CN104262637A - 双重敏感嵌段共聚物及其自组装胶束及其应用 - Google Patents

双重敏感嵌段共聚物及其自组装胶束及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种双重敏感嵌段共聚物及其自组装胶束及其制备方法，还公开制备该双重敏感嵌段共聚物的亲水化合物及疏水化合物及其制备方法，更公开制备该亲水化合物的中间体及其制备方法，该双重敏感嵌段共聚物M的结构式为通过分别制备亲水化合物和疏水化合物；取亲水化合物、疏水化合物在卤代烃溶剂中混合进行氧化反应制得双重敏感嵌段共聚物M。该双重敏感嵌段共聚物或与药物溶于极性溶剂中可制成胶束，该胶束可用于空白胶束的稳定性测定、对不同浓度GSH,H2O2的应激效应、载药胶束在GSH，H2O2的应激作用下的药物控制释放。本发明化合物合成原料简单易得，制得的胶束具有良好的稳定性，反应条件温和，可以规模化制备。

Description

双重敏感嵌段共聚物及其自组装胶束及其应用
技术领域
本发明涉及化工技术领域的共聚物及其制备方法，尤其涉及一种双重敏感嵌段共聚物及其胶束及其制备方法。
背景技术
抗癌药物的靶向治疗是指将外源的药物导入至靶细胞，在病灶部位可控的释放出药物抑制杀灭癌细胞，以达到治疗的目的。药物靶向输送体系以研究制备合适的药物载体负载药物为目标，使药物能够跨越体内环境中各种屏障，将其输递至靶细胞，实现该药物的高效表达，是药物靶向治疗研究的重要内容。理想的药物靶向输送体系应具备以下条件：载体有能力负载药物并能在体内运输过程中保持稳定；可以控制释放药物实现药物的高效表达；载体易合成制备，可实现较大规模生产。目前，聚合物自组装纳米体系是药物输送系统的重要研究方向，主要包括脂质体、嵌段共聚物胶束以及树状大分子等。
还原敏感性嵌段共聚物作为药物载体具有良好的应用前景，因为癌细胞内环境的谷胱甘肽(GSH)浓度(2-10mM)远远超过细胞外或正常细胞环境的浓度(2-20μM)，设计对谷胱甘肽还原作用敏感的含二硫键输送载体，使其在体外及体液环境中都可以稳定地负载和输送药物，待进入靶向细胞后在还原剂GSH作用下有效释放治疗药物。近来研究表明，癌细胞内环境产生的活性氧自由基(H2O2，HO-)浓度也高于正常细胞，基于癌细胞内活性氧自由基浓度高的特点，同理可设计对活性氧自由基氧化作用敏感的输送载体以达到药物靶向输送的目的。
基于癌细胞内环境的谷胱甘肽(GSH)，活性氧自由基(H2O2，HO-)的特点，科研工作者设计出了具有氧化还原双重敏感性的嵌段共聚物作为抗癌药物的靶向输送体系。缩硫酮键对活性氧自由基具有敏感性可以用来设计合成嵌段共聚物应用于药物靶向输送体系。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，采用有机合成的方法向聚合物分子中引入二硫键(谷胱甘肽还原敏感性)和缩硫酮键(活性氧自由基氧化敏感性)，设计合成了一类新型的具有氧化还原双重敏感性嵌段共聚物及其胶束及其制备方法。
本发明的通过下列技术方案实现：
根据本发明的第一个方面，提供了一种双重敏感嵌段共聚物，其中，所述双重敏感嵌段共聚物M的结构式为：
其中，6<n<228，1<m<138，所述双重敏感嵌段共聚物的数均分子量为5000～20000。
根据本发明的第二个方面，提供了一种双重敏感嵌段共聚物的制备方法，其中，包括步骤：分别制备亲水化合物和疏水化合物；取所述亲水化合物、疏水化合物在卤代烃溶剂中混合进行氧化反应，即得所述双重敏感嵌段共聚物M。
优选地，所述亲水化合物、疏水化合物在卤代烃溶剂中混合的步骤具体为：分别取所述亲水化合物和所述疏水化合物的二氯甲烷和/或三氯甲烷溶液，混合均匀进行氧化反应，旋除二氯甲烷和/或三氯甲烷，残留物用含碘的二氯甲烷溶液溶解、常温反应，其中，所述亲水化合物、所述疏水化合物、所述碘的摩尔比为1：1～1.5：12～24。
根据本发明的第三个方面，提供了一种亲水化合物D，其中，所述亲水化合物D的结构式为：
其中，6<n<228。
根据本发明的第四个方面，提供了一种亲水化合物D的制备方法，其中，步骤为：在碱性条件下，将化合物A5与化合物C进行酰胺化反应生成所述亲水化合物D，其中，所述化合物C中，6<n<228。
优选地，具体为：以二氯甲烷和/或三氯甲烷为溶剂，在NMM、HATU作用下所述化合物C与所述化合物A5进行酰胺化反应，其中，所述化合物C、所述NMM、所述HATU、所述化合物A5的摩尔比为1：1.4～2.0：1.5～3：1.3～2。
根据本发明的第五个方面，提供了一种化合物A5，其中，所述化合物A5的结构式为：
根据本发明的第六个方面，提供了一种化合物A5的制备方法，其中，包括如下步骤：
(a)将巯基乙胺与三氟乙酸乙酯在三乙胺的催化下反应生成化合物A1
(b)将所述化合物A1与2-甲氧基丙烯发生反应生成化合物A2
(c)将所述化合物A2在氢氧化钠条件下进行水解反应得到化合物A3
(d)将所述化合物A3与化合物A4在缩合剂作用下发生缩合反应生成所述化合物A5。
优选地，所述步骤(a)具体为：将所述巯基乙胺溶于甲醇中，加入所述三乙胺，在冰水浴下滴加所述三氟乙酸乙酯，在室温下搅拌反应12～36小时，其中，所述巯基乙胺、所述三乙胺和所述三氟乙酸乙酯的摩尔比为1：1.5～2.0：1.2～1.5。
优选地，所述步骤(b)具体为：将所述化合物A1溶于四氢呋喃并加入对甲苯磺酸溶解，加入2-甲氧基丙烯粉末在室温下进行反应生成所述化合物A2，反应时间为12～36小时，其中，所述化合物A1、所述对甲苯磺酸、所述2-甲氧基丙烯的摩尔比为2～2.5：0.3～0.5：0.8～1.0。
优选地，所述步骤(c)具体为：所述化合物A2在氢氧化钠溶液中发生水解，反应时间为2～4小时，其中，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为6M。
优选地，所述步骤(d)具体为：先将溶解于二氯甲烷中的所述化合物A4冰水浴下经NMM、HATU活化，然后加入所述化合物A3的二氯甲烷溶液发生缩合反应生成所述化合物A5，其中，反应时间为12～36h、反应温度为0～30℃，所述A4、NMM、所述HATU、所述化合物A3的摩尔比为1：1.4～2.0：1.5～3：1.3～2。
根据本发明的第七个方面，提供了一种疏水化合物F，其中，所述疏水化合物F的结构式为：
其中，所述疏水化合物F中，1<m<138。
根据本发明的第八个方面，提供了一种疏水化合物F的制备方法，其中，步骤为：将化合物与聚乳酸进行酰胺化反应生成所述疏水化合物F，其中，所述聚乳酸中，1<m<138。
