的液体、凝胶或浆体形式。

如本文所用，术语“纯化”和“分离”是指从样品和/或材料(如蛋白质、核酸、细胞等)中去除污染物，即从与其自然相关的至少一种组分中去除。例如，这些术语可以指基本上或大体上不含如下组分的材料：所述组分通常伴随所述材料，如同在其自然状态(例如完整的生物系统)发现。

如本文所用，“多肽”是指包含通过肽键联接的氨基酸且被本领域的技术人员辨别为蛋白质的任何组合物。本文使用氨基酸残基的常规单字母代码或三字母代码。术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用以指代任何长度的氨基酸的聚合物。所述聚合物可为直链或支链的，其可包含经修饰的氨基酸，并且其可被非氨基酸隔断。所述术语还涵盖天然改性或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，如与标记组分缀合。所述定义中还包括，例如含有一个或多个氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本领域已知其他修饰形式的多肽。

如本文所用，功能和/或结构类似的蛋白质被视为“相关蛋白质”。在一些实施例中，这些蛋白质衍生自不同的属和/或种，包括生物体类别(如细菌蛋白和真菌蛋白)之间的差异。在附加的实施例中，相关蛋白质由相同的种提供。实际上，不旨在将本文所述的过程、方法和/或组合物限于来自任何特定来源的相关蛋白质。此外，术语“相关蛋白质”涵盖三级结构同源物和一级序列同源物。在另外的实施例中，所述术语涵盖具有免疫交叉反应性的蛋白质。

如本文所用，术语“衍生物”是指这样的蛋白质，其通过将一个或多个氨基酸添加到C端和/或N端、在氨基酸序列中的一个或多个不同位点处置换一个或多个氨基酸、和/或在所述蛋白质的一端或两端或氨基酸序列中的一个或多个位点处缺失一个或多个氨基酸、和/或在所述氨基酸序列中的一个或多个位点处插入一个或多个氨基酸而衍生自蛋白质。蛋白质衍生物的制备优选地通过修饰编码天然蛋白质的DNA序列、将所述DNA序列转化至合适的宿主中以及表达经修饰的DNA序列以形成衍生蛋白质来实现。

相关的(和衍生的)蛋白质包括“变体蛋白质”。在一些实施例中，变体蛋白质不同于亲本蛋白质(如野生型蛋白质)，并且彼此在少量的氨基酸残基处有差异。不同的氨基酸残基的数量可以为一个或多个氨基酸残基，例如1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50或更多个氨基酸残基。在一些方面，相关蛋白质并且特别是变体蛋白质包含至少35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或者甚至99％或更多的氨基酸序列同一性。另外，相关蛋白质或变体蛋白质是指这样的蛋白质，其与另一种相关蛋白质或亲本蛋白质在突出区域的数目方面存在差异。例如，在一些实施例中，变体蛋白质具有1、2、3、4、5或10个不同于亲本蛋白质的对应突出区域。突出区域包括结构特征、保守性区域、表位、域、基序等等。

适于产生本文所述的酶的变体的方法是本领域已知的，包括但不限于点饱和诱变、扫描诱变、插入诱变、随机诱变、定点诱变和定向进化，以及各种其他重组方法。注意，在指定的变体多肽中的特定突变的位置处，所述变体多肽的另外的变体保持所述指定的突变并且在未指定的其他位置处有所差别。

如本文所用，术语“类似序列”是指在蛋白质内提供与所关注蛋白质(即，通常是所关注的原始蛋白质)相似的功能、三级结构和/或保守性残基的序列。例如，在包含α-螺旋或β-片层结构的表位区域中，类似序列中的置换氨基酸优选地保持相同的特定结构。所述术语还指核苷酸序列以及氨基酸序列。在一些实施例中，开发类似序列使得置换氨基酸导致显示类似或改善功能的变体酶。在一些实施例中，所关注蛋白质中的氨基酸的三级结构和/或保守残基位于或接近所关注的区段或片段。因此，在所关注区段或片段包含(例如)α-螺旋或β-片层结构的情况下，置换氨基酸优选地保持该特定结构。

如本文所用，术语“同源蛋白”是指具有与参照蛋白类似的活性和/或结构的蛋白质。意图的是同源物不必是进化相关的。因而，意图的是所述术语涵盖从不同生物体获得的相同、类似或对应的酶(即，就结构和功能而言)。在一些实施例中，希望鉴别具有与参照蛋白类似的四级、三级和/或一级结构的同源物。在一些实施例中，同源蛋白诱导与参照蛋白类似的免疫应答。在一些实施例中，同源蛋白经工程改造而产生具有所需活性的酶。序列之间的同源性程度可用Clustal W以默认参数进行确定(ThompsonJ.D.et al.)(1994)Nucleic Acids Res.22:4673-4680)((Thompson J.D等人，核酸研究，1994，第22卷第4673-4680页)，所述默认参数，即：

例如，PILEUP是测定序列同源性水平的可用程序。PILEUP利用渐进性双序列比对从一组相关序列产生多序列比对。其还可绘出关系树，所述关系树示出了用于产生比对的聚类关系。PILEUP使用Feng和Doolittle的渐进式比对方法(Feng and Doolittle(1987)J.Mol.Evol.35:351-360(Feng和Doolittle(1987)，《分子进化杂志》第35卷，第351-360页))的简化形式。所述方法与Higgins和Sharp描述的方法类似(Higgins and Sharp(1989)CABIOS 5:151-153(Higgins和Sharp，1989年，《计算机在生物科学中的应用》，第5卷第151-153页))。可用的PILEUP参数包括：默认空位权重＝3.00，默认空位长度权重＝0.10，以及加权的末端空位。另一个可用算法的例子为Altschul等人描述的BLAST算法(Altschul et al.(1990)，J.Mol.Biol.215:403-410(Altschul等人，1990年，《分子生物学杂志》，第215卷第403-410页)；以及Karlin et al..(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:5873-5787(Karlin等人，1993年，《美国国家科学院院刊》，第90卷第5873-5787页))。一种特别可用的BLAST程序为WU-BLAST-2程序(参见Altschul et al.(1996)Meth.Enzymol.266:460-480(Altschul等人.(1996)《酶学方法》第266卷，第460-480页))。参数“W”、“T”和“X”决定比对的灵敏度和速度。BLAST程序使用默认值：字长(W)11、BLOSUM62记分矩阵(参见Henikoff and Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915(Henikoff和Henikoff(1989)，《美国国家科学院院刊》89:10915))比对(B)50次、期望值(E)10、M'5、N'-4和两条链的比较。

如本文所用，在至少两条核酸或多肽的情况下，短语“基本上相似”和“基本上相同”通常意味着多核苷酸或多肽包含的序列与参考(即野生型)序列用带有默认参数的CLUSTAL W比较，其至少具有约70％的同一性，较优选的是至少约80％的同一性，更为优选的是至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％，或甚至至少约99％的序列同一性。

如本文所用，“野生型”和“天然”蛋白质是存在于自然界中的那些蛋白质。术语“野生型序列”和“野生型基因”在本文中互换使用，是指天然的或天然存在于宿主细胞内的序列。在一些实施例中，野生型序列是指为蛋白质工程项目的起始点的所关注序列。编码天然存在的蛋白质的基因可依据本领域的技术人员已知的一般方法获得。所述方法通常包括：合成具有编码所关注蛋白质的区域的推定序列的标记探针、由表达所述蛋白质的生物体制备基因组文库，以及通过杂交至探针对所述文库进行筛选以获得所关注基因。然后对正向杂交克隆进行映射和测序。

如本文所用，有关纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶等的术语“酸”，是指酶的最适pH。酸酶具有小于7的最适pH值。

如本文所用，单数冠词“一个”、“一种”和“所述”涵盖多个指代物，除非上下文明确指明并非如此。本文引用的全部参考文献均以其全文以引用的方式并入本文。

除非另外指明，否则如下缩写/首字母缩写具有如下含义：

cDNA              互补DNA

DNA               脱氧核糖核酸

EC                酶学委员会

kDa               千道尔顿

MW                分子量

SDS-PAGE          十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳

w/v               重量/体积

w/w               重量/重量

v/v               体积/体积

wt％              重量百分比

C                 摄氏度

H₂O               水

H₂O₂              过氧化氢

dH₂O或DI          去离子水

dIH₂O             Milli-Q过滤的去离子水

g或gm             克

μg               微克

mg                毫克

kg                千克

μL和μl          微升

mL和ml            毫升

mm                毫米

μm               微米

M                 摩尔

mM                毫摩尔

μM               微摩尔

U                 单位

ppm               百万分之一

sec和"            秒

min和'            分钟

h                 小时

ETOH              乙醇

eq.               当量

N                 当量浓度

CI                色度指数

CAS               化学文摘社

PGDA              丙二醇二乙酸酯

WT％或wt％        重量百分比

STPP              三聚磷酸钠

HEDP              乙烷1-羟基-1,1-二膦酸

   α-淀粉酶，可得自诺和诺德公司(Novo Nordisk A/S)

     蛋白酶，可得自诺和诺德公司

FN3               蛋白酶，可得自美国丹尼斯克公司(Danisco US Inc)

    α-淀粉酶，可得自诺和诺德公司

   α-淀粉酶，可得自诺和诺德公司

          脂肪酶，可得自诺和诺德公司

CELLUCLEAN^TM       纤维素酶，可得自诺和诺德公司

  甘露聚糖酶，可得自诺和诺德公司

   纤维素酶，可得自诺和诺德公司

SLF18             可得自巴斯夫公司(BASF)

ACNI              烷基封端的非离子表面活性剂

C₁₄AO             十四烷基二甲基氧化胺

C₁₆AO             十六烷基二甲基氧化胺

    α-淀粉酶，可得自诺和诺德公司

DPM               二丙二醇甲基醚

DPG               二丙二醇

METHOCEL^TM         纤维素增稠剂，可得自陶氏化学公司(Dow Chemica)

LAS               直链烷基苯磺酸盐

AE3S              烷基乙氧基硫酸盐

AE7               醇乙氧基化物，其平均乙氧基化度为7

AE9               醇乙氧基化物，其平均乙氧基化度为9

HSAS              中间支链的伯烷基硫酸盐

NOBS              壬酰氧基苯磺酸钠

TAED              四乙酰乙二胺

DMHP              1,2-二甲基-3-羟基-4(1H)-吡啶酮

S-ACMC            缀合有C.I.活性蓝19的羧甲基纤维素

  去污剂，可得自罗地亚公司(Rhodia)

HEDP              羟乙烷二膦酸盐

NI                非离子表面活性剂

DMDAO             十二烷基二甲基氧化胺

CAPOA             椰油酰胺基丙基二甲基氧化胺

DTPA              二亚乙基三胺五乙酸

MBC-1             5,12-二甲基1-1,5,8,12--四氮杂-双环[6.6.2]十六烷锰(II)氯化物

MBC-2             5,12-二乙基-1,5,8,12--四氮杂-双环[6.6.2]十六烷锰(II)氯化物

MBC-3             5-乙基-12-甲基-1,5,8,12--四氮杂-双环[6.6.2]十六烷锰(II)氯化物

MBC-4             5.12-二丙1-1,5,8,12-四氮杂-双环[6.6.2]十六烷锰(II)氯化物MBC-5:5,12-二苄1-1,5,8,12-四氮杂-双环[6.6.2]十六烷锰(II)氯化物MBC-6:5-正辛基-12-甲基-1,5,8,12-四氮杂-双环[6.6.2]十六烷锰(II)氯化物

MBC-7             二水合5,12-二乙基-1,5,8,12四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)六氟磷酸盐

MBC-8             水合-羟基-5,12-二甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(III)六氟磷酸盐

MBC-9             水合-羟基-5,12-二乙基-1-1,5,8,12四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(III)六氟磷酸盐

MBC-10            二氯-5,12-二乙基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(III)六氟磷酸盐