优选地，所述步骤具体为：先将溶解于二氯甲烷中的所述聚乳酸冰水浴下经NMM、HATU活化，然后加入所述化合物B发生酰胺化反应生成所述化合物F，其中，反应时间为12～36h、反应温度为0～30℃，所述PLA聚乳酸、所述NMM、所述HATU、所述化合物B的摩尔比为1：1.4～2.0：1.5～3：1.0～1.5。
根据本发明的第九个方面，提供了一种双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束，其中，包括上述双重敏感嵌段共聚物。
根据本发明的第十个方面，提供了一种双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的制备方法，其中，将所述双重敏感嵌段共聚物或者所述双重敏感嵌段共聚物与药物溶于极性溶剂中，缓慢滴加入搅拌的水相中使其形成微乳球，透出所述极性溶剂即得到空白胶束或载药胶束。
优选地，所述药物为阿霉素、紫杉醇、榄香烯或喜树碱。
优选地，所述极性溶剂为DMSO、DMF、THF中的任意一种。
优选地，所述空白胶束的平均粒径为55nm，所述载药胶束的平均粒径为74nm。
根据本发明的第十一个方面，提供了一种双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的应用，其中，应用于所述空白胶束的稳定性测定、所述空白胶束对不同浓度的GSH、H2O2的应激效应、所述载药胶束在GSH,、H2O2的应激作用下的药物控制释放。
与现有技术比较，本发明具有的实质性特点和显著进步为：
本发明中双重敏感嵌段共聚物的合成原料简单易得，合成过程较容易实现，该双重敏感嵌段共聚物可在一定条件下形成胶束，由该双重敏感嵌段共聚物形成的自组装胶束可用于药物运输载体，并且，本发明涉及制备的双重敏感嵌段共聚物胶束的平均粒径为55nm(空白胶束)，74nm(载药胶束)，制备的双重敏感胶束稳定性良好，具有对GSH,H2O2的双重氧化还原敏感效应，载药胶束在GSH,H2O2的应激作用下释放包裹药物。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为依据本发明的化合物A5的合成路径图。
图2为依据本发明的化合物A5的核磁共振1H NMR图。
图3为依据本发明的化合物A5的核磁共振13C NMR图。
图4为依据本发明的化合物A5的高分辨质谱HRMS(ESI)图。
图5为依据本发明的亲水化合物D的合成路径图。
图6为依据本发明的疏水化合物F的合成路径图。
图7为依据本发明的双重敏感嵌段共聚物M的合成路径图。
图8为依据本发明的亲水化合物D、疏水化合物F与双重敏感嵌段共聚物M的1H NMR对比图。
图9～图12为依据本发明的亲水化合物D、疏水化合物F与双重敏感嵌段共聚物M的GPC对比图。
图13为依据本发明的实施例5中制备的空白胶束PEG5000-6S-PLA5000的透射电镜形貌图。
图14为依据本发明的实施例5中制备的空白胶束PEG5000-6S-PLA5000的粒径分布图。
图15为依据本发明的实施例5中制备的载药胶束PEG5000-6S-PLA5000的透射电镜形貌图。
图16为依据本发明的实施例5中制备的载药胶束PEG5000-6S-PLA5000的粒径分布图。
图17为依据本发明制备的空白胶束PEG5000-6S-PLA5000的浓度与分子探针DPH吸光度A的关系图。
图18为依据本发明制备的空白胶束PEG5000-6S-PLA3000的浓度与分子探针DPH吸光度A的关系图。
图19为依据本发明制备的空白胶束PEG2000-6S-PLA5000的浓度与分子探针DPH吸光度A的关系图。
图20为依据本发明制备的空白胶束PEG2000-6S-PLA3000的浓度与分子探针DPH吸光度A的关系图。
图21为依据本发明的实施例5中的载药胶束PEG5000-6S-PLA5000DOX浓度与吸光度A的标准曲线图。
图22为依据本发明的实施例5中的空白胶束PEG5000-6S-PLA5000室温条件下稳定性测试结果图。
图23为依据本发明的实施例5中的空白胶束PEG5000-6S-PLA5000生理温度37℃下稳定性测试结果图。
图24为依据本发明的实施例5中的空白胶束PEG5000-6S-PLA5000经还原剂GSH处理后的粒径变化图。
图25为依据本发明的实施例5中的空白胶束PEG5000-6S-PLA5000经氧化剂自由基H2O2处理后的粒径变化图。
图26为依据本发明的实施例5中的载药胶束PEG5000-6S-PLA5000在GSH处理条件下DOX的释放速率图。
图27为依据本发明的实施例5中的载药胶束PEG5000-6S-PLA5000在H2O2处理条件下DOX的释放速率图。
图28为依据本发明的实施例5中的DOX浓度与吸光度A的标准曲线图。
图29为依据本发明的实施例5中的载药胶束PEG5000-6S-PLA5000在GSH或H2O2处理条件下体外药物释放曲线图。
其中，图14、图16、图22～25中的横坐标表示粒径大小，纵坐标表示频度分布。图17～20中横坐标表示载药胶束的浓度，纵坐标表示吸光度。图26、27中横坐标表示处理时间，纵坐标表示荧光强度。图29中横坐标表示处理时间，纵坐标表示药物释放率。图21与图28中的x、y、R分别指横坐标、纵坐标、标准曲线的相关系数的值。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明所用的原料、试剂均为市售AR、CP级。
本发明所得中间产物及最终产物采用NMR，IR，GPC等进行表征。
实施例1、化合物A5的合成
化合物A5为缩酮链接单元，其结构式如下式所示：
其合成路径图如图1所示：
(1)化合物A1的合成：将巯基乙胺(8.0g，104mmol)溶于100ml的甲醇中，加入三乙胺(15.8g，156mmol)，冰水浴下缓慢滴加入三氟乙酸乙酯(17.7g，125mmol)，混合物在室温下搅拌过夜，生成的反应产物以适量的乙酸乙酯萃取三次然后合并溶液，用无水硫酸钠干燥后旋干乙酸乙酯得化合物A1的粗产品，化合物A1的粗产品通过硅胶柱层析得15.51g化合物A1的纯产品，产率86％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.03(s,1H,-NH-),3.61–3.46(m,2H,-CH2NH-),2.79–2.64(m,2H,-SHCH2-),1.42(t,J＝8.6Hz,1H,-SH)。