单位剂量形式过水解酶系统

本文描述的是提供用于清洁应用(如衣物和盘碟清洗)的过水解酶系统的单位剂量包装件。所述单位剂量包装件利用水溶性材料以至少部分地限定一个或多个隔室，所述隔室能够储存过水解酶系统(即过水解酶、酰基底物及过氧化物源)的组分，并防止这些隔室在包装件接触水之前反应。

下面将给出单位剂量包装件的多种实施例，以及用于所述包装件中的组分的详细描述。读者将会理解，本文件的组织旨在易于阅读，并且应在整个文件背景下阅读本文件中某一部分的描述。显而易见，参考一个实施例讨论的特征可与参考另一实施例讨论的特征相结合。相同的参考编号会在不同的图中重复出现，应给予它们与其出现的第一张图中所用相同的含义。

在大多数简单的实施例中，单位剂量包装件10包括至少一个11处的隔室，且11至少部分地被水溶性材料12界定，从而允许释放隔室中的内容物，包括过水解酶系统的组分14、15及16，随后与含水介质13接触，例如，洗衣机、洗碗机或其他容器中的水或洗涤液(图1)。在可替代的实施例中，单位剂量包装件20包括隔室21，且隔室21包含悬浮或分散于水溶性材料22中的过水解酶系统的组分14、15及16，所述水溶性材料22用于在与水13接触后溶解并释放所述组分(图2)。在任一情况下，选取水溶性材料使得其与水接触后在5分钟或更短的时间内，如4分钟或更短时间、3分钟或更短时间、2分钟或更短时间、1分钟或更短时间、30秒或更短时间、或甚至15秒或更短时间基本溶解，从而释放隔室中的内容物。在不与水接触的情况下，水溶性材料应至少保持6个月不变，以防止隔室中的内容物释放出来。

关于过水解酶系统，单个隔室形式需要所述系统的所有三个组分，即过水解酶、酰基底物及过氧化物源，这些组分提供于同一隔室(通常由图1和图2中的14、15及16代表)中。这可通过悬浮固体过水解酶(也可选择颗粒形式)及液体酰基底物中的固体形式过氧化物(如参见US2009311395)或使用固体过水解酶(也可选择颗粒形式)、固体形式过氧化物及固体形式酰基底物来实现。

特别是单位剂量包装件包括所述系统的三种固体形式组分时，其可还包含任意数量的附加非混合组分，包括如固体衣物和/或盘碟洗涤制剂，或者凝胶、糊剂或蜡体衣物和/或盘碟洗涤制剂中常见的任何及所有固体组分。因而，单位剂量包装件可包含常规固体和/或凝胶、糊剂或蜡体洗涤剂制剂的全部组分，外加过水解酶漂白系统。

在大多数实施例中，单位剂量包装件中的隔室完全被水溶性材料界定，所述水溶性材料在含水洗涤液中基本上完全溶解。然而，可以预见的是，隔室可被水溶性材料部分地界定并且被水不溶性材料部分地界定。可溶性材料的溶解将允许隔室内容物的释放，而不溶性材料会保留在洗涤液中以备后期处理或回收。

在一些实施例中，为了允许分离过水解酶系统中的组分14、15及16，单位剂量包装件30包括两个单独的隔室31和32(图3)。在两隔室单位剂量包装件的一些实施例中，过水解酶14提供于第一隔室31中，酰基底物15和过氧化物源16提供于第二隔室32中。如本文所述，过水解酶可以液体或固体形式提供。如本文所述，酰基底物和过氧化物源可在低pH值的无水溶液中提供。或者，酰基底物可为液体，过氧化物源可以固体形式提供，或酰基底物和过氧化物源两者均以固体形式提供。

在包含固体形式过水解酶的两隔室剂量包装件中，含有过水解酶的隔室可还包含任意数量的附加非混合组分，包括如固体衣物和/或盘碟洗涤制剂，或凝胶、糊剂或蜡体衣物和/或盘碟洗涤制剂中常见的任何及所有固体组分。在包含液体形式过水解酶的两隔室剂量包装件中，含有过水解酶的隔室可还包含极低含水的液体衣物和/或盘碟洗涤制剂。

在包含固体形式酰基底物和过氧化物源的两隔室剂量包装件中，含有这些组分的隔室可还包含任意数量的附加非混合组分，包括如固体衣物和/或盘碟洗涤制剂，或凝胶、糊剂或蜡体衣物和/或盘碟洗涤制剂中常见的任何及所有固体组分。

在两隔室单位剂量包装件40的一些实施例中，酰基底物15提供于第一隔室41中，过水解酶14和过氧化物源16提供于第二隔室42中(图4)。酰基底物可为液体，或以无水溶液形式提供。或者，酰基底物可为固体。过水解酶可以液体或固体形式提供，而且过氧化物源可以固体形式提供。

在包含固体形式酰基底物的两隔室剂量包装件中，含有酰基底物的隔室可还包含任意数量的附加非混合组分，包括如固体衣物和/或盘碟洗涤制剂，或凝胶、糊剂或蜡体衣物和/或盘碟洗涤制剂中常见的任何及所有固体组分。

在包含固体形式过水解酶和过氧化物源的两隔室剂量包装件中，含有这些组分的隔室可还包含任意数量的附加非混合组分，包括如固体衣物和/或盘碟洗涤制剂，或凝胶、糊剂或蜡体衣物和/或盘碟洗涤制剂中常见的任何及所有固体组分。

在两隔室剂量包装件包含第一隔室中的液体形式酰基底物，以及第二隔室中的固体或液体形式过水解酶和固体或液体形式过氧化物源的情况下，第一或第二隔室可还包含极低含水洗涤剂组合物。

在两隔室单位剂量包装件50的一些实施例中，过氧化物源16提供于第一隔室51中，酰基底物和过水解酶提供于第二隔室52中。过氧化物源可为液体或固体。酰基底物可为液体，而过水解酶可以固体形式提供。或者，酰基底物和过水解酶可提供于无水溶液中，或酰基底物可为固体，过水解酶可以液体形式提供。

在包含固体形式过氧化物源的两隔室剂量包装件中，含有过氧化物源的隔室可还包含任意数量的附加非混合组分，包括如固体衣物和/或盘碟洗涤制剂，或凝胶、糊剂或蜡体衣物和/或盘碟洗涤制剂中常见的任何及所有固体组分。

在包含固体形式过水解酶和酰基底物的两隔室剂量包装件中，含有这些组分的隔室可还包含任意数量的附加非混合组分，包括如固体衣物和/或盘碟洗涤制剂，或凝胶、糊剂或蜡体衣物和/或盘碟洗涤制剂中常见的任何及所有固体组分。在包含固体形式过水解酶和液体形式酰基底物的两隔室剂量包装件中，含有过水解酶和底物的隔室可还包含极低含水的衣物和/或盘碟洗涤制剂。

在两隔室剂量包装件包含第一隔室中的固体或液体形式过氧化物源，以及第二隔室中的液体形式过水解酶和酰基底物的情况下，第二隔室可还包含极低含水衣物和/或盘碟洗涤制剂。

在两隔室单位剂量包装件60的一些实施例中，一个隔室61包含悬浮或分散于水溶性材料62中的过水解酶系统(未显示)的组分，所述水溶性材料62用于在与水13接触后溶解并释放所述组分，而另一隔室63至少部分地被水溶性材料界定(图6)。在进一步的实施例中，两个隔室均包含悬浮或分散于水溶性材料中的过水解酶系统的组分，而不是具有一个或多个至少部分地被水溶性材料界定(未显示)的隔室。

在两隔室单位剂量包装件70的相关实施例中，一个隔室71至少部分地被水溶性材料79界定，并且第二隔室72可为水溶性材料79，其中过水解酶系统的一个或多个组分被悬浮，用于在与水13接触后溶解并释放所述组分(图7A)。固体形式的过水解酶和/或过氧化物源非常容易悬浮于第二隔室的水溶性材料中。该两隔室单位剂量包装件的实施例具有单隔室包装件的一般外观。

在两隔室单位剂量包装件73的另一相关实施例中，一个隔室71可至少部分地被水溶性材料79界定，且第二隔室78可为施加于水溶性材料79的膜(图7B)。所述膜可采取涂层、设计、标签或标志形式，并可通过喷涂、刷涂、印刷(包括喷墨印刷)等施加。第二隔室的体积一般是小的，但足够容纳固体形式的过水解酶。读者将会理解，上述图7A显示的施加于单位剂量包装件的这种膜，能有效地建立三隔室单位剂量包装件，但其表面上具有单隔室包装件的外观。

在单位剂量包装件80的一些实施例中，过水解酶14、酰基底物15及过氧化物源16分别提供在三个分开的隔室81、82、83的每个中(图8)。三个隔室的排列通常是不关键的。这一排列允许相对于任何组分的固体和液体形式都有最大的灵活性。对于上述排列，固体衣物和/或盘碟洗涤制剂中常见的全部固体组分，均可与固体形式的过水解酶、酰基底物和/或过氧化物源进行合并。

在单位剂量包装件90的一些实施例中，其中三个分开的隔室91、92、93的每个中提供有过水解酶系统(未显示)的组分，并且至少一个隔室92中包含悬浮或溶解于水溶性材料99中的过水解酶系统的组分，所述水溶性材料99用于在与水13接触后溶解并释放所述组分。

在单位剂量包装件100的一些实施例中，其中三个单独的隔室101、102、103的每个中提供有过水解酶系统(未显示)的组分，并且至少一个隔室102为用于限定第二隔室101的水溶性材料109；过水解酶系统的组分可悬浮于水溶性材料中，所述水溶性材料用于在与水13接触后溶解并释放所述组分(图10)。

图11还显示了单位剂量包装件110的另一实施例，所述包装件包括四个隔室111、112、113及114；其中两个至少部分地被水溶性材料113和114界定，两个为界定上述提及隔室111和112的水溶性材料。此构造对单位剂量容器的附加功能有用，例如，包括在第四隔室中的衣物或盘碟洗涤组分，其与过水解酶系统的组分隔离。

在使用两隔室或三隔室包装件的情况下，优选相邻和连接的隔室，以便于操作和使用。这可通过对单个容器包装件形成一道屏障来实现，例如，通过热密封。所述隔室可共用公用屏障，如图8和12所示，或者可具有其自身的水溶性材料屏障，如图3-6、10和11所示。各隔室不需要大小相同，但应使其最优化和最小化，以适合各隔室的内容物。用于制备包装件的水溶性材料可具有一致的厚度，从而使包装件中的各组分在与含水介质接触后能基本上同时释放。或者，水溶性材料的厚度可变化，从而使一个隔室中内容物的释放优先于另一隔室中内容物的释放。不同的隔室也可被不同的水溶性材料界定，以影响各隔室内容物的不同释放率，例如通过对温度或pH值的响应。

不同的隔室可具有不同的大小、形状和排列，从而影响功能或对单位剂量包装件赋予设计。例如，小的圆形、三角形、心形或其他类型的隔室可附接到枕形隔室。隔室的形状也可为公司商标。不同隔室可包含不同的染料，以进一步有助于单位剂量包装件的总体设计和外观。小隔室可堆叠在大隔室之上，或多隔室可以莲座型排列。隔室也可按WO12/003360中所述和/或如Laundry Sheets(英国西萨塞克斯郡的Disolve集团公司(Disolve Group Corp.,West Sussex,UK))所例示的方式加以分隔。