(2)化合物A2的合成：化合物A1(11.72g，68mmol)溶于100ml的四氢呋喃中，加入对甲苯磺酸(1.54g，8mmol)溶解，搅拌下加入一定量的干燥过的分子筛，室温下搅拌30分钟后，加入2-甲氧基丙烯(2.0g，29mmol)粉末室温下搅拌反应24小时，离心机离心除去分子筛，旋蒸除去四氢呋喃，然后用乙酸乙酯溶解并以饱和碳酸钠溶液洗涤三次至中性，用无水硫酸钠干燥后旋干乙酸乙酯得化合物A2的粗产品，化合物A2的粗产品通过硅胶柱层析得5.5g化合物A2的纯产物，产率54％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ6.99(s,2H,-NH-),3.65–3.55(m,4H,-CH2NH-),2.83(t,J＝6.7Hz,4H,-SCH2-),1.62(s,6H,-CCH3).
(3)化合物A3的合成：化合物A3(4.3g，11mmol)溶于30ml的6M氢氧化钠溶液中搅拌水解2小时，以适量的二氯甲烷萃取三次后合并，无水硫酸钠干燥旋蒸后得1.75g化合物A3的纯产物，产率81％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ2.88(t,J＝6.5Hz,4H,-CH2NH2),2.72(t,J＝6.5Hz,4H,-SCH2-),1.59(s,6H,-CCH3).
(4)化合物A5的合成：在一25ml的单口烧瓶中加入15ml DMF，然后加入化合物A4(0.841g，1mmol)，冰水浴搅拌下加入NMM(N-甲基吗啉)(112μL，1.0mmol)，HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)(0.57g，1.5mmol)活化30min后，将其滴加入化合物A3(40mg，2mmol)的DMF溶液中1h后升温至室温反应10h，然后停止反应，加入适量二氯甲烷萃取，水洗两次，饱和NaCl溶液洗涤两次，有机相减压蒸馏得淡黄色固体0.91g，柱层析的白色固体0.75g，产率64％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.87(s,1H,ArH),7.65(s,2H,ArH),7.44–7.32(m,13H,ArH),7.30–7.21(m,12H,ArH),7.21–7.12(m,6H,ArH),3.62–3.51(m,2H,-NHCH2-),3.17–3.01(m,2H,-CH2NH2),2.95–2.76(m,4H,-SCH2-),2.36(t,J＝7.2Hz,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),2.24(t,J＝6.9Hz,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),1.84–1.69(m,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),1.62(s,6H,-CCH3).13C NMR(151MHz,CDCl3)δ172.1,167.8,144.9,144.8,138.8,134.7,129.6,127.9,126.7,114.5,70.5,66.6,56.6,39.3,36.0,31.4,31.1,31.0,29.8,29.7,29.4,28.3,24.3.HRMS(ESI)Calcd.for C60H64N4O3S4requires(M+H+)1017.3861,Found:1017.3929。
图2为依据本发明的化合物A5的核磁共振1H NMR图。图3为依据本发明的化合物A5的核磁共振13C NMR图。图4为依据本发明的化合物A5的高分辨质谱HRMS(ESI)图。
实施例2、亲水化合物D(PEG-2S-A)的合成
亲水化合物D，其结构式如下式所示：
(1)当化合物C(mPEG-COOH)的n＝44时，数均分子量Mn＝2000；
亲水化合物D合成路径如图5所示：
在碱性条件下，取化合物A5与化合物C即末端为羧基的PEG2000进行酰胺化反应，得化合物PEG2000-2S-A。
所述步骤具体为：在一25ml的单口烧瓶中，加入15ml DMF，然后加入mPEG2000-COOH(2.1g，1mmol)，冰水浴搅拌下加入NMM(N-甲基吗啉)(167μL,1.5mmol)，HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)(0.76g,2.0mmol)活化30min后，向其中加入化合物A5(1.5g，1.5mmol)搅拌1h后，升温至室温反应18h，停止反应，加入适量二氯甲烷萃取，水洗两次，饱和NaCl溶液洗涤两次，有机相减压蒸馏得淡黄色固体粗产物2.8g，柱层析得产品2.56g,产率83％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(s,1H,ArH),7.61(s,2H,ArH),7.42–7.35(m,12H,ArH),7.31–7.22(m,12H,ArH),7.22–7.13(m,6H,ArH),4.23–4.18(m,2H,-OCH2CH2O(C＝O)-),3.89–3.40(m,192H,2Hper repeating unit,-OCH2CH2O-and-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-),3.39(s,3H,CH3O-),2.89(t,J＝7.0Hz,2H,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-),2.76(t,J＝6.9Hz,2H,-SCH2CH2NH(C＝O)CH2-),2.64(t,J＝6.9Hz,2H,-SCH2CH2NH(C＝O)Ph-),2.49(t,J＝7.3Hz,2H,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-),2.35(t,J＝7.4Hz,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),2.25(t,J＝7.0Hz,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),1.81–1.71(m,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),1.62(s,6H,-CCH3)；IR(KBr,cm-1)3451,3055,2870,1735,1667,1602,1550,1446,1350,1298,1252,1108,1036,951,843,746,703,619,558。