上述实施例预期，用于制作单位剂量包装件的材料会在清洗过程中完全溶解，不留下任何待处理的固体材料。但是，在单位剂量包装件的一些实施例中，可能期望为水溶性包装120提供外壳121，例如，以提供运输及储存期间的保护、防止单个单位剂量包装件在潮湿的环境下粘附在一起、防止最终用户感测到与一些溶解膜相关的粘着性/粘附性、防止香料(如存在)在处理的过程中转移到最终用户手上等(图12)。外壳应为网状或打孔的，以使其包括足够数量的开口122，从而允许水13与可溶性包装件接触，以促进溶解和过水解酶系统组分的释放。网状或打孔外壳可重复使用，例如，最终用户可以打开外壳插入一个新鲜溶解包装，或者制造商可以收集用过的外壳重新进行生产。或者，所述外壳可以由可回收材料制成。网状或打孔外壳也可被涂覆、印刷(包括喷墨印刷)、上漆，或以其他方式包含活性组分，包括过水解酶系统的组分。

示例性密封单位剂量包装件如图13A所示。外壳130包括一个带有网孔或打孔面132(具有多个开口133)的壳体131。外壳保护至少一个单独的隔室136及137(两个均有显示)，所述一个或多个隔室至少部分地被水溶性材料134界定。虽然显示了两隔室，本实施例可用于如上文所描述的一个、两个、三个或更多个隔室中。在一些实施例中，隔室139可部分地被壳体131界定，在这种情况下，水溶性材料134只需要存在于打孔表面132之后(图13B)。显示出可选的第二隔室138，其完全被水溶性材料134界定。单位剂量包装件的侧视图如图13A和13B所示，其前视图如图13C所示。

在一些实施例中，单位剂量包装件140在网状或打孔外壳141中提供，所述外壳141附接到延伸的柄部142，这使得单位剂量包装件在不需要最终用户的手(或其他肢体)接触所述含水介质的情况下可以在桶中或其他容器中进行搅拌，其中所述单位剂量包装件溶解于所述含水介质中(图14)。在一些实施例中，柄部包括挂钩143，这使得单位剂量包装件在溶解时，可以暂停(即挂在)水桶、水槽、马桶水箱或厕缸、洗碗篮、滚筒洗衣机或其他容器的边缘，同时允许使用柄部，任选地进行搅拌。在相关的实施例中，单位剂量包装件150在网状或打孔外壳151中提供，所述外壳151附接到线、绳、链或其他细长柔性结构152，任选地附带连接环153，这使得单位剂量包装件在溶解时，可以系在或悬挂于水桶、水槽、马桶水箱或厕缸、洗碗篮、滚筒洗衣机或其他容器的上方(图15)。在一些实施例中，过水解酶系统用于清洗、漂白或消毒容器自身(如洗衣机或洗碗机)，而在一些实施例中，所述系统被用来生产过酸溶液，以用于漂白、清洗或消毒其他物体，例如，车道、板面、模具覆盖表面、淋浴室、浴缸等。

在一些实施例中，单位剂量包装件160在网状或打孔外壳161中提供，所述外壳161附接到漂浮结构162，作为更大组合件的一部分，这使得单位剂量包装件漂浮在含水液体165的表面上。优选地，通过定期给所述组合件加入新的单位剂量包装件来重复使用单位剂量包装件。该实施例让人联想到游泳池的氯分配器。

在上述任一单位剂量包装件形式的情况下，包装件可包括任意数量的用于提供附加组分的附加隔室，所述附加组分例如表面活性剂、盐类、缓冲剂、稳定剂、络合剂、螯合剂、助洗剂、金属离子、附加酶和底物、织物软化剂、香料、聚合物等。附加隔室可附接到上述提及的任一单位剂量包装件中，并且这种隔室可包含固体、凝胶、糊剂、蜡体或液体形式的完整衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物、预清洗组合物、织物软化剂、防斑添加剂、香料等。通过改变用于形成这些附加包装的水溶性材料，或通过改变这些附加包装的膜的厚度，对单位剂量包装件内所含不同组分的释放顺序进行控制是有可能的，例如，通过对温度或pH值的响应。

在一些实施例中，单位剂量包装件包括如上文所描述的包含在一个、两个或三个隔室内的过水解酶系统，并且至少一个附加隔室包含衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物。用于容纳过水解酶系统组分的水溶性材料应更厚，或是使用与用于容纳衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物的水溶性材料不同的材料，这可使衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物优先释放进洗涤液中，从而使存在于衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物中的表面活性剂和酶，在过水解酶系统组分释放并开始生成过酸之前，开始清洗衣物或盘碟。这种排列会延迟洗涤液中过酸的生成，其中过酸可不利地与衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物的组分反应。

在一些实施例中，单位剂量包装件包括如上文所描述的包含在一个、两个或三个隔室内的过水解酶系统，并且至少一个附加隔室包含衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物，至少一个附加隔室包含在较低pH值下，即在过水解酶系统在洗涤液中已经产生过酸后，很好发挥作用的清洁组分。示例性清洁组分为酸性纤维素酶、酸性淀粉酶、酸性蛋白酶、酸性果胶酸裂解酶等。用于容纳过水解酶系统组分和衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物的水溶性材料更薄，或是使用与用于在低pH值下容纳具有改善性能的清洁组分的水溶性材料不同的材料，这可使衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物及过水解酶系统的组分优先释放，从而使过水解酶系统在具有改善性能的清洁组分在低pH值下释放之前，降低洗涤液的pH值。在一些实施例中，洗涤剂组合物包含诸如酶的组分，通过选取这些组分使其能在洗涤液较低的pH值下发挥作用，而洗涤液较低的pH值是由于过酸的生成和/或过酸水解过程中形成的相应羧酸(如乙酸)造成的。

在一些实施例中，单位剂量包装件包括如上文所描述的包含在一个、两个或三个隔室内的过水解酶系统，并且至少一个附加隔室包含衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物，至少一个附加隔室含有至少一种过氧化氢酶。用于容纳过水解酶系统组分及衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物的水溶性材料更薄，或是使用与用于容纳过氧化氢酶的水溶性材料不同的材料，这可使衣物或盘碟清洗洗涤剂组合物及过水解酶系统的组分优先释放，从而使过氧化氢酶在接近清洗周期末尾进行释放之前，发生过酸的形成及清洗，以破坏残留的过氧化氢。

特别是在网状或打孔壳体中提供单位剂量包装件的情况下，对过酸浓度敏感的指示系统可被包括在壳体上或壳体内，从而使最终用户可以监视过酸的生成，例如，决定何时将洗涤液用于清洁应用。这种实施例对于当单位剂量包装件溶解于桶中进行清洁时尤为有用，例如，车道、板面或其他表面。在一实施例中，指示系统为包含于壳体内的传统pH试纸，其中试纸在水溶性材料溶解之后于壳体内保持固定状态。在其他实施例中，彩色pH值敏感指示器被包括在单位剂量包装件的隔室内，或被包括在单独的水溶性包装中，用于指示过酸的预选量在何时被生成。

过水解酶

过水解酶系统包含在合适酰基底物及过氧化物源存在的条件下能够生成过酸的过水解酶。

在一些实施例中，过水解酶为天然存在的酶。在一些实施例中，过水解酶包含下述氨基酸序列、由下述氨基酸序列组成或基本上由下述氨基酸序列组成：所述氨基酸序列与天然存在的过水解酶的氨基酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至99.5％的同一性。在一些实施例中，过水解酶来自微生物源，例如细菌或真菌。

在一些实施例中，过水解酶是天然存在的分枝杆菌属过水解酶或其变体。示例性酶是从耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)中衍生的。该酶、其酶学性质、其结构及其多种变体和同源物在国际专利申请公开WO05/056782A和WO 08/063400A以及美国专利公开US2008145353和US2007167344中有详细描述，所述专利均以引用的方式并入。

耻垢分枝杆菌过水解酶的氨基酸序列如下所示(SEQ ID NO：1):

MAKRILCFGDSLTWGWVPVEDGAPTERFAPDVRWTGVLAQQLGADFEVIEEGLSARTTNIDDPTDPRLNGASYLPSCLATHLPLDLVIIMLGTNDTKAYFRRTPLDIALGMSVLVTQVLTSAGGVGTTYPAPKVLVVSPPPLAPMPHPWFQLIFEGGEQKTTELARVYSALASFMKVPFFDAGSVISTDGVDGIHFTEANNRDLGVALAEQVRSLL

在一些实施例中，过水解酶包含SEQ ID NO：1示出的氨基酸序列或其变体或同源物、由SEQ ID NO：1示出的氨基酸序列或其变体或同源物组成、或者基本上由SEQ ID NO：1示出的氨基酸序列或其变体或同源物组成。在一些实施例中，所述过水解酶包含下述氨基酸序列、由下述氨基酸序列组成、或基本上由下述氨基酸序列组成：所述氨基酸序列与SEQ IDNO：1示出的氨基酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至99.5％的同一性。

在一些实施例中，所述过水解酶在与SEQ ID NO：1示出的耻垢分枝杆菌过水解酶氨基酸序列中的一个或多个位置等同的一个或多个氨基酸位置处包含一个或多个置换。在一些实施例中，所述过水解酶包含选自下述的任意一种氨基酸置换或氨基酸置换的任意组合：M1、K3、R4、I5、L6、C7、D10、S11、L12、T13、W14、W16、G15、V17、P18、V19、D21、G22、A23、P24、T25、E26、R27、F28、A29、P30、D31、V32、R33、W34、T35、G36、L38、Q40、Q41、D45、L42、G43、A44、F46、E47、V48、I49、E50、E51、G52、L53、S54、A55、R56、T57、T58、N59、I60、D61、D62、P63、T64、D65、P66、R67、L68、N69、G70、A71、S72、Y73、S76、C77、L78、A79、T80、L82、P83、L84、D85、L86、V87、N94、D95、T96、K97、Y99F100、R101、R102、P104、L105、D106、I107、A108、L109、G110、M111、S112、V113、L114、V115、T116、Q117、V118、L119、T120、S121、A122、G124、V125、G126、T127、T128、Y129、P146、P148、W149、F150、I153、F154、I194和F196。

在一些实施例中，所述过水解酶在与SEQ ID NO：1示出的耻垢分枝杆菌过水解酶氨基酸序列中的一个或多个位置等同的一个或多个氨基酸位置处包含下列一个或多个置换：L12C、Q或G；T25S、G或P；L53H、Q、G或S；S54V、L A、P、T或R；A55G或T；R67T、Q、N、G、E、L或F；K97R；V125S、G、R、A或P；F154Y；F196G。

在一些实施例中，所述过水解酶在与SEQ ID NO：1示出的耻垢分枝杆菌过水解酶氨基酸序列中的多个氨基酸位置等同的多个氨基酸位置处包含下述氨基酸置换的组合：L12I S54V；L12M S54T；L12T S54V；L12QT25S S54V；L53H S54V；S54P V125R；S54V V125G；S54V F196G；S54V K97R V125G；或A55G R67T K97R V125G。

在特定的实施例中，过水解酶为耻垢分枝杆菌过水解酶的S54V变体，其示出如下(SEQ ID NO：2)；S54V置换标有下划线)：

MAKRILCFGDSLTWGWVPVEDGAPTERFAPDVRWTGVLAQQLGADFEVIEEGLARTTNIDDPTDPRLNGASYLPSCLATHLPLDLVIIMLGTNDTKAYFRRTPLDIALGMSVLVTQVLTSAGGVGTTYPAPKVLVVSPPPLAPMPHPWFQLIFEGGEQKTTELARVYSALASFMKVPFFDAGSVISTDGVDGIHFTEANNRDLGVALAEQVRSLL

在一些实施例中，过水解酶包含S54V置换，而此外与SEQ ID NO：1或2示出的氨基酸序列具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至99.5％的同一性。

在一些实施例中，过水解酶是碳水化合物家族酯酶家族7(CE-7家族)的成员。CE-7家族的酶在与过氧化物源结合时，已被证明是从多种羧酸酯(酰基)底物中生成过氧羧酸特别有效的酶(WO2007/070609及美国专利申请公开号2008/0176299、2008/176783及2009/0005590)。

CE-7家族成员包括头孢菌素C脱乙酰酶(CAHs；E.C.3.1.1.41)及乙酰木聚糖酯酶(AXEs；E.C.3.1.1.72)。CE-7酯酶家族的成员共用一个保守特征基序(Vincent et al.,J.Mol.Biol.,330:593-606(2003)(Vincent等人，《分子生物学杂志》，330:593-606(2003))。

一方面，过水解酶包括一种酶，其含有CE-7特征基序并且与下列所示具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，或甚至99.5％的同一性：来自枯草芽孢杆菌ATCC 31954.TM.的头孢菌素C脱乙酰酶(SEQ ID NO：3)、来自枯草芽孢杆菌亚种枯草链球菌属168或枯草芽孢杆菌BE1010的头孢菌素C脱乙酰酶(SEQ ID NO：4)、来自枯草芽孢杆菌ATCC 6633的头孢菌素乙酰水解酶(SEQ ID NO：5)、来自地衣芽孢杆菌ATCC14580.TM.的头孢菌素C脱乙酰酶(SEQ ID NO：6)、来自短小芽孢杆菌PS213的乙酰木聚糖酯酶(SEQ ID NO：7)、来自热纤梭菌ATCC 27405.TM.的乙酰木聚糖酯酶(SEQ ID NO：8)、来自新阿波罗栖热袍菌的乙酰木聚糖酯酶(SEQ IDNO：9)、来自枯草芽孢杆菌ATCC 29233.TM.的头孢菌素C脱乙酰酶(SEQ ID NO：10)、来自海栖热袍菌或其变体的乙酰木聚糖酯酶(SEQID NO：11)。这些序列如下所示：

来自枯草芽孢杆菌ATCC 31954.TM.的头孢菌素C脱乙酰酶(SEQ IDNO：3)：

MQLFDLPLDQLQTYKPEKTAPKDFSEFWKLSLEELAKVQAEPDLQPVDYPADGVKVYRLTYKSFGNARITGWYAVPDKQGPHPAIVKYHGYNASYDGEIHEMVNWALHGYAAFGMLVRGQQSSEDTSISLHGHALGWMTKGILDKDTYYYRGVYLDAVRALEVISSFDEVDETRIGVTGGSQGGGLTIAAAALSDIPKAAVADYPYLSNFERAIDVALEQPYLEINSFFRRNGSPETEVQAMKTLSYFDIMNLADRVKVPVLMSIGLIDKVTPPSTVFAAYNHLETEKELKVYRYFGHEYIPAFQTEKLAFFKQHLKG

来自枯草芽孢杆菌亚种枯草链球菌属168或枯草芽孢杆菌BE1010的头孢菌素C脱乙酰酶(SEQ ID NO：4)：

MQLFDLPLDQLQTYKPEKTAPKDFSEFWKLSLEELAKVQAEPDLQPVDYPADGVKVYRLTYKSFGNARITGWYAVPDKEGPHPAIVKYHGYNASYDGEIHEMVNWALHGYATFGMLVRGQQSSEDTSISPHGHALGWMTKGILDKDTYYYRGVYLDAVRALEVISSFDEVDETRIGVTGGSQGGGLTIAAAALSDIPKAAVADYPYLSNFERAIDVALEQPYLEINSFFRRNGSPETEVQAMKTLSYFDIMNLADRVKVPVLMSIGLIDKVTPPSTVFAAYNHLETKKELKVYRYFGHEYIPAFQTEKLAFFKQHLKG

来自枯草芽孢杆菌ATCC 6633的头孢菌素乙酰水解酶(SEQ ID NO：5)：

MQLFDLPLDQLQTYKPEKTTPNDFSEFWKSSLDELAKVKAAPDLQLVDYPADGVKVYRLTYKSFGNARITGWYAVPDKEGPHPAIVKYHGYNASYDGEIHEMVNWALHGYAAFGMLVRGQQSSEDTSISPHGHALGWMTKGILDKDTYYYRGVYLDAVRALEVISSFDEVDETRIGVTGGSQGGGLTIAAAALSDIPKAAVADYPYLSNFERAIDVALEQPYLEINSFFRRNGSPETEEKAMKTLSYFDIMNLADRVKVPVLMSIGLIDKVTPPSTVFAAYNHLETEKELKVYRYFGHEYIPAFQTEKLAFFKQHLKG

来自地衣芽孢杆菌ATCC 14580.TM.的头孢菌素C脱乙酰酶(SEQ IDNO：6)：

MQQPYDMPLEQLYQYKPERTAPADFKEFWKGSLEELANEKAGPQLEPHEYPADGVKVYWLTYRSIGGARIKGWYAVPDRQGPHPAIVKYHGYNASYDGDIHDIVNWALHGYAAFGMLVRGQNSSEDTEISHHGHVPGWMTKGILDPKTYYYRGVYLDAVRAVEVVSGFAEVDEKRIGVIGASQGGGLAVAVSALSDIPKAAVSEYPYLSNFQRAIDTAIDQPYLEINSFFRRNTSPDIEQAAMHTLSYFDVMNLAQLVKATVLMSIGLVDTITPPSTVFAAYNHLETDKEIKVYRYFGHEYIPPFQTEKLAFLRKHLK

来自短小芽孢杆菌PS213的乙酰木聚糖酯酶(SEQ ID NO：7)：

MQLFDLSLEELKKYKPKKTARPDFSDFWKKSLEELRQVEAEPTLESYDYPVKGVKVYRLTYQSFGHSKIEGFYAVPDQTGPHPALVRFHGYNASYDGGIHDIVNWALHGYATFGMLVRGQGGSEDTSVTPGGHALGWMTKGILSKDTYYYRGVYLDAVRALEVIQSFPEVDEHRIGVIGGSQGGALAIAAAALSDIPKVVVADYPYLSNFERAVDVALEQPYLEINSYFRRNSDPKVEEKAFETLSYFDLINLAGWVKQPTLMAIGLIDKITPPSTVFAAYNHLETDKDLKVYRYFGHEFIPAFQTEKLSFLQKHLLLST

来自热纤梭菌ATCC 27405.TM.的乙酰木聚糖酯酶(SEQ ID NO：8)

MAQLYDMPLEELKKYKPALTKQKDFDEFWEKSLKELAEIPLKYQLIPYDFPARRVKVFRVEYLGFKGANIEGWLAVEGLYPGLVQFHGYNWAMDGCVPDVVNWALNGYAAFLMLVRGQQGRSVDNIVPGSGHALGWMSKGILSPEEYYYRGVYMDAVRAVEILASLPCVDESRIGVTGGSQGGGLALAVAALSGIPKVAAVHYPFLAHFERAIDVAPDGPYLEINEYLRRNSGEEIERQVKKTLSYFDIMNLAPRIKCRTWICTGLVDEITPPSTVFAVYNHLKCPKEISVFRYFGHEHMPGSVEIKLRILMDELNP

来自新阿波罗栖热袍菌的乙酰木聚糖酯酶(SEQ ID NO：9)：

MAFFDMPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWRETLKESEGFPLDPVFEKVDFHLKTVETYDVTFSGYRGQRIKGWLLVPKLAEEKLPCVVQYIGYNGGRGFPHDWLFWPSMGYICFVMDTRGQGSGWMKGDTPDYPVDPQYPGFMTRGILDPGTYYYRRVFVDAVRAVEAAISFPRVDSRKVVVAGGSQGGGIALAVSALSNRVKALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYVEITNFLKTHRDKEEIVFRTLSYFDGVNFAARAKVPALFSVGLMDTICPPSTVFAAYNHYAGPKEIRIYPYNNHEGGGSFQAIEQVKFLKR

来自枯草芽孢杆菌ATCC 29233.TM.的头孢菌素C脱乙酰酶(SEQ IDNO：10)：

MQLFDLPLDQLQTYKPEKTAPKDFSEFWKLSLEELAKVQAEPDLQPVDYPADGVKVYRLTYKSFGNARITGWYAVPDKQGPHPAIVKYHGYNASYDGEIHEMVNWALHGYAAFGMLVRGQQSSEDTSISPHGHALGWMTKGILDKDTYYYRGVYLDAVRALEVISSFDEVDETRIGVTGGSQGGGLTIAAAALSDIPKAAVADYPYLSNFERAIDVALEQPYLEINSFFRRNGSPETEVQAMKTLSYFDIMNLADRVKVPVLMSIGLIDKVTPPSTVFAAYNHLETEKELKVYRYFGHEYIPAFQTEKLAFFKQHLKG

来自海栖热袍菌的乙酰木聚糖酯酶(SEQ ID NO：11)：

MAFFDLPLEELKKYRPERYEEKDFDEFWEETLAESEKFPLDPVFERMESHLKTVEAYDVTFSGYRGQRIKGWLLVPKLEEEKLPCVVQYIGYNGGRGFPHDWLFWPSMGYICFVMDTRGQGSGWLKGDTPDYPVDPQYPGFMTRGILDPRTYYYRRVFTDAVRAVEAAASFPQVDQERIVIAGGSQGGGIALAVSALSKKAKALLCDVPFLCHFRRAVQLVDTHPYAEITNFLKTHRDKEEIVFRTLSYFDGVNFAARAKIPALFSVGLMDNICPPSTVFAAYNYYAGPKEIRIYPYNNHEGGGSFQAVEQVKFLKKLFEKG

酶，如来自海栖热袍菌的乙酰木聚糖酯酶，均在美国7,951,566号专利中有所描述。这种酶的示例性变体包括C277V、C277A、C277S及C277T，其均在美国8,062,875号专利中有所描述。

在其他实施例中，过水解酶来自苜蓿中华根瘤菌、中慢生型百脉根根瘤菌、牛莫拉氏菌、根癌土壤杆菌或突柄杆菌(Prosthecobacter dejongeii)(WO2005056782)、门多萨假单胞菌(美国5,389,536号专利)或恶臭假单胞菌(美国5,030,240号和5,108,457号专利)。

在一些实施例中，所述过水解酶的过水解：水解比率至少为1。在一些实施例中，过水解酶的过水解：水解比率大于1。在一些实施例中，过水解：水解比率大于1.5、大于2.0、大于2.5或甚至大于3.0。

在一些实施例中，过水解酶以约1至约100ppm或更高的浓度提供。在一些实施例中，过水解酶以相对于纺织物上染料的量的摩尔比提供。在一些实施例中，所述摩尔比为约1/10,000至约1/10，或甚至约1/5,000至约1/100。在一些实施例中，过水解酶的浓度为约10^-9M至约10^-5M、约10^-8M至约10^-5M、约10^-8M至约10^-6M、约5×10^-8M至约5×10^-7M，或甚至约10^-7M至约5×10^-7M。

过水解酶可以作为液体或固体提供，这取决于包装要求。过水解酶的液体形式包括稳定及无水制剂，其不溶于其中包含过水解酶的可溶性材料。示例性制剂在美国专利公开号20110300201中有所描述。所述制剂提供无水液相(即载液)中的过水解酶，所述无水液相接触阻隔材料或悬浮颗粒、膜或包含其中封装所述酶的聚合物基体的整块材料。聚合物在载液中不溶，但是却溶于水。液相包含小于5％、小于1％或甚至小于0.5％的水。该聚合物制剂的一个优点是酰基底物可与封装的酶混合，从而生成稳定的、非反应性、共配制的过水解酶—底物的液体混合物，其适合用于本发明单位剂量溶解包装件的许多实施例中。

在一些实施例中，聚合物基体包含聚乙烯醇、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、瓜尔豆胶或它们的衍生物或共聚物，或它们的混合物。在一些实施例中，聚合物基体包含一种或多种填充剂或增量剂(如淀粉、糖、粘土、滑石粉、碳酸钙、二氧化钛、纤维素纤维)、增塑剂(如甘油、山梨醇、丙二醇)、助溶剂、粘合剂、膨胀剂(如聚丙烯酸酯、交联羧甲基纤维素钠、羟基乙酸淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、半乳甘露聚糖、Water-Lok、ZapLoc)或脱模剂。