(2)当化合物C(mPEG-COOH)的n＝112时，数均分子量Mn＝5000；
亲水化合物D合成路径如图5所示：
在碱性条件下，取化合物A5与化合物C即末端为羧基的PEG5000进行酰胺化反应，得化合物PEG5000-2S-A。
所述步骤具体为：在一25ml的单口烧瓶中，加入装有15ml DMF，然后加入mPEG5000-COOH(5.1g，1mmol)，冰水浴搅拌下加入NMM(N-甲基吗啉)(167μL,1.5mmol)，HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)(0.76g，2.0mmol)活化30min后，加入化合物A5(1.5g，1.5mmol)搅拌1h后，升温至室温反应24h，停止反应，加入适量二氯甲烷萃取，水洗两次，饱和NaCl溶液洗涤两次，有机相减压蒸馏得淡黄色固体粗产物5.8g，柱层析得产品4.7g,产率77％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.18(brs,2H,-NH-),8.07(s,1H,ArH),7.69(s,2H,ArH),7.47–7.37(m,12H,ArH),7.32–7.22(m,12H,ArH),7.21–7.13(m,6H,ArH),6.97(s,1H,-NH-),4.19–4.08(m,2H,-OCH2CH2O(C＝O)-),3.86–3.41(m,515H,PEG,2H per repeating unit,-OCH2CH2O-and-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-),3.36(s,3H,CH3O-),2.90(t,J＝7.0Hz,2H,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-),2.76(t,J＝6.3Hz,2H,-SCH2CH2NH(C＝O)CH2-),2.65(t,J＝7.1Hz,2H,-SCH2CH2NH(C＝O)Ph-),2.55(t,J＝7.1Hz,2H,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-),2.31(t,J＝7.1Hz,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),2.24(t,J＝6.9Hz,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),1.81–1.68(m,4H,-SCH2CH2CH2(C＝O)-),1.59(s,6H,-CCH3)；IR(KBr,cm-1)3443,2889,1650,1555,1467,1359,1343,1280,1242,1147,1112,1060,963,842,745,701,529。
实施例3、疏水化合物F(PLA-B)的合成
疏水化合物F，其结构式如下式所示：
(1)当PLA的m＝38时，数均分子量Mn＝3000；
疏水化合物F的合成路径如图6所示：
在酰胺化反应条件下，取化合物B与PLA3000进行酰胺化反应，得疏水化合物PLA3000-B。
所述步骤具体为：在一25ml的干燥的单口烧瓶中，依次加入PLA3000(3.0g，1mmol)，HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)(1.14g，3.0mmol)，化合物B(1.566，2mmol)，冰水浴下氮气保护下加入NMM(N-甲基吗啉)(223μL，2.0mmol)，干燥的DMF 15ml搅拌45min后升温至30℃反应8h，停止反应，加入适量二氯甲烷萃取，水洗两次，饱和NaCl溶液洗涤两次，有机相减压蒸馏得淡黄色固体4.4g，柱层析得白色固体产品2.86g，产率76％。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.12(m，2H，ArH)，7.80(s，1H，ArH)，7.19-7.43(m，30H，ArH)，6.34(brs，2H，NH)，5.16～5.30(m，18H，PLA-CH-)，4.36(m，1H，PLA-CH-)，3.27(m，4H，-NCH2-)，2.51(m，4H，-SCH2-)，1.48-1.59(m，59H，PLA-CH3-)。IR(KBr)3385，2994，2941，1757，1657，1599，1536，1449，1379，1359，1266，1189，1129，1092，1047，951，866，803，746，702，622，507。
(2)当PLA的m＝66时，数均分子量Mn＝5000；
疏水化合物F合成路径如图6所示：
在酰胺化反应条件下，取化合物B与PLA5000进行酰胺化反应，得疏水化合物PLA5000-B；
所述步骤具体为：在一25ml的干燥的单口烧瓶中，依次加入PLA5000(5.0g，1mmol)，HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)(0.76g,2.0mmol)，化合物B(1.174，1.5mmol)，冰水浴下氮气保护下加入NMM(N-甲基吗啉)(167μL,1.5mmol)，干燥的DMF 15ml搅拌45min后升温至35℃反应14h，停止反应，加入适量二氯甲烷萃取，水洗两次，饱和NaCl溶液洗涤两次，有机相减压蒸馏得淡黄色固体5.8g，柱层析的产品4.1g，产率71％。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ8.12(m，2H，ArH)，7.80(s，1H，ArH)，7.19-7.43(m，30H，ArH)，6.34(brs，2H，NH)，5.16～5.30(m，73H，PLA-CH-)，4.36(m，1H，PLA-CH-)，3.27(m，4H，-NCH2-)，2.51(m，4H，-SCH2-)，1.48-1.59(m，219H，PLA-CH3-)。IR(KBr)3392，2994，2943，1756，1662，1600，1533，1451，1379，1268，1189，1129，1092，1048，952，866，743，702，623，508。