在一些实施例中，聚合物是带有负电荷的聚合物，例如异质多醣，包括葡糖苷酸和/或半乳糖醛酸苷残基。这种多糖可例如包括，由有机体(由其可生成酶自身)产生的材料，并且可保留在部分纯化的酶制剂中作为污染物，即使它们自身没有有用的酶活性。作为另外一种选择或除此之外，这种多糖可以高达浆液的约1至5重量％或更高的量被单独添加。这种用量可与酶本身的用量相当。在一些实施例中，多糖在进行喷雾干燥之前就已存在(或被加入)。其他示例性聚合物为阿拉伯半乳聚糖、木糖半乳聚糖，一般是酸性聚糖。

在一些实施例中，聚合物基体包含附加的蛋白质或肽，或它们的衍生物。一些或所有的蛋白质或肽可存在于发酵液、细胞培养基或部分纯化的蛋白质制剂中，并且可保留在部分纯化的酶制剂中作为污染物，即使它们自身没有有用的酶活性。作为另外一种选择或除此之外，这种多糖可以高达浆液的约1至5重量％或更高的量被单独添加。这种用量可与酶本身的用量相当。

在不同的实施例中，酶(及可选底物)通过运用技术被封装在聚合物中，所述技术包括但不限于溶剂浇铸、喷雾干燥、冻干/冷冻干燥、流化床喷雾包衣、流化床结块、喷雾冷却、湿法造粒、转鼓造粒、高剪切造粒、挤出、滚圆、锅包衣、凝聚、胶凝及雾化。在特定实施例中，使用喷雾干燥。

通常情况下，聚合物基体中所封装的酶的量不高于50重量％。在不同的实施例中，聚合物基体中所封装的酶的量按重量计为约0.01％至约50％、约0.1％至约25％、约1％至约10％或约2％至约5％。

在一些实施例中，含有酶的聚合物基体为颗粒形式，其被悬浮于含有底物的液相中。在不同的实施例中，颗粒直径，按微米计，为约0.1至约1000、约50至约250、约100至约300、约200至约500、约400至约800或约600至约1000。

在一些实施例中，聚合物基体为膜形式，其厚度，按微米计，为约5至约1000、约50至约100、约100至约200或约200至约500，或约500至约1000。

在一些实施例中，聚合物基体为整块材料形式，其厚度的最大尺寸为约1至30毫米。整体材料可为任何形状，从薄片状到较球形状，并且其可以自由悬浮或具有沉淀倾向，除非其被搅动或摇晃。

当过水解酶与极低含水或无水洗涤剂组合物组合地存在于隔室中时，聚合物基体中的稳定性是不必要的，并且所述酶可以直接被添加至洗涤剂中。

在一些实施例中，过水解酶以固体形式提供，例如，粉末、沉淀物、凝聚物、颗粒、微粒等。在一些实施例中，通过喷雾干燥或冻干过水解酶来形成酶粉。基于酶粉的干重，所述粉末中存在的酶的量优选为约5重量％(wt％)至约75wt％。酶粉中优选的酶重量百分比范围为约10wt％至50wt％，并且酶粉中更优选的酶重量百分比范围为约20wt％至33wt％。

在一些实施例中，酶粉还包含赋形剂，例如，惰性填料、崩解剂、溶解促进剂、增塑剂、润滑剂、表面活性剂等。一方面，提供的赋形剂的量，基于酶粉干重计为约95wt％至约25wt％。酶粉中的赋形剂优选的重量百分比范围为约90wt％至50wt％，酶粉中的赋形剂更优选的重量百分比范围为约80wt％至67wt％。示例性赋形剂为低聚糖和表面活性剂。

具体的低聚糖包括但不限于麦芽糖糊精、木聚糖、甘露聚糖、岩藻依聚糖、半乳甘露聚糖、壳聚糖、棉子糖、水苏糖、果胶、胰岛素、左聚糖、果聚糖、支链淀粉、蔗糖、果糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、黑曲霉三糖、麦芽三糖、松三糖、麦芽三碳糖、棉子糖、蔗果三糖，以及它们的混合物。在优选的实施例中，低聚糖赋形剂为麦芽糖糊精。基于低聚糖的赋形剂还包括但不限于水溶性非离子型纤维素醚，例如，羟甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素，以及它们的混合物。在另一实施例中，赋形剂选自但不限于一种或多种以下的化合物：海藻糖、乳糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、葡萄糖、纤维二糖、α-环糊精和羧甲基纤维素。

可用的表面活性剂包括但不限于离子型和非离子型表面活性剂或润湿剂，例如，乙氧基化蓖麻油、聚乙醇化甘油酯(polyglycolyzedglycerides)、乙酰化单甘油酯、山梨糖醇脂肪酸酯、泊洛沙姆、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯衍生物、单酸甘油酯或其乙氧基化衍生物、甘油二酯或其聚氧乙烯衍生物、多库酯钠、月桂基硫酸钠、胆酸或其衍生物、卵磷脂、磷脂、乙二醇和丙二醇的嵌段共聚物，以及非离子有机硅。优选的是，表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯，更为优选的是聚山梨酯80。

当制剂的一部分被用来制备酶粉时，表面活性剂基于酶粉中存在的蛋白质重量，其含量范围为约5wt％至0.1wt％，更为优选的是基于酶粉中存在的蛋白质重量，为约2wt％至0.5wt％。在优选的实施例中，酶粉/制剂通过喷雾干燥形成。

用于制备酶粉的制剂可附加包含一种或多种缓冲剂(如碳酸氢盐的钠和/或钾盐、柠檬酸盐、乙酸盐、磷酸盐、焦磷酸盐、甲基膦酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、酒石酸盐或马来酸盐)，和酶稳定剂(如乙二胺四乙酸及(1羟基亚乙基)二膦酸)。基于由羧酸酯和酶粉构成的制剂中羧酸酯的重量，缓冲剂的含量范围为约0.01wt％至约50wt％。基于由羧酸酯和酶粉构成的制剂中羧酸酯的重量，缓冲剂含量更为优选的范围为约0.10％至约10％。

在液体酰基底物中，当酶粉或酶粉制剂被储存在环境温度下达到一段时间后(如在25℃下储存至少6个月)，其基本上保持其酶活性(如保持至少70％、至少80％、至少90％或更高的活性)。酶粉也可通过固体酰基底物和/或固体过氧化物源配制而成。

在一些实施例中，过水解酶以颗粒固体形式提供。颗粒，包括多层颗粒，可通过以下多种制备技术制成，所述技术包括：旋转雾化、湿法制粒、干法制粒、喷雾干燥、圆盘制粒、挤出、锅包衣、滚圆、转鼓制粒、流化床凝聚、高速剪切制粒、流化床喷涂、结晶、沉淀、乳液胶凝、旋转圆盘雾化和其他浇注方法，以及造粒工艺。此类工艺在本领域中已为人们所知，并在美国专利4,689,297、5,324,649、6248706、6,534,466号及欧洲专利EP656058B1和EP804532B1中有所描述。

多层颗粒可包括内核或“芯”。美国专利公开20100124586号、美国专利5,324,649号以及国际专利WO9932595号中均对适用于芯的材料有所描述。在一些实施例中，所述芯包含一种或多种水溶性或水可分散性试剂。适合的水溶性试剂包括但不限于无机盐(如硫酸钠、氯化钠、硫酸镁、硫酸锌和硫酸铵)、柠檬酸、糖(如蔗糖、乳糖、葡萄糖、颗粒蔗糖、麦芽糖糊精和果糖)、增塑剂(如多元醇、脲、邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二甲酯)、纤维材料(如纤维素和纤维素衍生物，像羟基-丙基-甲基纤维素、羧甲基纤维素及羟基-乙基纤维素)、植酸，以及它们的组合。适合的可分散性试剂包括但不限于粘土、蔗糖小丸(nonpareils)(糖和淀粉的组合；如淀粉-蔗糖小丸-ASNP)、滑石粉、硅酸盐、羧甲基纤维素、淀粉，以及它们的组合。

美国专利公开20100124586号、美国专利5,324,649号以及国际专利WO9932595号中均对适用于涂层的材料有所描述。在一些实施例中，涂层包含下列材料中的一种或多种：无机盐(如硫酸钠、氯化钠、硫酸镁、硫酸锌和硫酸铵)、柠檬酸、糖(如蔗糖、乳糖、葡萄糖和果糖)、增塑剂(如多元醇、脲、邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二甲酯)、纤维材料(如纤维素和纤维素衍生物，如羟基-丙基-甲基纤维素、羧甲基纤维素及羟基-乙基纤维素)、粘土、蔗糖小丸(糖和淀粉的组合)、硅酸盐、羧甲基纤维素、植酸、淀粉(如玉米淀粉)、脂肪、油(如菜子油和石蜡油)、脂，乙烯基聚合物，乙烯基共聚物，聚乙烯醇(PVA)、增塑剂(如多元醇、脲、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二甲酯和水)、抗结块剂(如滑石粉、粘土、无定形二氧化硅和二氧化钛)、防沫剂(如Foamblast及Erol)及滑石粉。在一个实施例中，涂层包含糖，如蔗糖。在一个实施例中，涂层包含聚合物如聚乙烯醇(PVA)。适于掺入进多层型颗粒的涂层中的PVA包括具有低至高的粘度的部分水解、完全水解的和中等水解的PVA。

在一些实施例中，芯涂覆有至少一个涂层。在一个实施例中，芯涂覆有至少两个涂层。在另一个实施例中，芯涂覆有至少三个涂层。在又一个实施例中，芯涂覆有至少四个涂层。在一个实施例中，至少一个涂层是酶涂层。在一些实施例中，芯涂覆有至少两个酶层。在另一个实施例中，芯涂覆有至少三个酶层。

在一些实施例中，本教导内容的颗粒包含酶涂层。在一些实施例中，酶层包含至少一种酶。在一些实施例中，酶层包含至少两种酶。在一些实施例中，酶层包含至少三种酶。除了一种或多种过水解酶，涂层可还包括，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酸裂解酶、植酸酶、木聚糖酶、磷酸酶、酯酶、氧化还原酶、转移酶、β-葡聚糖酶、氧化酶(如己糖氧化酶和麦芽糖氧化还原酶)以及它们的混合物。

在一些实施例中，酶涂层可还包含一种或多种选自如下的附加材料：糖(如蔗糖)、淀粉(如玉米淀粉)、脂肪、油(如菜子油和石蜡油)、脂、乙烯基聚合物、乙烯基共聚物、聚乙烯醇(PVA)、增塑剂(如多元醇、脲、邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二甲酯和水)、抗结块剂(如滑石粉、粘土、无定形二氧化硅和二氧化钛)、防沫剂(如可得自法国莱斯坎Ouvrie PMC公司(Ouvrie PMC,Lesquin,France)的Foamblast及Erol)及滑石粉。Foamblast可得自Emerald Foam Control,LLC公司。Foamblast是用食品级成分制备的去沫剂。

在一些实施例中，多层型颗粒的外部涂层包含一种或多种如下涂层材料：聚合物(如乙烯基聚合物、聚乙烯醇和乙烯共聚物)、树胶、蜡、脂肪、油、脂、卵磷脂、颜料、润滑剂、蔗糖小丸、无机盐(如硫酸钠、氯化钠、硫酸镁、硫酸锌和硫酸铵)、滑石粉以及增塑剂(如糖、糖醇和聚乙二醇)。在一个特别的实施例中，多层型颗粒的外部涂层包含无机盐(如硫酸钠)、聚乙烯醇(PVA)、滑石粉或它们的组合。在一个特别的实施例中，外部涂层包含聚乙烯醇(PVA)和/或滑石粉。

在一些实施例中，同一颗粒内包括干燥形式的酯底物和/或干燥形式的过氧化物源，以及过水解酶。在过水解酶系统的活性组分或其他活性组分包含于同一颗粒的情况下，不同的组分可被中间层分隔，以防止组分之间的反应。这种层可被称为反应阻隔。反应阻隔可由水溶性聚合物材料和/或其多种材料制成。优选的水溶性材料包括，例如，聚乙酸乙烯酯、甲基纤维素蜡等、氯化钠、蔗糖、硫酸镁、硫酸铵、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、阿拉伯胶、聚乙烯吡咯烷酮、单和双甘油酯、聚乙二醇、非离子表面活性剂、淀粉、羟丙基淀粉、羟乙基淀粉及其他改性淀粉。

本文所述的多层型颗粒可通过多种技术来制备，所述技术包括：流化床喷涂、锅包衣和通过在起始芯材料(种子)的顶部添加连续层来构建多层型颗粒的其他技术。如见美国专利5,324,649号和美国专利公开20100124586号。在一些实施例中，多层型颗粒通过使用流化床喷涂工艺而被制成。

在一些实施例中，多层型颗粒包括下述或由下述组成：包含硫酸钠的芯；包含植酸酶、蔗糖、淀粉、植酸和菜籽油或由植酸酶、蔗糖、淀粉、植酸和菜籽油组成的第一涂层；包含硫酸钠或由硫酸钠组成的第二涂层；和包含滑石粉和PVA或由滑石粉和PVA组成的第三涂层。将第一涂层施加至芯，然后将第二涂层施加至第一涂层，然后将第三涂层施加至第二涂层。

在另一个实施例中，多层型颗粒包括如下或由如下组成：包含硫酸钠的芯；包含植酸酶、蔗糖、淀粉、植酸和消泡剂(如Foamblast)或由它们组成的第一涂层；包含硫酸钠或由硫酸钠组成的第二涂层；和包含滑石粉和PVA或由滑石粉和PVA组成的第三涂层。将第一涂层施加至芯，然后将第二涂层施加至第一涂层，然后将第三涂层施加至第二涂层。

以颗粒中经纯化的酶为0.001重量％至50重量％的量，将过水解酶掺入颗粒中。在一些实施例中，配制颗粒以便含有酶保护剂和溶解延缓材料(即在使用过程中调节颗粒溶解的材料)。

酰基底物

过水解酶系统还包含羧酸酯(酰基)底物，其在过氧化氢源存在的条件下可被过水解酶过水解，以生成过酸。

在一些实施例中，酰基底物是脂肪族和/或芳族羧酸或醇的酯。酰基底物可为单价、双价、三价或多价酯，或它们的混合物。例如，酰基底物可为羧酸和单醇(单价，如乙酸乙酯、乙酸丙酯)、两个羧酸和二元醇[如丙二醇二乙酸酯(PGDA)和乙二醇二乙酸酯(EGDA)，或混合物，如2-乙酰氧基1-丙酸酯，其中丙二醇在醇基团2上具有醋酸酯并且在醇基团1上具有丙基酯]或三个羧酸和三元醇(如附接在甘油或其他多元醇上的三乙酸甘油酯或乙酸酯/丙酸酯等的混合物)。

在一些实施例中，酰基底物是硝基醇(如2-硝基-1-丙醇)的酯。在一些实施例中，酰基底物为聚合物酯，如部分酰化(乙酰化、丙酰化等)聚羧基醇、乙酰化淀粉等。在一些实施例中，酰基底物为一种或多种如下物质的酯：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、甘油一醋酸酯、甘油一丙酸酯、甘油二丙酸酯、甘油三丙酸酯、甘油一丁酸酯、甘油二丁酸酯、葡萄糖五乙酸酯、木糖四乙酸酯、乙酰化木聚糖、乙酰化木聚糖片段、β-D-呋喃核糖-1,2,3,5-四乙酸酯、三-O-乙酰基-D-半乳醛、三-O-乙酰基-葡萄烯糖、丙二醇二乙酸酯、乙二醇二乙酸酯、1,2-乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、2,3-丁二醇、1,4-丁二醇、1,2-戊二醇、2,5-戊二醇、1,6-戊二醇、1,2-己二醇、2,5-己二醇或1,6-己二醇的单酯或二酯。.在一些实施例中，甘油三乙酸酯、甘油三丁酸酯和其他酯充当形成过酸的酰基供体。在一些实施例中，酰基底物为丙二醇二乙酸酯、乙二醇二乙酸酯或乙酸乙酯。在一个实施例中，酰基底物为丙二醇二乙酸酯。

在一些实施例中，酰基底物包括如下任意一种或多种物质：

(a)具有如下结构的一种或多种酯

[X]_mR₅

其中

X是式R6C(O)O的酯基团；

R6是C1至C7直链、支链或环状烃基部分，任选地被羟基基团或C1至C4烷氧基基团取代，其中R₆任选地包含一个或多个醚键，R₆为C2至C7；

R₅是C1至C6直链、支链或环状烃基部分，任选地被羟基基团取代，其中R₅中的每个碳原子单独地包含不超过一个羟基基团或不超过一个酯基基团，并且其中R₅任选地包含一个或多个醚键；

m为1至R₅中的碳原子数目

所述一种或多种酯在25℃下在水中具有至少5ppm的溶解度；或者

(b)具有如下结构的一种或多种甘油酯

其中R1是C1至C7直链或支链烷基，任选地被羟基或C1至C4烷氧基基团取代，R₃和R₄分别为H或R₁C(O)；或者

(c)具有下式的一种或多种酯

其中R₁是C1至C7直链或支链烷基，任选地被羟基或C1至C4烷氧基基团取代，R₂是C1至C10的直链或支链烷基、烯基、炔基、芳基、烷基芳基、烷基杂芳基、杂芳基、(CH₂CH₂O)_n或(CH₂CH(CH₃)-O)_nH，n为1至10；或者

(d)一种或多种乙酰化单糖、乙酰化双糖，或乙酰化多糖；或者

(e)(a)至(d)的任意组合。

如上所指出的，合适的底物可为单价的(即，包含单个羧酸酯部分)或多价的(即，包含不止一个羧酸酯部分)。用于颜色修饰的底物的量可根据底物分子中羧酸酯部分的数量进行调整。在一些实施例中，羧酸酯部分在最终含水介质(如洗涤液)中的浓度为约20-500mM，例如，约40mM至约400mM、约40mM至约200mM或甚至约60mM至约200mM。羧酸酯部分的示例性浓度包括约60mM、约80mM、约100mM、约120mM、约140mM、约160mM、约180mM和约200mM。

在一些实施例中，当酰基底物为二价的情况下(如就丙二醇二醋酸酯PGDA而言)，其以约10至200mM的量提供，例如，约20mM至约200mM、约20mM至约100mM或甚至约30mM至约100mM。酯底物的示例性量包括约30mM、约40mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约90mM和约100mM。技术人员可基于每分子的羧酸酯部分的数量，容易地计算出三价或其他多价酯底物的对应量。

在一些实施例中，酰基底物为液体，其包括粘性液体和凝胶。示例性液体为PGDA、三乙酸甘油酯以及其他本文所列出的底物，在最终用户很可能使用本单位剂量包装的过酸生成系统的温度下，它们为液体。液体底物优选以无水形式提供，或作为极低含水或无水洗涤剂被添加至同一隔室。在一些实施例中，酰基底物为固体，其中包括由吸湿性固体酰基底物所致的胶。示例性液体为2,2-二甲基-1,3-丙二醇、对硝基苯基乙酸酯、葡萄糖五乙酸酯以及其他本文所列出的底物，在最终用户很可能使用本单位剂量包装的过酸生成系统的温度下，它们为固体。

在一些实施例中，相对于在待经受颜色修饰的织物上染料的摩尔量，以摩尔过量提供酰基底物。在一些实施例中，提供的酯底物的羧酸酯部分是染料摩尔量的约20至约20,000倍。羧酸酯部分与染料分子的示例性摩尔比为约100/1至约10,000/1、约1,000/1至约10,000/1或甚至2,000/1至约6,000/1。在一些情况下，酰基底物与染料分子的摩尔比至少为2,000/1，或至少为6,000/1。

在一些实施例中，当酰基底物为二价的情况下(如就PGDA而言)，酰基底物以染料摩尔量的约10至约10,000倍提供。酰基底物与染料分子的示例性摩尔比为约50/1至约5,000/1、约500/1至约5,000/1或甚至1,000/1至约3,000/1。在一些情况下，酰基底物与染料分子的摩尔比至少为1,000/1，或至少为3,000/1。如上所述，技术人员可基于每分子的羧酸酯部分的数量很容易地计算出相应三价或其他多价酰基底物的量。

在一些实施例中，提供的酰基底物浓度为约100ppm至约100,000ppm，或约2500ppm至约3500ppm。在一些实施例中，相对于过水解酶以摩尔过量提供酰基底物。在一些实施例中，羧酸酯部分与过水解酶的摩尔比为至少约2×10⁵/1、至少约4×10⁵/1、至少约1×10⁶/1、至少约2×10⁶/1、至少约4×10⁶/1或甚至至少约1×10⁷/1或更高。在一些实施例中，相对于过水解酶，以约4×10⁵/1至约4×10⁶/1的摩尔过量提供酰基底物。

在一些实施例中，当酰基底物为二价时(如就PGDA而言)，酰基底物与过水解酶的摩尔比为至少约1×10⁵/1、至少约2×10⁵/1、至少约5×10⁵/1、至少约1×10⁶/1、至少约2×10⁶/1或甚至至少约5×10⁶/1，或更高。在一些实施例中，相对于过水解酶，以约2×10⁵/1至约2×10⁶/1的摩尔过量提供酰基底物。技术人员可基于每分子中羧酸酯部分的数量很容易地计算出相应三价或其他多价酰基底物的量。

在一些实施例中，酰基底物存在于混合的反应制剂中的浓度为反应制剂的0.05wt％至40wt％，优选的是浓度为反应制剂的0.1wt％至20wt％，更为优选的是浓度为反应制剂的0.5wt％至10wt％。

过氧化物源

过水解酶系统还包含至少一种过氧化物源。在一些实施例中，过氧化物源为过氧化氢。在一些实施例中，过氧化物源是在添加至水中后能生成过氧化物的化合物。化合物可为固体或液体。此类化合物包括过氧化氢与各种无机或有机化合物的加合物，其中最为广泛使用的是碳酸钠过氧化氢合物，也称为过碳酸钠。

在一些实施例中，过氧化物源是无机过氧化氢合物盐。无机过氧化氢合物盐的例子为过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐、过硫酸盐和过硅酸盐。无机过氧化氢合物盐通常为碱金属盐。另外的过氧化氢源包括过氧化氢与沸石的加合物、过氧化氢脲和过氧化脲。

过氧化物源可为结晶形式和/或没有附加保护基本上为纯净的固体形式。对于某些过氧化氢合物盐，优选的形式为包括包衣的颗粒状组合物，所述包衣为颗粒状产品中的过氧化氢合物盐提供更佳的贮存稳定性。合适的包衣包括无机盐诸如碱金属硅酸盐、碳酸盐或硼酸盐或它们的混合物，或有机材料诸如蜡、油或脂肪皂。

在一些实施例中，过氧化物源为酶促过氧化物生成系统。在一个实施例中，酶促过氧化氢生成系统包含氧化酶及其底物。合适的氧化酶包括但不限于：葡萄糖氧化酶、山梨醇氧化酶、己糖氧化酶、胆碱氧化酶、醇氧化酶、甘油氧化酶、胆固醇氧化酶、吡喃糖氧化酶、羧基醇氧化酶、L-氨基酸氧化酶、甘氨酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、谷氨酸氧化酶、肌氨酸氧化酶、赖氨酸氧化酶、乳酸氧化酶、香草基氧化酶、乙醇酸氧化酶、半乳糖氧化酶、尿酸酶、草酸氧化酶以及黄嘌呤氧化酶。