实施例4、双重敏感嵌段共聚物M(PEG-6S-PLA)的合成
双重敏感嵌段共聚物M，其结构式如下式所示：
当化合物C(mPEG-COOH)的n＝112时，数均分子量Mn＝5000；PLA的m＝38时，数均分子量Mn＝3000，双重敏感嵌段共聚物M(PEG5000-6S-PLA3000)的合成路径如图7所示：
在氧化反应条件下，取化合物PLA3000-B与PEG5000-2S-A进行氧化反应(脱三苯基甲基共聚反应)，得双重敏感嵌段共聚物PEG5000-6S-PLA3000。
所述步骤具体为：在一250ml的单口瓶中，加入20ml二氯甲烷，然后依次加入PLA3000-B(112mg，0.03mmol)和PEG5000-2S-A(122mg，0.02mmol)搅拌溶解混合均匀后减压蒸馏干，残留物加入60ml二氯甲烷I2溶液(其中I2为6.0mM)溶解，常温搅拌1h后将反应液冷却到0℃，加入Na2S2O3(3.0mM)直至I2的颜色消失。有机层用饱和NaCl(aq)洗涤，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏得淡黄色固体180mg，薄层板层析分离得淡黄色固体80mg，产率46％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.23–7.60(m,ArH),5.27–5.02(m,1H per repeating unit,PLA-CH-),4.20–3.99(m,PLA-CH-,-OCH2CH2O(C＝O)-),3.83–3.39(m,2H per repeating unit,-OCH2CH2O-and-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-),3.31(s,3H,CH3O-),3.09–1.76(m,-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-,-SCH2CH2NH(C＝O)CH2-,-SCH2CH2NH(C＝O)Ph-,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,),1.63–1.31(m,3H per repeating unit,PLA-CH3-,-CCH3)；IR(KBr,cm-1)3443,2890,1755,1649,1543,1467,1359,1359,1343,1280,1261,1242,1147,1112,1060,963,842,803,530。
(2)PEG2000-6S-PLA3000的合成；
当化合物C(mPEG-COOH)的n＝44时，数均分子量Mn＝2000；PLA的m＝38时，数均分子量Mn＝3000，双重敏感嵌段共聚物M(PEG2000-6S-PLA3000)的合成路径如图7所示：
在氧化反应条件下，取化合物PLA3000-B与PEG2000-2S-A进行氧化反应(脱三苯基甲基共聚反应)，得双重敏感嵌段共聚物PEG2000-2S-PLA3000。
所述步骤具体为：在一250ml的单口瓶中，加入20ml二氯甲烷，然后依次加入PLA3000-B(149mg，0.04mmol)和PEG2000-2S-A(62.4mg，0.02mmol)，搅拌溶解混合均匀后减压蒸馏干，残留物加入80ml二氯甲烷I2溶液(其中I2为6.0mM)溶解，常温搅拌1h后将反应液冷却到0℃，加入Na2S2O3(3.0mM)直至I2的颜色消失。有机层用饱和NaCl(aq)洗涤，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏得淡黄色固体100mg，薄层板层析分离得淡黄色固体56mg，产率48％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.73–7.64(m,ArH),5.38–4.90(m,1H per repeating unit,PLA-CH-),4.28–4.11(m,PLA-CH-,-OCH2CH2O(C＝O)-),3.78–3.40(m,2H per repeating unit,-OCH2CH2O-and-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-),3.31(s,3H,CH3O-),3.11–1.74(m,-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-,-SCH2CH2NH(C＝O)CH2-,-SCH2CH2NH(C＝O)Ph-,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,),1.62–1.26(m,3H per repeating unit,PLA-CH3-,-CCH3)；IR(KBr,cm-1)3435,2921,1756,1703,1655,1541,1455,1378,1352,1261,1189,1099,952,844,802,530。
(3)PEG2000-6S-PLA5000的合成；
当化合物C(mPEG-COOH)的n＝44时，数均分子量Mn＝2000；当PLA的m＝66时，数均分子量Mn＝5000，双重敏感嵌段共聚物M(PEG2000-6S-PLA5000)合成路线如图7所示：
在氧化反应条件下，取化合物PLA5000-B与PEG2000-2S-A进行氧化反应(脱三苯基甲基共聚反应)，得双重敏感嵌段共聚物PEG2000-6S-PLA5000。