如下反应式提供过氧化氢的酶促生成耦合系统的一个示例：

由于与合适底物生成过氧化物的任何酶均可能被使用，因此不特意将过氧化物的生成限于任一特定的酶。例如，可使用已知的能从乳酸和氧生成过氧化物的乳酸杆菌属乳酸氧化酶。此类反应的一个优点是酶促生成酸(如，上述例子中的葡萄糖酸)，所述酸将碱性含水溶液的pH值降低到其中过酸最为有效地进行漂白的pH值范围内(即，处于或低于pKa)。此类pH值降低还由于生成过酸而直接导致。其他能生成过氧化氢的酶(如醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、氨基酸氧化酶等)也可与酰基底物并结合过水解酶一起使用从而生成过酸。

在使用过氧化氢酶促生成耦合系统的情况下，相对于氧化酶底物，氧化酶应提供于单位剂量包装件的不同隔室中，或氧化酶和底物应以非混合形式提供，从而使它们不会发生反应，直至单位剂量包装件暴露于水。在一些实施例中，氧化酶与过水解酶、酰基底物或过氧化物源存在于同一隔室内。在一些实施例中，氧化酶的底物与过水解酶、酰基底物或过氧化物源存在于同一隔室内。

在一些实施例中，过氧化物源作为低pH值的液体提供，如pH值小于约6.5、小于约6.0、小于约5.5、小于约5.0、小于约4.5或甚至小于约4.0，从而稳定过氧化氢源以防止其降解。

在一些实施例中，提供的过氧化物源的浓度为约100ppm至约10,000ppm、约1,000ppm至约3,000ppm或约1,500ppm至约2,500ppm。在一些实施例中，过氧化氢以染料摩尔量的约10至约1,000倍提供。

在一些实施例中，提供的过氧化物源的量为约10-200mM，例如，约20mM至约200mM、约20mM至约100mM或甚至约30mM至约100mM。过氧化氢的示例性量包括约30mM、约40mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约90mM和约100mM。

在一些实施例中，相对于要经受颜色修饰的染料的摩尔量，过氧化物源以摩尔过量提供。在一些实施例中，过氧化氢以染料摩尔量的约10倍至约10,000倍提供。过氧化氢与染料分子的示例性摩尔比为约500/1至约5,000/1、或甚至1,000/1至约3,000/1。在一些情况下，过氧化氢与染料分子的摩尔比为至少1,000/1或至少3,000/1。

在一些实施例中，相对于过水解酶，过氧化物源以摩尔过量提供。在一些实施例中，过氧化氢与过水解酶的摩尔比为至少约1×10⁵/1、至少约2×10⁵/1、至少约5×10⁵/1、至少约1×10⁶/1、至少约2×10⁶/1、或甚至至少约5×10⁶/1或更高。在一些实施例中，过氧化氢以相对于过水解酶为约2×10⁵/1至2×10⁶/1的摩尔过量提供。

在一些实施例中，过氧化合物在反应制剂中的浓度可为0.0033wt％至约50wt％，优选的为0.033wt％至约40wt％，更为优选的为0.33wt％至约30wt％。

包装材料

单位剂量包装件应由水溶性材料制成，或应具有至少一个用水溶性材料部分界定的隔室，其材料在无水介质或极低含水介质中不溶。理想的是，水溶性材料甚至在冷水中也能完全溶解，从而避免在待用包装件的内容物进行处理的对象上留下残留物，和/或避免在洗衣机、洗碗机或其他容器中留下残留物。水溶性材料应开始溶解，从而使包装件在与水接触后的几分钟之内开始大量地释放其内容物。优选的是，包装件的内容物在与水接触后的5分钟或更短时间、4分钟或更短时间、3分钟或更短时间、2分钟或更短时间、1分钟或更短时间或甚至30秒或更短的时间内大量地释放。

水溶性材料的溶解率和溶解完全性可通过使用重量法来确定，其中将已知量的材料溶解于处于预定温度的水中，并在预定量的时间内用力搅拌(如在磁力搅拌器上)。混合物随后通过具有不超过约50微米孔径的烧结玻璃过滤器进行过滤。通过任一常规方法(如蒸发)收集滤液和除去水，并确定滤液中聚合物的重量，其等同于溶解或分散的部分。随后可计算溶解度或分散性的百分比。

优选的水溶性材料为可形成为膜的聚合物材料。所述膜优选具有1-200微米的厚度，更优选为15-150微米，甚至更为优选的为30-100微米。可使用本领域已知的方法获得膜，包括流延，吹塑成型、挤出、吹塑挤出等。所述膜可任选地在具有上述内容物的包装形成或包装的填充和密封期间被拉伸。拉伸所述膜可使最终的包装更为紧凑。

聚合物可具有任何重均分子量，优选为1,000至1,000,000、10,000至300,000、15,000至200,000或甚至20,000至150,000。示例性聚合物和/或共聚物和/或其衍生物，选自聚乙烯醇(PVA或PVOH)、聚乙烯基吡咯烷酮、聚环氧烷、丙烯酰胺、丙烯酸、纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺、聚乙酸乙烯酯、聚羧酸及其盐、聚氨基酸或肽、聚酰胺、聚丙烯酰胺、马来酸/丙烯酸的共聚物、多糖(包括淀粉和明胶)、天然树胶(如黄原胶和卡拉胶)，以及它们的混合物。较为优选的是，聚合物可选自聚丙烯酸酯和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、糊精、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯以及它们的混合物；最优选的是聚乙烯醇、聚乙烯醇共聚物、羟丙基甲基纤维素(HPMC)以及它们的混合物。可使用聚合物的共混物获取所需的溶解速率和存储稳定性，并且不同的聚合物可用于包装的不同隔室。

在一些实施例中，膜包含PVOH聚合物，其与Monosol LLC of Gary,Ind.,U.S.(美国印第安纳州加里的Monosol公司)出售的含有PVOH聚合物且以商号参证M8630所知的膜具有相似的特性。另一优选的膜为以商号参证PT-75所知的、Aicello化学欧洲有限公司(Aicello Chemica EuropeGmbH,Carl-Zeiss-Strasse 43,47445 Moers,DE)出售的膜。

在一些实施例中，水溶性材料由下列所述材料组合制成：如WO2008063468中描述的，聚乙烯醇(PVOH)、脱乙酰壳多糖以及交联剂(如硼酸)。所得膜优选配制成在pH值大于约9.3及优选pH值大于10的条件下为不溶性，并且在与洗涤剂组合物接触时稳定。所得膜还优选具有足够的湿强度以承受在预期用途的自动清洗装置中在清洗的预冲洗阶段的搅动。

包装用膜的主要组分为PVOH、脱乙酰壳多糖以及交联剂(如硼酸)。优选的是，PVOH是完全水解的(如99-100％)，具有中等分子量，且在20℃下具有约20cps至约30cps的4％含水溶液粘度。基于膜的总重量(wt/wt)，以干燥基计，PVOH优选的含量为约50重量％至约90wt/wt，如约60wt/wt至约80wt/wt或约70wt/wt。

甲壳质是N-乙酰葡糖胺聚合物的一类，具有不同的晶体结构和脱乙酰度，并因种类的不同而具有相当大的变化。通过甲壳质更广泛的脱乙酰作用所得的多糖为壳聚糖。甲壳质和壳聚糖在水、稀释含水基和大多数有机溶剂中均不溶。但是，不同于甲壳质，壳聚糖在稀释的酸含水溶液，所述酸通常为羧酸中作为脱乙酰壳多糖盐是可溶的。壳聚糖可以不同的分子量获得，并且通常被看做无毒和可生物降解的。乙酰化度对胺基pKa产生很大的作用，因此对溶解度行为和聚合物的流变特性也具有影响。大部分脱乙酰化聚合物上的胺基，根据聚合物源具有范围为5.5-6.5的pKa。在低pH值下，聚合物是可溶的，并且在pH值约为7下发生溶胶-凝胶转化。

壳聚糖的乙酰化度影响膜开始溶解时的pH值。随着乙酰化度升高，在之上膜溶解的pH值也升高。壳聚糖的乙酰化度优选为约65％或更低，或70％或更低，例如，其范围为约50％至约65％、约55％至约65％或约60％至约65％，从而提供膜pH值为约9.2或9.3的溶解度触发。该材料可通过本领域已知的方法、使用乙酸酐在含水乙酸中对市售的85％-95％脱乙酰壳聚糖进行再乙酰化反应而获得。优选的均重分子量为约150,000Da至约190,000Da。壳聚糖的含量范围优选为约1wt/wt至约20wt/wt。PVOH与壳聚糖的重量比率为约12:1至约3:1，或约8:1至约10:1，如约9:1。

据信，交联剂，如硼砂、硼酸盐、硼酸、柠檬酸、马来酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、铜盐、水溶性聚酰胺-表氯醇以及它们的组合，将PVOH弱交联至壳聚糖并提高所得膜的湿强度。根据交联剂的类型，交联剂存在的量优选为最高至约10wt/wt，如约0.1wt/wt至约10wt/wt，或0.1wt/wt至约5wt/wt。硼酸的使用量范围优选为约0.3wt/wt至约0.7wt/wt。

除了聚合物或聚合物材料，膜可还包含其他添加剂成分。例如，以适于它们预期用途的量添加增塑剂(如甘油、乙二醇、二甘醇、丙二醇、山梨糖醇及它们的混合物)、附加的水、崩解助剂、润滑剂、脱模剂、填充剂、增量剂、交联剂、防粘连剂、抗氧化剂、防粘剂、消泡剂、纳米颗粒如层状硅酸盐型的纳米粘土(如钠蒙脱石)、漂白剂(如亚硫酸氢钠)和其他功能性成分，这可能是有益的。这种次级试剂的量优选最高至约10wt/wt，更加优选最高至约5wt/wt。在一些实施例中，膜自身也是单位剂量包装件的隔室，在这种情况下，其可包含过水解酶、酰基底物和/或固体过氧化物源。膜也可包含洗涤剂组合物组分，例如，表面活性剂、有机聚合物去污剂、分散剂、染料、转移抑制剂、织物柔软剂、片剂、干燥剂和/或香料。

虽然单位剂量包装件应至少具有一个被水溶性材料部分界定的隔室，但单位剂量包装件的一部分也可用不溶性材料制成。例如，单位剂量包装件可包括附接有水溶性材料的支架结构，或环绕被水溶性材料界定的隔室的外壳。不溶性材料优选低成本、可循环的聚合物材料，如聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯等，但在理论上其可为木材或金属。特别是在单位剂量容器用于衣物洗涤时，不溶性材料的表面应光滑且无尖角(可损坏衣物)。

示例性的水溶性膜描述于：国际专利申请WO2008063468，WO2011094687和WO2011094690，美国专利No.8,008,241，7,671,003，7,615,524，7,517,847，7,507,699，7,479,475，7,472,710，7,452,853，7,282,472，7,115,173，7,086,110，7,074,748，7,036,177，7,033,980，7,022,659，7,001,878，6,998,375，6,956,016，6,812,199，6,750,191，6,740,628，6,670,314，6,632,785，6,503,879，6,475,977，6,448,212，6,303,553，6,228,825，4,925,586，D656,668 S，D657,495 S，D657,495 S，D651,340 S，D656,669 S，D656,670，D656,671 S，D657,910 S，D656,672S，D656,673 S，D656,674 S，D640,934 S，D648,481 S，D639,182 S，D639,183 S和D639,184 S，和美国专利公开No.20110201685，20110017239，20100120650，20080004198，20070203047，20070123444，20060019866，20050256024，20050215457，20050139241，20050124521，20050065053，20050039781，20050020476，20050003992，20040255395，20040235697，20040216500，20040147427，20040142841，20040142840，20040053798，20040018953，20030224959，20030213500，20030172960，20030114332，20030092590，20030050208，20030003095，20020187910，20020187909，20020142931以及20020142930，所有上述的全文以引用方式并入。