所述步骤具体为：在一250ml的单口瓶中，加入20ml二氯甲烷，然后依次加入PLA5000-B(129.735mg，0.0225mmol)和PEG2000-2S-A(47mg，0.015mmol)，搅拌溶解混合均匀后减压蒸馏干，残留物加入45ml二氯甲烷I2溶液(其中I2为6.0mM)溶解，常温搅拌1h后将反应液冷却到0℃，加入Na2S2O3(3.0mM)直至I2的颜色消失。有机层用饱和NaCl(aq)洗涤，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏得淡黄色固体110mg，薄层板层析分离得淡黄色固体47mg，产率41％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.30–7.16(m,ArH),5.39–4.98(m,1H per repeating unit,PLA-CH-),4.41–4.08(m,PLA-CH-,-OCH2CH2O(C＝O)-),4.03–3.41(m,2H per repeating unit,-OCH2CH2O-and-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-),3.31(s,3H,CH3O-),3.09–1.74(m,-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-,-SCH2CH2NH(C＝O)CH2-,-SCH2CH2NH(C＝O)Ph-,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,),1.69–1.34(m,3H per repeating unit,PLA-CH3-,-CCH3)；
IR(KBr,cm-1)3464,2922,1757,1653,1542,1455,1346,1261,1189,1091.952,842,752,528。
(4)PEG5000-6S-PLA5000的合成；
当化合物C(mPEG-COOH)的n＝112时，数均分子量Mn＝5000；当PLA的m＝66时，数均分子量Mn＝5000，双重敏感嵌段共聚物M(PEG5000-6S-PLA5000)的合成路径如图7所示：
在氧化反应条件下，取化合物PLA5000-B与PEG5000-2S-A进行氧化反应(脱三苯基甲基共聚反应)，得双重敏感嵌段共聚物PEG5000-6S-PLA5000。
所述步骤具体为：在一250ml的单口瓶中，加入20ml二氯甲烷，然后依次加入PLA5000-B(86.49mg，0.015mmol)和PEG5000-2S-A(61mg，0.01mmol)，搅拌溶解混合均匀后减压蒸馏干，残留物加入40ml二氯甲烷I2溶液(其中I2为6.0mM)溶解，常温搅拌1h后将反应液冷却到0℃，加入Na2S2O3(3.0mM)直至I2的颜色消失。有机层用饱和NaCl(aq)洗涤，无水Na2SO4干燥，减压蒸馏得淡黄色固体106mg，薄层板层析分离得淡黄色固体60mg，产率55％。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.17–7.44(m,ArH),5.22–5.00(m,1H per repeating unit,PLA-CH-),4.31–4.23(m,PLA-CH-,-OCH2CH2O(C＝O)-),3.73–3.39(m,2H per repeating unit,-OCH2CH2O-and-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-),3.31(s,3H,CH3O-),3.12–1.80(m,-NHCH2CH2S-,-NHCH2CH2S-,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-,-SCH2CH2NH(C＝O)CH2-,-SCH2CH2NH(C＝O)Ph-,-O(C＝O)CH2CH2(C＝O)NH-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,-SCH2CH2CH2(C＝O)-,),1.62–1.34(m,3H per repeating unit,PLA-CH3-,-CCH3)；IR(KBr,cm-1)3431,2922,1757,1661,1547,1465,1360,1344,1280,1261,1184,1110,963,842,802,702,530。
图8为依据本发明的亲水化合物D、疏水化合物F与双重敏感嵌段共聚物M的1H NMR对比图。由图8可以看出，双重敏感嵌段共聚物M兼具了亲水化合物D、和疏水化合物F的优点，是二者的综合。
实施例4、双重敏感嵌段共聚物M分子量的测定
图9～12为依据本发明的亲水化合物D、疏水化合物F与双重敏感嵌段共聚物M的GPC对比图。
采用GPC法测定实施例3中制得的双重敏感嵌段共聚物M(PEG-6S-PLA)的分子量；仪器：Agilent1260型凝胶渗透色谱仪，GPC柱：7.5×300mm、10μm的凝胶色谱柱，溶剂：四氢呋喃，流速：1.0mL/min，柱温：35℃，标样：聚苯乙烯。各聚合物的GPC分子量分布如图9～12所示，各聚合物的测试数据如下表1所示。
表1各聚合物的分子量及分子量分布范围
实施例5、双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的制备与表征
1、空白胶束的制备
准确称取10mg所合成的双重敏感嵌段共聚物M,溶于2mL DMF(也可为DMSO或THF)中，将双重敏感嵌段共聚物M的DMF溶液缓慢滴入10ml搅拌的PBS缓冲溶液(也可为纯净水或生理盐水)中(10min/ml)，搅拌30min后转入透析袋中，用PBS缓冲液透析48小时，4h换水一次，透析出DMF，即得自组装的空白胶束。
以双重敏感嵌段共聚物PEG5000-6S-PLA5000为例自组装成空白胶束，对制备的空白胶束进行粒度和形貌的表征，图13为依据本发明的实施例5中制备的空白胶束PEG5000-6S-PLA5000的透射电镜形貌图。图13中，空白胶束的粒径小于100nm，为圆形的核壳结构，疏水部分的核适合于负载疏水药物。从图14可知，空白胶束的平均粒径为55nm，粒径分布为0.172。
2、载药胶束的制备
准确称取10mg所合成的双重敏感嵌段共聚物M和1mg阿奇霉素(DOX.HCI)于2mL DMF(也可为DMSO或THF)中溶解，然后加入20μl三乙胺搅拌30min后把含有药物(可以是阿奇霉素、紫杉醇、榄香烯或喜树碱，本实施例中采用的是阿奇霉素)的所合成的双重敏感嵌段共聚物DMF溶液缓慢滴入10ml搅拌的PBS缓冲溶液(也可为纯净水或生理盐水)当中(10min/ml)，搅拌30min后转入透析袋中，用PBS缓冲液透析48小时，4h换水一次，透析出DMF，即得自组装载药胶束。
以双重敏感嵌段共聚物PEG5000-6S-PLA5000为例自组装成载药胶束，对制备的载药胶束进行粒度和形貌的表征。图15为依据本发明的实施例5中制备的载药胶束PEG5000-6S-PLA5000的透射电镜形貌图。图15中载药胶束的粒径小于100nm，为圆形的核壳结构。从图16可知，载药胶束的平均粒径为74nm，粒径分布为0.360。与空白胶束相比，载药后的胶束粒径略有增大。
3、最低聚集浓度CMC的测定
以1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)为紫外分子探针(最大吸收波长为313nm)测定CMC值，取10支10ml的EP管，每支管中加入20μl 1mM的DPH丙酮溶液，待丙酮挥发干后，每支管中分别加入不同浓度(浓度范围：0.5mg/mL，0.25mg/mL，0.1mg/mL，0.05mg/mL，0.025mg/mL，5×10-3mg/mL，1×10-3mg/mL，0.25×10-3mg/mL，0.05×10-3mg/mL，0×10-3mg/mL)的空白胶束溶液4ml，室温下搅拌4h分别测定吸光度，以空白胶束浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做曲线图，如图17～20所示，通过吸光度递增的突跃点来确定最低聚集浓度CMC，CMC值的数量级在10-5，说明合成的双重敏感嵌段共聚物在浓度很低的情况下能自组装成稳定的空白胶束体系，空白胶束浓度对吸光度A的关系图如图17～20所示，测试数据如表2所示。
表2空白胶束最低聚集浓度CMC值
4、药物包封率的测定
包封率是指包裹在纳米颗粒中的药物占纳米颗粒混悬液中药物总量的比例。冻干以上载药胶束，加入5ml DMF溶解干粉，通过紫外分光光度法测定药物包裹率，计算公式如下：
DLC(wt％)＝(weight of loaded drug/weight of polymer)×100％
DLE(％)＝(weight of loaded drug/weight in feed)×100％
取1mg DOX.HCl溶于4ml DMF中配置成浓度为0.25mg/ml，在此基础上稀释成一系列浓度的溶液，紫外分光光度法测定吸光度，绘制标准曲线图，如图21。载药胶束冻干后溶于DMF中测定吸光度，参照图21计算浓度，计算包裹率。载药胶束PEG5000-6S-PLA5000对应的标准曲线，计算出其药物包裹率，包封率值为DLC＝4.07％,DLE＝40.7％，说明合成的双重敏感嵌段共聚物PEG-6S-PLA具有良好的载药性能。
6、双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的形貌表征
将铜网放在覆有滤纸的表面皿中，各取空白胶束溶液、载药胶束溶液约20μL分别滴于铜网上，当铜网上的溶剂基本挥发完以后，于室温下自然挥干，空白胶束、载药胶束固定在网格后，用透射电子显微镜观测它们的形貌。电镜照片如图13、15所示，以双重敏感嵌段共聚物PEG5000-6S-PLA5000为例自组装成空白胶束和载药胶束，从图13和图15可以看出透射电镜测得的空白胶束、载药胶束粒径大小及分布与粒度仪测得结果相符合，空白胶束、载药胶束PEG5000-6S-PLA5000中颗粒大小分布较均匀。
7、空白胶束的稳定性试验
以双重敏感嵌段共聚物PEG5000-6S-PLA5000为例自组装成空白胶束，取2mL制备好的空白胶束于5mL的离心管中，隔段时间测定该空白胶束粒径的变化，直至粒径发生明显变化，说明胶束发生改变。从图22、23中可以得知双重敏感嵌段共聚物的空白胶束具有良好的稳定性。
8、还原剂GSH或氧化剂自由基H2O2处理空白胶束后粒径的变化
以双重敏感嵌段共聚物PEG5000-6S-PLA5000为例自组装成空白胶束,用不同浓度的GSH及H2O2处理空白胶束PEG5000-6S-PLA5000，通过粒度测试检测其粒度分布的变化，从图24、25中可以发现在还原剂GSH或氧化剂自由基H2O2处理的条件下，空白胶束粒径发生变化，这说明空白胶束中的二硫键和缩硫酮键被破坏，使得空白胶束粒径发生变化。
9、还原剂GSH或氧化剂自由基H2O2处理载药胶束的药物释放实验
以双重敏感嵌段共聚物PEG5000-6S-PLA5000为例自组装成载药胶束,分别配制成含GSH浓度为0.1mM，1.0mM,10Mm,H2O2浓度为0.3mM，3.0mM,30mM的载药胶束溶液各2mL,置入37℃的水浴锅中，分时间段荧光分光光度计(酶标仪)上以激发波长485nm，测定发射波长590nm的荧光吸收值变化，绘制荧光吸光度变化曲线图26、27。从图26、27可知：随着处理时间的加长，GSH,H2O2浓度的增加，载药胶束溶液的荧光吸收值增加，由此可知载药胶束在还原剂GSH或氧化剂自由基H2O2处理载药胶束的条件下，载药胶束中的二硫键或者缩硫酮键断裂，载药胶束包裹的DOX释放出来使得荧光强度增大。
分别取以上制备的载药胶束PEG5000-6S-PLA5000各10mL，装入分子量为2.0KD的透析袋中，分别置入GSH，H2O2浓度为1.0mM，0.0mM；3.0mM，0.0mM的PBS溶液100mL中控制在37℃透析，隔时间段取出5mL PBS溶液以荧光分光光度计在激发波长485nm处，测定发射波长为590nm处的吸收值计算释放出的药物浓度及含量(图28为依据本发明的实施例5中的DOX浓度与吸光度A的标准曲线图，参照图28计算)，同时加入相同浓度的GSH，H2O2溶液。计算药物的累计释放量。计算公式如下：
E r = V e &Sigma; 1 n - 1 C i + V 0 C n m drug
式中Er表示:药物DOX的累积释放量，％；Ve表示：PBS的置换体积(5mL)；V0表示：释放液PBS的体积(100mL)；Ci表示：第i次置换取样时释放液中药物的浓度(μg/mL)；mdrug表示：用于释放的载药胶束中DOX的质量(μg)407微克；n表示:置换PBS的次数。参照表3与图29可知，在还原剂GSH或氧化剂自由基H2O2处理载药胶束的条件下可以促进药物的释放，效率可达到50％-70％。
表3药物浓度与对应的荧光强度值
与现有技术比较，本发明具有的实质性特点和显著进步为：
本发明中双重敏感嵌段共聚物的合成原料简单易得，合成过程较容易实现，该双重敏感嵌段共聚物可在一定条件下形成胶束，由该双重敏感嵌段共聚物形成的自组装胶束可用于药物运输载体，并且，本发明涉及制备的双重敏感嵌段共聚物胶束的平均粒径为55nm(空白胶束)，74nm(载药胶束)，制备的双重敏感胶束稳定性良好，具有对GSH,H2O2的双重氧化还原敏感效应，载药胶束在GSH,H2O2的应激作用下释放包裹药物。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (21)