水溶性包装材料可从生产商如MonoSol公司(美国印第安纳州梅里尔维尔(Merrillville,Indiana,USA))及Multi-Pack公司(美国加利福尼亚州查茨沃斯(Chatsworth,California,USA))购得。按照本说明书可容易地适于递送过水解酶系统的示例性可商购获得的单位剂量包装件包括UltraPacks(汉高公司)、Quantum(利洁时公司)、CLOROX^TM2Packs(高乐氏)、OxiClean Max Force Power Paks(Church&Dwight公司)以及Stain Release、ActionPacs及Pods^TM(宝洁公司)。

洗涤剂组分

在一些实施例中，本发明单位剂量包装件包含洗涤剂组合物。示例性洗涤剂组合物包括衣物洗涤剂组合物和盘碟洗涤组合物(包括自动盘碟洗涤组合物)。如本文所详述，洗涤剂组合物可被包含在单位剂量包装件(还包含过水解酶系统的一种或多种组分)的一个或多个隔室内，或被包含在单位剂量包装件(不包含过水解酶系统的任何组分)的一个或多个附加隔室内。或者，洗涤剂组合物的组分可提供于不同隔室中，从而使洗涤剂组合物的一些组分被包含在单位剂量包装件(还包含过水解酶系统的一种或多种组分)的一个或多个隔室中，并且洗涤剂组合物的其他组分被包含在单位剂量包装件(不包含过水解酶系统的任何组分)的一个或多个附加隔室中。许多示例性洗涤剂制剂已特别旨在以多隔室形式提供，使其十分适于和过水解酶系统的组分一起被内含于本发明的单位剂量包装件。

下列表格提供了许多示例性洗涤剂组合物。由于它们为常规的洗涤剂组合物，因此许多都包含漂白剂，通常为过碳酸盐源和漂白增效剂。在本发明组合物和方法的优选实施例中，过水解酶系统部分或完全代替了这些常规的漂白剂。除非另有说明，否则所有的数字均指组分的重量百分比(wt％)。在下列表格中，用作参考的酶或酶制剂包括已知的对于洗涤剂组合物有用的所有酶，但不包括过水解酶。

实用性

本发明的单位剂量包装件可用于多种清洁、消毒和漂白应用。在一些实施例中，单位剂量包装件用于衣物洗涤应用，特别是用于顶装式和前装式洗衣机的衣物机洗应用。在这种应用中，当洗衣机注水时或注水后，加入单位剂量包装件。在单位剂量包装件不包含衣物洗涤剂组合物的情况下，其可被单独添加。理想状态下，在单位剂量包装件已溶解以及所有过水解酶组分和洗涤剂组分已分散于洗涤液中之后，将衣物放入洗衣机内，但可以理解和预期的是许多消费者会遵循一个非严格控制的流程。本发明单位剂量包装件的一个特点在于需要有限量的时间和充足的水量，以在洗涤液中溶解包装件并形成过酸，因此将单位剂量包装件添加至要洗的衣物之上，或同时将要洗的衣物和单位剂量包装件加入洗衣机内，不会引起不想要的漂白。

在其他实施例中，单位剂量包装件用于盘碟洗涤应用，特别是用于自动洗碗机。在这种应用中，开始自动清洗循环之前，单位剂量包装件被添加至洗碗机的洗涤剂分配器内，或被放置在洗碗机内的齿条上。在单位剂量包装件不包括盘碟清洗洗涤剂组合物的情况下，则其可被单独添加。

在其他实施例中，单位剂量包装件用于不需要专业清洗设备的清洁应用。在这种情况下，单位剂量包装件可与水或其他含水介质在水桶、水槽、面盆、部分清洁器、浴缸、马桶、马桶水箱/池或其他容器中进行混合。在单位剂量包装件不包括洗涤剂组合物的情况下，其可被单独添加。待清洁的示例性物品包括但不限于衣服、盘碟、车道、板面、轮胎、动物设施、医院地面、医疗设备和其他表面。在一些实施例中，单位剂量包装件被用于清洗、漂白或消毒洗衣机或洗碗机本身。

在上述任一应用中，单位剂量包装件可有利地配有网状或打孔的容器以有助于操作。在这种情况下，当单位剂量包装件溶解后或整个清洗应用完成后，壳体可以从容器中回收。在一些实施例中，壳体被附接到柄部、拉杆、钩、线、绳、链或其他结构上以赋予功能性。

根据本说明书，本发明的组合物和方法的这些和其他方面以及实施例对于技术人员将显而易见。以下实例旨在进一步说明(但不限制)所述组合物和方法。

虽然为了清楚理解的目的已经通过举例说明和实例的方式相当详细地描述了本发明，但对于本领域技术人员将显而易见的是，在不脱离本发明精神和范围的情况下可实施某些变化和修改。因此，本说明书不应理解为对本发明范围有所限制。

特此将本文所引用的全部出版物、专利以及专利申请全文以引用方式并入以用于所有目的，所引入的程度就如同将每个单独的出版物、专利或专利申请具体且独立地指出以引用方式这样并入。

Claims (37)

1.用于在清洁应用中递送过水解酶系统的单位剂量包装件，所述过水解酶系统包含过水解酶组分、酰基底物组分和过氧化物源组分，所述包装件包括：

至少部分地被水溶性材料界定并且包含过水解酶系统的第一组分的第一隔室；

至少部分地被水溶性材料界定并且包含过水解酶系统的第二组分和第三组分的第二隔室；

其中，第一隔室中的第一组分与第二隔室中的第二和第三组分在储存期间被分离开以防止过酸的形成，并且其中在含水溶液中溶解时，第一隔室和第二隔室同时或相继溶解，以允许过水解酶系统的第一、第二和第三组分接触，从而生成过酸。

2.根据权利要求1中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为过水解酶，所述第二组分为酰基底物，并且所述第三组分为过氧化物源。

3.根据权利要求1中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为酰基底物，所述第二组分为过水解酶，并且所述第三组分为过氧化物源。

4.根据权利要求1中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为过氧化物源，所述第二组分为酰基底物，并且所述第三组分为过水解酶。

5.根据前述权利要求中任一项所述的单位剂量包装件，其中在所述第一隔室中另外提供极低含水、无水或非混合形式的衣物或盘碟清洗洗涤剂。

6.根据权利要求2中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为以液体或固体形式提供的过水解酶，所述第二组分为以无水液体形式提供的酰基底物，并且所述第三组分为以固体形式提供的过氧化物源。

7.根据权利要求3中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为以无水液体形式提供的酰基底物，所述第二组分为以固体或无水液体形式提供的过水解酶，并且所述第三组分为以固体形式提供的过氧化物源。

8.根据权利要求4中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为以固体形式提供的过氧化物源，所述第二组分为以无水液体形式提供的酰基底物，并且所述第三组分为以固体或无水液体形式提供的过水解酶。

9.根据权利要求5-8中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述衣物或盘碟清洗洗涤剂是以非混合形式提供的，所述非混合形式选自固体、凝胶、糊剂或蜡。

10.根据权利要求5-8中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述衣物或盘碟清洗洗涤剂作为水含量小于约10％的极低含水液体提供。

11.根据权利要求5-8中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述衣物或盘碟清洗洗涤剂不含水。

12.根据权利要求1中所述的单位剂量包装件，其中在所述第二隔室中另外提供极低含水、无水或非混合形式的衣物或盘碟清洗洗涤剂。

13.根据权利要求12中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为以固体或液体形式提供的过水解酶，所述第二组分为以无水形式提供的酰基底物，并且所述第三组分为以固体形式提供的过氧化物源。

14.根据权利要求12中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为以液体形式提供的酰基底物，所述第二组分为以固体或无水液体形式提供的过水解酶，并且所述第三组分为以固体形式提供的过氧化物源。

15.根据权利要求12中所述的单位剂量包装件，其中所述第一组分为以固体或液体形式提供的过氧化物源，所述第二组分为以无水液体形式提供的酰基底物，并且所述第三组分为以固体或无水液体形式提供的过水解酶。

16.根据权利要求12-15中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述衣物或盘碟清洗洗涤剂是以非混合形式提供的，所述非混合形式选自固体、凝胶、糊剂或蜡。

17.根据权利要求12-15中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述衣物或盘碟清洗洗涤剂作为水含量小于约10％的极低含水液体提供。

18.根据权利要求12-15中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述衣物或盘碟清洗洗涤剂不含水。

19.根据前述权利要求中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述第一隔室完全由水溶性材料界定。

20.根据前述权利要求中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述第二隔室完全由水溶性材料界定。

21.根据前述权利要求中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述第一隔室为界定所述第二隔室的所述水溶性材料。

22.根据前述权利要求中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述第二隔室为至少部分地界定所述第一隔室的所述水溶性材料。

23.根据前述权利要求中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述第一隔室为施加至界定所述第二隔室的所述水溶性材料的膜。

24.根据前述权利要求中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述第二隔室为施加至界定所述第一隔室的所述水溶性材料的膜。

25.根据前述权利要求中任一项所述的单位剂量包装件，其还包括附加隔室。

26.根据权利要求25中所述的单位剂量包装件，其中所述附加隔室包含衣物洗涤剂组合物、盘碟清洗洗涤剂组合物、织物柔软剂、或冲洗剂。

27.根据权利要求1中所述的单位剂量包装件，其中所述过氧化物源组分为氧化酶及氧化酶底物，其中所述氧化酶对所述底物的活性产生过氧化物。

28.根据权利要求27中所述的单位剂量包装件，其中所述氧化酶和所述氧化酶底物存在于不同的隔室内。

29.单位剂量包装件，其包括水溶性小袋和洗涤剂组合物，所述小袋包括至少第一隔室和第二隔室，所述洗涤剂组合物包含：

(a)约5重量％至约80重量％的表面活性剂；

(b)约1重量％至约15重量％的无水溶剂；

(c)小于10重量％的水；以及

(d)过水解酶系统，所述过水解酶系统包含(i)过水解酶，(ii)酰基底物，以及(iii)过氧化物源；

其中通过存在于所述小袋的不同隔室内，选自(i)、(ii)或(iii)的至少一种组分与选自(i)、(ii)或(iii)的至少一种其他组分分离。

30.根据权利要求29中所述的单位剂量包装件，其包括至少第一隔室、第二隔室和第三隔室，其中通过存在于所述小袋的不同隔室内，选自(i)、(ii)或(iii)的每一种组分与每一其他组分分离。

31.根据权利要求29或30中所述的单位剂量包装件，其中所述洗涤剂组合物还包含选自螯合剂、聚合物、增白剂、香料和加工助剂的附加组分。

32.根据权利要求29-31中任一项所述的单位剂量包装件，其中除过水解酶之外，所述洗涤剂组合物还包含一种或多种附加酶。

33.根据权利要求29-32中任一项所述的单位剂量包装件，其中所述表面活性剂为阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂或它们的组合。

34.单位剂量包装件，其包括水溶性小袋和洗涤剂组合物，所述小袋包括至少第一隔室和第二隔室，所述洗涤剂组合物包含：

(a)非磷助洗剂；

(b)螯合剂；

(c)过水解酶系统，所述过水解酶系统包含过水解酶、酰基底物和过氧化物源；

其中所述过水解酶系统的至少两种组分存在于所述小袋的不同隔室内。

35.根据权利要求34中所述的单位剂量包装件，其中所述洗涤剂组合物还包含选自蛋白酶和α-淀粉酶的清洁酶。

36.根据权利要求34或35中所述的单位剂量包装件，其还包含清洗助剂。

37.根据前述权利要求任一项中所述的单位剂量包装件的使用方法，用于清洗衣物、盘碟、马桶、水槽、车道、板面和其他表面。