1.一种双重敏感嵌段共聚物，其特征在于，所述双重敏感嵌段共聚物M的结构式为：
其中，6<n<228，1<m<138，所述双重敏感嵌段共聚物的数均分子量为5000～20000。
2.一种如权利要求1所述的双重敏感嵌段共聚物的制备方法，其特征在于，包括步骤：分别制备亲水化合物和疏水化合物；取所述亲水化合物、疏水化合物在卤代烃溶剂中混合进行氧化反应，即得所述双重敏感嵌段共聚物M。
3.如权利要求2所述的双重敏感嵌段共聚物的制备方法，其特征在于，所述亲水化合物、疏水化合物在卤代烃溶剂中混合进行氧化反应的步骤具体为：分别取所述亲水化合物和所述疏水化合物的二氯甲烷和/或三氯甲烷溶液，混合均匀进行氧化反应，旋除二氯甲烷和/或三氯甲烷，残留物用含碘的二氯甲烷溶液溶解、常温反应，其中，所述亲水化合物、所述疏水化合物、所述碘的摩尔比为1：1～1.5：12～24。
4.一种亲水化合物D，其特征在于，所述亲水化合物D的结构式为：
其中，6<n<228。
5.一种如权利要求4所述的亲水化合物D的制备方法，其特征在于，步骤为：在碱性条件下，将化合物A5与化合物C进行酰胺化反应生成所述亲水化合物D，其中，所述化合物C中，6<n<228。
6.如权利要求5所述的亲水化合物D的制备方法，其特征在于，具体为：以二氯甲烷和/或三氯甲烷为溶剂，在NMM、HATU作用下所述化合物C与所述化合物A5进行酰胺化反应，其中，所述化合物C、所述NMM、所述HATU、所述化合物A5的摩尔比为1：1.4～2.0：1.5～3：1.3～2。
7.一种化合物A5，其特征在于，所述化合物A5的结构式为：
8.一种如权利要求7所述的化合物A5的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)将巯基乙胺与三氟乙酸乙酯在三乙胺的催化下反应生成化合物A1
(b)将所述化合物A1与2-甲氧基丙烯发生反应生成化合物A2
(c)将所述化合物A2在氢氧化钠条件下进行水解反应得到化合物A3
(d)将所述化合物A3与化合物A4在缩合剂作用下发生缩合反应生成所述化合物A5。
9.如权利要求8所述的化合物A5的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)具体为：将所述巯基乙胺溶于甲醇中，加入所述三乙胺，在冰水浴下滴加所述三氟乙酸乙酯，在室温下搅拌反应12～36小时，其中，所述巯基乙胺、所述三乙胺和所述三氟乙酸乙酯的摩尔比为1：1.5～2.0：1.2～1.5。
10.如权利要求8所述的化合物A5的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)具体为：将所述化合物A1溶于四氢呋喃并加入对甲苯磺酸溶解，加入2-甲氧基丙烯粉末在室温下进行反应生成所述化合物A2，反应时间为12～36小时，其中，所述化合物A1、所述对甲苯磺酸、所述2-甲氧基丙烯的摩尔比为2～2.5：0.3～0.5：0.8～1.0。
11.如权利要求8所述的化合物A5的制备方法，其特征在于，所述步骤(c)具体为：所述化合物A2在氢氧化钠溶液中发生水解，反应时间为2～4小时，其中，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为6M。
12.如权利要求8所述的化合物A5的制备方法，其特征在于，所述步骤(d)具体为：先将溶解于二氯甲烷中的所述化合物A4冰水浴下经NMM、HATU活化，然后加入所述化合物A3的二氯甲烷溶液发生缩合反应生成所述化合物A5，其中，反应时间为多少12～36h、反应温度为0～30℃，所述A4、NMM、所述HATU、所述化合物A3的摩尔比为1：1.4～2.0：1.5～3：1.3～2。
13.一种疏水化合物F，其特征在于，所述疏水化合物F的结构式为：
其中，所述疏水化合物F中，1<m<138。
14.一种如权利要求13所述的疏水化合物F的制备方法，其特征在于，步骤为：将化合物B与聚乳酸进行酰胺化反应生成所述疏水化合物F，其中，所述聚乳酸中，1<m<138。
15.如权利要求14所述的疏水化合物F的制备方法，其特征在于，所述步骤具体为：先将溶解于二氯甲烷中的所述聚乳酸冰水浴下经NMM、HATU活化，然后加入所述化合物B发生酰胺化反应生成所述化合物F，其中，反应时间为12～36h、反应温度为0～30℃，所述PLA聚乳酸、所述NMM、所述HATU、所述化合物B的摩尔比为1：1.4～2.0：1.5～3：1.0～1.5。
16.一种如权利要求1所述的双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束，其特征在于，包括权利要求1所述的双重敏感嵌段共聚物。
17.一种如权利要求16所述的双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的制备方法，其特征在于，将所述双重敏感嵌段共聚物或者所述双重敏感嵌段共聚物与药物溶于极性溶剂中，缓慢滴加入搅拌的水相中使其形成微乳球，透出所述极性溶剂即得到空白胶束或载药胶束。
18.如权利要求17所述的双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的制备方法，其特征在于，所述药物为阿霉素、紫杉醇、榄香烯或喜树碱。
19.如权利要求17所述的双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的制备方法，其特征在于，所述极性溶剂为DMSO、DMF、THF中的任意一种。
20.如权利要求17所述的双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的制备方法，其特征在于，所述空白胶束的平均粒径为55nm，所述载药胶束的平均粒径为74nm。
21.一种如权利要求17所述的双重敏感嵌段共聚物的自组装胶束的应用，其特征在于，应用于所述空白胶束的稳定性测定、所述空白胶束对不同浓度的GSH、H2O2的应激效应、所述载药胶束在GSH,、H2O2的应激作用下的药物控制释放。
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